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Immunology and Infection

एकपक्षीय इंट्रा-ब्रोन्कियल एसिड इंस्टिलेशन द्वारा स्व-सीमित तीव्र फेफड़ों की चोट का एक मॉडल

Published: August 30, 2019 doi: 10.3791/60024
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Pulmonary and Critical Care Medicine, Department of Internal Medicine, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School

Summary

चूहों में बाएं फेफड़ों के लिए चयनात्मक इंट्रा-ब्रोन्कियल एसिड पैदा करने से एकतरफा और आत्म-सीमित तीव्र फेफड़ों की चोट होती है जो गैस्ट्रिक एसिड आकांक्षा द्वारा प्रेरित मानव तीव्र श्वसन संकट सिंड्रोम (एआरडीएस) को मॉडल करता है।

Abstract

यूरीन बाएं मेनस्टेम ब्रोंकस के लिए हाइड्रोक्लोरिक एसिड (एचसीएल) के चयनात्मक इंट्रा-ब्रोन्कियल स्टिलेशन मानव तीव्र श्वसन संकट सिंड्रोम (एआरडीएस) के समान हिस्टोपैथोलॉजिकल निष्कर्षों के साथ तीव्र ऊतक की चोट का कारण बनता है। परिणामस्वरूप कूपिका एडीमा, कूपिका-केपिला बाधा क्षति, और ल्यूकोसाइट घुसपैठ मुख्य रूप से बाएं फेफड़े को प्रभावित करती है, एक अननिश्ड नियंत्रण के रूप में दाएं फेफड़े को संरक्षित करती है और जानवरों को जीवित रहने की अनुमति देता है। स्व-सीमित तीव्र फेफड़ों की चोट का यह मॉडल ऊतक संकल्प तंत्र की जांच में सक्षम बनाता है, जैसे एपोटोटिक न्यूट्रोफिल के मैक्रोफेज efferocytosis और कूपिका-कैपिलरी बाधा अखंडता का पुनर्वास। इस मॉडल में मदद मिली है संकल्प agonists के लिए महत्वपूर्ण भूमिकाओं की पहचान, विशेष समर्थक समाधान मध्यस्थों (SPMs) सहित, ARDS के साथ रोगियों के लिए नए चिकित्सीय दृष्टिकोण के विकास के लिए एक आधार प्रदान करते हैं.

Introduction

तीव्र श्वसन संकट सिंड्रोम (एआरडीएस) तीव्र श्वसन विफलता1का एक महत्वपूर्ण कारण है। यह एक सामान्य और घातक या अक्षम रोग है जो दुनिया भर में गहन देखभाल इकाइयों में भर्ती किए गए सभी रोगियों के 10% में होता है2. बर्लिन परिभाषा3के अनुसार , ARDS hypoxemic श्वसन विफलता की तीव्र शुरुआत से परिभाषित किया गया है (और 1 सप्ताह) और द्विपक्षीय फुफ्फुसीय छाती radiographs कि हृदय विफलता4द्वारा समझाया नहीं कर रहे हैं पर घुसपैठ . अंतर्निहित पैथोबायोलॉजी अत्यधिक सूजन प्रतिक्रिया की विशेषता है। फेफड़े सीधे घायल हो सकते हैं, जैसे निमोनिया में या गैस्ट्रिक एसिड आकांक्षा के साथ, या परोक्ष रूप से, जैसे सेप्सिस में या कई रक्त आधान4के बाद। प्रारंभिक अपमान के बाद, ARDS रोगजनन तीन चरणों में प्रगति: exudative, proliferative, और फाइब्रोटिक चरण1. इन चरणों अलग आणविक और सेलुलर प्रतिरक्षा और मरम्मत तंत्र है कि ARDS रोगियों के लिए पूर्वानुमान निर्धारित द्वारा विशेषता है. सहायक देखभाल ARDS रोगियों के लिए मुख्य आधार बनी हुई है; वर्तमान में, ARDS के लिए कोई प्रभावी औषधीय उपचार कर रहे हैं, तो इस विनाशकारी हालत4पर नए अनुसंधान के लिए एक तत्काल आवश्यकता है.

exudative चरण के दौरान जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के विनियमन ARDS और जुड़े श्वसन विफलता1की तीव्र शुरुआत करने के लिए योगदान देता है. शक्तिशाली समर्थक भड़काऊ मध्यस्थ संकेत प्रारंभिक प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं आर्केस्ट्रा, कूपिका-कैपिलरी बाधा के विघटन के लिए अग्रणी, फैलाना कूपिका एडीमा, और फेफड़ों के ऊतकों की चोट की साइट के लिए न्यूट्रोफिल घुसपैठ4. एआरडीएस में, तीव्र सूजन के लिए अप्रभावी ब्रेक लगाना फेफड़ों की विफलता के लिए पहले से तय होता है और घायल फेफड़ों के ऊतकों के समय पर कैटाबेसिस में देरी कर सकताहै। कि अंत करने के लिए, अंतर्जात की शुरुआत और एआरडीएस के समर्थक संकल्प तंत्र में पूर्व नैदानिक जांच उपन्यास चिकित्सीय रणनीतियों को उजागर कर सकते हैं. इस तरह की जांच तीव्र फेफड़ों की चोट है कि बारीकी से मानव ARDS की सुविधाओं के समान है, ऊतक चोट के दीक्षा और संकल्प चरणों अंतर्निहित तंत्र की पूछताछ की अनुमति के vivo मॉडल में आत्म सीमित प्रयोगात्मक की आवश्यकता है.

यहाँ प्रस्तुत murine मॉडल प्रत्यक्ष तीव्र फेफड़ों की चोट है कि exudative ARDS, अर्थात् कूपिका-केपिला बाधा व्यवधान और न्यूट्रोफिल घुसपैठ के कार्डिनल pathobiological प्रक्रियाओं को दर्शाता है पैदा करता है. विधि बाएं मेनस्टेम ब्रोंकस के कैनुलेशन के माध्यम से एचसीएल के चयनात्मक इंट्रा-ब्रोन्कियल स्टिलेशन पर निर्भर करती है, बाएं फेफड़े के लिए चोट और भड़काऊ प्रतिक्रिया को स्थानीयकृत करती है; unnizured सही फेफड़ों ऊतक चोट और सूजन का चयन करने के लिए एक आंतरिक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. इसके अलावा, एकतरफा फेफड़ों की चोट गैर घातक है और एक संकल्प कार्यक्रम का खुलासा किया. यह फेफड़ों की सूजन के संकल्प में एक अलग खिड़की प्रदान करता है कि अंतर्जात समर्थक समाधान मध्यस्थों और सेलुलर तंत्र की पहचान के लिए leveraged किया जा सकता है और एआरडीएस के लिए नए चिकित्सीय रास्ते खोलने के लिए कि संकल्प शरीर क्रिया विज्ञान पर जोर देती है और भेषजगुणविज्ञान.

Protocol

नीचे दी गई सभी पशु प्रक्रियाओं की समीक्षा की गई है और ब्रिघम और महिला अस्पताल (प्रोटोकॉल #2016N000356) में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है।

नोट: सभी अस्तित्व प्रक्रियाओं के लिए बाँझ तकनीक का पालन किया गया था। एक बाँझ क्षेत्र एक बाँझ कपड़ा तौलिया का उपयोग कर प्रत्येक सर्जरी के लिए स्थापित किया गया था, जबकि सर्जन बाँझ शल्य दस्ताने, टोपी, मास्क, और साफ प्रयोगशाला कोट पहना था। सभी शल्य चिकित्सा उपकरणों एक autoclave का उपयोग कर बाँझ थे, और बाँझपन एक मनका बाँझ का उपयोग कर बनाए रखा गया था.

1. 0.1 एन एच सीएल की तैयारी

  1. एक एम्बर गिलास की बोतल में 11 एमएल डीडीएच2ओ जोड़ें। धीरे-धीरे एक 1 एन एचसीएल काम कर रहे शेयर बनाने के लिए 37% एचसीएल (12 एन) के 1 एमएल जोड़ें।
    चेतावनी: सुनिश्चित करें कि एचसीएल को पानी में जोड़ा जाता है। यह एक सुरक्षा चिंता का विषय है क्योंकि एसिड के लिए सीधे पानी जोड़ने एसिड फोड़ा और बोतल से बाहर छप करने के लिए पैदा कर सकता है. जब केंद्रित एचसीएल से निपटने, सुनिश्चित करें कि एसिड एक vented रासायनिक हुड में रखा जाता है और उचित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण पहना जाता है, प्रयोगशाला कोट, दस्ताने, और सुरक्षा चश्मा सहित.
  2. धीरे धीरे एक 50 एमएल शंकु ट्यूब में डीडीएच2ओ के 35 एमएल में पहले से पतला एचसीएल काम कर स्टॉक के 4 एमएल जोड़ें एक 0.1 एन एचसीएल प्रयोगात्मक स्टॉक बनाने के लिए।
  3. कम पीएच समाधान का उपयोग कर दो सूत्री अंशांकन के बाद एक इलेक्ट्रॉनिक पीएच जांच का उपयोग कर प्रयोगात्मक शेयर के पीएच उपाय. आवश्यक के रूप में NAOH या HCl शेयर समाधान का उपयोग कर पीएच 1.1 के लिए titrate इतना है कि अंतिम मात्रा 40 एमएल है।
    नोट: कम पीएच मूल्यों को मापने मुश्किल हो सकता है. सटीक माप सुनिश्चित करने के लिए, सुनिश्चित करें कि पीएच जांच माप के अधिक-extrapolation से बचने के लिए कम पीएच मानकों का उपयोग कर ठीक से calibrated है।
  4. प्रयोग से ठीक पहले, एक बाँझ microcentrifuge ट्यूब में एक 0.22 डिग्री बाँझ फिल्टर के माध्यम से प्रयोगात्मक एचसीएल स्टॉक के 1-2 एमएल फिल्टर.

2. एचसीएल के चुनिंदा इंट्रा-ब्रोन्कियल इंस्टिलेशन

  1. शल्य चिकित्सा क्षेत्र की तैयारी
    1. इंट्रापर्टोनियल इंजेक्शन द्वारा एक केटामाइन (100 मिलीग्राम/किग्रा) और जाइलज़ीन (10 मिलीग्राम/किलोग्राम) मिश्रण वितरित करके सामान्य संज्ञाहरण को प्रेरित करें। सुनिश्चित करें कि माउस पूरी तरह से पूंछ या पिछले पैर की नोक को धीरे से निचोड़कर एनेस्थेट किया गया है। एक त्वचा चीरा बनाने से पहले वापसी प्रतिक्रिया की कमी की आवश्यकता है.  यदि आवश्यक हो तो अतिरिक्त संज्ञाहरण बोलूं का प्रबंध करें।
    2. गर्दन की घसीट के नीचे 0.1 मिलीग्राम/किलोग्राम ब्यूप्रेनोर्फिन को नीचे की ओर ले जाना। पूर्व ऑपरेटिव एनाल्जेसिक संज्ञाहरण के प्रभाव को मजबूत करेगा और प्रक्रिया से उत्पन्न पूर्व और बाद के ऑपरेटिव दर्द को सुधार देगा।
    3. धीरे नीचे स्ट्रोक का उपयोग कर, गले के गर्भाशय ग्रीवा क्षेत्र में ठोड़ी के नीचे, माउस के अधर सतह पर शल्य चिकित्सा क्षेत्र दाढ़ी करने के लिए बिजली के क्लिपर का उपयोग करें। पूरी तरह से अंतर्निहित त्वचा का पर्दाफाश करने के लिए ढीला फर निकालें।
    4. 10% povidone-आयोडीन समाधान के साथ मुंडा साइट swabing द्वारा शल्य क्षेत्र तैयार करें. aseptic समाधान लागू करने के बाद, एक 70% आइसोप्रोपिल शराब झाड़ू का उपयोग कर साइट को साफ. इस चरण 3x को दोहराएँ।
  2. श् वासनली को अलग करना
    1. एक साफ शल्य चिकित्सा बोर्ड पर एक सुपाच्य स्थिति में माउस प्लेस और एक बाँझ शल्य चिकित्सा पर्दे में माउस को कवर करते हुए शल्य चिकित्सा क्षेत्र के जोखिम को बनाए रखने. जगह में पर्दे को सुरक्षित करें।
    2. श्वासनली और लार ग्रंथियों के ऊपर त्वचा में 0.5 सेमी देशांतरीय चीरा बनाएं। सावधानी से त्वचा को वापस खींचने के लिए थोड़ा घुमावदार serated संदंश का प्रयोग करें और धीरे से लार ग्रंथियों को अलग करने के लिए श्वासनली मांसपेशियों को बेनकाब.
    3. कुंद विच्छेदन के लिए serated forceps का उपयोग करना, धीरे से paratracheal मांसपेशियों को अलग धक्का और दूर फारसा है कि श्वासनली के आसपास है जब तक कि श्वासनली के उपास्थि के छल्ले पूरी तरह से उजागर कर रहे हैं तंग.
    4. श्वासनली को उठाने और रेट्रो-ट्रेकिया और रेट्रो-फेसिया के बीच संयोजी ऊतक को अलग करने के लिए पूरी तरह से घुमावदार सेरेटेड संदंश का उपयोग करें। एक बार संयोजी ऊतक अलग है, forceps की नोक पूरी तरह से श्वासनली के पीछे स्लाइड चाहिए.
    5. श्वासनली के पीछे घुमावदार बलों को रखें और बलप्स के सुझावों के साथ 4-0 ब्रेड्ड रेशम सीवन के 10-15 सेमी टुकड़े को पकड़ें। श्वासनली के पीछे सीवन खींचो ताकि दोनों ओर एक भी लंबाई हो।
    6. एक बार सीवन जगह में है, धीरे माउस के पीछे की ओर सीवन के पक्षों खींच और जगह में पक्षों पकड़.
  3. चुनिंदा बाएं मेनस्टेम ब्रोंकस और डालने एचसीएल कैनालिंग
    1. एक 24 जी एक्स 3/4 " एंजियोकैथेटर ले लो और सुई डालने, बेवल, पहली और दूसरी श्वासनली के छल्ले के बीच श्वासनली के पूर्वकाल क्षेत्र में. एक बार उचित प्रविष्टि श्वासनली लुमेन में सुई टिप के प्रत्यक्ष दृश्य द्वारा पुष्टि की है, सीवन जारी है और सुई पर और श्वासनली में अग्रिम जब तक प्रतिरोध तक पहुँच जाता है, तो सुई वापस ले लो. बाएं मुख्य तने ब्रोंकस की ओर सम्मिलन की दिशाको बाएं फेफड़े में चयनात्मक रूप से डालने के लिए कोण .
    2. एक बार cannula जगह में है, मजबूती से स्थानांतरण से कैथेटर को रोकने के लिए इंजेक्शन बंदरगाह समझ.
    3. एक P200 पिपेट और बाँझ P200 pipette सुझावों का उपयोग करना, पैदा करना 2.5 एमएल/
    4. तेजी से कैथेटर वापस लेने और 30 s के लिए एक 60 डिग्री कोण करने के लिए शल्य चिकित्सा बोर्ड उठा।
  4. शल्य चिकित्सा क्षेत्र को बंद करना
    1. सर्जिकल बोर्ड को फ्लैट दें और श्वासनली के पीछे से सीवन को हटा दें।
    2. 2-3 टांके का उपयोग कर त्वचा चीरा बंद करने के लिए 4-0 मोम लेपित चोटी रेशम सीवन का प्रयोग करें।

3. पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल

  1. एक बार चीरा बंद कर दिया है, माउस एक गर्म हीटिंग पैड पर अपनी बाईं ओर जगह जब तक माउस संज्ञाहरण से ठीक हो. यह सामान्य आवास के लिए लौटने से पहले दर्द और गतिविधि के स्तर के लिए माउस की निगरानी शुरू करो.
    नोट: Buprenorphine पहले 24 एच के लिए 0.1 mg/kg subcutaneously हर 6-12 एच पर प्रशासित किया जाना चाहिए। यदि लगातार सफलता दर्द मौजूद है, दर्द कम हो जब तक एनाल्जेसिक आहार का विस्तार.

4. पूरे फेफड़े ब्रोंकोएलवेलर लावेज (BAL) और ल्यूकोसाइट इम्यूनोफेनोटाइपिंग

  1. 3x कदम 2.1.1 में इस्तेमाल ketamine/xylazine की खुराक प्रशासन द्वारा माउस Euthanize.
    1. अंतराकाशी और इंट्रावास्कुलर न्यूट्रोफिल में अंतर करने के लिए, अंतःशिरा एक चयनित फ्लोरोफोर-लेबल Ly6G एंटीबॉडी 5 मिनट इच्छामृत्यु से पहले इंजेक्ट करें। यह लेबल प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा पता लगाने के लिए फेफड़ों के अंतराकाशीऔर कूपिका न्यूट्रोफिल से इंट्रावास्कुलर न्यूट्रोफिल को अलग करने के लिए उपयुक्त होना चाहिए, जिसे ऊतक की तैयारी के दौरान एक अलग फ्लोरोफोर के साथ लेबल किया जाएगा (नीचे देखें)।
  2. माउस को सर्जिकल बोर्ड पर रखें और 2-0 ब्रेड्ड सिल्क सीवन के लूप के चारों ओर पूर्ववर्ती छेदक को हुक करें।
  3. 2.2.2-2.2.6 चरणों का पालन करें. कैनुलेशन के लिए श्वासनली तैयार करने के लिए।
    नोट: सुनिश्चित करें कि फेफड़ों के लावेज के दौरान ट्रांस-एल्वेलर फुलाने के दबाव को अधिकतम करने के लिए डायाफ्राम पंचर नहीं है; बाएं फेफड़ों के अनुपालन चोट के बाद कम हो जाती है, जो फेफड़ों lavage के लिए एक उच्च ट्रांस-एल्वेओलर दबाव की आवश्यकता हो सकती है।
  4. चरण 2.3.1 के बाद श्वासनली को छानना, लेकिन कैरिना के नीचे कैथेटर को आगे न बढ़ाएं; श् वासनली के समांतर कैथेटर डालें।
  5. कैथेटर डाला के साथ, जगह में कैथेटर पकड़ करने के लिए श्वासनली के आसपास सीवन टाई।
  6. बर्फ-ठंडा पीबीएस -/- (बिना मैग्नीशियम या कैल्शियम के) के दो लगातार 1 एमएल एलिकोट को 1 सीसी सिरिंज का उपयोग करके 0.6 एम एम ईडीटीए के साथ। प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा इम्यूनोफेनोटाइपिंग के लिए, प्रत्येक एलिकोट को हटा दें और बर्फ पर 5 एमएल पॉलीस्टाइरीन एफएसीएस ट्यूब पर वापस लौटें।
  7. इच्छामृत्यु सुनिश्चित करने के लिए, हृदय पंचर के बाद सर्जिकल कैंची का उपयोग करके एक thoracotomy प्रदर्शन करते हैं। फेफड़ों को आगे की प्रक्रिया के लिए काटा जा सकता है।
  8. कोशिकाओं को गोली करने के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 800 ग्राम पर 10 मिनट के लिए बाल को सेंट्रीफ्यूज करें।
  9. सुपरनेंट को 2 एमएल माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूब और एलिकोट को 1.5 एमएल माइक्रोसेंट्रीफ्यूज ट्यूबमें डाल लें। बाद के विश्लेषण के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
  10. पीबीएस में सेल गोली को पुन: निलंबित करें -/- प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा ल्यूकोसाइट विकल विश्लेषण के लिए 2% एफबीएस के साथ।
  11. अंतराकाशी और इंट्रावास्कुलर न्यूट्रोफिल में अंतर करने के लिए, बाएं और दाएं फेफड़ों को अलग से निकालें और अब्दुलनूर एट अल 20146के रूप में प्रवाह साइटोमेट्री के लिए फेफड़ों को संसाधित करें।
  12. चयनित FACS एंटीबॉडी का उपयोग कर जिसके परिणामस्वरूप सेल निलंबन दाग, Ly6G कि कदम 4.1.1 से Ly6G एंटीबॉडी की तुलना में एक अलग फ्लोरोफोर के साथ संयुग्मी है के लिए दाग करने के लिए सुनिश्चित कर रही है.

5. इवान के ब्लू डाई (ईबीडी) का उपयोग कर के Alveolar बैरियर स्थायित्व का आकलन

  1. अंतःशिरा इवान के ब्लू डाई (40 मिलीग्राम/किलोग्राम) को इच्छामृत्यु से 30 मिनट पहले इंजेक्ट करें।
  2. केटामाइन/xylazine ओवरडोज (चरण 4.1) का उपयोग करके माउस को यूथेनाइज़ करें।
  3. कूपिका बाधा अखंडता को मापने के लिए, बाल संग्रह के लिए चरण 4.2-4.9 का पालन करें।
  4. एक स्पष्ट नीचे 96 अच्छी तरह से microplate करने के लिए BALF के 100 $L स्थानांतरण, डुप्लिकेट EBD मानकों के 100 $L के साथ. PBS का उपयोग करें -/- एक रिक्त के रूप में.
  5. 620 एनएम और 740 एनएम पर बीएएलएफ के अवशोषण को मापने के लिए एक माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करें। 7नमूनों में हेम संदूषण के लिए सही करने के लिए 740 एनएम पर अवशोषण का प्रयोग करें .
  6. संवहनी बाधा अखंडता को मापने के लिए, धीरे-धीरे दिल के दाएं वेंट्रिकल के माध्यम से 5 एमएल बर्फ-ठंडा पीबीएस इंजेक्शन लगाकर फेफड़ों को दूर करें। बाएं फेफड़े निकालें.
  7. अतिरिक्त पानी को हटाने के लिए 58 डिग्री सेल्सियस पर 72 घंटे के लिए बाएं फेफड़े को सुखाएं।
  8. राडू और Chernoff 20138में के रूप में सूखे फेफड़ों के ऊतकों की प्रक्रिया , और 620 एनएम और 740 एनएम पर अवशोषण उपाय.

6. फेफड़ों की ऊतकशास्त्र

  1. 4-1-4-5 के चरणों का पालन करके श्वासनली को छानना।
  2. 20 सेमी एच2ओ पर फेफड़ों को ठीक करने के लिए, वाल्व-नियंत्रित ट्यूबिंग के साथ लगे 60 एमएल सिरिंज को ऊपर उठाने के लिए एक रिंग स्टैंड का उपयोग करें और एक चुनिंदा स्थिर समाधान (उदा., जस्ता स्थिर) से भरा हुआ है ताकि स्थिर समाधान का मेनिस्कस 20 सेमी ऊपर हो। फेफड़ों.
  3. कैथेटर के लिए ट्यूबिंग संलग्न करें और मूल्य खोलें। धीरे-धीरे जब तक वे inflating बंद स्थिर के साथ फेफड़ों को भरने.
  4. श्वासनली से बाहर निकलने के रास्ते में कैथेटर 3 डिग्री 4 निकालें। पूरी तरह से फिक्सेटिव के नुकसान को कम करने के लिए कैथेटर को हटाने से पहले सीवन के साथ श्वासन को बंद करें।
  5. फेफड़ों और दिल एन ब्लॉक निकालें.
    नोट: सुनिश्चित करें कि दबाव संचार फिक्सेटिव बनाए रखने के लिए हटाने के दौरान फेफड़ों को पंचर नहीं किया जाता है।
  6. कमरे के तापमान पर स्थिर के 25 एमएल में 24 एच के लिए फेफड़ों को ठीक करें।
  7. पीबीएस में अनुक्रमिक 20 मिनट के अंतराल के लिए निश्चित फेफड़ों को धोएं -/-, 30% इथेनॉल, और 50% इथेनॉल।
  8. पिछले धोने के बाद, के रूप में Eickmeier एट अल में के रूप में ऊतक विज्ञान प्रसंस्करण के लिए 70% इथेनॉल में फेफड़ों की दुकान 20139.

Representative Results

चयनात्मक अंतर-ब्रोन्कियल एचसीएल पैदा करने के परिणामस्वरूप एकपक्षीय तीव्र फेफड़ों की चोट

एचसीएल के बाएँ मुख्य स्रॉन् कस में चयनात्मक अंतर-ब्रोन्कियल स्टिलेशन की विधि चित्र 1कमें सचित्र है। परिणामी तीव्र फेफड़ों की चोट में पूरे बाएं फेफड़े शामिल हैं, और ईबीडी और फेफड़ों के भ्रम के अंतःशिरा प्रशासन के बाद, ईबीडी केवल बाएं फेफड़े में ही बना रहा (चित्र 1 बी)। बाएं फेफड़े में ईबीडी अपव्यय की मात्रा निर्धारित की गई थी और यह पाया गया कि शैम चयनात्मक आसवन के सापेक्ष काफी वृद्धि हुई है (चित्र 1C; अब्दुलनूर एट अल से अनुकूलित . 20146) . फेफड़ों की चोट के जवाब में, सूजन ऊतक में ल्यूकोसाइट्स dipedese घूम. इस मॉडल में, संवहनी न्यूट्रोफिल घायल फेफड़ों इंटरस्टिशियम में ट्रांस-एंडोथेलियल प्रवास से गुजरना। एचसीएल के बाद बाएं फेफड़े में जमा अंतराकाशी न्यूट्रोफिल, दाएं फेफड़े के विपरीत, जहां कुछ अंतराकाशी न्यूट्रोफिल देखे जाते हैं (चित्र 1D)। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि चयनात्मक बाएँ mainstem इंट्रा-ब्रोन्कियल instillation विधि murine तीव्र फेफड़ों की चोट है कि मोटे तौर पर बाएं फेफड़ों के लिए स्थानीयकृत किया गया था और रोग परिवर्तन है कि मानव ARDS के साथ भी देखा जाता है का उत्पादन किया, वृद्धि सहित कूपिका-केपिला बाधा उल्लंघन और न्यूट्रोफिल घुसपैठ।

एकपक्षीय तीव्र फेफड़ों की चोट समाधान तंत्र की जांच में सक्षम बनाता है

एसिड प्रेरित तीव्र फेफड़ों की चोट चूहों के संकल्प चरण का अध्ययन करने के लिए प्रारंभिक अपमान जीवित रहने में सक्षम होना चाहिए. इंट्राट्रेकल एचसीएल से अलग, केवल बाएं मेनस्टेम ब्रोंकस में पैदा करना अन्यथा स्वस्थ चूहों में एक समान अस्तित्व के साथ एक आत्म-सीमित चोट की ओर जाता है। चित्र 2कके अनुसार फेफड़े चूहों से या तो शीघ्र या बाद के समय बिंदु पर प्राप्त किए जा सकते हैं . फेफड़े के ऊतकों की ऊतक क्षति और अंग और सेलुलर स्तर पर सूजन से पता चलता है exudative सूजन के साथ 24 एच चोट के बाद चिह्नित कूपिका एडीमा और बाएं फेफड़ों में न्यूट्रोफिल घुसपैठ की विशेषता. ध्यान दें कि बिना किसी नियंत्रण वाले नियंत्रण में कोई महत्वपूर्ण चोट या ल्यूकोसाइट प्रवाह नहीं है (चित्र 2क) . चोट के बाद 72 एच, एडीमा और सेलुलर घुसपैठ काफी कम हो गई है, जो एक समाधान ात्मक चरण का प्रतिनिधित्व करती है। Alveolar न्यूट्रोफिल प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा नजर रखी जा सकती (CD45+/CD68-/F4/80-/Ly6G+/CD11b+ )पूरे फेफड़ों lavage द्वारा प्राप्त की. प्रारंभिक चोट के बाद बाएं फेफड़े में न्यूट्रोफिल में 24 एच की वृद्धि होती है और 48 और 72 ज में काफी हद तक कमी होती है (चित्र 2ख) । यदि बाद में समय अंक की जांच कर रहे हैं, न्यूट्रोफिल संख्या आधार रेखा और catabasis के बाद के चरणों में तंत्र के लिए वापस आ जाएगी, जैसे फाइब्रोप्रोलाइफेटिव प्रतिक्रियाओं के रूप में, अध्ययन किया जा सकता है.

Figure 1
चित्र 1: चयनात्मक इंट्रा-ब्रोन्कियल एचसीएल पैदा करने से एकपक्षीय फेफड़ों की चोट पैदा होती है जो कूपिका बाधा उल्लंघन और न्यूट्रोफिल घुसपैठ द्वारा परिभाषित की जाती है। (ए) यूरीन के कैनुलेशन का प्रतिनिधित्व बाएं फेफड़े में एचसीएल के चयनात्मक आस-पास के लिए मेनस्टेम ब्रोंकस को छोड़ दिया। (B) सही (आरएल) और बाएं (एलएल) फेफड़ों चयनात्मक एसिड पैदा करने के संपर्क में और अंतःशिरा इवान के नीले रंग के बाद perfused. (ग) अम्लीय चोट या शम नियंत्रण के बाद समजातियों से मध्याश्रयीय इवान के नीले रंग का क्वांटासीकरण, पर्फसित फेफड़े 24 ज; आंकड़ा Abdulnour एट अल से अनुकूलित 20146. मान अर्थ का प्रतिनिधित्व करते हैं - SEM, जहाँ n ] 5. * च;lt; 0.05, मान-व्हिटनी यू टेस्ट. (डी) इंट्रावास्कुलर (आई.वी.; फ्लोरोफोर 1) और इंटरस्टिशियल (आई.एस.; फ्लोरोफोर 2) कुल सीडी45 के प्रतिशत के रूप में न्यूट्रोफिल+ संसाधित फेफड़ों में कोशिकाओं 24 एच एसिड चोट के बाद। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2: एकपक्षीय तीव्र फेफड़ों की चोट आत्म समाधान है. (ए) प्रतिनिधि एच एंड ई ऊतक विज्ञान (10x) बाएं फेफड़ों के भोले चूहों से प्राप्त (0 ज) या चूहों 24, 48, 72 एच चोट के बाद, एक ही माउस से जुड़े दाहिने फेफड़ों के साथ (स्केल बार $ 250 डिग्री मी). (बी ) अल्वेलर न्यूट्रोफिल्स (Ly6G+ CD11b+ )के प्रतिनिधि प्रवाह साइटोमेट्री ( एसिड चोट के बाद कुल CD45+ कोशिकाओं के प्रतिशत के रूप में पूरे फेफड़ों lavage से प्राप्त (0 ज) चूहों या चूहों 24, 48, और 72 एच एसिड चोट के बाद। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Discussion

यहाँ वर्णित अंतर-ब्रोन्कियल इंस्टिजन विधि बाएं मेनस्टेम ब्रोंकस के चयनात्मक कैनुलेशन का उपयोग करता है ताकि एचसीएल को बाएं फेफड़ों में पैदा किया जा सके, जिसके परिणामस्वरूप एकतरफा और आत्म-सीमित मरिन तीव्र फेफड़ों की चोट होती है। इस murine एसिड फेफड़ों की चोट मॉडल बारीकी से भड़काऊ प्रतिक्रिया का प्रतिनिधित्व करता है, हिस्टोपैथोलॉजी, और शारीरिक रोग मानव ARDS में देखा, जहां गैस्ट्रिक एसिड आकांक्षा एक आम precipitant या योगदान कारक4है. कम पीएच एच सीएल के लिए murine airway के एक्सपोजर कूप-कैपिलरी बाधा, कूपिका एडीमा, और चोट के स्थल पर गहरा न्यूट्रोफिल घुसपैठ की पारगम्यता में परिणाम है। इन घटनाओं unnizured सही फेफड़ों में नहीं मनाया जाता है. इसके अलावा, इस मॉडल तेजी से भड़काऊ प्रतिक्रियाओं का उत्पादन करता है कि 24 एच के भीतर चोटी एसिड पैदा करने के बाद, और मानव ARDS के साथ जीन अभिव्यक्ति में परिवर्तन के शेयरों, इस तरह के फॉस्फोलिपिज डी isoforms के अंतर अभिव्यक्ति के रूप में10.

हालांकि इस murine पूर्व नैदानिक मॉडल आणविक, सेलुलर, और ऊतक के स्तर पर ARDS की सुविधाओं के कई पुन: पेश करता है, यह पूरी तरह से मानव ARDS recapitulate नहीं करता है. ARDS की परिभाषा द्विपक्षीय फेफड़ों की भागीदारी3भी शामिल है, जबकि instillation विधि यहाँ वर्णित एकतरफा फेफड़ों की बीमारी में डिजाइन द्वारा परिणाम. इसके अलावा, जानवरों को निरंतर यांत्रिक वेंटिलेशन, गतिहीनता, या माता-पिता के मल-पार करने की आवश्यकता नहीं होती है। यहाँ प्रस्तुत परिणाम (विधुर) और कहीं और6,9,11,12,13 प्रदर्शित करता है कि एकतरफा एसिड प्रेरित फेफड़ों की चोट रोग पहचान के अधिकांश पुन: उत्पन्न करता है ARDS जबकि आंतरिक नियंत्रण के रूप में सही फेफड़ों का उपयोग करने के लिए और इस रोग के संकल्प चरण का अध्ययन करने के लिए अद्वितीय अवसर प्रदान करते हैं. इस तरह के रूप में, मॉडल यहाँ चर्चा की मॉडल ARDS pathobiology, लेकिन यह भी चोट और संकल्प तंत्र है कि इस महत्वपूर्ण बीमारी को संबोधित करने के लिए प्रासंगिक हो सकता है के लिए मौलिक फेफड़ों के ऊतकों प्रतिक्रियाओं के मशीनी जांच सक्षम बनाता है.

एचसीएल का आसल प्रत्यक्ष तीव्र फेफड़ों की चोट का प्रतिनिधित्व करता है, इसलिए यह आकांक्षा न्यूमोनिटिस के साथ जुड़े पैथोफिजियोलॉजी के पहलुओं को मॉडलिंग कर रहा है। इसके अलावा, इस मॉडल में प्रारंभिक छोड़ दिया फेफड़ों का अपमान बाँझ एचसीएल का उपयोग कर उत्पन्न होता है बजाय बैक्टीरिया से लदी गैस्ट्रिक सामग्री कुछ मानव आकांक्षा की घटनाओं में देखा है कि भी निमोनिया14के लिए नेतृत्व कर सकते हैं . मनुष्यों में, रोगजनक बैक्टीरिया की आकांक्षा माध्यमिक जीवाणु निमोनिया में परिणाम कर सकती है जो तीव्र सूजन प्रतिक्रिया को बढ़ा देती है, प्रारंभिक फेफड़ों की चोट को बढ़ा देती है और एआरडीएस14विकसित करने के लिए रोगी संवेदनशीलता में वृद्धि करती है। इस संभावित सीमा को जांचकर्ताओं द्वारा जानबूझकर रोगजनक बैक्टीरिया एस्चेरीचिया कोलाई (ई. कोलाई)15 को बाँझ एचसीएल के बाद पैदा करने के लिए संबोधित किया गया है। इसके अतिरिक्त, इस विधि का उपयोग रोगजनक-मध्यस्थ की जांच करने के लिए किया गया है सूजन; एकपक्षीय जीवाणु निमोनिया बैक्टीरिया के चयनात्मक बाएं फेफड़ों के पैदा होने से प्रेरित किया जा सकता है, जैसे ई. कोलाई16,17, स्यूडोमोनास एरुजिनोसा16, और स्ट्रेप्टोकॉकस न्यूमोनिया18 . यहाँ वर्णित स्व-सीमित तीव्र फेफड़ों की चोट मॉडल का उपयोग वेंटीलेटर-प्रेरित फेफड़ों की चोट (VILI) का अध्ययन करने के लिए भी किया जा सकता है, जो मानव एआरडीएस19में मृत्यु दर में वृद्धि का एक महत्वपूर्ण कारण है। VILI के प्रायोगिक पशु मॉडल आमतौर पर ज्वारीय मात्रा है कि क्या चिकित्सकीय फेफड़ों की चोट के कारण करने के लिएप्रयोग किया जाता है की तुलना में बहुत अधिक हैं के साथ भोले चूहों में यांत्रिक वेंटिलेशन शामिल (gt; 15 एमएल/kg; पिछले काम 20,21देखें )। VILI के एक अधिक नैदानिक रूप से प्रासंगिक मॉडल की ओर, इंट्रा-ब्रोन्कियल एसिड पैदा करने के रूप में यहाँ वर्णित पहले नैदानिक रेंज के भीतर ज्वारीय मात्रा में यांत्रिक वेंटिलेशन के बाद गैर घातक फेफड़ों की चोट प्रेरित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है (6-12 एमएल / इस काल्पनिक पशु मॉडल जांचकर्ताओं एक नैदानिक रूप से प्रासंगिक तरीके से VILI अध्ययन करने के लिए एक बार विकसित और मान्य की अनुमति हो सकती है. एक साथ, इन murine मॉडल चयनात्मक intrabronchial instillation विधि की बहुमुखी प्रतिभा पर प्रकाश डाला एकतरफा फेफड़ों का अपमान है कि बारीकी से मानव फेफड़ों के रोगों के साथ जुड़े रोगों के समान उत्पन्न करने के लिए.

बाएं फेफड़े के लिए विभिन्न हानिकारक एजेंटों के चयनात्मक पैदा करने की अनुमति देने के अलावा, tracheostomy के बाद इंट्रा-ब्रोन्कियल पैदा करने की तकनीक विस्तारित प्रशिक्षण, लंबी प्रक्रिया समय, या जटिल उपकरण, और अनुभवी हाथों में आवश्यकता नहीं है जानवरों के लिए कम से कम संकट का कारण बनता है। इस के बावजूद, कई समस्याओं प्रयोगात्मक परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं जो चयनात्मक HCl instillation प्रक्रिया के दौरान हो सकती है। बाएं मुख्य स्टेम ब्रोंकस के अनुचित कैनुलेशन के परिणामस्वरूप द्विपक्षीय फेफड़ों की चोट हो सकती है जो प्रयोगात्मक चूहों के अस्तित्व को कम कर देती है और एक अननिषेक आंतरिक नियंत्रण के रूप में दाएं फेफड़ों के उपयोग को भ्रमित करती है। यह कैथेटर पर्याप्त रूप से कैनुलेशन के दौरान बाएं फेफड़े की ओर angling द्वारा बचा जा सकता है जब तक प्रतिरोध तक पहुँच गया है. एचसीएल के इंजेक्शन के बाद, हवा के एक बोलस इंजेक्शन किया जाना चाहिए, कैथेटर तेजी से हटा दिया, और शल्य बोर्ड एक 60 डिग्री कोण के लिए सीधे लाया. ये कदम यह सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण हैं कि एसिड बाएं फेफड़े के डिस्टल वायुमार्ग तक पहुंचता है और दाएं फेफड़े और श्वासनली में एसिड के भाटा को रोकता है, जिससे निकट चोट हो सकती है। पैदा होने के बाद 24 घंटे के भीतर, बाएं फेफड़े में चोट व्यापक फुफ्फुसीय एडीमा के साथ फैलाना है, जो डिस्टल और समीपस्थ बाएं फेफड़ों दोनों को प्रभावित करता है।

वयस्क 8-12 सप्ताह पुराने चूहों में विधि विकास के दौरान, इंट्रा-ब्रोन्कियल एचसीएल के 2.5 एमएल/ एचसीएल की कम खुराक reproduible और समरूप फेफड़ों की चोट में परिणाम नहीं था. हालांकि हम छोटे में इस मॉडल का प्रदर्शन नहीं किया है (उदा., 3-6 सप्ताह पुराने) या पुराने चूहों (उदा., 10-14 महीने पुराने), हम आशा है कि एचसीएल के वजन आधारित dosing एक फेफड़ों की चोट phenotype क्या 8-12 सप्ताह पुराने चूहों में उल्लेख किया है के समान में परिणाम होगा. हम अनुशंसा करते हैं कि जांचकर्ताओं titrate HCl खुराक वजन के चरम पर चूहों के साथ प्रयोग करने से पहले फेफड़ों की चोट के वांछित डिग्री प्राप्त करने के लिए.

इस चयनात्मक एसिड पैदा करने की प्रक्रिया बाँझ ऊतक सूजन है कि सहायक देखभाल के लिए की जरूरत कम कर देता है की एक गैर घातक murine मॉडल प्रदान करता है, इस तरह के यांत्रिक वेंटिलेशन के रूप में. घायल चूहों की विस्तारित अस्तित्व के साथ, एसिड प्रेरित सूजन आत्म को हल करने के लिए पर्याप्त समय है। इस मॉडल के संकल्प चरण अस्थायी रूप से विनियमित अंतर्जात bioactive लिपिड मध्यस्थों की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, विशेष समर्थक समाधान मध्यस्थों (SPMs) कहा जाता है, जैसे lipoxin ए4 (LXA4), Maresin 1 (MaR1), और resolvins6 ,11,12,16. घायल चूहों को exogenous SPMs प्रशासन भड़काऊ तंत्र dampening और घायल फेफड़ों के ऊतकों के catabasis को बढ़ावा देने के द्वारा एसिड प्रेरित फेफड़ों की चोट के संकल्प तेज. ये एसपीएम कूपिका एडीमा12की निकासी को बढ़ावा देते हैं , भर्ती मैक्रोफेज16द्वारा एपोटोटिक न्यूट्रोफिल्स के efferocytosis में वृद्धि , और वायुमार्ग और alveoli12 के पुन: epithealization में तेजी लाने के लिए संवहनी कम करने के लिए रिसाव और ऊतक हाइपोक्सिया। रोगज़नक़ प्रेरित फेफड़ों की चोट के एक मॉडल में, 15-एपि-रिसोलविन डी 1 ने मैक्रोफेज द्वारा बढ़ी हुई जीवाणु फागोसाइटोसिस के माध्यम से एंटीमाइक्रोबियल क्रियाओं का प्रदर्शन किया और संक्रमित फेफड़ों से बेहतर जीवाणु निकासी16. इन अंतर्जात संकल्प तंत्र की जांच ARDS5के साथ रोगियों के लिए संभावित उपन्यास चिकित्सीय रणनीतियों में अंतर्दृष्टि प्रदान करता है .

संकल्प तंत्र के spatiotemporal विनियमन का सबसे अच्छा अध्ययन करने के लिए, विवो प्रयोगात्मक मॉडल में की जरूरत है. तीव्र फेफड़ों की चोट मॉडल आणविक और सेलुलर प्रक्रियाओं को बढ़ावा देने मेजबान संकल्प की सगाई के साथ प्रासंगिक तीव्र भड़काऊ प्रतिक्रियाओं और अंग रोग शामिल होना चाहिए. इन तंत्रों को स्थापित संकल्प सूचकांक22का उपयोग करके परिमाणित किया जा सकता है . एकपक्षीय तीव्र फेफड़ों की चोट उत्पन्न करने के लिए चयनात्मक इंट्रा-ब्रोन्कियल इंस्टिवन विधि अंतर्जात संकल्प मध्यस्थों और रास्ते की जांच के लिए इस संबंध में उपयोगी साबित हुई है। भविष्य के अध्ययन है कि इन सक्रिय संकल्प प्रक्रियाओं की हमारी समझ को गहरा चिकित्सकीय agonists कि अंतर्जात लिपिड मध्यस्थों के bioactions की नकल करने के लिए सूजन के संकल्प को बढ़ाने और रुग्णता को कम करने के लिए अग्रणी का वादा किया है और ARDS और अन्य महत्वपूर्ण फेफड़ों की बीमारियों की मृत्यु.

Disclosures

लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

लेखकों को चुनिंदा अंतर ब्रोन्कियल विधि के विकास के लिए अपने योगदान के लिए और उनकी उपयोगी टिप्पणियों और पांडुलिपि की समीक्षा के लिए डॉ जोसेफ Mizgerd धन्यवाद देना चाहूंगा. यह काम राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुदान P01GM095467 (B.D.L.) और K08HL130540 (R.E.A.) द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
10x Zinc Fixative BD Biosciences 552658
2-0 Braided Silk Suture Surgical Specialties SP118
24 G x 3/4" Disposable Safelet I.V. Catheter Excel 26751
33 mm, 0.22 µm syringe filter unit Millipore-Sigma SLGP033RS
4" Long Serrated Slight Curve Graefe Forceps Roboz RS-5135
4" Long Tip Serrated Full Curve Graefe Forceps Roboz RS-5137
4.5 " Micro Dissecting Scissors Roboz RS-5912
6" Crile Wood Needle Holder Roboz RS-7860
60 mL syringe BD Biosciences 309653
Anti-mouse FITC-Ly6G antibody Thermo Fisher Scientific 11-9668-82 Preferred fluorophore can be used
Anti-mouse PE-Ly6G antibody Thermo Fisher Scientific 12-9668-82 Preferred fluorophore can be used
Bead sterilizer
Betadine Solution Swabstick Betadine 67618-153-01
Buprenex Reckitt Benckiser NDC: 12496-0757-1, 12496-0757-5
Clear flat-bottomed 96-well microplate Thermo Fisher Scientific 12565501
Dulbeccos's Phosphate Buffered Saline (PBS) without Ca2+ or Mg+ life technologies 14190-144
Electric clippers
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) Millipore-Sigma E6758
Evans Blue Dye Millipore-Sigma E-2129
Heating pad
Hydrochloric acid, 37% Millipore-Sigma 258148
Ketamine Henry-Schein 56344
Microplate reader (640, 720 nm)
P200 Pipette
P200 Pipette Tips
pH probe
Ring stand with extension clamp
Sterile Alcohol Prep Pads Thermo Fisher Scientific 22-363-750
Sterile Mouse Drape 8" x 8" with Oval Adhesive Fenestration Steris 88VCSTF
Sterile Nitrile Gloves Kimberly-Clark 56890
Sterile Towl Drape Dynarex 4410
Wax Coated 4-0 Braided Silk Suture Covidien SS733
Xylazine AKORN NDC: 59399-111-50

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References

  1. Baron, R. M., Levy, B. D., et al. Acute Respiratory Distress Syndrome. Harrison's Principles of Internal Medicine, 20e. Jameson, J. L. , McGraw-Hill Education. (2018).
  2. Bellani, G., et al. Epidemiology, Patterns of Care, and Mortality for Patients With Acute Respiratory Distress Syndrome in Intensive Care Units in 50 Countries. The Journal of the American Medical Association. 315 (8), 788-800 (2016).
  3. The ARDS Definition Task. Acute Respiratory Distress Syndrome: The Berlin DefinitionThe Berlin Definition of ARDS. The Journal of the American Medical Association. 307 (23), 2526-2533 (2012).
  4. Thompson, B. T., Chambers, R. C., Liu, K. D. Acute Respiratory Distress Syndrome. New England Journal of Medicine. 377 (6), 562-572 (2017).
  5. Krishnamoorthy, N., Levy, B. D., Walker, K. H., Abdulnour, R. -E. E., Engstrom, B. D. Specialized Proresolving Mediators in Innate and Adaptive Immune Responses in Airway Diseases. Physiological Reviews. 98 (3), 1335-1370 (2018).
  6. Abdulnour, R. -E. E., et al. Maresin 1 biosynthesis during platelet-neutrophil interactions is organ-protective. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (46), 16526 (2014).
  7. Chen, H., et al. Pulmonary permeability assessed by fluorescent-labeled dextran instilled intranasally into mice with LPS-induced acute lung injury. PLoS ONE. 9 (7), (2014).
  8. Radu, M., Chernoff, J. An in vivo assay to test blood vessel permeability. Journal of Visualized Experiments. 73 (73), e50062 (2013).
  9. Eickmeier, O., et al. Aspirin-triggered resolvin D1 reduces mucosal inflammation and promotes resolution in a murine model of acute lung injury. Mucosal Immunology. 6 (2), 256-266 (2013).
  10. Abdulnour, R. -E. E., et al. Phospholipase D isoforms differentially regulate leukocyte responses to acute lung injury. Journal of Leukocyte Biology. 103 (5), 919-932 (2018).
  11. Fukunaga, K., Kohli, P., Bonnans, C., Fredenburgh, L. E., Levy, B. D. Cyclooxygenase 2 Plays a Pivotal Role in the Resolution of Acute Lung Injury. Journal of Immunology. 174 (8), 5033 (2005).
  12. Colby, J. K., et al. Resolvin D3 and Aspirin-Triggered Resolvin D3 Are Protective for Injured Epithelia. American Journal of Pathology. 186 (7), 1801-1813 (2016).
  13. Bonnans, C., Fukunaga, K., Keledjian, R., Petasis, N. A., Levy, B. D. Regulation of phosphatidylinositol 3-kinase by polyisoprenyl phosphates in neutrophil-mediated tissue injury. The Journal of Experimental Medicine. 203 (4), 857-863 (2006).
  14. Mandell, L. A., Niederman, M. S. Aspiration Pneumonia. New England Journal of Medicine. 380 (7), 651-663 (2019).
  15. Seki, H., et al. The anti-inflammatory and proresolving mediator resolvin E1 protects mice from bacterial pneumonia and acute lung injury. Journal of Immunology. 184 (2), 836-843 (2010).
  16. Abdulnour, R. E., et al. Aspirin-triggered resolvin D1 is produced during self-resolving gram-negative bacterial pneumonia and regulates host immune responses for the resolution of lung inflammation. Mucosal Immunology. 9 (5), 1278-1287 (2016).
  17. Traber, K. E., et al. Myeloid-epithelial cross talk coordinates synthesis of the tissue-protective cytokine leukemia inhibitory factor during pneumonia. American journal of physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 313 (3), L548-L558 (2017).
  18. Yamamoto, K., et al. Roles of lung epithelium in neutrophil recruitment during pneumococcal pneumonia. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (2), 253-262 (2014).
  19. Acute Respiratory Distress Syndrome Network. Ventilation with Lower Tidal Volumes as Compared with Traditional Tidal Volumes for Acute Lung Injury and the Acute Respiratory Distress Syndrome. New England Journal of Medicine. 342 (18), 1301-1308 (2000).
  20. Peng, X., et al. Inducible nitric oxide synthase contributes to ventilator-induced lung injury. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 172 (4), 470-479 (2005).
  21. Abdulnour, R. -E. E., et al. Mechanical stress activates xanthine oxidoreductase through MAP kinase-dependent pathways. American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 291 (3), L345-L353 (2006).
  22. Serhan, C. N., Levy, B. D. Resolvins in inflammation: emergence of the pro-resolving superfamily of mediators. The Journal of Clinical Investigation. 128 (7), 2657-2669 (2018).

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इम्यूनोलॉजी और संक्रमण अंक 150 एसिड आकांक्षा तीव्र फेफड़ों की चोट तीव्र श्वसन संकट सिंड्रोम (एआरडीएस) चयनात्मक इंट्रा-ब्रोन्कियल स्टिलेशन एकतरफा संकल्प
एकपक्षीय इंट्रा-ब्रोन्कियल एसिड इंस्टिलेशन द्वारा स्व-सीमित तीव्र फेफड़ों की चोट का एक मॉडल
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Tavares, A. H., Colby, J. K., Levy, B. D., Abdulnour, R. E. E. A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation. J. Vis. Exp. (150), e60024, doi:10.3791/60024 (2019).

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