Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

מודל לפציעה בהקפאה לחקור אוטם שריר הלב בעכבר

Published: September 19, 2019 doi: 10.3791/59958
* These authors contributed equally

Summary

מאמר זה מדגים מודל ללמוד שיפוץ לב לאחר שריר הלב קריופגיעה בעכברים.

Abstract

השימוש במודלים בעלי חיים חיוני לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשות לתסמונת כלילית חריפה ולסיבוכים שלה. במאמר זה, אנו מדגימים סיכונים מורטין מודל הנזק שיוצר מידות סיכונים מדויקות עם היכולת הגבוהה והכפיל הגבוה. בקצרה, לאחר צנרור וכריתת החיה, מוסר הלב מהחזה. הבדיקה של מערכת כף יד משלוח חנקן נוזלי מוחל על הקיר שריר הלב כדי לגרום לקריופגיעה. ניתן לעקוב אחר תפקוד חדרית לקוי והולכה חשמלית באמצעות מיפוי האקו או המיפוי האופטי. שיפוץ שריר הלב של האזור הinfarcted מאופיין על ידי התצהיר קולגן ואובדן קרדיומיקוציטים. לעומת מודלים אחרים (למשל, בחור ליטל), מודל זה מנצל מערכת משלוח של חנקן נוזלי כף יד כדי ליצור יותר אחיד סיכונים גדלים.

Introduction

תסמונת כלילית חריפה (ACS) היא הגורם המוביל למוות בעולם המערבי1,2. חסימה חריפה של העורקים הכליליים מוביל להפעלת האיסכמי ונמק של רקמת לב מושפעת3. שריר הלב הפגום מוחלף בהדרגה על ידי רקמת צלקת שאינה מעטפת, אשר הבחינה קלינית כישלון לב4,5. למרות ההתקדמות האחרונה בטיפול של acs, השכיחות של acs וכישלון הלב הקשור לacs עולה, ואפשרויות טיפוליות מוגבלות6,7. לכן, פיתוח מודלים של בעלי חיים כדי ללמוד ACS והסיבוכים שלה הם בעלי עניין עצום.

עד כה, המודל החי הנפוץ ביותר לחקר ACS ושיפוץ שריר הלב של ACS המושרה הוא הארכה של עורק העורק השמאלי היורד (LAD). הארכה של הנער מובילה איסכמיה חריפה של שריר הלב, דומה רקמת שריר הלב האנושי במהלך ACS.  עם זאת, מידות סיכונים שאינן עקביות נותרות עקב אכילס של היחידה למען הילד. וריאציה כירורגית והשונות האנטומית של הנער להוביל לגדלים סיכונים לא עקביים ולעכב את היכולת להיות שיכפול והכפיל של הליך זה8,9,10. בנוסף, התקשרות לנער יש תמותה גבוהה פנים וכירורגית. למרות המאמצים האחרונים כדי לשפר את התמותה ולהפחית את תמותת11,12, מספר גדול של בעלי חיים עדיין יש צורך להעריך כראוי נגד שיפוץ טיפולים.

מודלים חלופיים של ACS הוצעו ולמדו בשנים האחרונות, כולל רדיותדר 13, תרמי14 או פציעות קריוגניים15,16,17,18. שיטות נוכחיות של נזקי ההקפאה מחילות מוט מתכת מקורר בחנקן נוזלי כדי לפגוע ברקמת הלב של הנבדק15,16. עם זאת, יש לחזור על הליך זה מספר פעמים כדי להפיק גודל סיכונים מספיק. בשל מוליכות גבוהה וקיבולת חום נמוכה של המוט לעומת הרקמה, החללית מתחמם במהירות, ואת הרקמה הוא מקורר (ובכך infarcted) הטרוגנאני. כדי להתגבר על מגבלות אלה, אנו מתארים כאן מודל קריואוטם ניצול מערכת שנערך משלוח חנקן נוזלי. מודל זה הוא לאפשר, קל לבצע והוא יכול להיות מהיר ואמין. מופק מסיכונים מפני הנגעים בלתי תלויים של אנטומיה כלילית נוצרת, אשר בסופו של דבר מוביל לכישלון לב. שיטה זו מתאימה במיוחד כדי ללמוד את תהליך שיפוץ עבור הערכה של הרומן תרופתי טיפולית ורקמות מבוססי הנדסה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

בעלי חיים קיבלו טיפול הומאני בציות למדריך לעקרונות בעלי חיים מעבדתיים, שהוכנו על ידי המכון למשאבי בעלי חיים במעבדה, ופורסם בידי המכון הלאומי לבריאות. כל פרוטוקולי החיות אושרו על ידי הרשות המקומית אחראי (אוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו (UCSF) טיפול בעלי חיים מוסדיים והוועדה השימוש).

1. טיפול בבעלי חיים

  1. להשיג עכברים בגיל 14 שבועות במשקל כ 27 g (למשל, מן המכון לחיות מעבדה).
    הערה: עכברים BALB/c משמשים עבור מאמר זה.
  2. לשמור על עכברים תחת תנאים קונבנציונליים בארונות מאוורר, להאכיל אותם עכברים סטנדרטיים האוכל והמים האוטופית המודעה libitum.

2. הכנת העכבר

  1. השתמש בחדר אינדוקציה כדי הרדים עכבר עם isofלאנה (3.5%).
  2. מסירים את השיער מעל החזה והצוואר בעזרת קוצץ שיער.
  3. מקום העכבר במיקום פרקדן על משטח מחומם ולשמור על הרדמה עם מסכה מכסה הפה ואת האף של העכבר.
  4. בדוק עומק מספיק של הרדמה על ידי צובט את הרגליים האחוריות ואת הזנב כדי לוודא העדר רפלקסים.
  5. הכנס בופרנורפין תת עורית (0.03 מ"ג/ק"ג) לחוסר כאבים.
  6. מורחים את הגפיים האחוריות והקידמה ומסדרים את עמדתם באמצעות קלטת.
  7. עם povidone יוד, לחטא את האזור מגולח, ואחריו קרצוף עם 80% אתנול. חזור על שלב זה פעמיים.
  8. השתמש מספריים קטנים כדי להפוך את העור באמצע חתך משליש התחתון של עצם החזה אל הסנטר.
  9. השתמש מלקחיים מעוקל ובזהירות להפריד את השרירים סביב הצוואר כדי לחשוף את קנה הנשימה.
  10. השתמש מיקרו מספריים לבצע פיום קנה הנשימה בין טבעות הסחוס השני והשלישי.
  11. הגדר את המאוורר לתדר אוורור של 110/מזערי עם נפח הגאות של 0.5 mL.
  12. הסר את המסכה והכנס צינורית פלסטיק (20 גר'), המחוברת למכונת ההנשמה, אל קנה הנשימה. . לאוורר את החיה
    הערה: ודא שצינורית האוורור אינה מוכנסת עמוק מדי על-ידי אישור אוורור דו-לטאי.
  13. השימוש נמנעתי לנתק את השריר הימני הימנית מהמקור הסטראלי שלו בין הצלעות השלישי והשביעי.
  14. השתמש בצד מספריים בזווית האביב כדי לחתוך את הצלעות הרביעי עד שישית קרוב ככל האפשר לעצם החזה.
  15. מצרוב את עורק החלב, אם הדימום גלוי.
  16. . הנמך את ה2.5%
  17. מנתחים רקמת החיבור הבסיסית כדי לקבל מבט ברור לתוך חלל החזה.
  18. השתמש בלקחיים בוטים כדי לפתוח. את קרום הלב ולחשוף את הלב
  19. השתמש במפסק מיני גולדשטיין כדי לפזר את הצלעות ולשמור על חלל החזה פתוח.
  20. הרם את הלב מחלל בית החזה. עם מוט קהה
  21. להקטין את המתח של המפסק כדי להפחית את פתיחת החזה כדי לשמור על הלב מפני נפילה.
  22. לצנן את הקריופלסט (3 מ"מ קוטר) עבור 10 s.
  23. החל את הקריוהחלוק על הקיר השמאלי הקדמי הגוף להקפיא עבור 10 s כדי ליצור סיכונים הגוף השמאלי פגיעה הגוף.
    הערה: ניתן למרוח את הקריוהחלוק על קירות לב שונים, בהתאם לשאלה המדעית ולצורך.
  24. . לנתק את המקדח מהקיר השמאלי
  25. השתמש במפסק כדי להגדיל את פתיחת החזה.
  26. החזר בעדינות את הלב לחלל. בית החזה עם מוט קהה
  27. להסיר את המפסק ולחבר את כריתת האונה עם קשר אחד באמצעות 6-0 תפר.
  28. סגור את חלל החזה באמצעות 6-0 הפעלת תפר. השתמש במזרק 10 מ ל כדי לפנות את כל האוויר שנותר מהחזה לפני קשירת הקשר.
  29. להתאים את העור על קצה caudal ולתפור אותו לנקודה של פתיחת קנה הנשימה עם תפר הפעלה (5-0).
  30. הגדר את ה1.5% והמתן עד שהחיה תקבל נשימה ספונטנית.
  31. הסר את קטטר הקנה והחלה מחדש את המסכה על הפה של בעל החיים והאף כדי לשמור על ההרדמה.
  32. סגור את חתך הקנה עם אחד 8-0 תפר.
  33. מקמו את שרירי הצוואר הגהים. בחזרה לעמדתם כדי לכסות את קנה הנשימה
  34. . השלימו את תפר העור
  35. הוסף מטאמיאזול אל מי השתייה (50 מ ג מטאמיאזול ל100 mL) לכאבי כאבים במשך 3 ימים ונטר את החיה היומית.
    הערה: תקופת התצפית לדגם זה היא שמונה שבועות. הקפידו לעקוב אחר ההנחיות של המוסד שלכם לגבי משטר כאבים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

מודל סיכונים בהקפאה מתאים לחקר ACS ולסיבוכים שלה. שיעורי תמותה נמוכים והתאוששות כירורגית יעילה נתפסת במודל זה. הנגרמת מפגיעת שריר הלב נזק מוביל לתפקוד לב מופחת, בלתי צימוד חשמלי, ושיפוץ התמרה.

ניתן להשתמש באקו-קרדיוגרפיה כדי לפקח על תפקוד הלב באופן בלתי פולשני בvivo. בלבבות שנפגעו בהקפאה, האקו ממחישה את שבר הפליטה באופן משמעותי ושינוי אזור חלקי (איור 1א-ג). ליקוי פונקציונלי ממשיך מיום 7 לאחר ניתוח עד נקודת התצפית של 56 ימים.

תפקוד לב מפורט ניתן להעריך באופן פולשני דרך לולאה נפח הלחץ (PV-loop) ניתוח. קטטר 1.2 Fr מוליכות מפעילה הוכנס לתוך החדר השמאלי, ואת הלחץ השמאלי חדרית הוא התווה נגד עוצמת המוח השמאלי. ניתן לחשב פרמטרים של הומודינמיקה כגון עוצמת קו, עבודת קו, פלט לב וכוח מקסימלי מותאם לטעינה. כפי שמוצג באיור 1d-h, קריואוטם מוביל החדר השמאלי לקויי (LV0 הפונקציה, אשר משתקף כירידה בנפח קו, לעבוד שבץ, פלט לב וכוח משיא מנוכי המקסימלית.

כדי ללמוד אלקטרופיזיולוגיה לבבית, מיפוי אופטי יכול להתבצע ex vivo. הלבבות מוסרים, מצוידים בטכניקת לאנגדורף ומוכתמים בצבע רגיש של מתח פלורסנט. לבבות קריופגועים מדגימים חסימה של הולכה חשמלית בגבול הפציעה, המציין מקומי חשמלי בלתי צימוד (איור 1i).

מכתים היסטולוגית עם trichrome של מאסנה מדגים היווצרות רקמת המבנה באתר של פציעה (איור 2א). סיכונים size ניתן לחשב על-ידי מדידת סיכונים הצלקת באזור או באמצע הצלקת אורך19 (איור 2b). Immunofluorescence כתמים נגד אלפא sarcomeric אקמין (מרקר קרדיו,) ו קולגן-אני לאשר שיפוץ והפסד של קרדיומיקוציטים באתר של פציעה (איור 2ג).

Figure 1
איור 1 : אנליזה פונקציונלית ואלקטרולוגית של לב קריופצע. הנציגה דו-מימדית של תמונות האקו שצולמו מראש (D0) וביום שלאחר הניתוח 7 (D7), 28 (D28) ו-56 (D56). (א) הפאנל העליון מציג את התצוגה הציר הארוך parasternal בסוף-דיאמטה ואת הפאנל התחתון בסוף systole מערכת. (ב, ג) שבר הוצאה (EF) ושינוי אזור החלקי (FAC) להקטין לאחר אוטם ההקפאה ונשאר פחתה לאורך זמן תפקוד הלב הוערך באופן פולשני על ידי הלחץ בניתוח עקומת עוצמת הקול. (d-g) יום 56 לאחר הפגיעה בעוצמת שבץ (SV), עבודת קו (SW), פלט לב (CO), ומראש כוח מקסימלי מנוכי (PAMP) היו נמוכים באופן משמעותי מאשר בחיות מקוריות טרום הניתוח. (h) נציג PV-לולאות מן הילידים ו 56 ימים לאחר ניתוח בעלי חיים הראו משתנה הנכון וירידה משרעת האות הלחץ בעקבות הבנה קאווה החזה (tvc) הסגר. (i) איזוכרום מפה של מיפוי אופטי לב מלבבות מקומיים ובהקפאה 14 ימים לאחר הניתוח. לוחות עליונים ותחתונים להראות לבבות המהיר מן הפיסגה ואת הבסיס, בהתאמה. אזור סיכונים מסומן על-ידי קו לבן מקווקו. הבדלים בין קבוצות העריכו באמצעות ניתוח חד כיוון של שונות (ANOVA) במבחן הפוסט-הוק של בונפררוני או במבחן tשל סטודנט. N = 3 בעלי חיים. * מציין p < 0.05. קווי השגיאה מייצגים את סטיית התקן (SD). ESPVR = קשר קצה-סיסטולי של הלחץ בעוצמת הקול; EDPVR = מערכת יחסים עם עוצמת הלחץ של הקצה-דיאסטולי. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2 : הערכה היסטולוגית של לבבות מקומיים ופגועים. (a) הצביעת התלת-כרוםשל masson מראה תצהיר קולגן (ירוק) באזור infarcted. האחוז הinfarcted של החדר השמאלי נמדד כמו (ב) אזור ו (ג) באמצע סיכונים אורך. (ד) אימונוoforסנס כתמים מדגים מוגברת קולגן-אני התצהיר עם הפסד במקביל של קרדיוומיציטים באזור infarcted. LV = חדר שמאלי; RV = החדר הימני; אנדו = אנדוקרחייג; אפינפרין = אפיארחוגה.  N = 3 בעלי חיים. קווי שגיאה מראים SD. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

מאמר זה מתאר מודל הקפאה של העכבר כדי לחקור ACS ו הקשורים אפשרויות תרופתי וטיפולי.

הצעד המכריע ביותר הוא יישום של הקריוהחלוק על רקמת הלב. משך ההתקשרות חייב להיות נשלט באופן הדוק על מנת להשיג את הגודל הסיכונים האופטימלי ולהבטיח תוצאות שניתן לשנות. התקררות ממושכת של שריר הלב תוביל לinfarcts מנופחים או ניקוב המוח. לעומת זאת, זמן הצינון המקוצר יוצר נגעים אפילטיים מוגבלים ואינו מסלק את כל התאים המתמחים. מכאן, זה יכול להיות הקמתה בעת לימוד השתלת תא התחדשות.

לעומת שיטות קריואוטם אחרות20, הגישה לחזה פתוח המתואר במאמר זה יש את היתרון כי סיכונים יכול להיגרם בחופשיות על תנוחות שונות של הלב. יתר על כן, גישה זו מקלה על הזרקת תאים טיפולית או תיקון יישומים, כמו הגבול סיכונים גלוי, ואת האתר של השתלת תא ניתן לבחור בהתאם.

חיסרון של מודל זה הוא האטיולוגיה של פציעה באוטם שריר הלב. התוצאה הקריומית מוות בתאים בשל הדור של גבישי הקרח משבש את קרום התא ולא איסכמיה ישירה. בנוסף, הכיוון של פציעה הוא בדרך כלל מן האפיארדיום פנימה, ואילו האיסכמי infarcts נוטים להתפשט כלפי חוץ מתוך האנדוקקרודיאל אל שכבת האפיארדיאל. לכן, מודל זה מוגבל ללמוד את המנגנונים הפתופסלוגיים של איסכמיה של אוטם שריר הלב או לחקות את ההגדרה reperfusion איסכמיה.

לסיכום, המודל המתואר כאן הוא זול, קל לביצוע, ניתן להקים במהירות ובאמינות. נמק והיווצרות צלקת בעקבות הזמן, וכתוצאה מכך תפקוד משאבה מתקדמת לקוי ומוליכות חשמלית. טוב לשליטה סיכונים size, צורה ומיקום להפוך את המודל הזה אידיאלי כדי להעריך התערבויות ניסיוני במטרה לשחזר את תפקוד הלב או התחדשות הלב. אפשרויות טיפול שנבדקו בהצלחה צריכות להיות מאושרות עוד יותר במחקרים של בעלי חיים גדולים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

. למחברים אין מה לגלות

Acknowledgments

אנו מודים לכריסטיאן פדרמן על הסיוע הטכני שלה. D.W. נתמך על ידי קרן מקס קאדה. T.D. קיבל מענקים משאר הדברים האחרים (2012) ו-"הגרמני" (DE2133/2 -1 _). ס. ס. התקבלו מענקי מחקר מהגרמני פורשונגססבישדורסואס (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
10 ml Syringe Thermo Scientific 03-377-23
5-0 prolene suture Ethicon EH7229H
6-0 prolene suture Ethicon 8706H
8-0 Ethilon suture Ethicon 2808G
Absorption Spears Fine Science Tools 18105-01
BALB/c The Jackson Laboratory Stock number 000651
Bepanthen Eye and Nose ointment Bayer 1578675 Eye ointment
Betadine Solution Betadine Purdue Pharma NDC:67618-152
Blunt Forceps Fine Science Tools 18025-10
Buprenex Reckitt Benckiser NDC Codes: 12496-0757-1, 12496-0757-5 Buprenorphine
Cryoprobe 3mm Brymill Cryogenic Systems Cry-AC-3 B-800
Ethanol 70% Th. Geyer 2270
Forceps curved S&T 00284
Forceps fine Fine Science Tools 11251-20
Forceps standard Fine Science Tools 11023-10
Gross Anatomy Probe Fine Science Tools 10088-15
Hair clipper WAHL 8786-451A ARCO SE
High temperature cautery kit Bovie 18010-00
ISOFLURANE Henry Schein Animal Health 029405
IV Catheter 20G B. Braun 603028
Mini-Goldstein Retractor Fine Science Tools 17002-02
NaCl 0.9% B.Braun PZN 06063042          Art. Nr.: 3570160 saline
Needle holder Fine Science Tools 12075-14
Needle Holder, Curved Harvard Apparatus 72-0146
Novaminsulfon Ratiopharm PZN 03530402 Metamizole
Operating Board  Braintree Scientific 39OP
Replaceable Fine Tip Bovie H101
Scissors Fine Science Tools 14028-10
Small Animal Ventilator Kent Scientific RV-01
Spring Scissors - Angled to Side Fine Science Tools 15006-09
Surgical microscope Leica  M651
Transpore Surgical Tape 3M 1527-1
Vannas Spring Scissors Fine Science Tools 15400-12
Vaporizer  Kent Scientific VetFlo-1205S

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Writing Group. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133 (4), 38-360 (2016).
  2. de Alencar Neto, J. N. Morphine, Oxygen, Nitrates, and Mortality Reducing Pharmacological Treatment for Acute Coronary Syndrome: An Evidence-based Review. Cureus. 10 (1), 2114 (2018).
  3. Detry, J. M. The pathophysiology of myocardial ischaemia. European Heart Journal. 17, Suppl G 48-52 (1996).
  4. Ertl, G., Frantz, S. Healing after myocardial infarction. Cardiovascular Research. 66 (1), 22-32 (2005).
  5. Jugdutt, B. I. Ventricular remodeling after infarction and the extracellular collagen matrix: when is enough enough. Circulation. 108 (11), 1395-1403 (2003).
  6. Velagaleti, R. S., Vasan, R. S. Heart failure in the twenty-first century: is it a coronary artery disease or hypertension problem. Cardiology Clinics. 25 (4), 487-495 (2007).
  7. Benjamin, E. J., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2017 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 135 (10), 146-603 (2017).
  8. Morrissey, P. J., et al. A novel method of standardized myocardial infarction in aged rabbits. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 312 (5), 959-967 (2017).
  9. Degabriele, N. M., et al. Critical appraisal of the mouse model of myocardial infarction. Experimental Physiology. 89 (4), 497-505 (2004).
  10. Chen, J., Ceholski, D. K., Liang, L., Fish, K., Hajjar, R. J. Variability in coronary artery anatomy affects consistency of cardiac damage after myocardial infarction in mice. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 313 (2), 275-282 (2017).
  11. Reichert, K., et al. Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction. Journal of Visualized Experiments : JoVE. (122), e55353 (2017).
  12. Kim, S. C., et al. A murine closed-chest model of myocardial ischemia and reperfusion. Journal of Visualized Experiments : JoVE. (65), e3896 (2012).
  13. Antonio, E. L., et al. Left ventricle radio-frequency ablation in the rat: a new model of heart failure due to myocardial infarction homogeneous in size and low in mortality. J Card Fail. 15 (6), 540-548 (2009).
  14. Ovsepyan, A. A., et al. Modeling myocardial infarction in mice: methodology, monitoring, pathomorphology. Acta Naturae. 3 (1), 107-115 (2011).
  15. Ciulla, M. M., et al. Left ventricular remodeling after experimental myocardial cryoinjury in rats. Journal of Surgical Research. 116 (1), 91-97 (2004).
  16. Grisel, P., et al. The MRL mouse repairs both cryogenic and ischemic myocardial infarcts with scar. Cardiovascular Pathology. 17 (1), 14-22 (2008).
  17. Duerr, G. D., et al. Comparison of myocardial remodeling between cryoinfarction and reperfused infarction in mice. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 961298 (2011).
  18. Ma, N., et al. Intramyocardial delivery of human CD133+ cells in a SCID mouse cryoinjury model: Bone marrow vs. cord blood-derived cells. Cardiovascular Research. 71 (1), 158-169 (2006).
  19. Takagawa, J., et al. Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches. Journal of Applied Physiology (1985). 102 (6), 2104-2111 (2007).
  20. van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: a comparison with coronary artery ligation. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 289 (3), 1291-1300 (2005).

Tags

רפואה סוגיה 151 אי ספיקת לב פגיעה בלב שריר הלב סיכונים מודל העכבר הקפאה ניתוח לב
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Wang, D., Tediashvili, G., Hu, X.,More

Wang, D., Tediashvili, G., Hu, X., Gravina, A., Marcus, S. G., Zhang, H., Olgin, J. E., Deuse, T., Schrepfer, S. A Cryoinjury Model to Study Myocardial Infarction in the Mouse. J. Vis. Exp. (151), e59958, doi:10.3791/59958 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter