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24 घंटे अंग संरक्षण और निरंतर टेलीमेट्री का उपयोग करके पोर्सिन मॉडल में ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो-ट्रांसप्लांटेशन

Published: August 21, 2020 doi: 10.3791/61591
Automatic Translation
*1,2, *2, 2, 1, 3, 2, 2, 1,4, 1, 5, 6, 1,6, 2, 1,2
1Department of Surgery and Transplantation, Faculty of Medicine, University Hospital RWTH Aachen, 2Institute for Laboratory Animal Science, Faculty of Medicine, University Hospital RWTH Aachen, 3Department of General-, Visceral-, and Transplantation Surgery, University Hospital Muenster, 4Department of Surgery, Maastricht University Medical Centre (MUMC), 5Institute of Pathology, Faculty of Medicine, University Hospital RWTH Aachen, 6Department of Surgery, Campus Charité Mitte | Campus Virchow-Klinikum, Charité-Universitätsmedizin
* These authors contributed equally

Summary

बड़े पशु मॉडल प्रीक्लिनिकल प्रत्यारोपण अनुसंधान में एक आवश्यक भूमिका निभाते हैं। नैदानिक सेटअप के लिए अपनी समानताओं के कारण, इस लेख में वर्णित ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो-प्रत्यारोपण का पोर्सिन मॉडल अंग संरक्षण तकनीकों और चिकित्सीय हस्तक्षेपों के परीक्षण के लिए वीवो सेटिंग में एक उत्कृष्ट प्रदान करता है।

Abstract

महत्वपूर्ण अंगों की कमी के साथ अंग प्रत्यारोपण के वर्तमान युग में, गुर्दे प्रत्यारोपण (केटी) के लिए उपलब्ध एलोबेड़ा के पूल का विस्तार करने के लिए विभिन्न रणनीतियों को नियोजित किया जाता है। हालांकि, विस्तारित मानदंड दाताओं (ईसीडी) से allografts का उपयोग आंशिक रूप से अंग दाताओं की कमी को कम कर सकता है, ईसीडी अंगों अवर परिणामों और पश्चात जटिलताओं के लिए एक संभावित उच्च जोखिम ले । गतिशील अंग संरक्षण तकनीकें, इस्केमिया-रिफ्यूजन और संरक्षण चोट का मॉडुलन, और एलोग्रैफ्ट उपचार केटी में एलोग्रफ्ट उपयोग और रोगी परिणामों में सुधार के प्रयास में वैज्ञानिक हित की सुर्खियों में हैं।

पूर्व नैदानिक पशु प्रयोगों अनुवाद अनुसंधान में एक आवश्यक भूमिका निभा रहे हैं, विशेष रूप से चिकित्सा उपकरण और दवा के विकास में । पूर्व वीवो या छोटे पशु अध्ययनों पर पोर्सिन ऑर्थोटोपिक ऑटो-प्रत्यारोपण मॉडल का प्रमुख लाभ नैदानिक सेटिंग के लिए शल्य चिकित्सा-शारीरिक और शारीरिक समानताओं के भीतर निहित है। यह नए चिकित्सीय तरीकों और तकनीकों की जांच की अनुमति देता है और निष्कर्षों के एक सुविधाजनक नैदानिक अनुवाद सुनिश्चित करता है। यह प्रोटोकॉल 24 घंटे के संरक्षण समय और टेलीमेट्री निगरानी का उपयोग करके पोर्सिन ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो-प्रत्यारोपण मॉडल का एक व्यापक और समस्या उन्मुख विवरण प्रदान करता है। संज्ञाहरण, पशु आवास, पेरिऑपरेटिव अनुवर्ती कार्रवाई के अत्यधिक मानकीकृत और अत्याधुनिक तरीकों के साथ परिष्कृत शल्य चिकित्सा तकनीकों का संयोजन, और निगरानी इस मॉडल की प्रजनन क्षमता और सफलता सुनिश्चित करता है।

Introduction

१९५४ में समान जुड़वां बच्चों के बीच पहली सफल मानव गुर्दे प्रत्यारोपण के बाद से, नोबेल पुरस्कार विजेता सर्जन जोसेफ मरे1के अग्रणी समूह द्वारा प्रदर्शन किया, गुर्दे प्रत्यारोपण (केटी) अंत चरण गुर्दे की बीमारी (ESRD)2के साथ रोगियों के लिए उपचार के मुख्य आधार के रूप में विकसित किया गया है । केटी डायलिसिस 2 की तुलना में बेहतरदीर्घकालिकनैदानिक परिणामों और जीवन की गुणवत्ता को दर्शाता है । केटी के बाद लघु और दीर्घकालिक जीवित रहने की दरों में लगातार सुधार हुआ, सर्जिकल तकनीकों, अंग संरक्षण, इम्यूनोसप्रेसिव थेरेपी और क्रिटिकल केयर में प्रगति के कारण, इसलिए केटी वैश्विक स्तर पर व्यापक रूप से उपलब्ध हो गया2,3,4।

महत्वपूर्ण अंगों की कमी के कारण, एलोबेड़ा आपूर्ति और मांग3,5,6के बीच लगातार अंतर बढ़ रहा है। 2018 में, लगभग 12,031 रोगी जर्मनी में केटी की प्रतीक्षा कर रहे थे, हालांकि, प्रत्यारोपण7के लिए अंगों में अत्यधिक कमी के कारण केवल 20% (2,291 रोगियों) को दाता गुर्दे प्राप्त हो सकते थे। दुर्भाग्य से, न केवल अंग दाताओं की पूर्ण संख्या, बल्कि प्रत्यारोपण के लिए पेश किए गए एलोबेड़ा की सामान्य गुणवत्ता में भी पिछले दशकों में गिरावट आई है8,9। 10प्रत्यारोपण के लिए स्वीकार किए जाने वाले प्रीडामैग्ड या "सीमांत" गुर्दे के एलोग्राफ्ट की संख्या में बढ़ती प्रवृत्ति देखी गई । ईसीडी एलोग्राफ्ट का उपयोग प्रतीक्षा समय और प्रतीक्षा सूची रुग्णता और मृत्यु दर को कम कर सकता है, हालांकि, यह भ्रष्टाचार से संबंधित जटिलताओं जैसे प्राथमिक भ्रष्टाचार गैर-कार्य (पीएनएफ) और/या विलंबित भ्रष्टाचार समारोह (डीजीएफ)8,9,10की बढ़ी हुई घटनाओं से जुड़ा हुआ है । एलोग्राफ्ट उपयोग को अनुकूलित करने, दाता पूल का विस्तार करने और सीमांत एलोग्राफ़ की रक्षा और पुनर्संरचना के लिए आगे अनुसंधान आवश्यक है जो अंततः रोगी परिणामों में सुधार कर सकता है3,6।

बड़े पशु प्रत्यारोपण मॉडलों की संसाधन-प्रधान और जटिल प्रकृति के कारण, छोटे जानवरों या पूर्व वीवोसेटिंग्स11, 12, 13,14, 15में बड़ी संख्या में अध्ययन किए जाते हैं। हालांकि इन मॉडलों महत्वपूर्ण वैज्ञानिक डेटा वितरित कर सकते हैं, नैदानिक सेटिंग के लिए इन निष्कर्षों का अनुवाद अक्सर सीमित है । ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो-प्रत्यारोपण का पोर्सिन मॉडल एक अच्छी तरह से स्थापित और प्रजनन योग्य मॉडल है जो वीवो सेटिंग में चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक में नए अभिनव उपचार दृष्टिकोणों का परीक्षण करने की अनुमति देता है, संभावित रूप से लंबे समय तक अनुवर्ती अवधि और दोहराव वाले नमूना संग्रह16,17के लिए प्रचुर संभावनाओं के साथ। तुलनीय आकार के लाभ से परे, जो नैदानिक सेटिंग (विशेष रूप से चिकित्सा उपकरण विकास और दवा की खुराक के लिए) में अपेक्षाकृत प्रत्यक्ष अनुवाद की अनुमति देता है, इस्केमिया-रिफ्यूजन इंजरी (आईआरआई) प्रतिक्रिया और गुर्दे की क्षति के संदर्भ में सर्जिकल-शारीरिक और शारीरिक समानताएं, अनुवादात्मकअनुसंधान17, 18,19में इस मॉडल के उपयोग का समर्थन करते हैं। यह मॉडल नैदानिक अंग प्रत्यारोपणकीतकनीकी चुनौतियों के लिए युवा प्रत्यारोपण सर्जन तैयार करने का एक उत्कृष्ट प्रशिक्षण अवसर भी प्रदान करता है ।

मानव सेटिंग की तुलना में कई अंतर भी हैं और मॉडल के विभिन्न तकनीकी संशोधन साहित्य 16,17,19,20,21में पाए जा सकते हैं । यह लेख व्यापक रूप से तकनीकी विवरणों, नुकसान और सिफारिशों का वर्णन करता है जो पोर्सिन ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो-प्रत्यारोपण के मॉडल को स्थापित करने में सहायता कर सकते हैं। वर्णित टेलीमेट्री और वीडियो निगरानी विधि के साथ-साथ हमारी विशेष रूप से डिजाइन की गई आवास सुविधा जानवरों के एक क्लोज-अप गंभीरता मूल्यांकन और नैदानिक अवलोकन की अनुमति देती है। एक पेरक्यूटेनियस मूत्र कैथेटर और नामित पोर्सिन जैकेट का उपयोग मेटाबोलिक पिंजरों के उपयोग के बिना गुर्दे के कार्य के विस्तृत मूल्यांकन की संभावना प्रदान करता है। इन तकनीकी संशोधनों को 3आर सिद्धांत (प्रतिस्थापन, कमी और शोधन) की आधुनिक चुनौतियों का पालन करने और बड़े पशु मॉडल22का उपयोग करके पशु प्रयोगों में सुधार करने के लिए संभावित समाधान के रूप में वर्णित किया गया है।

Protocol

वर्तमान अध्ययन आने के सिद्धांतों के अनुसार डिजाइन किया गया था (पशु अनुसंधान: वीवो प्रयोगों में रिपोर्टिंग) दिशा निर्देश23। प्रयोग संस्थागत दिशा निर्देशों और जर्मन संघीय जानवरों की सुरक्षा के बारे में कानून के अनुसार प्रदर्शन किया गया । पूर्ण नैतिक प्रस्ताव को जिम्मेदार प्राधिकरणों (सरकारी पशु देखभाल और उपयोग समिति, लैन्व एनआरडब्ल्यू-"लैंडेस्ट फ्यूर नितूर, उमवेल्ट एंड वर्ब्रुचेरचुट्ज़ नोर्ड्रहेन-वेस्टफालेन", रेकलिंगहौसेन, जर्मनी, प्रोटोकॉल आईडी: 81-02.04.2018.A051) द्वारा अनुमोदित किया गया था। वर्तमान अध्ययन में सभी जानवरों की देखभाल और प्रयोगशाला जानवरों के उपयोग के लिए गाइड के सिद्धांतों के अनुसार मानवीय देखभाल प्राप्त "(8 संस्करण, NIH प्रकाशन, 2011, संयुक्त राज्य अमेरिका) और निर्देश 2010/63/यूरोपीय संघ के वैज्ञानिक प्रयोजनों के लिए इस्तेमाल जानवरों की सुरक्षा पर (यूरोपीय संघ के आधिकारिक जर्नल, २०१०) । महिला जर्मन लैंडरेस सूअरों को एक स्वच्छता रूप से अनुकूलित बाधा प्रजनन सुविधा (हेनरिक्स जीबीआर, हेन्सबर्ग, नोर्ड्रेन-वेस्टफालेन) से प्राप्त किया गया था। चित्र 1 वर्णित प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल के सारांश को दर्शाया गया है।

1. पशु और आवास

  1. इस प्रोटोकॉल के लिए महिला जर्मन लैंडरेस सूअरों (या तुलनीय) का उपयोग करें। जानवरों को 14 दिन पहले अनुसंधान सुविधा के लिए वितरित करना पहली सर्जरी (टेलीमेट्री प्रत्यारोपण) के लिए अनुकूलन और उन्हें एक तापमान और आर्द्रता नियंत्रित बाधा वातावरण में एक 12 घंटे प्रकाश और अंधेरे चक्र (चित्रा 2)के साथ घर ।
  2. कमरे की छत पर दो टेलीमेट्री रिसीवर माउंट जो पंजीकृत डेटा को सीधे अवलोकन कक्ष में स्थित पीसी में स्थानांतरित करने की अनुमति देता है। सुनिश्चित करें कि पशु चिकित्सा अधिकारियों द्वारा नियमित दौरे के दौरान और पशु कार्यवाहक प्रभारी (हर 8 घंटे और ऑन-डिमांड) के दौरान जानवरों को नेत्रहीन रूप से मनाया जाता है।
    नोट: इसके अलावा, इस प्रयोग में स्थानीय नेटवर्क से जुड़े एकीकृत थर्मल इमेजिंग के साथ एक वास्तविक समय कैमरा फुटेज का उपयोग किया गया था। इस अध्ययन में उपयोग की जाने वाली आवास सुविधा का विवरण चित्र 2में दर्शाया गया है ।

2. बुनियादी तकनीकों और सामान्य प्रक्रियाओं

  1. सर्जरी से पहले रात भर जानवरों को उपवास करें।
  2. एजापेरोन (4 मिलीग्राम/किलो) और एट्रोपाइन (0.1 मिलीग्राम/किलो) के प्रारंभिक इंट्रामस्कुलर इंजेक्शन द्वारा प्रीमेडिकेट, इसके बाद 10 मिनट बाद केटामाइन (15 मिलीग्राम/किलो) का इंजेक्शन लगाया गया।
  3. पूर्वध्यान के बाद, जानवर का वजन करें और इसे सीधे आवास सुविधा से केंद्रीय या सुविधा संज्ञाहरण तैयारी कक्ष में स्थानांतरित करें।
  4. एक 18 जी परिधीय शिरा कैथेटर का उपयोग कर बड़े कान नसों में से एक cannulate । एक मानक ईसीजी और पल्स ऑक्सीमेट्री द्वारा जानवर की निगरानी करें।
  5. प्रोपोफोल (3 मिलीग्राम/किलो) के साथ संज्ञाहरण शुरू करें।
  6. एक लैरिंगोस्कोप के साथ मुखर कॉर्ड का पर्दाफाश करें और 7.5 मिमी एंडोट्रेक्शियल ट्यूब डालें। निर्माता की सिफारिशों के अनुसार कफ हवा के साथ अवरुद्ध है।
  7. पेट से तरल पदार्थ और हवा को हटाने के लिए एक ओरो-गैस्ट्रिक ड्रेनेज ट्यूब डालें।
  8. मूत्रमार्ग के माध्यम से एक मूत्र कैथेटर डालें।
  9. इसके बाद, सर्जिकल चीरा के क्षेत्र में त्वचा को ट्रिम करें।
  10. सर्जरी के दौरान कॉर्निया के सूखने से रोकने के लिए आंखों का मरहम लगाएं।
  11. ओरोट्रेक्ल यूटबेशन के बाद, आइसोफलुनेन (अंतिम एक्सपायरी 1.45-2.0 Vol.%) और फेन्टनाइल (3-7.5 μg/kg/h) के साथ संज्ञाहरण बनाए रखें।
  12. हीटिंग पैड द्वारा जानवर का सक्रिय इंट्राऑपरेटिव तापमान नियंत्रण सुनिश्चित करें और गर्म हवा का उपयोग करें। शरीर के तापमान (लक्ष्य तापमान 36.5 डिग्री सेल्सियस - 37.5 डिग्री सेल्सियस) की निगरानी के लिए एक गुदा जांच डालें।
  13. सेफरोक्सिम (35 मिलीग्राम/किलोग्राम i.v.) का उपयोग करके एंटीबायोटिक प्रोफिलैक्सिस का प्रशासन करें। 4 एमएल/किलो/एच पर इन्फ्यूर इन् टर्न रिंगर सॉल्यूशन और स्किन चीरा के बाद 8 एमएल/किलो/घंटा तक बढ़ जाता है । कान की नस का उपयोग पर पैंटोप्राजोल (40 मिलीग्राम i.v.) की एक रोगनिरोधी खुराक प्रशासित करें।
  14. सर्जिकल एसेप्सिस और एंटीसेप्सिस के सामान्य सिद्धांतों के अनुसार बाँझ परिस्थितियों में सभी सर्जिकल प्रक्रियाओं का प्रदर्शन करें। सर्जिकल क्षेत्र को पोविडोन-आयोडीन समाधान के साथ कीटाणुरहित करें और सर्जिकल पर्दे के साथ कवर करें।

3. टेलीमेट्री प्रत्यारोपण

  1. प्रोटोकॉल की धारा 2 के तहत वर्णित चरणों के बाद सर्जरी के लिए पशु तैयार करें और कम हृदय गति और जानवर के सचेत आंदोलन की कमी से उचित संज्ञाहरण की पुष्टि करें।
  2. व्यक्तिगत बेसलाइन प्रयोगशाला मूल्यों का निर्धारण करने के लिए रक्त और मूत्र के नमूने एकत्र करें।
  3. एक स्थायी मार्कर का उपयोग कर चीरा साइटों को चिह्नित करें।
  4. टेलीमेट्री ट्रांसपोंडर के धमनी सेंसर को प्रत्यारोपित करने के लिए, कमर में 3-4 सेमी चीरा करें। 360 ° फैशन में धमनी को बेनकाब और विच्छेदन करें।
  5. धमनी के नीचे दो-पोत छोरों के माध्यम से ओवरहोल्ट क्लैंप खींचना और उन्हें मच्छर क्लैंप के साथ सुरक्षित करना।
  6. #11 ब्लेड स्केलपेल का उपयोग करके एक धमनी बनाने के बाद, धमनी सेंसर डालें। एक गाँठ टांके के साथ 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन सीवन का उपयोग करके धमनी को बंद करें और इनमें से एक टांके का उपयोग करके धमनी सेंसर को सुरक्षित करें।
  7. जानवर के बाईं पार्श्व पर 3-4 सेमी बड़ा चीरा बनाएं और कुंद विच्छेदन द्वारा ट्रांसपोंडर के लिए एक चमड़े के नीचे पाउच बनाएं।
  8. फ्लैंक में टेलीमेट्री ट्रांसपोंडर को सुरंग बनाएं और इसे मांसपेशियों के प्रावरणी (3-0 पॉलीप्रोपाइलीन, एकल गाँठ) में ठीक करें। थोरेक्स के दाईं और बाईं ओर लाल और सफेद ईसीजी इलेक्ट्रोड सुरंग। दो 1 सेमी चीरे बनाएं और मांसपेशियों के ऊतकों में इलेक्ट्रोड को सुरक्षित करें ताकि एकल गाँठ टांके (3-0 पॉलीग्लैक्टिन) के साथ एक अच्छा ईसीजी संकेत सुनिश्चित किया जा सके।
  9. टेलीमेट्री डेटा का पंजीकरण शुरू करें और विभिन्न संकेतों (उदाहरण के लिए, ट्रांसपोंडर शरीर द्वारा पंजीकृत शरीर का तापमान, धमनी रक्तचाप और ईसीजी संकेतों) की जांच करें।
  10. कमर में चीरों को बंद करें, बाईं पार्श्व पर और मांसपेशियों और चमड़े के नीचे के टांके (3-0 पॉलीग्लेक्टिन) का उपयोग करके दो छोटे छाती चीरों और एक गैर-अवशोषित मोनोफिलामेंट सीवन (जैसे, 2-0 प्रोलीन) का उपयोग करके त्वचा को बंद करें।
  11. चीरा साइटों को सील करने के लिए एक स्प्रे फिल्म ड्रेसिंग का उपयोग करें।
  12. इस समय बिंदु पर जानवर को एक नामित पोर्सिन जैकेट पहनने के लिए तैयार करें जो जानवर बाकी अध्ययन अवधि के लिए पहनता है। हर सर्जिकल हस्तक्षेप के बाद एक साफ जैकेट के साथ जैकेट की जगह ।
    नोट: स्थिर बेसलाइन डेटा रिकॉर्ड करने के लिए, टेलीमेट्री ट्रांसपोंडर इंडेक्स सर्जरी से 14 दिन पहले प्रत्यारोपित किए जाते हैं (बाएं नेफ्रेक्टॉमी, कृपया चर्चाभी देखें)।

4. नेफ्रेक्टॉमी और किडनी भ्रष्टाचार पुनः प्राप्ति

  1. धारा 2 में वर्णित प्रक्रियाओं के बाद भ्रष्टाचार पुनर्प्राप्ति सर्जरी के लिए पशु तैयार करें।
  2. संज्ञाहरण के प्रेरण के बाद, बाहरी जुगुलर नस को कैनुलेट करें। सर्जिकल क्षेत्र के बाँझ कीटाणुशोधन के बाद, जुगुलर नाली में दाईं ओर 4 सेमी चीरा बनाया जाता है।
  3. बाहरी जुगुलर नस को बेनकाब करने के लिए चमड़े के नीचे के ऊतकों और मांसपेशियों को विच्छेदन करें।
  4. 360 ° फैशन में नस को बेनकाब और विच्छेदन करें।
  5. नस के नीचे दो-पोत छोरों के माध्यम से ओवरहोल्ट क्लैंप खींचना और मच्छर क्लैंप के साथ उन्हें सुरक्षित करना।
  6. जानवर के पीछे जुगुलर कैथेटर सुरंग। इसके लिए सुअर को उसके बायीं ओर रखें। जुगलबंदी कैथेटर डालने के लिए सेल्डिंगर विधि का प्रयोग करें।
  7. नस पर खोलने को बंद करें और 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन सीवन का उपयोग करके कैथेटर को सुरक्षित करें।
  8. चीरा को दो परतों में बंद करें (उदाहरण के लिए, मांसपेशियों और चमड़े के नीचे और त्वचा के लिए 2-0 पॉलीप्रोपाइलीन के लिए 3-0 पॉलीग्लोलेक्टिन)।
  9. कई टांके (2-0 पॉलीप्रोपाइलीन) के साथ त्वचा के लिए कैथेटर सुरक्षित।
  10. मुफ्त आकांक्षा और इंजेक्शन के लिए जुगलबंदी नस कैथेटर का परीक्षण करें। इसके बाद, कान की नस कैनुला से नसों की रेखा को केंद्रीय शिरा रेखा पर स्विच करें।
  11. सर्जिकल कीटाणुशोधन और ड्रेपिंग के बाद, पेट (25-30 सेमी) खोलने के लिए एक औसत लेप्रोटॉमी करें। सर्जिकल क्षेत्र का पर्दाफाश करने के लिए एक मानक पेट रिट्रैक्टर का उपयोग करें।
  12. कोलन और छोटी आंत को कवर करने के लिए गीले और गर्म पेट के तौलिए का इस्तेमाल करें। दूसरे सहायक से कहें कि गुर्दे और उसकी संवहनी संरचनाओं को उजागर करने वाले दाहिने हेमी-पेट की दिशा में आंत्र धारण करें।
  13. पेरिटोनियल परत खोलें और एकाधिकार कौटर, बाइपोलर संदंश और ठीक कैंची का उपयोग करके किसी भी अनुयायी ऊतक से बाईं किडनी और मूत्रवर्धक को विच्छेदन करें।
  14. लिगेट और बाएं मूत्रवर्धक (3-0 पॉलीग्लैक्टिन) को कम से कम 10 से 12 सेमी लंबे सेगमेंट को छोड़ दें।
  15. क्रमशः अवर वेना कावा और महाधमनी से उनकी उत्पत्ति के लिए बाईं गुर्दे की नस (एस) और धमनी के विच्छेदन को पूरा करें।
    नोट: चोट और इस शारीरिक क्षेत्र में बड़े लसीका जहाजों के उद्घाटन से बचें । इसके अलावा वेना कावा से अपने मूल के पास गुर्दे नस में शामिल होने azygo-काठ नस के लिए एक संभावित चोट के बारे में पता है ।
  16. दो लिगेचर (3-0 पॉलीग्लेक्टिन) के बीच अज़ीगो-काठ की नस को विच्छेदन और लिगेट करें।
  17. बर्फ के एक कटोरे और एक बाँझ कवर का उपयोग कर वापस मेज विच्छेदन के लिए तैयार करें ।
  18. भ्रष्टाचार गुर्दे को पुनः प्राप्त करने के लिए, गुर्दे की धमनी और गुर्दे की नस को महाधमनी और वेस्कुलर क्लैंप के साथ वेना कावा के करीब दबाएं। क्लैंप के करीब कैंची के साथ जहाजों को काटकर गुर्दे के भ्रष्टाचार को हटा दें फिर किडनी को बैक-टेबल टीम को सौंप दें ।
  19. 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन सीवन का उपयोग करके गुर्दे की धमनी के स्टंप को बंद करें। 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन के साथ दो-परत निरंतर सीवन का उपयोग करके गुर्दे की नस को बंद करें। संवहनी क्लैंप हटा दें।
  20. रक्तस्राव या लसीका रिसाव के लिए क्षेत्र की जांच करने के बाद, पेट को 4 परतों में बंद करें।
    नोट: पेरिटोनियम: 3-0 पॉलीग्लेक्टिन रनिंग सीवन; प्रावरणी: 0 पॉलीग्लेक्टिन चल सीवन; चमड़े के नीचे परत: 3-0 पॉलीग्लेक्टिन रनिंग सीवन; त्वचा: गुर्दे की पुनर्प्राप्ति सर्जरी के बाद त्वचा स्टेपलर, अगले दिन पेट को फिर से खोलने की सुविधा के लिए और निश्चित बंद करने के लिए प्रत्यारोपण प्रक्रिया के बाद 2-0 पॉलीप्रोपाइलीन सिंगल नॉट टांके।
  21. बाँझ घाव ड्रेसिंग लागू करने के बाद, जानवर को आवास सुविधा में वापस करें और एंडोट्रेक्सील एक्सटबेशन के बाद ठीक होने की अनुमति दें। पश्चात एनाल्जेसिया के लिए, ऑटो प्रत्यारोपण तक हर 8 घंटे में बुप्रेनोरफिन (0.05 - 0.1 मिलीग्राम/किलो) का उपयोग करें।

5. बैक-टेबल और अंग संरक्षण

  1. भ्रष्टाचार पुनः प्राप्ति के बाद, तुरंत एक मानक 14 जी (नारंगी) परिधीय कैथेटर का उपयोग कर गुर्दे की धमनी को कैनुलेट करें और 3-0 पॉलीग्लेक्टिन से तैयार टूनीकेट का उपयोग करके इसे ठीक करें।
  2. ठंडे अंग संरक्षण समाधान के साथ गुर्दे कुल्ला।
  3. अंग संरक्षण समाधान के 500 एमएल के साथ फ्लशिंग के बाद, धमनी कैनुला को हटा दें, गुर्दे के भ्रष्टाचार को बाँझ अंग बैग में लपेटें और कंप्यूटर नियंत्रित कूलिंग सर्किट का उपयोग करके 4 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लक्ष्य कोल्ड इस्कीमिक समय (सीआईटी) के साथ अंग संरक्षण समाधान में स्टोर करें।
    नोट: 4 डिग्री सेल्सियस सामान्य नमकीन समाधान के 500 मिलीलन का उपयोग करके एक संक्षिप्त पोस्ट-प्रिजर्वेशन फ्लश की सिफारिश की जाती है।

6. कॉन्ट्रालेट्रल नेफ्रेक्टॉमी और ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो प्रत्यारोपण

  1. प्राप्तकर्ता ऑपरेशन के दौरान, प्रतिबंधित गुर्दे के चयापचय के लिए पूर्व चिकित्सा और प्रारंभिक संज्ञाहरण को अनुकूलित करें और केटामाइन के उपयोग से बचें। प्रेरण प्रोपोफोल (3-5 मिलीग्राम/किलोग्राम i.v.), मिदाजोलम (0,25 मिलीग्राम/किलो i.v.), और एट्रोपिन (0.1 मिलीग्राम/किलो i.m.) के साथ किया जाता है। इसके बाद, प्रीऑपरेटिव तैयारी धारा 2 में वर्णित प्रक्रियाओं के समान है।
  2. आइसोफ्लुन (अंतिम समाप्ति 1.45-2.0 Vol.%) और फेन्टनाइल (3-7,5 μg/kg/h) और प्रोपोफोल (2-4 मिलीग्राम/किलो/घंटा) के साथ संज्ञाहरण बनाए रखें ।
  3. ईसीजी, पल्स ऑक्सीमेट्री, गुदा तापमान और टेलीमेट्री ट्रांसपोंडर के कार्य की जांच और लगातार निगरानी करें।
    नोट: प्रत्यारोपण प्रक्रिया के दौरान सख्त संज्ञाहरण और रक्तचाप नियंत्रण महत्वपूर्ण महत्व का है।
  4. दुर्लभ मामलों में जहां टेलीमेट्री ट्रांसपोंडर पर पंजीकृत धमनी रक्तचाप संकेत जानवर की रीढ़ की स्थिति के कारण संतोषजनक नहीं है, एक और धमनी कैथेटर को परक्यूटेनियस पंचर और सेल्डिंगर तकनीक का उपयोग करके सही फीमोरल धमनी में रखें।
  5. बाँझ ड्रेपिंग के बाद, औसत लेप्रोटॉमी को फिर से खोलें और पेट रिट्रैक्टर का उपयोग करके सर्जिकल क्षेत्र का पर्दाफाश करें। कोलन और छोटी आंत को बरकरार दाहिनी किडनी को बेनकाब करने के लिए पेट के बाईं ओर रखा जाता है।
  6. दाता प्रक्रिया के समान, आसपास के ऊतकों से कॉन्ट्रा-पार्श्व गुर्दे और उसके जहाजों को काटना। एनास्टोमोसिस के लिए पर्याप्त पोत लंबाई सुनिश्चित करने के लिए किडनी हिलम की दिशा में सही गुर्दे की नस और गुर्दे की धमनी को विच्छेदन करें।
  7. संवहनी क्लैंपिंग से 5 मिनट पहले, नसों के द्वारा नैट्रियम-हेपरिन इंजेक्ट करें (100 I.U./kg)।
  8. वैस्कुलर क्लैंप का उपयोग करके सही गुर्दे की धमनी और सही गुर्दे की नस को क्लैंप करें। दाहिनी किडनी निकल जाती है। अनास्टोमोस शुरू करने से पहले जहाजों को अखंडता के लिए चेक किया जाता है।
  9. संरक्षित भ्रष्टाचार गुर्दे को पेट में रखें और शिरीन और धमनी एनास्टोमोस शुरू करें।
  10. इस बिंदु के बाद से, 80-90 मिमी एचजी पर मतलब धमनी दबाव रखें ताकि ईंधन के बाद गुर्दे के भ्रष्टाचार का एक अच्छा प्रारंभिक पर्फ्यूजन सुनिश्चित किया जा सके। यह आंशिक रूप से पर्याप्त मात्रा प्रबंधन द्वारा और आंशिक रूप से norepinephrine के प्रशासन द्वारा प्राप्त (०.१-१.० μg/kg/min एक सतत जलसेक के रूप में औसत धमनी रक्तचाप और दक्षता की निगरानी के लिए हृदय गति का उपयोग कर) ।
  11. गुर्दे की नस के अंत से अंत तक एनास्टोमोसिस करें:
    1. 5-0 पॉलीप्रोपाइलीन का उपयोग करके दो कोने टांके रखने के बाद, पीछे की दीवार को निरंतर फैशन में सीवन करें।
    2. कपाल कोने सिलाई टाई और पीछे की दीवार के लिए इस्तेमाल धागे के साथ इसे एक साथ टाई।
    3. पीछे की दीवार खत्म करने के बाद, कपाल कोने सिलाई का उपयोग एक क्रैनियो-कौडल दिशा में सामने की दीवार सीवन के लिए । अहेपरिनाइज्ड लवकुश समाधान (100 I.U./mL) के साथ नस फ्लश। कौडल कॉर्नर सिलाई बांधें।
      नोट: दाता और प्राप्तकर्ता पक्षों के बीच एक आकार बेमेल के मामले में, एक छोटे से विकास कारक एक व्यापक और पर्याप्त एनास्टोमोसिस सुनिश्चित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । पोर्सिन गुर्दे की नस शाखाओं के कई संभावित रूप हैं। जटिल शिरस शरीर रचना विज्ञान के मामले में, एक संशोधित एनास्टोमोसिस दृष्टिकोण आवश्यक है (चित्र 3देखें)।
  12. गुर्दे की धमनी के अंत से अंत एनास्टोमोसिस का प्रदर्शन करें:
    1. धमनी एनास्टोमोसिस करने के लिए 6-0 पॉलीप्रोपाइलीन कपाल कोने सिलाई का उपयोग करें। एक और कौडल रखना, कोने सिलाई का समर्थन करना जिसे बाद में हटा दिया जाता है, वैकल्पिक है।
    2. पैराशूट तकनीक का उपयोग करके लगातार फैशन में पीछे की दीवार को सीवन करें। कौडल कॉर्नर पर पहुंचने के बाद दूसरे कोने की सिलाई (यदि लागू हो) को हटा दें।
    3. सीवन डबल सशस्त्र 6-0 पॉलीप्रोपाइलीन सीवन के दूसरे छोर के साथ सामने की दीवार। एक हेपरिनाइज्ड नमकीन समाधान (१०० I.U./mL) के साथ धमनी फ्लश । दोनों धागों को कौंडल कॉर्नर पर बांधें।
  13. और लेफ्टिनेंट;40 मिनट के एक लक्ष्य गर्म इस्केमिया समय के साथ दोनों एनास्टोमोस प्रदर्शन के लिए आवश्यक समय रिकॉर्ड करें।
  14. वेरियस्कुलर क्लैंप और बाद में धमनी क्लैंप खोलकर किडनी को फिर से रंफ इस्तेमाल करें। महत्वपूर्ण रक्तस्राव की जांच करें।
  15. यदि एनास्टोमोस से कोई महत्वपूर्ण रक्तस्राव नहीं देखा जाता है, तो गुर्दे के भ्रष्टाचार को खोलें और पेट में गर्म सामान्य नमकीन समाधान डालें जो ईंधन भरे भ्रष्टाचार को कवर करते हैं।
  16. सजातीय रिफ्यूजन सुनिश्चित करने और भीड़ से बचने के लिए, यदि आवश्यक हो, तो भ्रष्टाचार को फिर से स्थान दिया जाए।
  17. गुर्दे की धमनी और धमनी एनास्टोमोसिस (5 एमएल अनास्तूड) के बाहर के लिए सामयिक रूप से पपवेरिन को प्रशासित करें।
  18. रिफ्यूजन के बाद, ओस्मोटिक डिरेसिस को प्रेरित करने के लिए 20% ग्लूकोज समाधान के 250 एमएल को डालने के बाद 80 मिलीग्राम फ्यूरोमाइड की एक खुराक के प्रशासन द्वारा।
    नोट: इसके बाद, प्रारंभिक मूत्र उत्पादन देखा जा सकता है।
  19. मूत्र जल निकासी सुनिश्चित करने के लिए, जानवर के दाहिने पार्श्व के पेट की दीवार के माध्यम से एक 12 फ्रांसीसी बाल चिकित्सा मूत्र कैथेटर पास करें, रेट्रोपेरिटोनेली।
  20. लिगेचर (2-0 पॉलीग्लेक्टिन) का उपयोग करके मूत्रेटर में कैथेटर को सुरक्षित करें और कैथेटर को 2 मिलीलीटर नमकीन के साथ ब्लॉक करें। इसके अलावा टांके का उपयोग उदर की दीवार (2-0 पॉलीप्रोपाइलीन) के पेरिटोनम में यूरेटर को अनुकूलित और सुरक्षित करने के लिए किया जाता है। कैथेटर भी कम से कम दो एकल गाँठ टांके (2-0 पॉलीप्रोपाइलीन) के साथ त्वचा के लिए सुरक्षित है।
  21. गुर्दे के भ्रष्टाचार और संवहनी एनास्टोमोस (3-0 पॉलीग्लोक्टिन) के किनारािंग के अव्यवस्था को रोकने के लिए गुर्दे के ऊपर पेरिटोनियल परत को बंद करें।
  22. भ्रष्टाचार पुनः प्राप्ति के लिए पहले वर्णित समान 4-लेयर फैशन में पेट को बंद करें।
  23. पेट बंद होने के बाद, या मेज पर नॉर्मथथर्मिया बनाए रखें।
    नोट: मतलब धमनी रक्तचाप 80 मिमी एचजी पर बनाए रखा जाना चाहिए जब तक जानवर जाग रहा है और एक प्रवण स्थिति में है।
  24. पेट बंद होने के बाद, गुर्दे के भ्रष्टाचार(चित्र 4)के पर्याप्त धमनी और शिरस परफ्यूजन सुनिश्चित करने के लिए कलर डॉप्लर अल्ट्रासाउंड का उपयोग करें। जानवर की बारीकी से निगरानी करें जब तक कि यह पूरी तरह से जाग न जाए और अनायास चल और पी सके। पशुओं को वसूली चरण के दौरान रिंगर समाधान के 1 एल दिए जाते हैं।
  25. बाद में, आवास सुविधा में जानवर को अपने बॉक्स में वापस करें।

7. अनुवर्ती, नमूना और डेटा संग्रह

  1. जानवरों को पानी विज्ञापन लिबिटम प्रदान करें जैसे ही वे अनायास पी सकते हैं। 1 पश्चात दिन से ठोस भोजन प्रदान करें।
  2. पश्चात एनाल्जेसिया के लिए, 72 घंटे के लिए हर 8 घंटे में बुप्रेनोरफिन (0.05 - 0.1 मिलीग्राम/किलो) का प्रशासन करें, 72 घंटे के लिए दिन में एक बार पैंटोजोल (40 मिलीग्राम i.v.) दें। प्रयोग के अंत तक पूरे अवलोकन अवधि के दौरान एंटीबायोटिक उपचार (सेफुरोक्सिम 35 मिलीग्राम/किलोग्राम 2x दैनिक) और थ्रोम्बोसिस प्रोफिलैक्सिस (पोस्टऑपरेटिव डे 1 से 500 मिलीग्राम एसीटिलसाइलसाइलिलिक एसिड) प्रदान करें।
    नोट: यदि रक्तस्राव जटिलताएं होती हैं, तो एस्पिरिन बंद कर दिया जाता है।
  3. अवलोकन अवधि के दौरान निरंतर टेलीमेट्री डेटा पंजीकृत करें। सुनिश्चित करें कि पशुओं पशु चिकित्सा अधिकारी द्वारा और/या एक अनुभवी पशु चिकित्सा तकनीशियन द्वारा कम से हर 8 घंटे का दौरा किया जाता है और उनकी नैदानिक स्थिति एक स्कोर शीट का उपयोग करके मूल्यांकन किया जाता है जिसका उपयोग पशु की नैदानिक स्थिति के लिए आवश्यक होने पर समय से पहले प्रयोग को समाप्त करने के लिए एक आधार के रूप में किया जाता है ।
    नोट: इन तथाकथित मानवीय अंत बिंदु मानदंडों को पहले24वर्णित के रूप में परिभाषित किया गया है ।
  4. केंद्रीय शिरीकार लाइन और परक्यूटेनियस मूत्र कैथेटर का उपयोग करके दैनिक नमूना संग्रह करें। मूत्र बैग (2,000 मिलीएल) 2x दैनिक बदलें।
  5. नमूना संग्रह या तरल पदार्थ या दवाओं के प्रशासन के बाद, हर उपयोग के बीच हेपरिनाइज्ड खारा समाधान (100 I.U./mL) के साथ केंद्रीय शिराकार ब्लॉक करने के लिए ऑक्सीकरण से बचने के लिए और यह एक नया बाँझ टोपी के साथ कवर किया ।
  6. 5 से 7 दिनों की इसी अवलोकन अवधि के बाद, गुर्दे के भ्रष्टाचार के पुनर्पार्णि, नमूना संग्रह और उन्मूलन के बाद गहरे संज्ञाहरण में जानवरों का बलिदान करें। बलिदान पेंटोबार्बिटल (50 - 60 मिलीग्राम/
    नोट: 3R सिद्धांत के अनुपालन में, बलिदान किए गए जानवरों के शेष अंगों और ऊतकों का उपयोग इन-हाउस संस्थानों में विभिन्न पूर्व वीवो अनुसंधान और शैक्षिक उद्देश्यों के लिए किया जा सकता है।

Representative Results

हमारे समूह को छोटे और बड़े जानवरों में ठोस अंग प्रत्यारोपण मॉडल के साथ कई वर्षों का अनुभव है और उन्होंने पोर्सिन ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो-प्रत्यारोपण मॉडल का उपयोग किया, जो विभिन्न प्रयोगात्मक सेटिंग्स16,25, 26,27में प्रजनन योग्य परिणाम प्राप्त करते हैं। प्रायोगिक सेटअप के आधार पर, हम प्रारंभिक प्रयोगों के रूप में 3 से 5 ऑटो-प्रत्यारोपण करने की सलाह देते हैं जो पूरी प्रायोगिक टीम की पर्याप्त सीखने की अवस्था सुनिश्चित करता है। वर्तमान सेटिंग में 5 प्रत्यारोपण के लिए एक सर्जन को प्रशिक्षित करने के लिए आवश्यक थे, पिछले प्रयोगात्मक के 8 साल के साथ-और प्रत्यारोपण सर्जरी के क्षेत्र में नैदानिक शल्य चिकित्सा अनुभव के 5 साल, इन प्रयोगों के प्रदर्शन में । यह इन तकनीकों के लिए सर्जन के पिछले जोखिम के आधार पर अलग कर सकते हैं।

इस प्रोटोकॉल के चौखटे के भीतर, 5 पोर्सिन ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो-प्रत्यारोपण प्रयोगों के एक सेट के परिणाम प्रदर्शित किए जाते हैं। ट्रांसपोंडर प्रत्यारोपण अवलोकन अवधि के दौरान पर्याप्त टेलीमेट्री संकेतों के साथ प्रत्येक जानवर में सफल रहा (आंशिक ट्रांसपोंडर शिथिलता के साथ एक जानवर को छोड़कर)। ट्रांसपोंडर प्रत्यारोपण के लिए चाकू से त्वचा का अंतराल 85 मिनट ± 5 मिनट(टेबल 1)था। भ्रष्टाचार पुनः प्राप्ति के बाद, सभी जानवरों को आवास सुविधा में अच्छी तरह से बरामद किया । पुनर्प्राप्ति सर्जरी के लिए चाकू से त्वचा अंतराल ३२ मिनट ± १३५ मिनट था (प्रविष्टि के लिए लगभग 30-45 मिनट सहित, सुरंग और जुगल कैथेटर की सुरक्षा) । बाईं किडनी को ठंडे पानी में रखा गया था- बाथ में 24 घंटे (24 घंटे ± 30 मिनट) का टारगेट कोल्ड इस्केमिया टाइम था। अगले दिन, संज्ञाहरण प्रेरण और रिलापरोटॉमी के बाद, कॉन्ट्रालेटरल (दाएं) गुर्दे को हटा दिया गया था जिसके बाद कोल्ड संग्रहीत बाएं गुर्दे के भ्रष्टाचार के ऑर्थोटोपिक ऑटो प्रत्यारोपण के बाद पहले वर्णित किया गया था। ऑटो प्रत्यारोपण सर्जरी के लिए चाकू से त्वचा अंतराल 168 मिनट ± 27 मिनट (सही गुर्दे के उन्मूलन सहित) था। गर्म इस्केमिया समय 34 मिनट ± 7 मिनट था। प्रत्येक प्रत्यारोपित गुर्दे भ्रष्टाचार एक ंयूनतम लेकिन प्रत्यक्ष मूत्र उत्पादन के बाद जलसेक था । पेट बंद होने के बाद, रंग डॉप्लर अल्ट्रासाउंड ने सभी मामलों(चित्र 4)में गुर्दे की संतोषजनक धमनी और शिरस परफ्यूजन दिखाया। संज्ञाहरण से बरामद सभी जानवरों और अवलोकन अवधि के दौरान कोई महत्वपूर्ण जटिलताओं को देखा गया। रोजाना ब्लड और यूरिन के नमूने एकत्र किए गए। सभी सूअरों अनुवर्ती के दौरान अच्छी नैदानिक हालत में थे और 5 दिनों के बाद बलिदान किया गया । सीरम क्रिएटिनिन और पोटेशियम मूल्य POD3-4 पर नुकीला। रक्त पीएच सामान्य श्रेणियों(चित्रा 5)के भीतर बना हुआ है। मूत्र उत्पादन पहले चार पश्चात दिनों में सामान्य मूल्यों के लिए बरामद किया । अनुवर्ती अवधि(चित्रा 5)के अंत में सफेद रक्त कोशिका गिनती थोड़ी बढ़ गई थी। शरीर के तापमान, निरंतर टेलीमेट्री निगरानी द्वारा मापा, पश्चात अवधि में मामूली उतार चढ़ाव दिखाया ।

Figure 1
चित्रा 1:अध्ययन प्रवाह और प्रोटोकॉल। संक्षिप्त उपयोग किए गए: पीओडी-पश्चात दिवस; ईसीजी-इलेक्ट्रोकार्डियोग्राफी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्र 2:6 जानवरों की वास्तविक समय और निरंतर टेलीमेट्री निगरानी के साथ पशु आवास सुविधा। 6 जानवरों के आवास और टेलीमेट्री निगरानी के लिए उपयुक्त हमारी सुविधा का योजनाबद्ध खाका। एकल होल्डिंग बक्से के आकार यूरोपीय संघ के निर्देश 2010/63 और ईटीएस १२३ परिशिष्ट ए पैनल ए-ई हमारी सुविधा के संगठन के प्रतिनिधि छवियों को दिखाने के दिशा निर्देशों के आधार पर निर्धारित किया गया था । (ख)6 जानवरों के आवास के लिए पशु कक्ष। (ग)टेलीमेट्री डेटा के निरंतर पंजीकरण के लिए उपयोग किए जाने वाले पीसी के साथ अवलोकन कक्ष। (घ)जानवरों का रियल टाइम वीडियो और थर्मल फुटेज । (ई)सामाजिक अलगाव से बचने के लिए अपने साथियों के साथ जानवरों के ध्वनिक और घ्राण संपर्क सुनिश्चित करने वाले व्यक्तिगत होल्डिंग । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्र 3:ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो प्रत्यारोपण और शारीरिक विविधताओं और पुनर्निर्माण की संभावनाएं। (ए,बी)"मानक" संवहनी शरीर रचना विज्ञान के मामले में ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो प्रत्यारोपण मॉडल के कदम। (ग)भिन्नता 1: जबकि एक बड़ी नस दाता गुर्दे के साथ आती है, प्राप्तकर्ता पक्ष पर दो नसें होती हैं। प्रबंधन: छोटी नस को एक लिगेचर द्वारा बंद कर दिया जाता है और एनास्टोमोसिस गुर्दे की नसों के बीच अंत तक किया जाता है। (घ)भिन्नता 2: जबकि एक बड़ी नस दाता गुर्दे के साथ आती है, कॉन्ट्रालेटरल साइड (जैसे, आकार बेमेल) पर कोई उपयुक्त प्राप्तकर्ता पोत नहीं है। प्रबंधन: अवर वेना कावा के लिए गुर्दे की नस के पक्ष एनास्टोमोसिस को समाप्त करें। (ई)भिन्नता 3: दोनों पक्षों पर दो समान आकार की नसें। प्रबंधन: दो शिश्चन एनास्टोमोस द्वारा पुनर्निर्माण। (च)भिन्नता 4: जबकि दो समान आकार की नसें दाता गुर्दे के साथ आती हैं, कॉन्ट्रालेट्रल साइड पर कोई उपयुक्त प्राप्तकर्ता पोत नहीं है। प्रबंधन: दो गुर्दे की नसों के मामले में अवर वेना कावा के लिए गुर्दे की नस के पक्ष एनास्टोमोसिस को समाप्त करें। (जी)भिन्नता 5: एक दाता गुर्दे एक नस के साथ आता है एक प्रारंभिक विभाजन दिखा रहा है, जबकि वहां contralateral पक्ष पर एक बड़ी नस है । प्रबंधन: प्राप्तकर्ता पक्ष पर एक बड़ी नस के साथ दाता गुर्दे नस के छोटे आम चैनल के एनास्टोमोसिस को समाप्त करने के लिए। (ज)वेरिएशन 6: जबकि डोनर किडनी शुरुआती विभाजन के साथ एक ही गुर्दे की नस के साथ आती है, कॉन्ट्रालेटरल साइड पर कोई उपयुक्त प्राप्तकर्ता पोत नहीं है । प्रबंधन: अवर वेना कावा के लिए दाता गुर्दे नस के छोटे आम चैनल के पक्ष एनास्टोमोसिस को समाप्त करें। यह आंकड़ा अधिक लगातार विविधताओं के एक मुट्ठी भर दर्शाया गया है और जर्मन लैंडरेस सूअरों में संभव सभी विविधताओं के मामले में सांख्यिकीय व्यापक नहीं है । संक्षिप्त उपयोग किया गया: केजी-किडनी भ्रष्टाचार; आरके-राइट किडनी; आईवीसी-अवर वेना कावा; AO-aorta कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4:प्रतिनिधि रंग डॉप्लर अल्ट्रासाउंड छवियां, सीधे ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो प्रत्यारोपण और पेट बंद होने के बाद। (क)कलर डॉप्लर अल्ट्रासाउंड सीधे गुर्दे और पेट बंद होने के प्रत्यारोपण के बाद किया जाता है, गुर्दे के भ्रष्टाचार की अच्छी धमनी और विषैले परफ्यूजन सुनिश्चित करने के लिए और संभावित iatrogenic संवहनी kinking के लिए स्क्रीन करने के लिए । विभिन्न समस्याओं के लिए स्क्रीन करने के लिए जानवर के नैदानिक प्रदर्शन के आधार पर अल्ट्रासाउंड का दैनिक और ऑन-डिमांड भी उपयोग किया गया था। (बी-ई) प्रत्यारोपण के बाद गुर्दे के भ्रष्टाचार की प्रतिनिधि अल्ट्रासाउंड छवियां। रंग डॉप्लर(बी, सी)के साथ और बिना गुर्दे के भ्रष्टाचार की छवि एक उत्कृष्ट धमनी(डी)और शिरीज़ परफ्यूजन(ई)दिखाती है। यह आंकड़ा एक ही जानवर से प्रतिनिधि छवियों को दिखाते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 5
चित्रा 5: 24 घंटे के ठंडे इस्केमिया समय के साथ ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो प्रत्यारोपण मॉडल केप्रतिनिधि प्रयोगशाला निष्कर्ष और टेलीमेट्री डेटा। (ए)सीरम पोटेशियम वैल्यूज(B)सीरम क्रिएटिनिन वैल्यूज(सी)पीएच(D)वाइट ब्लड सेल काउंट (डब्ल्यूबीसी)(ई)यूरिन आउटपुट । (च)लगातार चार गुर्दे प्रत्यारोपण में अवलोकन अवधि के दौरान टेलीमेट्रिक निगरानी द्वारा पंजीकृत शरीर का तापमान (आंशिक ट्रांसपोंडर शिथिलता के कारण5 वें जानवर से प्रस्तुत कोई डेटा) । संक्षिप्त उपयोग किया जाता है: पीओडी-पोस्टऑपरेटिव डे। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 6
चित्र 6:संभावित पेरी-ऑपरेटिव जटिलताओं और नुकसान के उदाहरण। (ए-सी)ऑर्थोटोपिक किरी ऑटो प्रत्यारोपण के बाद POD3 पर प्रत्यारोपित गुर्दे की भ्रष्टाचार की पश्चात भीड़ । (घ)त्वचा के स्तर पर अधिक तेज सीवन के कारण भीड़ का कारण कैथेटर किंकिंग के रूप में पहचाना गया । सीवन को पुनः समायोजित करने के बाद भीड़ लगभग पूरी तरह से 24 घंटे में हल हो गई ।(ई)यहां ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो प्रत्यारोपण के बाद POD2 पर एक अन्य गुर्दे भ्रष्टाचार दिखाया गया है । Asterix (*) भ्रष्टाचार के अंडरपोल के आसपास एक तरल पदार्थ संग्रह से पता चलता है (खूनी संग्रह बनाम लिंफोसेल) । गुर्दे पर पेरिटोनम के बंद होने के साथ हमारी तकनीक के कारण ये संग्रह आमतौर पर स्थानीय संपीड़न के लाभप्रद प्रभावों के कारण स्वयं सीमित होते हैं। स्थानीय खोज, रक्तस्राव या संक्रमण के लक्षणों के संदर्भ में जानवरों पर बारीकी से नजर रखी जानी चाहिए। (एफ)योग्य रंग डॉप्लर अल्ट्रासाउंड आवास सुविधा में दैनिक प्रदर्शन (और मांग पर) अपने अकादमिक उपयोग के अलावा (उदाहरण के लिए, प्रलेखन, धमनी पुनर्निरीबंधित सूचकांकों का पंजीकरण), प्रारंभिक उप-नैदानिक चरण में संभावित जटिलताओं को पहचानने में एक महत्वपूर्ण नैदानिक भूमिका है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

प्रायोगिक कार्य/कदम दिन समय (न्यूनतम) सर्जन पशु चिकित्सा अधिकारी पशु चिकित्सा तकनीशियन प्रयोगशाला तकनीशियन डॉक्टरेट छात्र कुल
के पास
प्रीप्रेटिव केयर डी-29 से डी-15 एन.ए. 1 1 1 3
टेलीमेट्री प्रत्यारोपण सर्जरी डी-15 85±5 1 1 1 1 1 5
टेलीमेट्री प्रत्यारोपण के बाद पश्चात देखभाल डी-15 से डी-1 एन.ए. 1 1 1 3
भ्रष्टाचार पुनः प्राप्ति सर्जरी डी-1 135±32 1 2 1 2 2 8
किडनी ऑटो प्रत्यारोपण सर्जरी डी 0 168 ±27 1 2 1 2 2 8
गुर्दे ऑटो प्रत्यारोपण के बाद पश्चात देखभाल डी 0 से डी 5 एन.ए. 2 1 2 5
बलिदान डी 5 एन.ए. 2 1 1 4

तालिका 1. पोर्सिन किडनी ऑटो प्रत्यारोपण मॉडल के विभिन्न प्रयोगात्मक चरणों के प्रदर्शन के लिए आवश्यक मानव संसाधन और समय-कार्यक्रम का विवरण।

Discussion

केटी का पोर्सिन मॉडल चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक बड़े पशु सेटिंग 15 ,17,21में उपन्यास चिकित्सीय दृष्टिकोण और चिकित्सा उपकरणों की जांच की अनुमतिदेताहै । पोर्सिन और मानव सेटिंग के बीच शारीरिक, रोगविज्ञानी और शल्य चिकित्सा-तकनीकी समानताएं डेटा की नैदानिक व्याख्या और निष्कर्षों और तकनीकों के नैदानिक परीक्षण15, 16, 17,18,19,21में तेजी से अनुवाद की सुविधा प्रदान कर सकती हैं।

ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो-प्रत्यारोपण का मॉडल न केवल एलो-प्रत्यारोपण की तुलना में आवश्यक जानवरों की संख्या को कम करके 3R सिद्धांत का पालन करता है, उदाहरण के लिए कोई अलग दाता जानवर की आवश्यकता नहीं है, लेकिन यह भी इम्यूनोलॉजिकल प्रतिक्रिया और इम्यूनोसप्रेसिव दवाओं17, 21के जटिल प्रभावों के बिना आईआरआई और संरक्षण चोट के प्रभावों की जांच करने का एक अनूठा अवसर प्रदान करता है।

प्रोटोकॉल के मामूली संशोधनों नैदानिक स्थितियों के एक व्यापक स्पेक्ट्रम मॉडलिंग की अनुमति देते हैं। संचार मृत्यु (डीसीडी) गुर्दे के बाद दान का उपयोग करके केटी की नकल करने के लिए, गुर्दे की प्राप्ति से पहले सीटू में 30 से 60 मिनट के लिए संवहनी संरचनाओं को दबाया जाता है, जबकि लंबे समय तक ठंडे इस्केमिया समय (24 घंटे और लंबे समय तक) को व्यापकसंरक्षण चोट16, 17,28, 29मॉडल पर लागू किया जा सकता है।

हालांकि, पोर्सिन केटी मॉडल छोटे जानवरों (जैसे चूहों और चूहों)26में ठोस अंग प्रत्यारोपण मॉडल की तुलना में शल्य चिकित्सा रूप से कम चुनौतीपूर्ण है, कई तकनीकी पहलू और नुकसान हैं जिन्हें परिणामों में सुधार करने और विशिष्ट जटिलताओं से बचने के लिए ध्यान में रखा जाना चाहिए17।

तकनीकी गलती या शारीरिक विविधताओं के कारण भ्रष्टाचार पुनः प्राप्ति या प्रत्यारोपण के दौरान अवर वेना कावा और महाधमनी के आसपास बड़े लिम्फेटिक जहाजों से बचने में विफल रहने से, उच्च उत्पादन लिम्फेटिक फिस्टुला और पोस्ट-ऑपरेटिव पेट तरल पदार्थ संग्रह, संक्रमण और संभावित तकनीकी विफलता हो सकती है। लिम्फेटिक जहाजों को सर्जरी के दौरान पूरी तरह से बचा जाना चाहिए या 5-0 या 6-0 पॉलीप्रोपाइलीन टांके के साथ बंद कर दिया जाना चाहिए। लिम्फेटिक लीक होने की स्थिति में बाइपोलर या किसी अन्य जमावट डिवाइस के इस्तेमाल से भी बचना बुद्धिमानी है। इससे आमतौर पर स्थिति बिगड़ती है। कम आउटपुट लिम्फेटिक रिसाव के मामले में, हमारी टीम को फाइब्रिन-आधारित कोलेजन पैच (जैसे, टैकोसिल)30के अनुप्रयोग के साथ एक अच्छा अनुभव है, हालांकि, उनकी उच्च लागत इस सेटिंग में उनके आवेदन को सीमित करती है।

वर्तमान प्रोटोकॉल में हम गुर्दे की पुनर्प्राप्ति और ऑटो प्रत्यारोपण के लिए एक ट्रांसपेरिटोनियल दृष्टिकोण प्रदर्शित करते हैं। यह नैदानिक स्थिति की तुलना में एक प्रमुख तकनीकी अंतर है, जहां गुर्दे के ग्राफ्ट को आमतौर पर एक एक्सपेरि़टोनियल दृष्टिकोण का उपयोग करके इलियाक फॉसा में प्रत्यारोपित किया जाता है। हालांकि, अधिकांश समूह पोर्सिन मॉडल में ट्रांसपेरिटोनियल और ऑर्थोटोपिक दृष्टिकोण का उपयोग करते हैं, इलियाक फोसा में हेट्रोटोपिक प्रत्यारोपण भीसूअरों 31में संभव है। हालांकि, 30-40 किलो सूअरों में बाहरी इलियाक धमनी के अपेक्षाकृत कम व्यास और वासोस्पास्म की प्रवृत्ति के कारण कभी-कभी बाहरी इलियाक धमनी31के लिए गुर्दे की धमनी के अंत-से-साइड एनास्टोमोसिस को करना मुश्किल हो जाता है। इस तथ्य के संबंध में कि हम बाद में ऑटो-प्रत्यारोपण करने के लिए ट्रांसपेरिटोनियल दृष्टिकोण के माध्यम से बाईं किडनी को पुनः प्राप्त करते हैं, एक ही चीरा को फिर से खोलकर और एक स्ट्रैगफॉरवर्ड ऑर्थोटोपिक दृष्टिकोण का उपयोग करके प्रत्यारोपण करना अधिक संभव है, विशेष रूप से यह सुनिश्चित करने के लिए कि पशु केवल एक प्रीडामागेड किंडी के साथ ठीक हो जाएगा। मॉडल की सभी संभावित तकनीकी विविधताओं का व्यापक विवरण इस प्रोटोकॉल के दायरे से बाहर है और इसे अन्य लोगों द्वारा व्यापक समीक्षा अनुच्छेद31में संक्षेप में प्रस्तुत किया गया है ।

प्रत्यारोपित गुर्दे के भ्रष्टाचार और संवहनी एनास्टोमोस के परिणामी किंकिंग की अव्यवस्था पोर्सिन केटी मॉडल में विफलता का एक प्रमुख स्रोत है, जो एक शल्य जटिलता के कारण तेजी से संवहनी ऑक्सक्यूलेशन और प्रयोग की पूरी विफलता के लिए अग्रणी है। इससे बचने के लिए, ऑटो-प्रत्यारोपण के बाद हम 3-0 पॉलीग्लेक्टिन का उपयोग करके चल रहे सीवन के साथ गुर्दे पर पेरिटोनियल परत को बंद कर देते हैं। इसके अलावा, किडनी ग्राफ्ट के अच्छे धमनी और शिरस परफ्यूजन सुनिश्चित करने के लिए, गुर्दे और पेट बंद होने के प्रत्यारोपण के बाद सीधे रंग डॉप्लर अल्ट्रासाउंड किया जाता है। अल्ट्रासाउंड का उपयोग दैनिक और ऑन-डिमांड भी किया जाता है, जो जानवर के नैदानिक प्रदर्शन के आधार पर, गुर्दे के परफ्यूजन, गुर्दे की समस्याओं (जैसे मूत्र कैथेटर की बाधा या किंकिंग) के लिए स्क्रीन करने के लिए किया जाता है, और लिम्फेटिक फिस्टुला, रक्तस्राव या संक्रमण(चित्रा 4 और चित्रा 6) के कारण तरल पदार्थ संग्रह।

चूंकि ठंड इस्केमिया के 24 घंटे अक्सर कार्यात्मक हानि और विलंबित भ्रष्टाचार कार्य की ओर जाता है, जानवरों को पशु चिकित्सा अधिकारी द्वारा आवश्यक माने जाने पर ऑन-डिमांड चिकित्सा चिकित्सा की आवश्यकता हो सकती है। इसमें केंद्रीय शिराकार रेखा के माध्यम से प्रशासित 5% ग्लूकोज और/या रिंगर समाधान का उपयोग करके जलसेक चिकित्सा शामिल हो सकती है, फ्यूरोस्माइड बोलस इंजेक्शन (नैदानिक राज्य और प्रयोगशाला परिणामों के आधार पर ओलिगुरिया/एनुरिया के मामले में, 60-80 मिलीग्राम बोलस इंजेक्शन 200 मिलीग्राम/दिन तक), और गंभीर हाइपरकालेमिया32के मामले में सोडियम पॉलीस्टीरिन सल्फोनेट (रेसोनियम ए) का मौखिक प्रशासन। प्रायोगिक पूर्वाग्रह से बचने के लिए, पशुओं के प्रत्यारोपण के बाद पशु चिकित्सा देखभाल के लिए जिम्मेदार पशु चिकित्सा अधिकारी को लागू उपचार और समूहिंग के लिए अंधा किया जाना चाहिए ।

हालांकि, गुर्दे की धमनी की शारीरिक रचना जर्मन लैंडरेस सूअरों में आमतौर पर पुनर्निर्माण के लिए एक धमनी के साथ सरल है, गुर्दे की नस शाखाओं की शारीरिक विविधताओं का एक विस्तृत स्पेक्ट्रम है जिसके लिए शिरीकार पुनर्निर्माण के दौरान कुछ सर्जिकल रचनात्मकता की आवश्यकता होती है। अक्सर दो (या अधिक) गुर्दे की नस शाखाएं गुर्दे के हिलम और अवर वेना कावा के बीच विभिन्न स्तरों पर शामिल होती हैं। सबसे अधिक बार देखी जाने वाली विविधताएं और17 के संभावित पुनर्निर्माण विकल्प चित्र 3में दिखाए गए हैं ।

पहले शल्य चिकित्सा हस्तक्षेप (दिन -15, टेलीमेट्री प्रत्यारोपण) के बाद, सभी जानवरों को एक पोर्सिन जैकेट प्राप्त होता है जिसे वे प्रयोगों की पूरी अवधि में पहनते हैं। यह प्रत्यारोपित कैथेटर की आकस्मिक चोटों और अव्यवस्था के खिलाफ उत्कृष्ट सुरक्षा प्रदान करता है और मूत्र संग्रह बैग के भंडारण के लिए कमरा प्रदान करता है। इन जैकेटों का उपयोग 3आर सिद्धांत के अनुसार शोधन विधि के रूप में क्रिएटिनिन क्लीयरेंस के आकलन के लिए मेटाबोलिक पिंजरों की आवश्यकता को खत्म करने के लिए एक व्यवहार्य समाधान भी है।

हमारी आवास सुविधा टेलीमेट्री और वीडियो आधारित पेरी-ऑपरेटिव निगरानी के उपयोग को एकीकृत करती है। हालांकि, ये विधियां पशु चिकित्सा अधिकारी और तकनीशियनों द्वारा नियमित यात्राओं की जगह नहीं ले सकतीं, वे तेजी से हस्तक्षेप की सुविधा प्रदान करते हैं और भविष्य के लिए हमारी प्रायोगिक सेटिंग्स को और अधिक परिष्कृत करने के लिए गंभीरता मूल्यांकन में सुधार करते हैं। बड़े पशु मॉडल 33 में इम्प्लांटेबल टेलीमेट्री डिवाइस के उपयोग के लिए कईसंकेत हैं। हालांकि, ईसीजी, रक्तचाप जैसी बड़ी सर्जरी के बाद नैदानिक पैराटर्स की बारीकी से निगरानी, तापमान को सर्जिकल गहन और मध्यवर्ती देखभाल इकाई की मानव नैदानिक सेटिंग में मानक माना जाता है, प्रायोगिक सर्जरी निगरानी में ज्यादातर बंद कर दिया जाता है जब जानवर एनेस्थीसिया33,34,35से जाग रहा होता है। इसलिए, टेलीमेट्री इन जानवरों की सतत निगरानी के लिए एक व्यवहार्य तरीका प्रदान करता है। हमारा मानना है कि ये सभी डेटा संभावित पश्चात जटिलता का सही और समय पर पता लगाने में योगदान देते हैं (उदाहरण के लिए, रक्तस्रावी सदमे, या सेप्सिस तापमान, हाइपोटोनिया और टैचिकार्डिया में वृद्धि से पता चला है)। यह समय पर हस्तक्षेप की सुविधा दे सकता है (उदाहरण के लिए, चिकित्सीय एंटीबायोटिक चिकित्सा की शुरूआत, तरल पदार्थ प्रतिस्थापन, एंटीकोगुलेशन का विच्छेदन, या दुख से बचने के लिए जानवर का बलिदान)। इन "वास्तविक समय" निगरानी पहलू के अलावा, हमारा समूह वर्तमान में पशुप्रयोगों36, 37,38के गंभीरता मूल्यांकन और शोधन पर ध्यान केंद्रित कर रहा है। इन प्रयोगों में बड़ी मात्रा में एकत्र टेलीमेट्री डेटा का पूर्वव्यापी विश्लेषण हमें इस प्रकार के शल्य चिकित्सा हस्तक्षेपों की गंभीरता को बेहतर तरह से स्तरीकृत करने और प्रयोगशाला जानवरों में पेरिऑपरेटिव देखभाल (जैसे, एनाल्जेसिया) का अनुकूलन करने की अनुमति दे सकता है।

प्रत्यारोपण टेलीमेट्री के संदर्भ में, माप प्रणाली के प्रत्यारोपण के बाद कम से कम 12 दिनों की अवधि स्थिर और इष्टतम माप डेटा (व्यक्तिगत संचार के आधार पर) सुनिश्चित करने की सिफारिश की जाती है। विभिन्न निर्माताओं के साथ इस मुद्दे पर चर्चा करने के बाद बड़े जानवरों के लिए टेलीमेट्री समाधान प्रदान करने के साथ ही विभिन्न प्रयोगात्मक सेटिंग्स में इन प्रणालियों का उपयोग कर अंय अनुसंधान समूहों के साथ, हम टेलीमेट्री प्रत्यारोपण और गुर्दे प्रत्यारोपण के बीच एक 14 दिन की अवधि को एकीकृत करने का फैसला किया । पहले के दिनों के दौरान, जानवर के आंदोलन के कारण विचलन अभी भी हो सकता है क्योंकि जख्म और उपचार प्रक्रियाएं अभी भी पूरी नहीं होती हैं।

इसके फायदों के बावजूद, उपर्युक्त मॉडल की कुछ सीमाएं हैं। जटिलता और आवश्यक संसाधनों और बुनियादी ढांचे मॉडल की सबसे महत्वपूर्ण सीमाएं हैं । समय लेने वाले प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल, जटिल तकनीकों, और तीव्र पेरी-ऑपरेटिव का पालन करने के लिए एक महत्वपूर्ण आवास और या क्षमता की उपलब्धता की आवश्यकता होती है और डॉक्टरेट अध्येता, सर्जन, पशु चिकित्सा अधिकारियों और तकनीशियनों (तालिका 1) सहित एक बड़ी टीम की भागीदारी की आवश्यकता होती है। इसलिए, हमारे अनुभवजन्य टिप्पणियों के आधार पर, आमतौर पर एक दिन में दो से अधिक प्रक्रियाओं का प्रदर्शन करना अव्यवहार्य होता है। छोटे पशु मॉडल की तुलना में पोर्सिन मॉडल का एक और नुकसान यंत्रवादी और आणविक-जैविक जांच की सीमित संभावना है । वर्तमान प्रोटोकॉल में केवल 5 दिन के अनुवर्ती कार्रवाई की सूचना दी गई थी । यह मॉडल की सबसे महत्वपूर्ण प्रयोगात्मक विशेषताओं को प्रदर्शित करने के लिए उपयुक्त था, हालांकि, यह अपेक्षाकृत कम अनुवर्ती कुछ विशिष्ट शोध प्रश्न का जवाब देने के लिए पर्याप्त नहीं हो सकता है (उदाहरण के लिए कार्य बनाम तीव्र क्षति की दीर्घकालिक वसूली)। इसलिए, अनुवर्ती का एक परियोजना से संबंधित विस्तार आवश्यक हो सकता है। यह पांडुलिपि हमारे वर्तमान "सर्वश्रेष्ठ अभ्यास" पोर्सिन ऑर्थोटोपिक किडनी ऑटो प्रत्यारोपण की प्रायोगिक सेटिंग में वर्णन करता है। जबकि इस मॉडल को सफलतापूर्वक स्थापित करने के लिए कुछ कदम अनिवार्य हैं, मामूली पहलू (उदाहरण के लिए, मूत्राशय कैथेटर का इंट्राऑपरेटिव उपयोग, धमनी कैथेटर प्लेसमेंट फेमोरल बनाम कैरोटिड धमनी के लिए) संकाय हैं और जांचकर्ताओं के विवेक पर बचा/बदला जा सकता है। प्रत्येक विधिपूर्ण पहलू का विवरण और औचित्य वर्तमान प्रोटोकॉल के दायरे से बाहर होगा और इस पर31और चर्चा की गई है । अंत में, पोर्सिन मॉडल में ईसीडी केटी की सटीक नैदानिक स्थिति को दोहराना भी मुश्किल है, जहां बुजुर्ग दानदाताओं, तीव्र गुर्दे की चोट के साथ एलोग्रैफ्ट और कई सह-रुग्णता और उच्च रक्तचाप, मधुमेह मेलिटस या आर्टेरियोस्क्लेरोसिस जैसे पुराने रोगों के साथ एलोग्रैफ्ट सीमांत दाता पूल8,9का एक प्रमुख हिस्सा प्रतिनिधित्व करते हैं।

उपर्युक्त सीमाओं के साथ-साथ तकनीकी और साजो-सामान की चुनौतियों के बावजूद, केटी का यह सुस्थापित और प्रजनन योग्य बड़ा पशु मॉडल अंग संरक्षण और नैदानिक परिणामों में सुधार करने के लिए उपन्यास चिकित्सा और तकनीकों की जांच करने का एक अनूठा अवसर प्रदान करता है और युवा सर्जनों के लिए एक बड़े पशु मॉडल में अंग प्रत्यारोपण तकनीकों में महारत हासिल करने के लिए एक उत्कृष्ट मंच का प्रतिनिधित्व करता है।

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है ।

Acknowledgments

लेखक पास्कल पासचेन्डा, मारेक शुल्ज, ब्रिटा बुंगर्ट, अन्ना कुममेके को उनकी कुशल तकनीकी सहायता के लिए आभार व्यक्त करना चाहते हैं।

लेखकों ने चिकित्सा संकाय के प्रारंभ कार्यक्रम, आरडब्ल्यूटीएच आकिन विश्वविद्यालय (#23/19 से जेड.C) के प्रारंभ कार्यक्रम से भाग में धन की घोषणा की, जो बी ब्रून फाउंडेशन, मेलसुंगन, जर्मनी (बीबीएस्ट-एस-17-00240 से जेड.C तक), जर्मन रिसर्च फाउंडेशन (ड्यूश फोर्चुंग्सेन्चेफ्ट-डीएफजी; के लिए-२५९१, 542/5-1 करने के लिए, 542/6-1; २०१६ आर टी और SFB/TRR57, SFB/TRR219, BO3755/3-1, BO3755/6-1 से पी.B.) और जर्मन शिक्षा और अनुसंधान मंत्रालय (बीएमबीएफ: स्टॉप-एफएसजीएस-01GM1901A से पी.B.), अध्ययन डिजाइन, डेटा संग्रह, डेटा विश्लेषण, पांडुलिपि तैयारी या प्रकाशित करने के निर्णय में funders की भागीदारी के बिना ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Anesthesia materials, drugs and medications
Aspirin 500mg i.v., powder for solution for injection  Bayer Vital AG, Leverkusen, Germany 4324188 antiplatelet agents
Atropine sulfate solution for injection, 100mg Dr. Franz Köhler Chemie GmbH, Bensheim, Germany  1821288 parasympatholytic agent, premedication
Bepanthen ointment for eyes and nose Bayer Vital AG, Leverkusen, Germany 1578675 eye ointment
BD Discardit II syringes, 2ml, 5ml, 10ml,20ml Becton Dickinson GmbH, Heidelberg, Germany 300928, 309050,309110, 300296  syringes
BD Micolance 3 (20G yellow) Cannula Becton Dickinson GmbH, Heidelberg, Germany 305888 venous catheter
BD Venflon Pro Safety (20G pink) Becton Dickinson GmbH, Heidelberg, Germany 4491101 venous catheter
Buprenorphine (Buprenovet) Bayer Vital AG, Leverkusen, Germany 794-996 analgesia
Cefuroxime 750mg, powder for preparing  injection solution FRESENIUS KABI Deutschland GmbH, Bad Homburg, Germany J01DC02 antibiotics
Covidien Hi-Contour, Endotracheal Tube 7,5 with Cuffed Murphy Eye Covidien Deutschland GmbH,Neustadt/Donau, Germany COV-107-75E endotracheal Tube
FENTANYL 0,5 mg Rotexmedica solution for injection  Rotexmedica GmbH Arzneimittelwerk, Trittau, Germany 4993593 opioide analgetic agent
Furosemide-ratiopharm 250 mg/25 ml solution for injection Ratiopharm GmbH, Ulm, Germany 1479542 loop diuretics
Glucose 5% solution for infusion (500ml, 250ml) B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  3705273,03705422 infusion fluid
Glucose 20% solution for infusion B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  4164483 osmotic diuresis
Heparin-Sodium 5000 I.E./ml B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  15782698 anticoagulant
Isoflurane-Piramal (Isoflurane) Piramal Critical Care Deutschland GmbH, Hallbergmoos, Germany 9714675 volatile anaesthetic agent
Ketamine (Ketamine hydrochloride) 10% Medistar Arzneimittelvertrieb GmbH, Ascheberg, Germany 0004230 general anaestetic agent
MIDAZOLAM 15mg/3ml Rotexmedica GmbH Arzneimittelwerk, Trittau, Germany 828093 hybnotica, sedative agent
NaCl 0,9% solution for infusion (500ml,1000ml) B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  864671.8779 infusion fluid
Norepinephrine (Arterenol) Sanofi-Aventis Deutschland GmbH, Frankfurt, Germany 16180 increase in blood pressure 
Organ preservation solution (e.g. HTK) Dr. Franz Köhler Chemie GmbH, Bensheim, Germany  should be decided based on preference and experimental design organ preservation
Pantoprazole 40mg/solution for injection Laboratorios Normon,Madrid, Spain 11068 proton pump inhibitor
Paveron N 25mg/ml solution for injection (Papaverine Hydrochloride) LINDEN Arzneimittel-Vertrieb-GmbH, Heuchelheim, Germany 2748990 spasmolytic agent for vasodilatation
Pentobarbital (Narcoren) Boehringer Ingelheim vetmedica GmbH, Ingelheim, Germany 1,204,924,565 used for euthanasia
Propofol 1% (10mg/ml) MCT Fresenius FRESENIUS KABI Deutschland GmbH, Bad Homburg, Germany 654210 general anaesthetic agent
Ringer solution B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  1471411 infusion fluid
Sterofundin ISO solution for infusion (1000ml) B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  1078961 Infusion fluid
Stresnil (Azaperone) 40mg/ml Elanco 797-548 sedative
Urine catheter ruffle 12CH  Wirutec Rüsch
Medical Vertriebs GmbH, Sulzbach, Germany		 RÜSCH-180605-12 transurethral urinecatheter
Surgical materials
Appose ULC Skin Stapler Covidien Deutschland GmbH,Neustadt/Donau, Germany 8886803712 skin stapler
Cavafix Certo 375  B. Braun Deutschland GmbH & Co. KG, Melsungen, Germany  4153758 central venous catheter
EMKA Easytel +L-EPTA Transponder emka TECHNOLOGIES S.A.S,Paris,France L-EEEETA 100 telemetry transponder
EMKA Reciever and Data Analyzer System emka TECHNOLOGIES S.A.S,Paris,France Reviever  telemetry receiver
Feather Disposable Scapel (11)(21) Feather, Japan 8902305.395 scapel
Prolene 2-0, blue monofil VISI-BLACK, FS needle Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany EH7038H skin
Prolene 3-0,blue monofil,FS1 needle Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany EH7694H skin
Prolene 5-0 (simply angulated, C1 needle) blue monofil VISI-BLACK Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany EH7227H vascular
Prolene 5-0 (double armed, C1 needle) 60cm Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany KBB5661H vascular
Prolene 6-0 (double armed, C1 needle) 60cm Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany EH7228H vascular
Sempermed derma PF Surgical Gloves Seril Gr. 7, 7.5, 8  Semperit investment Asia Pte Ltd, Singapore 4200782,4200871,4200894 surgical gloves
Sentinex® PRO Surgical Gowns Spunlace XL 150cm Lohmann & Rauscher GmbH & Co. KG, Neuwied, Germany 19302 surgical gown
Tachosil Takeda Pharma Vertrieb GmbH & Co. KG, Berlin, Germany MAXI 9,5 x 4,8 cm haemostasis
Telasorp Belly wipes (green 45x45cm) PAUL HARTMANN AG,Heidenheim, Germany 4542437 abdominal towel
Pediatric urine catheter Uromed Kurt Drews KG, Oststeinbeck, Germany PZN 03280856 used for the uretero-cutaneus stoma
VICRYL- 0 MH Plus Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany V324 fascial closure
VICRYL - 3-0, SH1 Plus needle, 75cm Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany W9114 subcutaneous suture, peritoneal suture, 
VICRYL - 3-0, SH1 Plus needle, 4*45cm Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany V780 subcutaneous suture, peritoneal suture, 
VICRYL - ligatures Sutupak purple braided, 3-0 Johnson & Johnson Medical GmbH - Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany V1215E threats for ligature
3M™ Standard Surgical Mask 1810F 3M Deutschland GmbH, Neuss, Germany 3M-ID 7000039767 surgical mask
Surgical instruments
Anatomical forceps Standard ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  PZ0260 anatomical forceps
Atraumatic tweezers steel, De Bakey Tip 1,5mm 8" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  GF0840 anatmical atraumatic forceps
Bipolar forceps 16 cm straight, Branch 0,30 mm pointed, universal fit Bühler Instrumente Medizintechnik GmbH,Tuttlingen, Germany 08/0016-A biopolar forceps
Bulldog clamp atraumatic,curved, De bakey 78 mm, 3" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  GF0900 bulldog clamps
DE BAKEY-SATINSKY vascular clamp 215mm ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  GF1661 vascular clamp
Dissecting scissors Mayo,250 mm, 10" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  SC2232   Scissors for dissection
Dissecting scissors Metzenbaum-Fino, 260 mm, 101/4" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  SC2290 Scissors for dissection
Draeger CATO Anesthetic machine with PM8050 Monitor Dräger, Drägerwerk AG & Co. KGaA, Lübeck, Germany  106782 Ventilation System
 Fine Tweezers, ADSON 180 mm ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  ADSONPZ0571 fine forceps
Gosset abdomenal wall spreader CHIRU-INSTRUMENTE, Kaierstuhl,Germany 09-621512 abdominal retractor
HALSTEAD MOSQUITO,curved, surgical 125mm ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  KL2291 mosquite clamps
HF surgical device ICC 300, Electrocautery Erbe Elektromedizin Gmbh; Tübingen, Germany 20132-043 cautery, biopolar
MICRO HALSTED-MOSQUITO 100mm, curved ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  KL2187 mosquite clamps
Micro steel needle holder straight 0,5mm, with spring lock ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  MN1324D microsurgical needle holder
Microsurgical/watermaker tweezers LINZ 150mm 6" Ergo round handle ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  MN0087 fine microsurgical forceps
needle holder Mayo-hegar,190 mm, 71/2" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  NH1255 needle holder
Overhold Slimline Fig. 0 8 1/2" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  KL4400 overholds
Sterile Gauze 10X10 Paul HaRTMANN AG,Heidenheim, Germany 401725 sterile gauze
Suction tip OP-Flex Handpiece Yankauer Pfm Medical AG, Köln, Germany 33032182 suction
surgical forceps Standard 5 3/4"  ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  PZ1260 surgical forceps
surgical scissors standard pointed-blunt (thread/cloth scissors)175 mm, 7" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  SC1522 surgical Scissors
Titanit vascular scissors POTTS-SMITH,185 mm, 71/4"60° ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  SC8562 Pott scissors
Tunneling instrument Marina Medical Instruments Inc,Davies,US MM-TUN06025 subcutaneous tunneling
Vessel loops Medline International Germany GmbH,Kleve, Germany VLMINB hold and adjust the vessel
Wound spreaders Weitlander, Stump,110 mm, 41/4" ASANUS Medizintechnik GmbH, Tuttlingen, Germany  WH5210 wound care
Further material
Heating pad Eickemeyer - Medizintechnik für Tierärzte KG, Tuttlingen, Germany 
648050 MHP-E1220		 maintain body temperature during surgery
Laryngoscope, customized Wittex GmbH, Simbach, Germany 333222230  expose the vocal cord
Rectal temperature probe Asmuth Medizintechnik, Minden, Germany ASD-RA4 measure body temperature
Spray wound film Mepro-Dr. Jaeger und Bergmann GmbH, Vechta, Germany 2830  keep sterile condition
Sterile organ bag Raguse Gesellschaft für medizinische Produkte, Ascheberg, Germany 800059 organ preservation
swine jacket small, adult Landrasse swine 30-50kg, customized for Emka Telemetry and urinary catheterization  Lomir Biomedical Inc., United Kingdom SS J1LAPMP swine jackets to pretect implanted catheters and store urine bag
 Ultrasound device, Sonosite Edge-II FUJIFILM SonoSite GmbH, Frankfurt, Germany V21822 ultrasound and color Doppler
Urine bag 2000ml Volume ASID BONZ GmbH, Herrenberg, Germany  2062578 disposable urine bag connected to the uretero-cutaneous fistula catheter

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References

  1. Watts, G. Joseph Murray: innovative surgeon and pioneer of transplantation. Lancet. 377 (9770), 987 (2011).
  2. Merion, R. M., et al. Deceased-donor characteristics and the survival benefit of kidney transplantation. Journal of the American Medical Association. 294 (21), 2726-2733 (2005).
  3. Jochmans, I., O'Callaghan, J. M., Pirenne, J., Ploeg, R. J. Hypothermic machine perfusion of kidneys retrieved from standard and high-risk donors. Transplant International. 28 (6), 665-676 (2015).
  4. Czigany, Z., et al. Machine perfusion for liver transplantation in the era of marginal organs-New kids on the block. Liver International. 39 (2), 228-249 (2018).
  5. Fabrizii, V., et al. Patient and graft survival in older kidney transplant recipients: does age matter. Journal of the American Soceity of Nephrology. 15 (4), 1052-1060 (2004).
  6. Jochmans, I., Nicholson, M. L., Hosgood, S. A. Kidney perfusion: some like it hot others prefer to keep it cool. Current Opinion in Organ Transplantation. 22 (3), 260-266 (2017).
  7. DSO. DSO Jahresbericht. , Available from: https://www.dso.de/SiteCollectionDocuments/DSO_Jahresbericht_2018.pdf (2018).
  8. Meister, F. A., et al. Hypothermic Oxygenated Machine Perfusion of Extended Criteria Kidney Allografts from Brain Dead Donors: Protocol for a Prospective Pilot Study. JMIR Research Protocols. 8 (10), 14622 (2019).
  9. Meister, F. A., et al. Hypothermic oxygenated machine perfusion-Preliminary experience with end-ischemic reconditioning of marginal kidney allografts. Clinical Transplantation. 33 (10), 13673 (2019).
  10. Siedlecki, A., Irish, W., Brennan, D. C. Delayed graft function in the kidney transplant. American Journal of Transplantation. 11 (11), 2279-2296 (2011).
  11. Plenter, R., Jain, S., Ruller, C. M., Nydam, T. L., Jani, A. H. Murine Kidney Transplant Technique. Journal of Visualized Experiments. (105), e52848 (2015).
  12. Fabry, G., et al. Cold Preflush of Porcine Kidney Grafts Prior to Normothermic Machine Perfusion Aggravates Ischemia Reperfusion Injury. Scientific Reports. 9 (1), 13897 (2019).
  13. Kalenski, J., et al. Improved preservation of warm ischemia-damaged porcine kidneys after cold storage in Ecosol, a novel preservation solution. Annals of Transplantation. 20, 233-242 (2015).
  14. Kalenski, J., et al. Comparison of Aerobic Preservation by Venous Systemic Oxygen Persufflation or Oxygenated Machine Perfusion of Warm-Ischemia-Damaged Porcine Kidneys. European Surgical Research. 57 (1-2), 10-21 (2016).
  15. Kaths, J. M., et al. Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation. Journal of Visualized Experiments. (101), e52909 (2015).
  16. Schreinemachers, M. C., et al. Improved preservation and microcirculation with POLYSOL after transplantation in a porcine kidney autotransplantation model. Nephrology Dialysis Transplantation. 24 (3), 816-824 (2009).
  17. Kaths, J. M., et al. Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol. Journal of Visualized Experiments. (108), e53765 (2016).
  18. De Deken, J., et al. Postconditioning effects of argon or xenon on early graft function in a porcine model of kidney autotransplantation. British Journal of Surgery. 105 (8), 1051-1060 (2018).
  19. Faure, A., et al. An experimental porcine model of heterotopic renal autotransplantation. Transplantation Proceedings. 45 (2), 672-676 (2013).
  20. Golriz, M., et al. Do we need animal hands-on courses for transplantation surgery. Clinical Transplantation. 27, Suppl 25 6-15 (2013).
  21. Gallinat, A., et al. Transplantation of Cold Stored Porcine Kidneys After Controlled Oxygenated Rewarming. Artificial Organs. 42 (6), 647-654 (2018).
  22. Russell, W. M. S., Burch, R. L. The Principles of Humane Experimental Technique. , Methuen. (1959).
  23. Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: the ARRIVE guidelines for reporting animal research. PLoS Biology. 8 (6), 1000412 (2010).
  24. Hagemeister, K., et al. Severity assessment in pigs after partial liver resection: evaluation of a score sheet. Laboratory Animals. 54 (3), (2019).
  25. Doorschodt, B. M., et al. Hypothermic machine perfusion of kidney grafts: which pressure is preferred. Annals of Biomedical Engineering. 39 (3), 1051-1059 (2011).
  26. Czigany, Z., et al. Improving Research Practice in Rat Orthotopic and Partial Orthotopic Liver Transplantation: A Review, Recommendation, and Publication Guide. European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).
  27. Nagai, K., Yagi, S., Uemoto, S., Tolba, R. H. Surgical procedures for a rat model of partial orthotopic liver transplantation with hepatic arterial reconstruction. Journal of Visualized Experiments. (73), e4376 (2013).
  28. Doorschodt, B. M., et al. Evaluation of a novel system for hypothermic oxygenated pulsatile perfusion preservation. The Internation Journal of Artificial Organs. 32 (10), 728-738 (2009).
  29. Kaths, J. M., et al. Continuous Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion Is Superior to Brief Normothermic Perfusion Following Static Cold Storage in Donation After Circulatory Death Pig Kidney Transplantation. American Journal of Transplantation. 17 (4), 957-969 (2017).
  30. Tammaro, V., et al. Prevention of fluid effusion in kidney transplantation with the use of hemostatic biomaterials. Transplantation Proceedings. 46 (7), 2203-2206 (2014).
  31. Golriz, M., et al. Pig kidney transplantation: an up-to-date guideline. European Surgical Research. 49 (3-4), 121-129 (2012).
  32. Higgins, R., et al. Hyponatraemia and hyperkalaemia are more frequent in renal transplant recipients treated with tacrolimus than with cyclosporin. Further evidence for differences between cyclosporin and tacrolimus nephrotoxicities. Nephrology Dialysis and Transplantation. 19 (2), 444-450 (2004).
  33. Markert, M., et al. A new telemetry-based system for assessing cardiovascular function in group-housed large animals. Taking the 3Rs to a new level with the evaluation of remote measurement via cloud data transmission. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 93, 90-97 (2018).
  34. Längin, M., et al. Perioperative Telemetric Monitoring in Pig-to-Baboon Heterotopic Thoracic Cardiac Xenotransplantation. Annals of Transplantation. 23, 491-499 (2018).
  35. Willens, S., Cox, D. M., Braue, E. H., Myers, T. M., Wegner, M. D. Novel technique for retroperitoneal implantation of telemetry transmitters for physiologic monitoring in Göttingen minipigs (Sus scrofa domesticus). Comparative Medicine. 64 (6), 464-470 (2014).
  36. van Dijk, R. M., et al. Design of composite measure schemes for comparative severity assessment in animal-based neuroscience research: A case study focussed on rat epilepsy models. PLoS One. 15 (5), 0230141 (2020).
  37. Zieglowski, L., et al. Severity assessment using three common behavioral or locomotor tests after laparotomy in rats: a pilot study. Laboratory Animals. , (2020).
  38. Bleich, A., Bankstahl, M., Jirkof, P., Prins, J. B., Tolba, R. H. Severity Assessment in animal based research. Laboratory Animals. 54 (1), 16 (2020).

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Liu, W. J., Ernst, L., Doorschodt, B., Bednarsch, J., Becker, F., Nakatake, R., Masano, Y., Neumann, U. P., Lang, S. A., Boor, P., Lurje, I., Lurje, G., Tolba, R., Czigany, Z. Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry. J. Vis. Exp. (162), e61591, doi:10.3791/61591 (2020).

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