Summary
Stamceller undersöks kontinuerligt som potentiella behandlingar för individer med hjärtinfarkt skada, dock, deras minskade livskraft och retention inom skadad vävnad kan påverka deras långsiktiga effekt. I detta manuskript beskriver vi en alternativ metod för stamcellsleverans i en murine modell av ischemi reperfusion skada.
Abstract
Det finns ett betydande intresse för användning av stamceller (SCs) för återvinning av hjärtfunktion hos individer med skador på hjärtinfarkt. Vanligast studeras hjärtstamcellsterapi genom att leverera SCs samtidigt med induktion av hjärtinfarkt skada. Detta tillvägagångssätt presenterar dock två betydande begränsningar: den tidiga fientliga pro-inflammatoriska ischemisk miljö kan påverka överlevnaden av transplanterade SCs, och det representerar inte subakut infarkt scenario där SCs kommer sannolikt att användas. Här beskriver vi en tvådelar serie av kirurgiska ingrepp för induktion av ischemi-reperfusion skada och leverans av mesenchymala stamceller (MSC). Denna metod för stamcellsadministration kan möjliggöra den längre viabiliteten och retentionen runt skadad vävnad genom att kringgå det ursprungliga immunsvaret. En modell av ischemi reperfusion skada inducerades i möss åtföljs av leverans av mesenkymala stamceller (3,0 x 105), stably uttrycker reportern genen firefly luciferas under den constitutively uttryckt CMV promotor, intramyocardially 7 dagar senare. Djuren var avbildade via ultraljud och bioluminescerande imaging för bekräftelse av skada och injektion av celler, respektive. Viktigt, det fanns ingen extra komplikation takt när du utför denna två-förfarande tillvägagångssätt för SC leverans. Denna metod för stamcellsadministration, kollektivt med utnyttjande av state-of-the-art reporter gener, kan möjliggöra in vivo studie av livskraft och lagring av transplanterade SCs i en situation av kronisk ischemi vanligen ses kliniskt, samtidigt kringgå den ursprungliga pro-inflammatoriska svar. Sammanfattningsvis etablerade vi ett protokoll för fördröjd leverans av stamceller till myokardiet, som kan användas som en potentiell ny metod för att främja regenerering av den skadade vävnaden.
Introduction
Hjärt-kärlsjukdom är fortfarande den vanligaste orsaken till sjuklighet och dödlighet i hela världen. Hjärt ischemiska händelser har konstaterats vara till skada för den övergripande funktionen av myokardiet och omgivande celler1. Endast ̴0,45-1,0% av kardiomyocyter kommer att regenerera varje år efter att myokardskador uppstår2. Trots den ökande efterfrågan och inneboende fokus på att utveckla behandlingar, terapier medhjälp i regenerering av skadad vävnad har varit svårt att fastställa och fortfarande kräver ytterligare optimering3,4,5. Stamcellsterapier har införts som en alternativ väg att föryngra skadad vävnad efter en ischemisk händelse; har dock utvecklingen av dessa behandlingar utmanats av begränsad överlevnad och bibehållande av cellerna till ett skadat område6.
Den mikromiljö av hjärtat efter en ischemisk händelse kan karakteriseras som hypoxisk, pro-oxidant, och pro-inflammatoriska, presentera fientliga villkor för terapeutiska stamceller att anpassa sig till för överlevnad7,8. Som ett immunsvar utlöses efter skada, försöker naiva lymfocyter, makrofager, neutrofiler och mastceller att reparera skadan genom att ta bort döende celler och modulera processen för vävnad remodeling9,10,11. Inom de första 3 dagarna efter ischemi, inflammation är på topp med frisättningen av proinflammatoriska cytokiner med högt antal neutrofiler och monocyter i området10,12. Efter 7 dagar har mycket av inflammationen avtagit och övergången till reparativa celler börjar, fortsätter tills ombyggnadskad är klar, cirka 14 dagar hos möss13. Vår kirurgiska metod är en potentiell alternativ strategi för införandet av biologiska läkemedel i hjärtmuskeln att kringgå topp medfödda immunsvar efter ischemi reperfusion skada. Samtidigt kommer det att möjliggöra studier av eventuella behandlingar i ett tillstånd av subakut/kronisk ischemi där det kan finnas olika variabler att överväga jämfört med akut hjärtinfarkt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Experimenten utfördes på kvinnliga C57BL/6 möss, ålder 10-12 veckor och 20-25 g kroppsvikt. Alla djurprocedurer uppfyllde de normer som anges i handledningen för vård och användning av försöksdjur (Institute of Laboratory Animal Resources, National Academy of Sciences, Bethesda, MD, USA) och godkändes av Mayo Clinic College of Medicine Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
1. Förberedelse och intubation
- Autoklavera alla kirurgiska instrument före operation. Om flera operationer ska utföras i en session, rengör instrumenten efter varje djur och åter sterilisera med hjälp av en varm pärla sterilisator.
- Söva mössen med 3,5-4% isofluran vid 1 L/min O2 i en induktionskammare.
- Administrera Buprenorfin SR 1 mg/kg (smärtstillande) subkutant, väg djuret, och mata in vikten i ventilatorn.
- Raka vänster sida av bröstet från bröstbenet till nivån på axeln och tillämpa avhårningskräm för att avlägsna överflödig päls.
- För ischemi reperfusion förfarandet upprätthålla den positiva slutet-expiratory tryck (PEEP) på ventilatorn vid 2 cmH2O. För den fördröjda injektion av celler förfarande ändra PEEP till 3 cmH2O för att förhindra lungkollaps.
- Intubera djuret med hjälp av ett 20 G endotrakealrör, överför till en kontrollerad värmedyna för att bibehålla en kroppstemperatur på 35-37 °C.
- Placera musen på en ventilator i lateral recumbency med kranialänden till vänster och caudaländen till höger.
- Bibehåll anestesi vid 2-2,5% isofluran vid 1 L/min O2 under återstoden av förfarandet.
- Skrubba det kirurgiska området omväxlande mellan povidone-jod och sprit svabbarna tre gånger och tillämpa oftalmisk salva på båda ögonen.
2. Ischemi reperfusion skada
- Med hjälp #10 av ett blad skalpell göra en vertikal snitt 2,5 mm till höger om den vänstra bröstvårtan i synfältet.
- Använda sax skära genom den ytliga muskel lager tills intercostal muskler och revben är synliga.
- Medan du lyfter revbenen och omgivande vävnad, skär genom det intercostal utrymmet mellan den 4: e och 5: e revben, sedan in ögonlocket upprullningsdon i det öppna utrymmet.
- Dra tillbaka hjärtsäcken med hjälp av böjda tåtal, flytta lungan uppåt och utom synfält.
- Visualisera LAD artär och, med hjälp av en 9-0 nylon sutur, passera genom myokardiet under artären 2,5 mm distal till vänster auricle och knyta en lös fyrkantig knut.
- Skär 1 cm polyetylenrör och placera den i den lösa knuten.
- Säkra suturen runt slangen, bekräfta ischemi, släpp sedan efter 35 min.
OBS: Bekräfta ischemi genom pallor och ventrikulär arytmi. - Efter att ha släppt ligeringen och tagit bort slangen, vänta i 5 min för att bekräfta reperfusion av myokardiet.
- Placera en 24 G I.V. kateter rör i brösthålan en intercostal utrymme till höger om öppningen.
- Stäng det intercostala snittet med en 6-0 resorberbar sutur i ett enkelt avbrutet mönster.
- Stäng muskellagret med en 6-0 resorberbar sutur i ett kontinuerligt suturmönster.
- Efter stängning av ytliga muskellagret, ta bort bröströret medan dra tillbaka luften från brösthålan med hjälp av en 1 mL tuberkulin spruta.
- Stäng huden snitt med en 6-0 resorberbar sutur i en kontinuerlig horisontell madrass mönster
OBS: Suturer i nylon och ett diskontinuerligt suturmönster får också användas för hudlagret. - Administrera 1,5 mL varm saltlösning subkutant och tillämpa trippel-antibiotiska salva till snittet webbplats för att förhindra infektion.
- Stäng av isofluran och låt djuret andas genom ventilatorn på 100% O2 tills det kan andas kontinuerligt utan hjälp.
- Överför musen till en sängfri bur eller en bur med täckta sängkläder (pappershandduk eller drapering) på en varm pad med en temperatur på 35-37 °C tills den är helt återställd.
3. Mus mesenchymal stamcellsleverans
OBS: Stammen av möss som används för förfarandet är en inavlad linje och bedöms genetiskt identiska. De mesenkymala stamcellerna erhölls från djur av samma stam och, genom protokollutformning, var immunsuppression inte inducerad1.
- Slutföra förberedelse och intubation steg som gjort tidigare för den första proceduren.
- Ta bort suturen från hudlagret med hjälp av sax och tämpningar.
- Med en #10 skalpell, gör ett snitt på samma plats som den tidigare operationen.
- Fortsätt att använda skalpell för att skära igenom ärrvävnad tills muskelskikt sutur är synlig
- Använda saxen och kraftpnuren ta bort suturen och skär muskelskiktet öppna.
- Visualisera och ta bort suturerna som håller ihop revbenen och fortsätt skära genom interkosamuskeln från det tidigare snittet.
OBS: Lungorna kan ha vidhäftat vid bröstväggen, om detta inträffar, använd trubbiga eller böjda tärningar för att noggrant separera och släppa dem. - Placera ögonlocksretraktorn i det interkonstala utrymmet och lokalisera området för den tidigare ligeringen.
- Ladda de mesenkymala stamcellerna (3,0 x 105), upphängda i 20 μL PBS, i en 30 G insulinspruta, böj nålen något efter behov för rätt vinkel för att injicera.
OBS: Mesenkymala stamceller (MSC) isolerades från fettvävnaden hos 4-6 veckor gamla C56BL/6-möss. Tidiga passage celler (p3) var transduced med en vektor uttrycker firefly luciferase genen under CMV promotorn att tillåta in vivo cellen livsduglig övervakning. Adipose-derived mus MSC kännetecknades av flödescytometri och cellerna var positiva för CD44, CD29, CD90 och CD105 men negativa för den hematopoitiska markören CD4514. Före injektionen odlades MSC för minst en passage för att undvika förlust av celler från upptiningsprocessen. - Rör sig i riktning från spetsen mot hjärtats bas för in sprutan i regionen peri-infarkt tills nålöppningen är helt inne i hjärtmuskeln.
- Väl inne långsamt injicera cellerna i myokardiet, vänta 3 s, sedan ta bort nålen.
- Observera hjärtat noga i 3 min för att vara säker på några onormala reaktioner på cellerna såsom ventrikulärt förmaksflimmer.
- Placera en 24 G IV kateterrör i brösthålan ett intercostal utrymme till höger om öppningen.
- Stäng intercostal, muskel, och hud lager och ta bort bröstet röret i samma metod som det första förfarandet.
- Administrera 1,5 mL varm saltlösning subkutant och tillämpa trippel-antibiotiska salva till snittet webbplats för att förhindra infektion.
- Stäng av isofluran och låt djuret andas genom ventilatorn på 100% O2 tills det kan andas kontinuerligt utan hjälp.
- Överför musen till en sängfri bur eller en bur med täckta sängkläder (pappershandduk eller drapering) på en varm pad med en temperatur på 35-37 °C tills den är helt återställd.
4. Postoperativ vård efter båda ingreppen
- Observera djuret kontinuerligt tills spontan andning, sternal recumbency och normal rörelse är etablerad.
- Fortsätt observation varje 15-30 min i minst 3 h på dagen för operationen.
- Kontrollera mössen för sår dehiscence eller onormal smärta en gång dagligen i 5 dagar, sedan 2-3 gånger per vecka.
- Om djuret visar tecken på smärta (dvs. välvd rygg, minimal rörelse, grimacing, eller scruffy päls) efter 72 h post-op, ge en ytterligare dos av Buprenorfin SR smärtstillande.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ischemi reperfusion skada var inducerad i möss på dag 0, följt av en post-operativ echocardiogram och elektrokardiogram dagen före stamceller implantation. Ultraljud och elektrokardiogram analys bekräftade infarkt och minskade ventrikulärt kontraktil funktion (Figur 1A-D). Ytterligare undersökning av data visade utskjutningsfraktionen och fraktionerad förkortning minskade hos möss som fick ischemisk skada, medan de end-diastoliskt och systoliska volymerna ökade (Tabell 1). Jämfört med en normal mus hjärta (Figur 2A), Masson Trichrome färgning av myokardvävnad 7 dagar efter skada (Figur 2B) visade ökad kollagen nedfall och gallring av vänster ventrikulära väggen. Den andra proceduren utfördes 7 dagar efter skada; möss gavs en intramyokardiell injektion av mesenkymala stamceller (3,0 x 105 i 20 μL PBS) som uttryckte skonsam uttryck för reportergenen firefly luciferas under den constitutively uttryckta CMV promotorn. In vivo bioluminescent imaging (BLI) av dessa möss slutfördes dagen efter stamcellsimplantation för bekräftelse av en lyckad injektion. Den framgångsrika leveransen av MSC exemplifieras av BLI-signalen, jämfört med möss som hade inducerat ischemireperfusionsskada men som inte fick MSC (Figur 3A,B). Detta dubbla interventionella förfarande hade en avgångsgrad på 22 %, liknande den som observerades hos djur som fick MSC i det akuta scenariot.
Bild 1: Bildåtergivning av möss hjärtfunktion. Ultraljud analys av mus vid baslinjen (A) visar enhetlig sammandragning av vänster kammare myokardium jämfört med en mus efter ischemi reperfusion skada (B), som visar minskad ventrikulärt rörelse. Vid jämförelse med baslinjen elektrokardiogram för en normal mus (C),det finns betydande förändringar i ST-segmentet av en mus med ischemi reperfusion skada (D), vilket tyder på en minskning av ventrikulär funktion. Vänligen klicka här för att visa en större version av denna figur.
| Ef% | FS% | EDV (μl) | ESV (μl) | SV (μl) | |
| Originalplan | 74,19±1,2 | 44,67±2 | 23,8±3,6 | 6,14±0,98 | 17,68±2,7 |
| Efter IR | 43,9±3,8 | 30,65±3,8 | 33,88±4,4 | 18,11±1,4 | 15,74±3,2 |
Tabell 1: Analys av ekokardiografi. Variabler uttrycks som Medelvärde ± Standardfel för Medelvärdet. EF: Utskjutningsfraktion, FS: Bråkavkortning, EDV: End-Diastolisk volym, ESV: Slut-Systolisk volym, SV: Slagvolym.
Figur 2: Histologisk färgning av hjärtvävnad. Masson's Trichrome färgning av hjärtmuskulatur i normal mus (A) visar ingen skada på hjärtvävnaden, medan musen med ischemi reperfusion skada (B) visar ökad kollagen nedfall och gallring i hjärtmuskulaturen av vänster kammare, stödja bestämning av en lyckad infarkt. Vänligen klicka här för att visa en större version av denna figur.
Bild 3: In vivo bioluminescerande avbildning. En mus med ischemi reperfusion skada som inte fick intramyokardiell injektion av stamceller visade ingen bioluminescerande signal (A). En mus med ischemi reperfusion skada som fick en fördröjd injektion av mesenkymala stamceller (CMV-FLUC) visade en betydande mängd signal (B). Vänligen klicka här för att visa en större version av denna figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Över 85 miljoner människor världen över drabbas av hjärt- ochkärlsjukdomar 3. Den höga prevalensen av dessa ischemiska händelser motiverar ytterligare utveckling och expansion av alternativa terapier för att främja regenerering av skadad vävnad. Traditionella metoder utnyttja ischemi reperfusion förfarandet i en akut inställning med efterföljande administrering av therapeutics1. Inflammatoriska reaktioner är på sin topp mellan 3-4 dagar postdating en hjärt ischemisk händelse, med infiltration av neutrofiler, makrofager, och ökad cytokin signalering10,12. Efter denna period av död cell degregation, börjar det primära immunsvaret att avta och övergång mot ombyggnad faser13. Vidare är det viktigt att behandlingar undersöks inom samma scenario som presenteras i den kliniska inställningen. I detta manuskript visar vi representativa resultat från ischemiska möss för att visa genomförbarheten och säkerheten i det dubbla kirurgiska ingreppet, med fördröjd injektion av MSC. Vi anser att detta tillvägagångssätt kan användas inte bara för myokardischedjursmodeller, utan också för djurmodeller av sjukdomar där inflammation kan spela en avgörande roll, vilket förändrar framgången för terapeutiska strategier som involverar biologiska läkemedel, såsom cell- eller läkemedelsbehandlingar.
Därför i detta manuskript beskriver vi en kirurgisk metod för att leverera stamceller till en subakut infarkt, 7-10 dagar efter inducering av ischemi reperfusion skada hos möss. Denna teknik kommer att vara användbar i att studera stamceller livskraft och biologi i samband med olika stadier av immunsvaret och i den subakuta/kroniska fasen av ischemisk sjukdomsprocessen. Murine modeller är idealiska ämnen för denna metod för studier i form av reproducerbarhet och bekvämlighet, de kan dock bära vissa nackdelar. Storleken på djuret motiverar en viss grad av kirurgisk skicklighet även om, med praxis, dessa förfaranden kan slutföras framgångsrikt.
För att utföra de förfaranden som presenteras i detta manuskript är det viktigt att notera några viktiga steg och observationer som är nödvändiga för att dessa operationer ska kunna slutföras framgångsrikt. Ett kritiskt steg i det första förfarandet är ligering av vänster främre fallande födans gatan (LAD) och placering av polyeten slangar för att uppnå tillfälliga ischemi av myokardiet. Användning av steril avsmalnande spets bomullspinnen för att placera tryck på hjärtvävnaden distala till atriumet möjliggör förbättrad avsaltning av LAD. När slangen är på plats och suturen tätt säkrade, observation av arytmi och blekhet av vävnaden är avgörande för att bestämma framgångsrik induktion av ischemi. Perioden av ischemi och den efterföljande reperfusion, när suturen släpps, är viktigt för konsekvens av skada över flera djur. Dessutom, under den andra beskrivna proceduren, injektionen av mesenkymala stamceller måste utföras med horisontella rörelser i den distala till proximala riktningen. På grund av resulterande fibros från det första förfarandet krävs betydande men stadigt tryck för att sätta in nålen följt av en långsam konsekvent injektion av cellerna för att förhindra chock. Slutligen, ger kontinuerlig värme och kompletterande subkutana vätskor innan vakna möss från anestesi, kommer att förhindra värmeförlust och stöd i ersättning av blod som förlorats under förfarandena, liksom djurets totala återhämtning.
I detta manuskript, ger vi ett protokoll för att slutföra flera förfaranden som en metod för att administrera stamceller som en terapeutisk behandling i en murine modell av kronisk ischemi reperfusion skada. Utnyttjande av dessa kirurgiska ingrepp erbjuder en ny metod för leverans av stamceller i den fientliga ischemisk miljö efter skada för att förbättra deras livskraft över tiden. Användning av detta tillvägagångssätt för studier av stamcellsterapi kommer att avsevärt komplettera andra studier med fokus på användning av SCs i den akuta inställningen. Sammanfattningsvis är det beskrivna protokollet framgångsrikt inducera ischemisk skada och den efterföljande fördröjd implantation av stamceller för användning som modell i prekliniska studier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Ingen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% NaCl Irrigation, USP | Baxter | 0338-0048-04 | |
| 11x12" Press n' Seal surgical drape, autoclavable | SAI Infusion Technologies | PSS-SD | |
| 24G 3/4" IV catheter tube | Jelco | 4053 | |
| 28G x 1/2" 1mL allergy syringe | BD | 305500 | Injection of analgesic |
| 30G x 1/2" 3/10cc insulin syringe | Ulticare | 08222.0933.56 | Injection of stem cells |
| 6-0 S-29, 12" Vicryl suture | Ethicon | J556G | Intercostal, superficial muscle and skin layer incision closure |
| 9-0 BV100-4, 5" Ethilon suture | Ethicon | 2829G | Ligation of the LAD artery |
| Absorbent underpad | Thermo Fischer Scientific | 14-206-64 | For underneath the animal |
| Alcohol prep pads, 2 ply, medium | Coviden | 6818 | |
| Anti-fog face mask | Halyard | 49235 | |
| Bonn Strabismus scissors, curved, blunt | Fine Science Tools | 14085-09 | |
| Buprenorphine HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml | ZooPharm Pharmacy | Buprenorphine narcotic analgesic formulated in a polymer that slows absorption extending duration of action (72 hours duration of activity). | |
| Castroviejo needle holders, curved | Fine Science Tools | 12061-01 | |
| Curity sterile gauze sponges | Coviden | 397310 | |
| Delicate suture tying forceps, 45 angle bent | Fine Science Tools | 11063-07 | |
| Electric Razor | Wahl | Fur removal | |
| Isoflurane 100 ml | Cardinal Health | PI23238 | Anesthetic |
| Lab coat | |||
| Monoject 1 mL hypodermic syringe | Coviden | 8881501400 | |
| Moria iris forceps, curved, serrated (x2) | Fine Science Tools | 11370-31 | |
| Moria speculum retractor | Fine Science Tools | 17370-53 | |
| Mouse endotracheal intubation kit | Kent Scientific | ||
| Nair depilatory cream | Johnson & Johnson | Fur removal | |
| Optixcare eye lube plus | Aventix | Sterile ocular lubricant | |
| Physiosuite ventilator | Kent Scientific | ||
| PolyE Polyethylene tubing | Harvard Apparatus | 72-0191 | Temporary compression of LAD artery |
| Povidone-iodine swabs | PDI | S41125 | |
| Scalpel, 10-blade | Bard-Parker | 371610 | |
| Sterile 3" cotton tipped applicators | Cardinal Health | C15055-003 | |
| Sterile 6" tapered cotton tip applicators | Puritan | 25-826-5WC | |
| Sterile gloves | Cardinal Health | N8830 | |
| Sterilization pouches | Medline | MPP100525GS | |
| Surgery cap | |||
| Surgical Microscope | Leica | M125 | |
| Suture tying forceps, straight (x2) | Fine Science Tools | 10825-10 | |
| Transpore surgical tape | 3M | 1527-1 | |
| Triple antibiotic ointment | G&W Laboratories | 11-2683ILNC2 | Topical application to prevent infection |
| Vannas-Tübingen Spring Scissors, curved | Fine Science Tools | 15004-08 | |
| Vetflo vaporizer | Kent Scientific |
References
- Franchi, F., et al. The Myocardial Microenvironment Modulates the Biology of Transplanted Mesenchymal Stem Cells. Molecular Imaging Biology. , (2020).
- Bergmann, O., et al. Evidence for cardiomyocyte renewal in humans. Science. 324 (5923), 98-102 (2009).
- Writing Group, M., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133 (4), 38 (2016).
- Gersh, B. J., Simari, R. D., Behfar, A., Terzic, C. M., Terzic, A. Cardiac cell repair therapy: a clinical perspective. Mayo Clinic Protocol. 84 (10), 876-892 (2009).
- Terzic, A., Behfar, A. Regenerative heart failure therapy headed for optimization. European Heart Journal. 35 (19), 1231-1234 (2014).
- Beegle, J., et al. Hypoxic preconditioning of mesenchymal stromal cells induces metabolic changes, enhances survival, and promotes cell retention in vivo. Stem Cells. 33 (6), 1818-1828 (2015).
- Kubli, D. A., Gustafsson, A. B. Mitochondria and mitophagy: the yin and yang of cell death control. Circulation Research. 111 (9), 1208-1221 (2012).
- Psaltis, P. J., et al. Noninvasive monitoring of oxidative stress in transplanted mesenchymal stromal cells. JACC Cardiovascular Imaging. 6 (7), 795-802 (2013).
- Peet, C., Ivetic, A., Bromage, D. I., Shah, A. M. Cardiac monocytes and macrophages after myocardial infarction. Cardiovasc Research. 16 (6), 1101-1112 (2020).
- Swirski, F. K., Nahrendorf, M. Cardioimmunology: the immune system in cardiac homeostasis and disease. Nature Reviews Immunology. 18 (12), 733-744 (2018).
- Zhang, Z., et al. Mesenchymal Stem Cells Promote the Resolution of Cardiac Inflammation After Ischemia Reperfusion Via Enhancing Efferocytosis of Neutrophils. Journal of the American Heart Association. 9 (5), 014397 (2020).
- Saxena, A., Russo, I., Frangogiannis, N. G. Inflammation as a therapeutic target in myocardial infarction: learning from past failures to meet future challenges. Translational Research. 167 (1), 152-166 (2016).
- Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. The Biological Basis for Cardiac Repair After Myocardial Infarction: From Inflammation to Fibrosis. Circulation Research. 119 (1), 91-112 (2016).
- Dominici, M., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).
