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Medicine

抗疟药的紫外线-Vis和裸眼测定优化的格里斯反应

doi: 10.3791/60136 Published: October 11, 2019
* These authors contributed equally

Summary

该协议描述了一种在合成尿液和人血清中检测抗疟原药(PMQ)的新型色度测定方法。

Abstract

Primaquine(PMQ)是一种重要的抗疟疾药物,已被世界卫生组织(WHO)推荐用于治疗由P.vivax椭圆形引起的威胁生命的感染。然而,PMQ有不必要的副作用,导致葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏的患者急性溶血。有必要开发简单可靠的方法来PMQ测定与剂量监测的目的。2019 年初,我们报告了基于 UV-Vis 和肉眼的 PMQ 色度定量方法。检测基于PMQ和ailines之间的格里斯状反应,可以产生有色偶氮产物。合成尿中直接测量PMQ的检测限值在纳米摩尔范围内。此外,该方法在临床相关浓度下,从人血清样本中定量PMQ具有巨大潜力。在本协议中,我们将介绍有关彩色偶氮产物的合成和表征、试剂制备以及PMQ测定程序的技术细节。

Introduction

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PMQ是最重要的抗疟药物之一,它不仅作为组织分裂剂,以防止复发,而且作为一种药物细胞杀菌剂,以阻断疾病传播1,2,3,4。血管内溶酶是PMQ的一个引起关注的副作用,在G6PD缺陷中变得极其严重。众所周知,G6PD遗传性疾病在全世界分布,在疟疾流行地区的基因频率在3-30%之间。PMQ弱度的严重程度取决于G6PD缺乏的程度,以及PMQ暴露5、6的剂量和持续时间。为了降低风险,世卫组织建议对疟疾进行单低剂量(0.25毫克基础/千克)PMQ治疗。然而,这仍然受到患者药物敏感性变化5,7的挑战。剂量监测是必要的,以评估PMQ施用后的药代动力学,这可以影响剂量调整,以有限的毒性成功治疗。

高性能液相色谱(HPLC)是PMQ临床测定应用最广泛的技术。Endoh等人报告了一个HPLC系统,该系统带有一个紫外线检测器,用于使用C-18聚合物凝胶柱8进行血清PMQ定量。在其系统中,血清蛋白首先与醋酸酯沉淀,然后将上清液中的PMQ分离为HPLC。校准曲线在浓度范围为0.01-1.0 μg/mL8为线性。另一种基于反相HPLC的方法,在254nm处进行紫外线检测,用于PMQ及其主要代谢物9的定量。PMQ 的校准曲线在 0.025-100 μg/mL 之间是线性的。一种以混合己氧和乙酸乙酯作为有机相的附加液体-液体萃取物用于PMQ分离,回收率达到89%9。最近,Miranda等人开发了一种在260nm处进行紫外线检测的UPLC方法,用于在片剂配方中进行PMQ分析,检测限值为3微克/mL10。

虽然HPLC方法在药物测定中表现出良好的灵敏度,如果HPLC配备质谱仪,灵敏度还可以进一步提高,但仍存在一些缺点。HPLC 通常无法对生物流体中的直接药物测量进行直接测量,因为许多生物分子可以极大地影响分析。在HPLC分析11、12之前,需要额外提取以去除内源性分子。此外,HPLC-UV 探测器的 PMQ 检测通常以最大吸收波长 (260 nm) 进行;然而,生物流体中有许多内源性分子,其吸收性强于260nm(例如氨基酸、维生素、核酸和泌尿色素),从而干扰PMQ紫外线检测。需要开发简单且具有成本效益的方法来确定 PMQ,具有合理的灵敏度和选择性。

格里斯反应最早于1879年作为亚硝酸盐检测13、14、15、16的色度测试。最近,这种反应被广泛探索,不仅检测亚硝酸盐,而且检测其他与生物有关的分子17,18,19,20。我们之前已经报告了对PMQ的意外格里斯反应的第一次系统研究(图1)。在此系统中,PMQ 能够在酸性条件下与亚硝酸盐离子的替代品结合时形成彩色偶氮。我们进一步发现,当增加在苯二1的代用物的电子捐赠效果时,偶氮的颜色从黄色到蓝色不等。通过4-二聚氧碱和PMQ之间的优化反应,开发了一种基于紫外线吸收的PMQ定量方法。该方法在生物相关流体中对PMQ进行敏感和选择性检测具有巨大潜力。在这里,我们旨在描述基于此色度策略的 PMQ 确定的详细过程。

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Protocol

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1. 彩色偶氮合成

  1. 在25 mL圆形底瓶(RBF)中,将苯胺(0.1毫摩尔)和磷酸二磷酸二磷酸二磷酸二磷酸酯(45.5毫克,0.1毫摩尔)溶解到10 mL的H3PO4溶液(5%v/v)。将 RBF 放在冰浴上,在溶液中加入具有适当尺寸的搅拌棒,并将 RBF 放在搅拌板上。
    注:对于偶氮3g的合成(图2),使用0.2毫摩尔的原磷基磷酸二磷酸酯。
  2. 将NaNO 2(6.9毫克,0.1毫摩尔)溶解在1 mL的冷却水中,然后滴入反应混合物中。取出冰浴,并将反应混合物搅拌在室温下。
  3. 使用硅胶涂层薄层色谱 (TLC) 板监测反应。使用二氯甲烷 (DCM)/甲醇 (MeOH) 混合物 (vol/vol = 5:1) 作为 TLC 的稀释剂。偶氮产品在 TLC 板上呈现彩色斑点,肉眼易于分辨。当 PMQ 斑点在 TLC 上消失时停止反应。
  4. 在冰浴上通过 NaOH (2 M) 将反应混合物调整到 pH >10。使用 50 mL 分离漏斗将混合物提取 3 次,每种混合物均含有 20 mL 乙酸乙酯,使用旋转蒸发器在真空下混合和浓缩有机相。
    注:萃取前,调整反应溶液的pH值超过10。这可以保持原胺作为非离子形式,从而促进提取。
  5. 在正常压力下,使用MeOH/H2O作为埃孔,用闪闪色谱法用反相硅胶净化残留物。通过冻干干燥产品溶液,提供所需的偶氮产品。
    注:在稀释的HCl溶液(0.2M)中也进行同样的反应。

2. 紫外线测量和理论计算

  1. 分别在蒸馏水中或5%H3PO4溶液(pH 1.1)中溶解纯偶氮(50 μM)。在室温 (25°C) 下在分光光度计上记录 UV-减光光谱 (250-700 nm)。将数据导出为 .xls/.xlsx 文件,以便进一步分析。
  2. 使用高斯16程序对PMQ本身和偶氮产品执行所有理论计算。使用具有 6-31G 基础集的时间相关密度函数理论 (TD-DFT)。通过可极化连续模型(PCM)使用水的形式主义包括溶剂效应。
    1. 使用软件(例如,Chemdraw Office)绘制结构,然后将结构另存为高斯输入文件 (.gif)。
    2. 使用高斯视图打开 gif 文件,然后单击"计算"按钮。选择高斯计算设置,Opt_Freq接地状态-DFT-B3LYP-6-31G;然后单击"提交"。几何优化将生成 .log 文件。
    3. 按照上述过程,使用高斯视图打开此日志文件。单击"计算高斯计算设置",仅选择能量TD-SCF-DFT-B3LYP-6-31G-单一。然后提交。能量计算将生成另一个日志文件和多维数据集文件。
    4. 使用高斯视图从能量计算打开日志文件。单击结果-UV/Vis以查看预测的吸收。
    5. 使用高斯视图打开多维数据集文件。单击"结果"并选择曲面和轮廓曲面操作以及新曲面以查看轨道。
  3. 比较实验测量和高斯计算的结果。根据以下公式计算计算值和测量值之间的百分比误差。
                  错误 | |(最大 cal.-W最大分量)/最大分量。|• 100%
    其中 W最大cal. 表示理论计算的最大吸收波波长和 W最大分量。表示实验结果的波长。

3. PMQ 确定

  1. 使用 96 孔板进行 PMQ 测量 (图 5
    1. 将4-二氧化二环在0.2 M HCl中溶解,用于200 mM的氧化盐溶液R1。将亚硝酸钠溶解在蒸馏水中,获得5 mM溶液R2。使用前,将所有溶液放在冰箱4°C。
    2. 将 100 μL 的 R1 添加到 96 孔板中,并将含有样品的 50 μL PMQ 添加到板中,与 R1 混合。然后,将 50 μL 的 R2 添加到板中。通过重复移液混合溶液。
    3. 将板保持在室温下 15 分钟,然后将紫外线吸收度记录在 504 nm。每次测试重复 3 次。 偶氮产品稳定,房间光线照射;没有必要把盘子放在暗底下。
    4. 将数据导出为 .xls/.xlsx 文件,以便进一步分析。
  2. 用于尿样直接 PMQ 测量的校准曲线
    1. 使用PMQ浓度分别为0、1、2、5、10、20、50、100、200 μM的合成尿液制备PMQ溶液。
    2. 将 100 μL 的 R1 加入 96 孔板,并加入 50 μL 的 PMQ 尿液溶液,与 R1 混合。然后,向上述混合物中加入50μL的R2。通过重复移液混合溶液。将板保持在室温下 15 分钟,然后将紫外线吸收度记录在 504 nm。
    3. 根据吸收度I504和 PMQ 浓度生成校准曲线。使用没有 PMQ 的井中的值作为空白,并在数据处理之前从所有测试中减去空白值。
    4. 执行线性拟合以生成线性方程,如Y = aX+b,其中Y是 504 nm 处的吸收强度,X是 PMQ 的浓度,a是斜率,b是线性线的 y 截距。
  3. 用于人血清样本中直接 PMQ 测量的校准曲线
    1. 使用PMQ浓度分别为0、1、2、5、10、20、50、100、200、μM的血清制备PMQ溶液。
    2. 将 100 μL 的 R1 加入 96 孔板,并加入 50 μL 的 PMQ 血清溶液,与 R1 混合。将 50 μL 的 R2 添加到上述混合物中,并通过重复移液混合溶液。将板保持在室温下 15 分钟,然后将紫外线吸光度记录在 504 nm。将数据导出为 .xls/.xlsx 文件,以便进一步分析。
    3. 根据吸收度I504和 PMQ 浓度生成校准曲线。使用没有 PMQ 的井中的值作为空白,并在数据处理之前从所有测试中减去空白值。
    4. 执行线性拟合以生成线性方程,如Y = aX+b,其中Y是 504 nm 处的吸收强度,X是 PMQ 的浓度,a是斜率,b是线性线的 y 截距。
  4. 从血清中提取PMQ
    1. 在人血清中加入一定量的PMQ,以模拟含有PMQ的血清。对于PMQ萃取,在15 mL离心管中加入6 mL乙酸乙酯/六氯苯甲酸酯混合物(7:1 v/v)至2 mL的含PMQ血清中。
    2. 在萃取系统中加入100 μL氢氧化钠(2M)溶液。使用涡旋混合器猛烈摇动管子30s。收集有机层,并在真空下使用旋转蒸发器浓缩。
    3. 用200 μL蒸馏水重新溶解残留物,并通过220nm孔径的圆盘状膜过滤去除不溶性脂质成分。使用最终解决方案进行测试。
  5. 通过提取从血清中确定PMQ
    1. 按照步骤 3.2 或 3.3 生成蒸馏水中 PMQ 的校准曲线。根据步骤 3.4 从含 PMQ 的血清中提取 PMQ。
    2. 将 100 μL 的 R1 和 50 μL 的 PMQ 溶液加入 96 孔板中。将 50 μL 的 R2 添加到上述混合物中,并通过重复移液混合溶液。
    3. 将板保持在室温下 15 分钟,并将紫外线吸光度记录在 504 nm。使用带有 R1 和 R2 但没有 PMQ 的井作为控件。将数据导出为 .xls/.xlsx 文件,以便进一步分析。
    4. 从每个测试的吸收值 I 504中减去控制值,然后根据校准曲线中的内衬方程使用结果进行浓度计算。
      注:PMQ 在所有情况下的检测 (LOD) 限值都可以根据标准方法22计算。计算基于校准函数:LOD = 3.3 =SD/b,其中 SD 是空白的标准偏差,b是回归线的斜率

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Representative Results

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为了优化反应条件(图2),使用各种银条通过格里斯反应与PMQ耦合。我们取得了一系列不同颜色的偶氮。已经发现,具有电子捐赠的单线可导致紫外线吸收光谱的红移。通过时间相关密度函数理论(TD-DFT)进行理论计算。如图2A所示,计算结果与光学测量结果一致,平均误差为3.1%。4-二氧化二环,由于其反应速率好、产品溶解度、稳定性好,因此用于进行PMQ检测反应。此外,4-二氧化二氮的偶氮产物为红色,与肉眼很容易区分。因此,这种反应为肉眼PMQ检测提供了潜力(图3)。

图 4A显示了偶氮产品 3d 的紫外线吸收光谱的 pH 效应。I504在将 pH 从 1.0 增加到 6.0 时不会更改。I504低于 pH 7.0 显示略有下降,而基本 pH(8.0 和 9.0)对吸收影响很大。图4B显示了PMQ溶液对格里斯反应的pH效应。如第 3.1 节所述,在具有各种 pH(4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0)的 PBS 缓冲液中的 PMQ (50 μM) 与测试试剂单独混合。然后,在室温下15分钟后测量I504。如上所述,PMQ溶液的基本pH(8.0,9.0)可能会影响反应。图 5显示了执行 PMQ 检测的 Gries 反应的一般过程。如协议部分所述,需要四个步骤来获取吸收数据I504进行分析。图6A和6B显示了分别从尿液和血清样本直接检测PMQ的校准曲线,无需进行样品预处理。当合成尿液中的PMQ范围为0至200μM时,发现具有优异的线性关系(R2 = 0.998)。在血清样本中,在浓度在10至200μM时发现线性关系。

图7A显示了从血清中提取PMQ的过程。残留物在萃取和浓缩后重新溶解在蒸馏水中,然后进行过滤。为了模拟真正的含PMQ血清,PMQ被添加到人血清中,最终浓度为0,0.2,0.5,1.0,2.0μM。使用步骤3.4和3.5,发现血清中PMQ的浓度分别为0.02、0.14、0.44、0.90和1.78 μM(图7C)。根据结果,当PMQ在血清中超过0.5μM时,PMQ回收的百分比约为90%,这与以前的报告9相当。

Figure 1
图1:PMQ. ( A ) 用于亚硝酸盐分析的经典格里斯反应的原理图. B) 建议的PMQ检测方法中的格里斯反应。这个数字已经修改,从以前的工作21的许可。请点击此处查看此图的较大版本。

Figure 2
图2:合成偶氮的光物理特性。A) UV-vis 测量和理论计算从不同苯二系产生的偶氮的最大吸收。括号外的数字表示蒸馏 H2O 接近中性 pH 条件的最大吸光度测量;括号中的数字是指 5% H3PO4溶液 (pH = 1.1) 中的测量值。abs/nm exper.表示实验数据,βabs/calc 表示理论计算数据。Eexc是激发能量 (eV),f 是振荡器强度。(B) PMQ和偶氮产物的照片图像具有不同的基质,50μM在5%磷酸溶液中。(C) 合成产品的紫外线光谱.值已归一化为介于 0 和 1 之间的范围。这个数字已经修改,从以前的工作21的许可。请点击此处查看此图的较大版本。

Figure 3
图3:PMQ的色度测定。A) 以时间相关方式监测最大I504的吸光度变化。使用4-二氧基碱进行反应,PMQ在100μM下使用;(B) PMQ 不同浓度反应的颜色变化:4-血氧素溶液400 μL(0.2 M HCl中为200 mM)和水中亚硝酸钠200μL(5 mM),不同浓度的PMQ溶液为200μL(0,1,2,510、20、50、100 μM)。请点击此处查看此图的较大版本。

Figure 4
图4:pH对PMQ检测的影响。A) pH 对偶氮产物3d (50 μM) 的紫外线吸收率的影响;(B) PMQ (50 μM) 在PBS缓冲液中具有不同pH(4.0,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0)用于执行步骤3.1所述的反应。15分钟后,测量了504纳米的吸光度。请点击此处查看此图的较大版本。

Figure 5
图5:PMQ测定通过96孔板系统上的Gries反应。R1 是指 0.2 M HCl 中的 200 mM 4-二氧化二环溶液;R2 是指蒸馏水中的亚硝酸钠 5 mM。请点击此处查看此图的较大版本。

Figure 6
图6:从(A)合成尿液和(B)人血清样本中确定PMQ的校准曲线。PMQ 的浓度范围为 0-200 μM。请点击此处查看此图的较大版本。

Figure 7
图7:从血清样本中测定PMQ.A) 从血清样本中提取PMQ的原理图进行定量分析.(B) I 504和 PMQ 浓度之间的线性关系在 0 到 100 μM 的范围内。(C) 血清中的PMQ通过基于Gries反应的方法与添加到血清中的确切量进行比较进行量化。这个数字已经修改,从以前的工作21的许可。请点击此处查看此图的较大版本。

Table 1
表 1.对数D的理论计算和PMQ和CPMQ水分布百分比。

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Discussion

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我们描述了一种用于方便PMQ定量的色度方法。它可能是最简单、最经济高效的当前方法。更重要的是,这种方法无需使用任何设备即可实现基于肉眼的PMQ测量。

用于 PMQ 检测的优化的 Griess 反应可以生成最大吸收为 504 nm 的红色偶氮。内源性生物分子的紫外线吸收的潜在影响有限,因此该方法可用于生物流体中PMQ的直接测量。结果表明,在0-200μM浓度范围内,尿液PMQ检测存在优异的线性关系(R2 = 0.998),图6A)。PMQ 的检测限值 (LOD) 为 0.63 μM。该方法还显示出了直接测量人血清中PMQ的巨大潜力。在血清PMQ检测的浓度范围从10至200μM中发现一种极好的线性关系(图6B)。通过提取和浓缩对血清样品进行预处理,可以进一步提高血清的灵敏度。如图7所示,使用简单的提取过程,该方法可以量化血清PMQ在临床相关范围内。根据反应机制,PMQ(CPMQ)的主要甲苯代谢物可能形成具有类似UV-Vis特性的偶氮产物。然而,在基本pH条件下的液体-液体萃取可以潜在地减少CPMQ的干扰。表 1显示了 PMQ 和 CPMQ 的计算日志 D 和水分布。如图所示,在 pH >10 时,在水相中不到 6.33% 的 PMQ,而超过 98.54% 的 CPMQ 将在水相中找到。因此,从理论上讲,PMQ的93.7%以上和CPMQ的不到1.56%可以提取出来进行测试。可以得出结论,主代谢物CPMQ的干扰是有限的。

PMQ 检测过程非常容易处理。以96孔板系统为例,整个过程包括四个步骤:1)将100μL的4-二氧基溶液(0.2 M HCl中的200 mM)R1加入96孔板;2) 加入50μL的PMQ浓度未知样品与R1混合;3)加入50μL的R2(5mM亚硝酸钠溶液),在室温下执行反应;4) 使用光谱仪在 504 nm 处记录紫外线吸收。根据吸收强度I504和校准曲线中的线性方程,可以计算未知样品的 PMQ 浓度。整个过程在室温下进行,无需孵育。整个过程中不需要深色环境,因为彩色产品对室内光线不敏感。

需要注意的是,反应溶液达到饱和I504的时间取决于温度。如图3所示,在室温(25°C)下至少需要12分钟。如果在低于 25°C 的温度下执行反应,反应时间会更长。PMQ溶液的基本pH条件可能影响吸收度I504。要解决此问题,请将 PMQ 解决方案的 pHH 调整为小于 7.0。否则,pH 超过 7.0 的解决方案需要新的校准曲线。此外,测试样品中的内在亚硝酸盐会影响检测。然而,只有当内在亚硝酸盐的浓度极高时,才会发生这种情况,因为标准测试中使用了高浓度亚硝酸盐(5 mM)。

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Disclosures

作者没有什么可申报的。

Acknowledgments

作者认可了广州中医药大学的创业助学金和GZUCM(2019QNPY06)的青年科研培训项目。我们亦感谢广州中医药大学岭南医学研究中心对设施的支持。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
4-Methoxyaniline Aladdin K1709027
2,4-Dimethoxyaniline Heowns 10154207
3,4-Dimethoxyaniline Bidepharm BD21914
4-Methylaniline Adamas-beta P1414526
4-Nitroaniline Macklin C10191447
96-wells,Flat Botton Labserv 310109008
Gaussian@16 software Gaussian, Inc Version:x86-64 SSE4_2-enabled/Linux
Hydrochloric acid GCRF 20180902
Marvin sketch (software) CHEMAXON free edition: 15.6.29
Phosphoric acid Macklin C10112815
Primaquine bisiphosphate 3A Chemicals CEBK200054
Sodium nitrite Alfa Aesar 5006K18R
Sulfonamides TCI(shanghai) GCPLO-BP
Varioskan LUX Plate reader Thermo Fisher Supplied with SkanIt Software 4.1

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Fernando, D., Rodrigo, C., Rajapakse, S. Primaquine in vivax malaria: an update and review on management issues. Malar Journal. 10, 351 (2011).
  2. Deng, C., et al. Large-scale Artemisinin-Piperaquine Mass Drug Administration With or Without Primaquine Dramatically Reduces Malaria in a Highly Endemic Region of Africa. Clinical Infectious Diseases. 67, (11), 1670-1676 (2018).
  3. Pavic, K., et al. Primaquine hybrids as promising antimycobacterial and antimalarial agents. European Journal of Medical Chemistry. 143, 769-779 (2018).
  4. McQueen, A., et al. Synthesis, characterization, and cellular localization of a fluorescent probe of the antimalarial 8-aminoquinoline primaquine. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 27, (20), 4597-4600 (2017).
  5. Ashley, E. A., Recht, J., White, N. J. Primaquine: the risks and the benefits. Malaria Journal. 13, (1), 418 (2014).
  6. Watson, J., Taylor, W. R., Menard, D., Kheng, S., White, N. J. Modelling primaquine-induced haemolysis in G6PD deficiency. Elife. 6, (2017).
  7. Beutler, E. Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency: a historical perspective. Blood. 111, (1), 16-24 (2008).
  8. Endoh, Y. S., et al. High-performance liquid chromatographic determination of pamaquine, primaquine and carboxy primaquine in calf plasma using electrochemical detection. Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications. 579, (1), 123-129 (1992).
  9. Dua, V. K., Kar, P. K., Sarin, R., Sharma, V. P. High-performance liquid chromatographic determination of primaquine and carboxyprimaquine concentrations in plasma and blood cells in Plasmodium vivax malaria cases following chronic dosage with primaquine. Journal of Chromatography B: Biomedical Applications. 675, (1), 93-98 (1996).
  10. Miranda, T. A., Silva, P. H. R., Pianetti, G. A., César, I. C. Simultaneous quantitation of chloroquine and primaquine by UPLC-DAD and comparison with a HPLC-DAD method. Malaria Journal. 14, 29 (2015).
  11. Tatsuno, M., Nishikawa, M., Katagi, M., Tsuchihashi, H. Simultaneous determination of illicit drugs in human urine by liquid chromatography-mass spectrometry. Journal of Analytical Toxicology. 20, (5), 281-286 (1996).
  12. Erni, F. Use of high-performance liquid chromatography in the pharmaceutical industry. Journal of Chromatography A. 507, 141-149 (1990).
  13. Tsikas, D. Analysis of nitrite and nitrate in biological fluids by assays based on the Griess reaction: Appraisal of the Griess reaction in the l-arginine/nitric oxide area of research. Journal of Chromatography B. 851, (1), 51-70 (2007).
  14. Zurcher, D. M., Adhia, Y. J., Romero, J. D., McNeil, A. J. Modifying a known gelator scaffold for nitrite detection. Chemical Communications. 50, (58), 7813-7816 (2014).
  15. Kunduru, K. R., Basu, A., Tsah, T., Domb, A. J. Polymer with pendant diazo-coupling functionality for colorimetric detection of nitrates. Sensors and Actuators B: Chemical. 251, 21-26 (2017).
  16. Li, D., Ma, Y., Duan, H., Deng, W., Li, D. Griess reaction-based paper strip for colorimetric/fluorescent/SERS triple sensing of nitrite. Biosensors and Bioelectronics. 99, 389-398 (2018).
  17. Deng, T., et al. A novel strategy for colorimetric detection of hydroxyl radicals based on a modified Griess test. Talanta. 195, 152-157 (2019).
  18. Pang, H., et al. A photo-responsive macroscopic switch constructed using a chiral azo-calix[4]arene functionalized silicon surface. Chemical Communications (Camb). 54, (24), 2978-2981 (2018).
  19. Kaur, N., Dhaka, G., Singh, J. Simple naked-eye ratiometric and colorimetric receptor for anions based on azo dye featuring with benzimidazole unit. Tetrahedron Letters. 56, (9), 1162-1165 (2015).
  20. Liu, F., Lou, J., Hristov, D. X-Ray responsive nanoparticles with triggered release of nitrite, a precursor of reactive nitrogen species, for enhanced cancer radiosensitization. Nanoscale. 9, (38), 14627-14634 (2017).
  21. Deng, T., et al. An unexpected Griess reaction on the important anti-malarial drug primaquine and its application for drug determination. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 171, 8-14 (2019).
  22. Shrivastava, A., Gupta, V. Methods for the determination of limit of detection and limit of quantitation of the analytical methods. Chronicles of Young Scientists. 2, (1), 21-25 (2011).
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Wu, Y., Wu, S., Huang, X. a., Zeng, Q., Deng, T., Liu, F. Optimized Griess Reaction for UV-Vis and Naked-eye Determination of Anti-malarial Primaquine. J. Vis. Exp. (152), e60136, doi:10.3791/60136 (2019).More

Wu, Y., Wu, S., Huang, X. a., Zeng, Q., Deng, T., Liu, F. Optimized Griess Reaction for UV-Vis and Naked-eye Determination of Anti-malarial Primaquine. J. Vis. Exp. (152), e60136, doi:10.3791/60136 (2019).

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