Summary
用于分析等离子脂蛋白的几种方法：然而，超中心化仍然是最流行和最可靠的方法之一。在这里，我们描述了如何使用顺序密度超中心化将脂蛋白从血浆中分离的方法，以及如何分析用于诊断和研究目的的非脊髓灰质素。
Abstract
血浆脂蛋白和非政治蛋白的分析是血脂血症诊断和脂质代谢和动脉粥样硬化研究的重要组成部分。虽然有几种方法分析等离子脂蛋白，超中心化仍然是最流行和最可靠的方法之一。由于其完整的分离程序，通过这种方法分离的脂蛋白分数可用于分析脂蛋白，阿波利波蛋白，蛋白质组，和功能研究的脂蛋白与培养细胞体外。在这里，我们提供了隔离七个脂蛋白分数的详细协议，包括 VLDL（d=lt;1.006 g/mL）、IDL（d=1.02 g/mL）、LDL（d=1.04 和 1.06 g/mL）、硬盘（d=1.08， 1.10 和 1.21 克/mL） 从兔子血浆使用顺序浮动超中心。此外，我们向读者介绍如何分析阿波利波蛋白，如apoA-I，apoB，和apoE由SDS-PAGE和西方印迹，并显示具有代表性的结果脂蛋白和非波利波蛋白配置文件使用高脂兔模型。这种方法可以成为临床医生和基础科学家分析脂蛋白功能的标准方案。
Introduction
血脂血症是世界上动脉粥样硬化的主要危险因素。高浓度的低密度脂蛋白（LDLs）和低水平的高密度脂蛋白（HDL）与冠心病的高风险（CHD）1，2密切相关。在临床环境中，低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）都是在临床实验室3、4中使用自动分析仪进行常规测量的。尽管如此，还是有必要详细分析脂蛋白特征，以诊断脂质血症，研究人类和实验动物的脂质代谢和动脉粥样硬化。据报道，分析血浆脂蛋白的几种方法，如超中心化、大小排除色谱[快速蛋白质液体色谱（FPLC）和高性能液体色谱（HPLC）]、阿加罗斯和多丙烯酰胺凝胶的电磷化、核磁共振以及使用多面体和二价沉淀或其他化学品的选择性化学沉淀。20世纪50年代，Havel的研究小组首次提出了由密度定义的利波蛋白的概念，并将其分为低密度脂蛋白（CM）、低密度脂蛋白（VLDL）、中密度脂蛋白（IDL）、LDL和HDL5等，后来，其他组6、7进一步修改了该方法。到目前为止，超中心化是最流行和最可靠的方法，而实用的协议仍然不可用。在本文中，我们试图描述一个易于使用的方案，用于隔离小比例的等离子体使用顺序密度浮动超中心最初描述以前8。隔离七个等离子脂蛋白分数 [VLDL（d=lt;1.006 g/mL）、IDL（d=1.02 g/mL）、LDL（d=1.04 和 1.06 g/mL）、高密度脂蛋白（d=1.08， 1.10 和 1.21 克/mL）]使研究人员能够对脂蛋白及其组成非脊蛋白9、10、11进行广泛分析。完整的连续七密度脂蛋白可用于分析脂蛋白功能，也可用于基于细胞的体外策略。此协议应可用于临床诊断和基础研究。在这里，我们以兔子等离子体为例来证明这项技术，而来自其他物种的等离子体也可以以同样的方式应用。
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Protocol
兔子研究的所有程序均经山梨大学机构动物护理和使用委员会批准（批准编号：A28-39）。
1. 血浆与兔血分离
- 准备 1.5 mL 微管，其中含有 15μL 的 0.5 M EDTA （pH 8.0）， 用于采血。
- 将兔子放入约束器中，用22量针刺穿动脉中间动脉，并将血液收集到管子中。轻轻地将血液与EDTA混合，放在冰上。
- 在4°C下将血管在1，500 x g 上集中20分钟，并将血浆收集到新的微管中。
注：3 mL的血液足以收集1 mL血浆。如果你从老鼠或其他小动物身上采集血液，你需要把它们汇集在一起。
2. 血浆脂蛋白的隔离
注：示意图程序显示在图 1中。溴化钾（KBr）密度溶液的制备方法见表1。
- 将 1 mL 的等离子体转移到聚碳酸酯超中分子管（图 2A）。
- 将这些管子装在固定角度转子中，并在 4 °C （图 2B）下以 356，000 x g将等离子体离心，2.5 小时。
注：对于贝克曼TLA 120.2转子，356，000 x g（ 平均相对离心场，Av RCF）对应100，000转子。 - 使用切片机切割管子，然后收集顶部部分 [VLDL（d<1.006 g/mL）]，大约 200 μL 放入新的微管（图 2C）。将剩余的底部部分收集到一个新的聚碳酸酯超中分子管中，用于下一次分离（图2D）。通过添加相同的密度溶液（d=1.006 g/mL），测量体积并使总音量达到 800 μL。
注意：为管切片机设置刀片。在顶部分数 （200 μL） 和底部分数 （800 μL） 之间的水平上调整刀片的位置。底部部分的粘性沉淀物应通过以下所有步骤的管道仔细和完整地收集。如果暂停，则在所有步骤中分离顶部和底部分数后暂停。将样品存放在 4°C，直到下一次离心。 - 通过添加 58.9 μL d=1.21 g/mL 溶液和 141.1 μL d=1.02 g/mL 溶液（总体积为 1 mL），将底部分数（总计 800 μL）调整为 d=1.02 g/mL。
- 将这些管子以固定角度转子和离心机装载在 356，000 x g 中，在 4 °C 下为 2.5 小时。
- 使用切片机切割管子，然后将顶部部分 [IDL（d=1.02 g/mL）] 大约 200 μL 收集到新的微管中。将剩余的底部部分收集到一个新的聚碳酸酯超中分子管中，用于下一次分离。通过添加相同的密度溶液（d=1.02 g/mL），测量体积并使总音量达到 800 μL。
- 通过添加 94.1 μL d=1.21 g/mL 溶液和 105.9 μL d=1.04 g/mL 溶液（总容量为 1 mL），将底部分数（总计 800 μL）调整为 d=1.04 g/mL。
- 将这些管子装在固定角度转子和离心机中，在 356，000 x g 下，在 4 °C 下以 2.5 小时的速度装载这些管子。
- 使用切片机切割管子，然后将顶部部分 [LDL（d=1.04 g/mL）] 大约 200 μL 收集到新的微管中。将剩余的底部部分收集到一个新的聚碳酸酯超中分子管中，用于下一次分离。通过添加相同的密度溶液（d=1.04 g/mL），测量体积并使总音量达到 800 μL。
- 通过添加 106.7 μL d=1.21 g/mL 溶液和 93.3 μL d=1.06 g/mL 溶液（总容量为 1 mL），将底部分数（总计 800 μL）调整为 d=1.06 g/mL。
- 将这些管子装在固定角度转子和离心机中，在 356，000 x g 下，在 4 °C 下以 2.5 小时的速度装载这些管子。
- 使用切片机切割管子，然后将顶部部分 [LDL（d=1.06 g/mL）] 大约 200 μL 收集到新的微管中。将剩余的底部部分收集到一个新的聚碳酸酯超中分子管中，用于下一次分离。通过添加相同的密度溶液（d=1.06 g/mL），测量体积并使总音量达到 800 μL。
- 通过添加 123.1 μL d=1.21 g/mL 溶液和 76.9 μL d=1.08 g/mL 溶液（总容量为 1 mL），将底部分数（总计 800 μL）调整为 d=1.08 g/mL。
- 将这些管子装在固定角度转子和离心机中，在 356，000 x g 下，在 4 °C 下以 2.5 小时的速度装载这些管子。
- 使用切片机切割管子，然后将顶部部分 [HDL 2（d=1.08 g/mL）] 大约 200 μL 收集到新的微管中。将剩余的底部部分收集到一个新的聚碳酸酯超中分子管中，用于下一次分离。通过添加相同的密度溶液（d=1.08 g/mL），测量体积并使总音量达到 800 μL。
- 通过添加 145.5 μL d=1.21 g/mL 溶液和 54.5 5 μL d=1.10 g/mL 溶液（总容量为 1 mL），将底部分数（总计 800 μL）调整为 d=1.10 g/mL。
- 将这些管子装在固定角度转子和离心机中，在 356，000 x g 下，在 4 °C 下以 2.5 小时的速度装载这些管子。
- 使用切片机切割管子，然后将顶部部分 [HDL 2（d=1.10 g/mL）] 大约 200 μL 收集到新的微管中。将剩余的底部部分收集到一个新的聚碳酸酯超中分子管中，用于下一次分离。通过添加相同的密度溶液（d=1.10 g/mL），测量体积并使总音量达到 800 μL。
- 通过添加 0.140 克溴化钾 （KBr） 粉末，将底部部分（总计 800 μL）调整为 d=1.21 g/mL，并将其完全溶解。通过添加 d=1.21 g/mL 解决方案，测量体积并使其达到 1 mL。
- 将这些管子装在固定角度转子和离心机中，在 4 °C 下以 513，000 x g 4 小时。
注：对于贝克曼 TLA 120.2 转子，513，000 x g （Av RCF） 对应 120，000 rpm。 - 使用切片机切割管子，然后收集顶部部分 [HDL3 （d=1.21 g/mL）] 大约 200μL 放入新的微管中。这是超中心化的最后一步。
3. 透析
注：由于密度分数（d<1.006 g/mL 分数除外）含有高浓度的 KBr，因此有必要通过透析将其去除。
- 将密度分数转移到透析管中，然后用闭合夹住两端。
- 透析缓冲液（如PBS/1 mM EDTA）在4°C下对2升透析缓冲液进行透析，在4°C下进行6小时的透析，使用磁搅拌器搅拌。
- 更换新的缓冲区，并在4°C时再次透析6小时。
- 收集密度分数并测量体积。将所有密度分数调整到相同的体积（例如，250 μL）。
注：您可以从原始等离子体的 1 mL 计算集中因子（例如，250μL 的密度分数对应于浓度的四倍）。
4. 脂蛋白分析
注：透析后，这些脂蛋白可以进行不同的分析。脂蛋白可以通过测量脂质或非政治蛋白或两者兼有来评估。为了测量每个分数中的脂质含量，如总胆固醇 （TC）、甘油三酯 （TG）、磷脂 （PL） 和自由胆固醇 （FC），我们使用商用酶色度测定套件。为了分析非政治蛋白，我们使用带有 CBB 染色或西式印迹的 SDS-PAGE。
- 脂质分析
注：脂蛋白分数中的 TC、TG、PL 和 FC 等脂质可使用市售测量套件进行测量。该程序取决于使用的试剂，因此请按照所使用的每个试剂盒的说明操作。在这里，我们展示了一个典型的微板检测使用商业酶检测套件。- 在 96 井微板上应用 8 μL 的脂蛋白样品和标准校准物质。
- 加入240μL的检测试剂，并通过管道混合。
- 在37°C下孵化10分钟。
- 用微板读取器测量 OD 并计算脂质浓度。
- 阿波利波普罗汀分析
- SDS-页面和CBB染色
- 样品制备：将 10 μL 的 2 倍样品缓冲液添加到 10 μL 的脂蛋白分数中。使用干热块在 80 °C 下加热混合物 5 分钟。
- 准备 4-20% 梯度 SDS-聚丙烯酰胺凝胶，并在充满运行缓冲器的电光室上设置凝胶。
- 在堆叠凝胶上装载脂蛋白样品（10 μL/lane）和蛋白质标准（5 μL/lane）。
注：如果样品浓度为两倍，则每车道将分析等量为 20 μL 等离子体。 - 以 20-40 mA 恒定电流运行电光。
- CBB染色：在固定溶液中浸泡凝胶两次，轻轻摇晃10分钟。用 CBB 染色溶液染色凝胶 30 分钟。在蒸馏水中冲洗凝胶以去除多余的污渍。凝胶已准备好拍摄。
- 西方印迹
- 在上文所述的相同程序中执行电光检查。
注：用于西方印迹的脂蛋白量小于上面描述的 CBB 染色量（例如 1-5 μL）。 - 将凝胶和PVDF膜放在转移缓冲浸泡滤纸和窗体垫之间。将三明治放在支架盒式磁带中，放在装满转移缓冲器的储罐中。
- 在100 mA恒定电流下进行电击，在4°C下持续3小时。
- 阻塞：在室温下或在 4 °C 过夜时将膜在阻塞缓冲区中孵育 1 小时。
- 原 Ab 反应：在室温下或在 4 °C 下用阻塞缓冲器稀释原 Abs 中的膜，在轻微摇晃时浸泡 1 小时。
注：建议的初级 Ab 稀释显示在 材料表中。三种针对非政治蛋白的原发性腹肌可以单独使用或鸡尾酒中使用。 - 搅拌洗涤缓冲膜三次，每次洗涤5分钟。
- 二次 Ab 反应： 在室温下用阻塞缓冲液稀释二次 Abs 中的膜， 搅拌 1 小时。
注：建议的二次 Ab 稀释显示在 材料表中。 - 搅拌洗涤缓冲膜三次，每次洗涤5分钟。
- ECL 检测：将膜放在塑料包装上。加入 ECL 检测试剂并孵育 1 分钟。排干多余的液体，将膜密封在袋子里。
- 使用图像分析仪可视化信号。
- 在上文所述的相同程序中执行电光检查。
- SDS-页面和CBB染色
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Representative Results
使用此协议，我们使用 1 mL 的血浆分离兔子脂蛋白，并获得了 7 个密度分数。对于大多数研究目的，孤立的密度分数足以测量上文所述的脂质和非政治蛋白。同样的程序也可用于将等离子脂蛋白与人类和其他物种分离。对于小动物，如小鼠，需要汇集血浆。图 3显示了野生类型 （WT） 兔子喂养正常标准 （NS） 饮食或高胆固醇 （HC） 饮食的脂蛋白特征。兔子是食草动物，因此它们的血浆TC、TG和PL水平通常低于人类和小鼠。在NS饮食喂养的兔子中，TC主要分布在HDL 3（d=1.21 g/mL）中，其次是低密度脂蛋白（d=1.04 g/mL）（图3A）。在NS饮食中，39%的血浆TG分布在VLDL中，而57%的血浆PL包含在HDL3（图3A）中。当兔子被挑战与高胆固醇补充的饮食，他们迅速发展成高胆固醇血症。如图3B所示，与 NS 喂养的兔子相比，脂蛋白轮廓的特点是 VLDL 的显著高程（VLDL-TC 中的 165 倍+，VLDL-TG 中的 1.5 倍*和 VLDL-PL 中的 30 倍+）。由于从胆固醇喂养的兔子中分离出的VLDL富含胆囊酯，并移动到阿加罗斯凝胶电泳的β位置，它们通常被称为β-VLDL，以区别于移动到β前位置的普通VLDL。
除了脂质外，非脊髓灰质炎还可以通过CBB染色或西式印迹（图4）简单地由SDS-PAGE分析。七个脂蛋白分数从WT兔子喂NS或HC饮食运行在4-20%SDS-聚丙烯酰胺凝胶和可视化与CBB染色（图4A）。在HC饮食方面，与 NS 饮食中的兔子相比，VLDL（d=1.006 g/mL）、IDL（d=1.02 g/mL）和 LDL（d=1.04 g/mL）中的 apoB-100 和 apoE 含量均显著升高。此外，我们还比较了三种不同高脂兔子的非政治蛋白和脂蛋白特征：HC饮食喂养的WT兔子、apoE敲击（KO）兔子和渡边遗传性高脂（WHHL）兔子，以及受体缺乏的西方斑点（图4B）。等离子脂蛋白被4-20%的SDS-PAGE分馏，然后用抗药性对apoE、apoB和apoA-I进行西式印迹。HC 饮食喂养的 WT 兔子的含有 apoB 的颗粒 （VLDL、IDLs 和 LDL） 的特点是增加 apoB-100 和 apoE 含量，而 apoE KO 兔子则随着 apoA-I 的外观而显著增加 apoB-48。WHHL 兔子在 LDL 受体功能方面存在遗传缺陷，因此在 LDL 中，apoB-100 显著增加，同时在高密度脂蛋白中减少 apoA-I，这与人类家族高胆固醇血症相似。
图1：顺序浮动超中心化的示意图。请点击这里查看此数字的较大版本。
图2：等离子脂蛋白分离的代表性图像。（A） 诺莫利皮德和高脂兔等离子体。（B） 在超中心化后浮动顶部 VLDL （d=1.006 g/mL） 和底部分数 （d=1.006 g/mL）。（C） 管切片和收集顶部部分的移液器。（D） 收集底部分数。 请点击这里查看此数字的较大版本。
图3：从普通兔子（A）和胆固醇喂养的兔子（B）分离出的每个脂蛋白分数中脂质含量的量化。血浆脂蛋白通过在正常标准饮食（A）或高胆固醇饮食（B）上从野生型兔子的血浆中连续浮动超中心分离。测量了总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和磷脂（PL）。数据表示为平均± SEM （n=6）。这个数字已经从燕H等人12。请点击这里查看此数字的较大版本。
图4：使用CBB染色（A）和西印（B）比较非政治蛋白分布。等离子体被超中心分离，脂蛋白被分割4-20%SDS-PAGE。（A） 以正常标准 （NS） 饮食和高胆固醇 （HC） 饮食喂养的野生型 （WT） 兔子的阿波利波蛋白特征通过 CBB 染色可视化。与 NS 饮食喂养的兔子（左）相比，HC 饮食喂养的兔子（右）在 VLDL、IDLs 和 LDL 中显示的 apoB-100 和 apoE 含量增加（B）比较了 NS 或 HC 饮食中 WT 兔子的非政治蛋白特征，在 HC 饮食中增加了 apoE KO （敲击） 兔子，在 NS 饮食中增加了 WHHL 兔子。西方的印迹是用"鸡尾酒抗体"对阿波、阿波布和阿波A-I进行。与诺姆利皮德米亚兔子（NS饮食上的WT兔，左一）相比，其他三只高脂兔子表现出独特和不同的非脊髓灰质素特征。HC 喂养的 WT 兔子的含有 apoB 的颗粒 （VLDL、IDL 和 LDL） 的特点是 apoB-100 和 apoE 含量增加，而 apoE KO 兔子的 apoB-48 随着 apoA-I 的出现而显著增加。WHHL 在 LDL 中显著增加了 apoB-100，同时在硬盘中出现了减少的 apoA-I。这个数字已经从尼米M等人10修改。 请点击这里查看此数字的较大版本。
| 密度解决方案（克/mL） | 克布尔 （g） | 蒸馏水 （mL） |
| d=1.006 | 8.404 | 1000 |
| d=1.02 | 28.271 | 1000 |
| d=1.04 | 57.261 | 1000 |
| d=1.06 | 86.958 | 1000 |
| d=1.08 | 117.365 | 1000 |
| d=1.10 | 148.490 | 1000 |
| d=1.21 | 333.394 | 1000 |
表1：准备溴化钾（KBr）密度溶液。显示 KBr 的重量 （g） 添加到 1000 mL 蒸馏水。
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Discussion
高脂血症是动脉粥样硬化疾病最重要的危险因素之一。因此，对血浆脂蛋白的分析不仅对血脂血症患者的诊断至关重要，而且对研究脂蛋白代谢和动脉粥样硬化的分子机制也具有重要意义。在这项研究中，我们描述了等离子脂蛋白的分离和分析方案，这些协议可以应用于有超中心化的实验室。通过这种方法获得的信息是全面和直接的，因此建议临床和基础研究科学家。分离脂蛋白也可用于研究脂蛋白功能的许多其他方面，如负污渍电子显微镜13，14，氧化性9，15，蛋白组学16，细胞培养基于体外研究，如胆固醇排泄物检测9和脂蛋白吸收检测17。
应该指出这一点：然而，有几个弱点需要考虑。首先，与其他方法相比，此方法相对耗时（至少三天）。如果使用最新的桌面超中心，高速旋转（150，000 rpm）可以缩短分离时间50-140分钟，每个脂蛋白部分18。其次，样品丢失可能发生在隔离期间。为了尽量减少样品损失，底部部分的粘性沉淀物应通过管道溶解并仔细收集。离心管需要用切片机紧密固定，以避免顶部部分泄漏。此外，应从透析袋中仔细回收样品。通过比较脂蛋白总胆固醇和原始血浆胆固醇，可以计算恢复情况。根据我们的经验，一般回收率将≈80%19。第三，此协议对少量样品是有限的，因为一个转子一次只能运行十二个管子。要执行大量的样品，它可能适合使用其他方法，如降水法HDL制备4和自动HDL脂蛋白分析20。
总之，该协议为研究人员提供了使用顺序密度超中心化和脂质和非政治蛋白分析分离等离子脂蛋白的指南。
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Disclosures
作者没有什么可透露的。
Acknowledgments
这项工作部分得到了JSPS KAKENHI赠款编号JP 20K08858、中国国家自然科学基金（第81941001号和81770457号）的研究资助。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 22-gauge needle | Terumo | NN-2232S | For blood collection |
| 96-well microplate | greiner bio-one | 655101 | For lipids measurment |
| Anti-apolipoprotein A-I antibody | LifeSpan BioSciences | LS-C314186 | For Western blottng, use 1:1,000 |
| Anti-apolipoprotein B antibody | ROCKLAND | 600-101-111 | For Western blottng, use 1:1,000 |
| Anti-apolipoprotein E antibody | Merck Millipore | AB947 | For Western blottng, use 1:1,000 |
| CBB staining kit | FUJIFILM Wako Pure Chemical | 299-50101 | For apolipoprotein analysis |
| Centrifuge | HITACHI | himac CF15RN | |
| Closure | Spectrum | 132736 | For lipoprotein dialysis |
| Dialysis tubing | FUJIFILM Wako Pure Chemical | 043-30921 | For lipoprotein dialysis, MWCO 14,000 |
| Dry heat block | Major Science | MD-01N | For SDS-PAGE sample preparation |
| ECL Western blotting detection reagents | GE Healthcare | RPN2209 | For Western blotting |
| Electrophoresis Chamber | BIO-RAD | Mini-PROTEAN Tetra Cell | |
| Ethylenediamine-N,N,N',N'-tetraacetic acid (EDTA) disodium salt dihydrate | FUJIFILM Wako Pure Chemical | 345-01865 | For anticoagulant (0.5 M), for dialysis (1 mM) |
| Filter paper | ADVANTEC | 590 | For Western blotting |
| Fixed angle ultracentrifuge rotor | BECKMAN COULTER | 357656 | TLA-120.2 |
| Fixing solution | For SDS-PAGE (50% Methanol/ 10% Acetic acid) | ||
| Immun-Blot PVDF menbrane | BIO-RAD | 1620177 | For Western blotting |
| Lumino image analyzer | GE Healthcare | For Western blotting, ImageQuant LAS 4000 | |
| Magnetic stirrer | ADVANTEC | SR-304 | For lipoprotein dialysis |
| Microplate reader iMARK | BIO-RAD | For lipids measurment | |
| Microtube | INA-OPTIKA | SC-0150 | |
| Orbital agitator USBDbo | Stovall Life Science | ||
| Peroxidase congugated anti goat IgG antibody | Jackson ImmunoResearch | 705-035-003 | For Western blotting, use 1:2,000 |
| Peroxidase congugated anti mouse IgG antibody | Jackson ImmunoResearch | 715-035-150 | For Western blotting, use 1:2,000 |
| Phospholipids assay kit | FUJIFILM Wako Pure Chemical | 433-36201 | For lipids measurment |
| Polycarbonate ultracentrifuge Tubes | BECKMAN COULTER | 343778 | |
| Potassium Bromide | FUJIFILM Wako Pure Chemical | 168-03475 | For density solution |
| Power Supply | BIO-RAD | For SDD-PAGE and Western blotting, PowerPac 300, PowerPac HC | |
| Protein standards Precidion Plus Protein Dual Xtra | BIO-RAD | 161-0377 | For SDS-PAGE and Western blotting |
| Rabbit restrainer | Natsume Seisakusho | KN-318 | For blood collection |
| Rotor | HITACHI | T15A43 | |
| SDS-PAGE running buffer | 25 mM Tris/ 192 mM Glycine/ 0.1% SDS | ||
| SDS-PAGE sample buffer (2x) | 0.1M Tris-HCl (pH 6.8)/ 4% SDS/ 20% glycerol/ 0.01% BPB/12% 2-merpaptoethanol | ||
| SDS-polyacrylamide gel | 4-20% gradient polyacrylamide gel | ||
| Skim milk powder | FUJIFILM Wako Pure Chemical | 190-12865 | For Western blotting blocking buffer (5% skim milk/ 0.1% Tween 20/ PBS) |
| Total cholesterol assay kit | FUJIFILM Wako Pure Chemical | 439-17501 | For lipids measurment |
| Triglyicerides assay kit | FUJIFILM Wako Pure Chemical | 432-40201 | For lipids measurment |
| Tube slicer for thick-walled tube | BECKMAN COULTER | 347960 | For lipoprotein isolation |
| Tween 20 | SIGMA-ALDRICH | P1379 | For Western blotting washing buffer (0.1% Tween 20/ PBS) |
| Ultracentrifuge | BECKMAN COULTER | A95761 | Optima MAX-TL |
| Western blotting wet transfer system | BIO-RAD | Mini Trans-Blot Cell |
References
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