हालांकि Campylobacter के लिए मल संस्कृति गलत है, यह अभी भी पहचान के लिए सोने के मानक माना जाता है । मानव मल में सी जेजुनी के परिवहन मीडिया में पता लगाने और अस्तित्व की सीमा निर्धारित करने के तरीकों का वर्णन किया जाता है और बेहतर सटीकता के साथ एक नए इम्यूनोसे के साथ तुलना की जाती है।
Campylobacterके निदान के लिए मानव मल से एक संस्कृति आधारित आंतों की बीमारी कई दिन लगते हैं, एक प्रतीक्षा है कि चिकित्सक और रोगी के धैर्य करों । एक संस्कृति नमूना हैंडलिंग के दौरान व्यवहार्यता के यादृच्छिक नुकसान, अन्य मल वनस्पतियों के अतिविकास और पारंपरिक मीडिया पर कई रोगजनक कैम्पिलोबैक्टर प्रजातियों के खराब विकास से झूठे नकारात्मक परिणामों से भी ग्रस्त है। इन समस्याओं रोगी उपचार पर नैदानिक निर्णयचकित कर सकते है और Campylobacter विकास और संक्रमण पर बुनियादी सवालों का जवाब देने से क्षेत्र सीमित है । हम एक ऐसी प्रक्रिया का वर्णन करते हैं जो जीवाणु संख्याओं की निचली सीमा का अनुमान लगाती है जिसे संस्कृति द्वारा पता लगाया जा सकता है और इस नाजुक जीव के परिवहन के लिए उपयोग किए जाने वाले मीडिया में सी जेजुनी के अस्तित्व की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक विधि है। इस जानकारी को जानते हुए, नैदानिक परीक्षणों के लिए चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक पता लगाने की सीमा निर्धारित करना और गैर-रोगसूचक उपनिवेशीकरण प्रचलित है, यदि अन्य आंत्र रोगजनकों के साथ सह-संक्रमण आम है, या यदि बैक्टीरियल लोड लक्षणों या गंभीर अगली कड़ी से संबंधित है, तो इसका अध्ययन नहीं करना संभव हो जाता है। अध्ययन में १,५५२ संभावित रूप से एकत्र किए गए रोगी दस्त मल नमूनों का परीक्षण भी शामिल है जिन्हें शुरू में पारंपरिक संस्कृति द्वारा वर्गीकृत किया गया था और आगे एक नए एंजाइम इम्यूनोसे द्वारा परीक्षण किया गया था । सकारात्मक और विवेकी नमूनों को फिर सच्चे-सकारात्मक या सच्चे-नकारात्मक स्थिति को आवंटित करने के लिए चार आणविक तरीकों से जांच की गई । 5 गैर संस्कृति तरीकों सभी ४८ सकारात्मक और विचारशील नमूनों पर पूरा समझौता दिखाया, जबकि संस्कृति गलत पहचान 14 (28%) संस्कृति द्वारा गलत तरीके से पहचाने गए नमूनों में 13 झूठे नकारात्मक और 1 झूठे सकारात्मक नमूना शामिल थे । इस बुनियादी प्रोटोकॉल का उपयोग कई कैम्पिलोबैक्टर spp के साथ किया जा सकता है और कैम्पिलोबैक्टर बैक्टीरिया की संख्या की अनुमति देगा जो मनुष्यों में आंत्रशोथ के लक्षणों का उत्पादन करते हैं और व्यापकता दरों को अपडेट करने के लिए।
संयुक्त राज्य अमेरिका रोग नियंत्रण केंद्र (सीडीसी) ने हाल ही में प्रकाशित किया है कि खाद्य जनित रोग सक्रिय निगरानी नेटवर्क (FoodNet) निगरानी कार्यक्रम २०१८१में प्रयोगशाला का निदान Campylobacter संक्रमण के ९,७२३ मामलों की सूचना दी । यह 2015−20171में कैम्पिलोबैक्टर मामले की रिपोर्ट में 12% की वृद्धि का प्रतिनिधित्व करता है। दुनिया भर में, Campylobacter spp. सबसे आम जीवाणु आंतों संक्रमण2में से एक हैं । फिर भी, हर साल होने वाली कैम्पिलोबैक्टरआधारित आंतों की बीमारियों की संख्या3को कम रिपोर्ट किए जाने की आशंका है । यह कम अनुमान अनुमान के रूप में उम्मीद के मुताबिक है क्योंकि ज्यादातर रोगियों को केवल मध्यम असुविधा और कोई चिकित्सा उपचार के साथ ठीक कर सकते हैं । हालांकि, अधिक गंभीर लक्षणों वाले रोगियों के लिए या जो गंभीर बीमारी के लिए उच्च जोखिम में हैं, और जो तब चिकित्सा देखभाल की तलाश करते हैं, मल संस्कृति यह आकलन करने के लिए सबसे आम तरीका है कि क्या कैम्पिलोबैक्टर रोगजनक है जो उनके संकट का कारण बन रहा है4।
Campylobacter spp.के लिए, मल संस्कृति विशेष रूप से परेशानी है । सबसे आम रोगजनक जीव, सी जेजुनी, सी कोलाई, सी अप्सलेन्सिस, और सी लारी, माइक्रोएयरोफिलिक5हैं। इसका मतलब यह है कि बैक्टीरिया यादृच्छिक, अज्ञात दरों पर एक बार हवा के संपर्क में मर जाएगा । नमूना संग्रह और संस्कृति सेटअप के बीच का समय इस प्रकार संस्कृति द्वारा व्यवहार्य कैम्पिलोबैक्टर spp का पता लगाने की क्षमता में एक अनियंत्रित चर बन जाता है ।
मल के नमूनों की प्रत्यक्ष संस्कृति के लिए, कैम्पिलोबैक्टर की धीमी वृद्धि भी एक समस्या है। कैम्पिलोबैक्टर उपनिवेश 48 एच के ऊष्मायन के बाद भी बहुत छोटे हैं और मल मैट्रिक्स में प्रतिस्पर्धी जीवों द्वारा आसानी से कवर किया जा सकता है। प्लेटें जिनमें एंटीबायोटिक्स होते हैं, जिनमें सी जेजुनी और सी कोलाई के अधिकांश उपभेदों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, क्योंकि एंटीबायोटिक्स कई (लेकिन सभी नहीं) के विकास को रोकते हैं, जो मल बैक्टीरिया प्रतिस्पर्धा करते हैं, जिससे कैम्पिलोबैक्टर कॉलोनियों के बेहतर दृश्य की अनुमति होती है6। हालांकि, सी लारी और सी अपसेलियांसिस जैसी अन्य कैम्पिलोबैक्टर प्रजातियां इनमें से कुछ एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति संवेदनशील हैं, और या तो खराब हो जाती हैं या बिल्कुल नहीं। यह इन एंटीबायोटिक-संवेदनशील प्रजातियों7से कैम्पिलोबैक्टर संक्रमणों की कम रिपोर्टिंग में योगदान देता है ।
एक तीसरा कारण है कि कैम्पिलोबैक्टर के लिए एक संस्कृति गलत हो सकती है। बैक्टीरिया, जब जोर दिया, व्यवहार्य रह सकते हैं, लेकिन बन सकता है “गैर culturable”8। परिभाषा के अनुसार इसका मतलब है कि संस्कृति नमूने में मौजूद बैक्टीरिया का पता नहीं लगाएगी। कितनी बार होता है8ज्ञात नहीं है ।
संस्कृति के साथ इन संभावित मुद्दों को देखते हुए, हम कई तुलना संदर्भ तरीकों का इस्तेमाल किया ताकि दोषपूर्ण संस्कृति परिणाम एक भी तुलना परख गलत9दिखाई नहीं दिया । उपयोग की जाने वाली संस्कृति विधियों (उदाहरण के लिए, कैम्पिलोबैक्टर-चयनात्मकप्लेटें, परिवहन माध्यम, गैस पैदा करने वाले पाउच) को चुना गया क्योंकि उनका उपयोग स्टूल नमूना संस्कृति10के लिए नैदानिक प्रयोगशालाओं में व्यापक रूप से किया जाता है।
यहां वर्णित संस्कृति प्रोटोकॉल विकसित किए गए थे क्योंकि कैम्पिलोबैक्टर जेजुनी की सबसे कम संख्या है कि मानव मल में संस्कृति द्वारा पता लगाया जा सकता है पता नहीं था । हालांकि पोल्ट्री मल11में मौजूद कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (सीएफयू) की संख्या के लिए अनुमान प्रकाशित किए गए हैं, लेकिन इन परिणामों को मानव मल के बराबर नहीं किया जा सकता है, क्योंकि कैम्पिलोबैक्टर spp मुर्गियों में कॉममेंसल्स हैं, और दस्त का कारण नहीं बनते हैं। इस मौलिक जानकारी के लिए Campylobacter बैक्टीरिया की संख्या है कि मनुष्यों में आंत्रशोथ के लक्षण पैदा करेगा और उपभेदों या प्रजातियों के बीच उग्रता की तुलना स्थापित करने की जरूरत है ।
यहां वर्णित संस्कृति विधियों सरल, व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली तकनीकों और अधिकांश प्रयोगशालाओं में उपलब्ध सामग्रियोंपर 10बनाई गई हैं। यह विश्लेषणात्मक और काल्पनिक नमूनों का संयोजन है जो मल संस्कृतियों के लिए चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक पता लगाने की सीमा की नई जानकारी प्रदान करता है। इसके अतिरिक्त, 5 अलग-अलग परखों के साथ संस्कृति परिणामों का न्यायनिर्णयन इस निष्कर्ष को मजबूत करता है कि कैम्पिलोबैक्टर मल संस्कृति रोगी नमूनों के एक महत्वपूर्ण हिस्से को गलत पहचानती है। ईआईए और आणविक परख नियंत्रण के रूप में उपयोगी होते हैं क्योंकि वे प्रत्येक एक अलग सिद्धांत (एंटीबॉडी बनाम डीएनए प्रवर्धन के साथ एंटीजन इंटरैक्शन) पर आधारित होते हैं और महत्वपूर्ण बात यह है कि बैक्टीरिया की व्यवहार्यता पर भरोसा नहीं करते हैं। ध्यान दें कि इन अध्ययनों के लिए उपयोग की जाने वाली ईआईए परख अच्छी तरह से मान्य है और इसे 4 आणविकपरीक्षणों 12के साथ पूरी तरह से सहमत दिखाया गया है।
Campylobacter spp की संस्कृति विशेष रूप से परेशानी है, संवेदनशीलता के साथ 60−76%19,20से सीमा की सूचना दी, और के रूप में यहां सच सकारात्मक नमूनों का पता लगाने में विफलता की अपनी ~30% की दर से स्पष्ट है । कार्मिक उम्मीद कर सकते हैं कि नियंत्रण ईआईए और आणविक परीक्षण अक्सर सकारात्मक परिणाम देंगे जब संस्कृति डेटा नकारात्मक होते हैं।
प्रोटोकॉल में सबसे महत्वपूर्ण कदम प्रतिस्पर्धी मल वनस्पतियों के बीच पिन-पॉइंट कॉलोनियों की पहचान है। यह असामान्य नहीं है, क्योंकि पता लगाने की सीमा के पास कमजोर होना, शून्य और गैर-शून्य कॉलोनी गिनती अनुमान (जैसे, 2, 0, 1, 0, 0, 0) का बारी-बारी से होना। यह पहचानना महत्वपूर्ण है कि संस्कृति थ्रेसहोल्ड सांद्रता की एक श्रृंखला होगी, न कि एक विशिष्ट सीएफयू/एमएल । फिर भी, संस्कृति का पता लगाने के लिए एक कम सीमा के रूप में ~ 1 x 106 CFU/mL मल का अनुमान अच्छी तरह से रिपोर्ट के साथ तुलना करता है कि संक्रमित मनुष्यों ने प्रति ग्राम मल21106 से 109कैम्पिलोबैक्टर बहाया। एंटीबायोटिक दवाओं या आगर प्लेटों में परिवर्तन और व्यक्तिगत मल नमूनों में अपरिहार्य विविधताओं निस्संदेह दहलीज मूल्यों को बदल देगा । इस प्रोटोकॉल से ग्रोथ मीडिया में सुधार संभव होना चाहिए ।
संस्कृति का पता लगाने के लिए एक सीमा पर यह पहली जानकारी नैदानिक परीक्षणों के लिए चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक थ्रेसहोल्ड सेट करना संभव बनाती है, और माइक्रोबायोलॉजिकल फाउंडेशन देती है जिसे कैम्पिलोबैक्टरद्वारा गैर-रोगसूचक गाड़ी22,23 के अअध्ययन मुद्दों का समाधान करने की आवश्यकता होती है, या यदि बैक्टीरियल लोड लक्षणों या गंभीर अगली कड़ी से संबंधित है।
The authors have nothing to disclose.
इन अध्ययनों को टेकलैब, इंक द्वारा वित्त पोषित किया गया था ।
Anaerobic 3.5L Jar | Thermo Fisher | HP0031A | |
AnaeroGRO Campylobacter Selective Agar | Hardy Diagnostics | AG701 | |
Bacto Brain Heart Infusion | BD Biosciences | 237500 | |
Bacto Protease Peptone | Life Technologies Corp | 211684 | |
Basic Fuchsin | Fisher Scientific | B12544 | |
BBL Trypticase Peptone | Life Technologies Corp | 211921 | |
C. coli Type strain | ATCC | 33559 | |
C. jejuni Type strain | ATCC | 33560 | |
CampyGen gas generating system sachet | Thermo Fisher | CN0025A | |
Campylobacter QUIK CHEK | TechLab, Inc. | T5047 / T31025 | |
Cary-Blair transport medium | Fisher Scientific | 23-005-47 | |
Coli Roller Sterile plating beads | Millipore Sigma | 71013 | |
Dilution Buffer | Anaerobe Systems | AS-908 | |
Fetal bovine serum | Equitech-Bio, Inc | SFBM30 | |
Sodium bisulfite | Sigma-Aldrich | 243973 | |
Sodium pyruvate | Sigma-Aldrich | P2256 | |
Spectrophotometer cuvettes | USA Scientific | 9090-0460 |