Иммуноглобулин G (IgG) N-гликанхарактеризуется с помощью гидрофильной взаимодействия хроматографии UPLC. Кроме того, структура IgG N-гликанчетко разделена. Представлено здесь введение в этот экспериментальный метод, так что он может быть широко использован в научно-исследовательских условиях.
Glycomics является новой подспециализацией в исследованиях системы омики, которая предлагает значительный потенциал в открытии биомаркеров следующего поколения для восприимчивости к болезням, открытия целевых лекарственных средств и точной медицины. Альтернативные IgG N-гликаны были зарегистрированы в нескольких распространенных хронических заболеваний и предложил иметь большой потенциал в клинических приложениях (т.е., биомаркеры для диагностики и прогнозирования заболеваний). IgG N-гликанов широко характеризуется с помощью метода гидрофильной взаимодействия хроматографии (HILIC) ультра-производительности жидкой хроматографии (UPLC). UPLC является стабильной технологией обнаружения с хорошей воспроизводимостью и высокой относительной количественной точностью. Кроме того, структура IgG N-гликанчетко разделена, а гликановский состав и относительное изобилие в плазме характеризуются.
N-гликозилирование человеческих белков является общей и важной посттрансляционной модификацией1 и может помочь предсказать возникновение и развитие заболеваний относительно точно. В связи со сложностью его структуры, ожидается, что Есть более чем 5000 гликановых структур, обеспечивая большой потенциал в качестве диагностических и прогностических биомаркеров для заболеваний2. N-гликанов, прикрепленных к иммуноглобулину G (IgG), как было показано, имеют важное значение для функции IgG, и IgG N-гликозилирование участвует в балансе между про- и противовоспалительными системами3. Дифференциальная IgG N-гликозилирование участвует в развитии и прогрессировании заболеваний, представляющих как предрасположенность, так и функциональный механизм, участвующий в патологии заболевания. Воспалительная роль IgG N-гликозилирования была связана со старением, воспалительными заболеваниями, аутоиммунными заболеваниями и раком4.
С развитием технологии обнаружения, наиболее широко используются следующие методы в гликомиксах высокой пропускной способности: гидрофильные взаимодействия хроматографии (HILIC) ультрапроизводительной жидкой хроматографии с обнаружением флуоресценции (UPLC-FLR), мультиплексного капиллярного геля электрофорекса с лазерным индуцированным Обнаружение флуоресценции (xCGE-LIF), матричной лазерной дезорпации/ионизации времени полета масс-спектрометрии (MALDI-TOF-MS) и жидкой хроматографии электроспрейной масс-спектрометрии (LC-ESI-MS) . Эти методы преодолели предыдущие недостатки низкого потока, нестабильные результаты, и низкая чувствительность специфичность5,6.
UPLC широко используется для изучения связи между IgG N-гликозилирование и некоторые заболевания (т.е. старение7, ожирение8, дислипидемия9, диабет II типа10, гипертония11, ишемический инсульт12, и болезнь Паркинсона13). По сравнению с другими тремя вышеупомянутыми методами, UPLC имеет следующие преимущества5,14. Во-первых, он обеспечивает относительный метод количественного анализа, а анализ данных, который включает в себя полное нормализацию площади, улучшает сопоставимость каждой выборки. Во-вторых, стоимость оборудования и требуемых знаний относительно невелики, что облегчает внедрение и преобразование биомаркеров гликозилирования в клинические приложения. Представлено здесь введение в UPLC, чтобы он мог быть более широко используется.
UPLC служит в качестве метода относительного количественного анализа5,15. Полученные результаты свидетельствуют о том, что UPLC является стабильной технологией обнаружения с хорошей воспроизводимостью и относительной количественной точностью. Количество ?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана грантами Национального фонда естественных наук Китая (81673247 и 81872682) и Австралийско-китайский совместный грант (NH и MRC – APP11112767 -NSFC 81561128020).
2-aminobenzamide, 2-AB | Sigma, China | ||
96-well collection plate | AXYGEN | ||
96-well filter plate | Pol | 0.45 um GHP | |
96-well monolithic plate | BIA Separations | ||
96-well plate rotor | Eppendorf Co., Ltd, Germany | T_1087461900 | |
Acetic acid | Sigma, China | ||
Acetonitrile | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China | ||
Ammonium bicarbonate | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
Ammonium formate | Beijing Minruida Technology Co., Ltd. | ||
Constant shaking incubator/rocker | Zhicheng analytical instrument manufacturing co., Ltd, China | ZWY-10313 | |
Dextran Calibration Ladder/Glycopeptide column | Watts technology Co., Ltd, China | BEH column | |
Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma, China | ||
Disodium phosphate | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
Electric ovens | Tester instruments Co., Ltd | 202-2AB | |
Empower 3.0 | Waters technology Co., Ltd, America | ||
Ethanol | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China | ||
Formic acid | Sigma, China | ||
GlycoProfile 2-AB Labeling kit | Sigma, China | ||
HCl | Junrui Biotechnology Co., Ltd, China | ||
High-speed centrifuge | Eppendorf Co., Ltd, Germany | 5430 | |
Igepal | Sigma, China | ||
Low temperature centrifuge | Eppendorf Co., Ltd, Germany | ||
Low temperature refrigerator | Qingdao Haier Co., Ltd | ||
Manifold 96-well plate | Watts technology Co., Ltd, China | 186001831 | |
Methanol | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China | ||
Milli-Q pure water meter | Millipore Co., Ltd, America | Advantage A10 | |
NaOH | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
PH tester | Sartorius Co., Ltd, Germany | PB-10 | |
Phosphate buffered saline, PBS | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
Pipette | Eppendorf Co., Ltd, Germany | 4672100, 0.5-10μl & 10-100μl & 20-200μl & 1000μl | |
PNGase F enzyme | Sigma, China | ||
Potassium dihydrogen phosphate | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
Propan-2-ol | Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China | ||
SDS | Sigma, China | ||
Sodium chloride | Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China | ||
Sodium cyanoborohydride (NaBH3CN) | Sigma, China | ||
Spectrophotometer | Shanghai Yuanxi instrument Co., Ltd | B-500 | |
Transfer liquid gun | Smer Fell Science and Technology Co., Ltd, China | 4672100 | |
Tris | Amresco, America | ||
Ultra-low temperature refrigerator | Thermo Co., Ltd, America | MLT-1386-3-V; MDF-382E | |
Ultra-performance liquid chromatography | Watts technology Co., Ltd, China | Acquity MLtraPerformance LC | |
Vacuum Pump | Watts technology Co., Ltd, China | 725000604 | |
Volatilizing machine/Dryer | Eppendorf Co., Ltd, Germany | T_1087461900 | |
Vortex | Changzhou Enpei instrument Co., Ltd, China | NP-30S | |
Water-bath | Tester instruments Co., Ltd | DK-98-IIA | |
Weighing balance | Shanghai Jingke Scientific Instrument Co., Ltd. | MP200B |