Summary
우리는 파리에 대한 두 선택 먹이 분석에 대한 프로토콜을 제시한다. 이 수유 분석은 빠르고 실행하기 쉬우며 소규모 실험실 연구뿐만 아니라 파리의 고처리량 행동 스크린에도 적합합니다.
Abstract
유해 한 에이전트의 소비를 피하면서 영양가가있는 음식을 선택하려면 동물은 식품 환경을 평가하기 위해 정교하고 견고한 맛 시스템이 필요합니다. 과일 파리, Drosophila 멜라노가스터,널리 음식 취향의 분자, 세포, 신경 기초를 해독하는 데 사용되는 유전 적 인 기관 모델 유기체입니다. 플라이 푸드 선호도를 분석하려면 강력한 급식 방법이 필요합니다. 여기에 설명된 2가지 선택 식용 분석은 엄격하고 비용 절감적이며 빠릅니다. 분석법은 페트리 접시에 기반을 두고 있으며, 요리의 두 반쪽에 파란색 또는 빨간색 염료로 보충된 두 가지 식품을 첨가하는 것을 포함합니다. 그런 다음~ 70개의 프리스타드, 2-4일 된 파리를 접시에 넣고 어둠 속에서 파란색과 붉은 음식 중에서 약 90분 동안 선택할 수 있습니다. 각 비행의 복부에 대한 검사다음에는 기본 설정 지수의 계산이 뒤따릅니다. 멀티웰 플레이트와는 달리, 각 페트리 요리는 채우기 위해 ~ 20 s만 소요되며 시간과 노력을 절약합니다. 이 수유 분석은 파리가 특정 음식을 좋아하거나 싫어하는지 여부를 신속하게 결정하기 위해 사용될 수 있습니다.
Introduction
파리와 포유류 사이의 맛 기관의 해부학 적 구조에 극적인 차이에도 불구하고, 많은 맛 물질에 대한 파리의 행동 반응은 포유류와 현저하게 유사합니다. 예를 들어, 파리는 설탕1,2,3,4,5,6,7,8,아미노산9,10, 및저염(11)을선호하며, 이는 영양소를 나타내지만, 쓴식품(12,13,14,15)을 거부한다. 지난 2년 동안 파리는 맛감각과 음식 소비와 관련된 많은 근본적인 질문에 대한 이해를 증진시키는 매우 귀중한 모델 유기체로 입증되었으며, 여기에는 맛 의 검출, 미각 감연, 미각 가소성, 먹이 조절16,17,18,19,20. 놀랍게도, 많은 연구는 맛 인식의 근본적인 맛 변환 및 신경 회로 메커니즘이 과일 파리와 포유동물 사이에 유사하다는 것을 보여주었습니다. 따라서 과일 파리는 이상적인 실험 유기체 역할을하므로 연구자들은 동물 왕국에서 식품 탐지 및 소비를 제어하는 진화적으로 보존된 개념과 원칙을 발견할 수 있습니다.
파리의 맛 감각을 조사하기 위해 식품 선호도를 객관적으로 측정하기 위해 빠르고 엄격한 분석서를 설정하는 것이 중요합니다. 수년에 걸쳐 다양한 먹이 방법,염료 계분석제(11,12,13,21,22,23,플라이 프로보시스 연장 응답 분석24,모세관 피더(CAFE) 분석25,26,플라이리액트-푸드 상호작용카운터(FLIC)분석27및 기타 조합방법은28,29,30,31의과일 사료에 대한 식품 선호도 및/또는 식품 섭취를 정량적으로 측정하기 위해 개발되었다. 인기 있는 급식 패러다임 중 하나는 다중웰 마이크로티터플레이트(12,21,32)를 이용한 염료 계 의 2선택 먹이 분석체이며, 여기에 설명된 바와 같이, 작은 페트리접시(11,22)를 먹이챔버로 한다. 이 분석은 플라이의 복부의 투명성을 기반으로 설계되었습니다. 이 분석 하는 동안, 파리 먹이 챔버에 배치 하 고 붉은 염료 또는 블루 염료와 혼합 된 두 가지 음식 옵션 제시. 분석이 완료되면, 비행 복부는 그들이 소비 한 음식에 따라 빨간색 또는 파란색 나타납니다.
페트리 접시와 멀티웰 플레이트 염료 기반 공급 에세이는 매우 견고하며 거의 동일한 결과를 얻을 수 있습니다. 이 두 가지 애서를 사용하여 음식 맛과 음식 질감을 감지하는 매우 다양한 수용체 및 세포를 해독하는 방향으로 많은 중요한 발견과 돌파구가 만들어졌습니다11,12,21,22,32,33. 염료 기반 분석에서 상당한 시간과 노력이 필요한 실험 단계는 음식을 먹이실에 준비하고 적재하는 것입니다. 식품 준비 및 적재 시간을 줄이기 위해 이 분석은 멀티웰 마이크로티터 플레이트를 두 개의 동일한 구획으로 나누어 작은 페트리 접시로 대체하여 수정되었습니다. 페트리 접시 기반 분석에서 파란색 또는 빨간색 염료로 보충된 두 가지 식품이 요리의 두 반쪽에 추가됩니다. 그런 다음~ 70개의 프리스타드, 2-4일 된 파리를 접시에 넣고 어둠 속에서 파란색과 붉은 음식 중에서 약 90분 동안 선택할 수 있습니다. 각 플라이의 복부를 검사하고 기본 설정 지수(PI)가 계산됩니다.
페트리 접시를 기반으로 하는 2가지 식용 분석지는 저렴하고 간단하며 빠릅니다. 하나의 멀티웰 플레이트는 채우기 위해 약 110s가 필요한 반면, 각 페트리 요리는 ~20s만 소요됩니다. 또한, 멀티웰 플레이트는 소량의 음식을 소량의 작은 우물(예: 접시당 60개 이상의 우물)으로 파이프팅해야 하며, 이는 상당한 정밀도와 주의를 필요로 합니다. 반대로 페트리 접시 기반 분석법은 접시당 두 가지 작업만 필요합니다. 먹이 분석이 많은 수의 복제를 포함할 수 있기 때문에 페트리 접시 기반 분석은 사소한 시간과 노력을 절약합니다. 이 분석은 다중웰 기반 분석기의 것과 동등한 결과를 제공하며 소금 맛코딩(11),식품체험(22)에의해 변형된 맛 가소성, 식품 감도감각(33)의분자 기초 등 맛 감각에 대한 많은 근본적인 질문을 해결하는 데 성공한 것으로 입증되었습니다. 요약하면, 이 페트리 접시 기반의 두 선택 분석은 파리가 적절한 먹이 행동을 유도하기 위해 외부 및 내부 영양소 milieus를 인식하는 방법을 조사하는 강력한 도구입니다.
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Protocol
1. 분석 챔버 조립
참고: 이 프로토콜은 35mm 페트리접시(그림 1A)의사용을 설명하지만, 양분및 커버할 수 있는 방수, 매끄러운 바닥 의 용기를 사용하여 원하는 효과를 얻을 수 있다.
- 먼저, 방수 접착제로 미드라인 아래로 플라스틱 길이(너비 5mm, 높이 3mm)를 고정하여 뚜껑이 달린 35mm 페트리 접시를 양분하여 두 개의 방수 구획을 형성합니다. 두 식품 기판의 혼합으로 이어질 수있는 누출을 피하기 위해 씰이 완료되었음을 확인합니다.
참고 : 조립 후, 씰이 보유하는 한이 장치를 다시 사용합니다.
2. 기아 바이알 준비
- 빈 플라스틱 플라이 바이알의 충분한 수를 준비; 그런 다음 바닥에 티슈 페이퍼 를 느슨하게 압축합니다. 티슈 페이퍼를 압축하여 공간을 채울 수 있지만 조밀한 질량을 형성할 수는 없습니다.
참고: 이 갇혀 점점 파리로 이어질 수 있기 때문에 조직에 깊은 틈새 또는 주름이 없는지 확인하십시오. - 조직이 완전히 포화되도록 바이알에 ~ 3 mL 순수 물을 추가하지만 서있는 물은 없습니다. 유리병 벽에 는 과도한 물방울이 없는지 확인하십시오. 또는, 각 빈 유리병에 1%의 아가로즈5mL을 추가하고 아가로즈가 실온에서 고화할 수 있도록 하여 1%w/v agar 용액(자당 없이)을 준비하여 젖은 종이에 아가로즈를 대체한다.
3. 실험 전에 파리의 젖은 기아
- 실험 시간 24시간 전에 기아를 시작합니다. CO2 마취하에서 ~ 70, 2-4 일 된 분류 그룹은 준비 된 기아 바이알로 날아 들어각 유리병에 유전자형과 기아 시간을 표시합니다.
4. 시약 설정
- 염료 준비
참고: 실험을 수행하기 전에 예비 제어 분석을 수행하여 사용할 빨간색 및 파란색 염료의 정확한 농도를 결정하는 것이 중요합니다.- 대조군 분석의 경우 각 염료에 대한 다양한 희석을 준비하고 다른 염료 색으로 동일한 음식으로 수유 분석법을 수행합니다. 실험 화합물이 첨가되지 않은 경우 ~0의 PI를 산출하는 2-염료 농도(빨간색 1개, 파란색 1개)를 식별하기 위해 결과를 사용합니다(섹션 7 참조).
참고: 예를 들어, 최종 청색 염료 농도는 50 μM로 고정되어 일련의 적색 염료 농도에 대해 테스트되었습니다. 적색 염료 투여 곡선을 기준으로 최적의 적염 농도는 210 μM이었으며, 이는 최소한의 염료 바이어스(도1B)를주었다. 붉은 염료 농도가 높을수록 붉은 음식을 선호하는 파리가 날아가고, 농도가 낮으면 푸른 음식을 선호합니다. 이 크기와 더 큰 차이가 실험 결과에 영향을 미칠 수 있기 때문에 1 μM의 증분에 파란색 또는 적색 염료 농도를 신중하게 정제합니다.
- 대조군 분석의 경우 각 염료에 대한 다양한 희석을 준비하고 다른 염료 색으로 동일한 음식으로 수유 분석법을 수행합니다. 실험 화합물이 첨가되지 않은 경우 ~0의 PI를 산출하는 2-염료 농도(빨간색 1개, 파란색 1개)를 식별하기 위해 결과를 사용합니다(섹션 7 참조).
- 아가로즈 1% 준비
- 0.5 g아가로즈와 50mL의 순수한 물(또는 그 중 일부 다중)을 전자레인지에 안전한 용기에 섞어주세요. 아가로즈 용액을 녹일 때까지 전자레인지에 넣고 필요에 따라 저어줍니다.
- 다른 식품 성분의 준비
- 자당 및 모든 실험 화합물을 포함한 각 식품 성분을 최종 시험 농도의 100배 또는 더 높은 농도로 물에 용해하십시오.
참고: 1% 한천에 첨가된 각 식품 성분의 총 부피는 10mL 용융 한천당 1mL를 초과해서는 안 됩니다. 그렇지 않으면, 아가로즈는 너무 희석될 수 있고 적절히 고화되지 않을 것이다.
- 자당 및 모든 실험 화합물을 포함한 각 식품 성분을 최종 시험 농도의 100배 또는 더 높은 농도로 물에 용해하십시오.
- 식품 미디어 준비
- 원내 폴리프로필렌 원심분리기 튜브(15 또는 50mL)에 한천, 염료 및 원하는 실험 화합물을 혼합; 대조군 식품의 실험용 태스트 대신물을 사용하십시오. 한천이 여전히 완전히 액체인 동안이 작업을 수행하고 소용돌이 믹서를 사용하여 철저히 혼합하십시오. 60°C의 수조에 튜브를 보관하면서아가로즈가 경화되는 것을 방지하기 위해 사용하지 않고 요리에 분배됩니다.
- 실험을 위한 요리 준비
참고: 시작하기 전에 모든 요리가 완전히 건조해야 합니다.- 피펫 1 mL의 적색 실험 식품 배지의 한쪽으로 분석 접시(도 1A); 원하는 수의 요리에 대해 반복하십시오. 아가로즈가 단단할 때까지 식힌 다음(3-5분) 식힌 다음, 요리의 다른 쪽으로 블루 컨트롤 푸드1mL(그림1A)을식힙니다. 컨트롤 레드/실험 블루 쌍으로 이 프로세스를 반복합니다.
참고: 실험을 시작하기 전에 모든 요리가 완전히 설정되어 있는지 확인합니다. 30분 이내에 요리를 사용하십시오.
- 피펫 1 mL의 적색 실험 식품 배지의 한쪽으로 분석 접시(도 1A); 원하는 수의 요리에 대해 반복하십시오. 아가로즈가 단단할 때까지 식힌 다음(3-5분) 식힌 다음, 요리의 다른 쪽으로 블루 컨트롤 푸드1mL(그림1A)을식힙니다. 컨트롤 레드/실험 블루 쌍으로 이 프로세스를 반복합니다.
5. 양방향 수유 분석서 를 시동
- 비행이나 등산과 같은 명백한 모터 활동이 관찰되지 때까지 얼음에 실험 비행 선을 일시적으로 마비시다. 파리가 움직이지 않게 되면 유리병을 부드럽게 반전시키고 탭하여 모든 파리를 분석실로 옮으십시오.
참고: 감기 충격은 ~ 3-5분 정도 걸립니다. 감기에 장기간 노출은 비행의 생리학과 건강에 영향을 미칠 수 있으므로 피해야합니다. - 신속하게 챔버에 덮개를 놓고 따로 둡니다. 모든 파리가 옮겨지면 모든 챔버를 어둡고 둘러싸인 공간으로 이동합니다. 분석이 90분 동안 실행되도록 허용합니다.
참고: 어두운 환경은 플라이의 시각적 경로가 먹이 행동에 미치는 영향을 최소화하고 요리 외부에서 환경 신호를 제거합니다.
6. 양방향 수유 분석 종료
- 90분 경과 후 챔버를 -20°C 냉동고로 이송하여 파리를 희생시게 한다. ~1h 후, 파리를 세어라.
참고: 접시를 냉동실에 넣기 전에 각 페트리 접시를 뒤집어 파리가 음식에 얼어 붙지 않도록 하십시오.
7. 음식 선호도를 결정하기 위해 기본 설정 지수(PI)를 할당
- 표준 해부 현미경에서 각 개별 접시에서 파리의 복부 색상을 검사하십시오. 파리를 복부의 색상에 따라 빨간색, 파란색 또는 보라색으로계산합니다(그림 2A). 복부가 50% 이상 색인 경우 비행을 계산하여 견고한수유(그림 2B)를나타냅니다. 복부에 작은 음식 반점만 포함되어 있는 경우, 가난한식사(그림 2C)를나타내는 경우 비행을 제외하십시오.
- 파란색, 빨간색 또는 파란색과 빨간색 식품을 모두 먹는 파리의 수가 계산된 후 다음 방정식을 사용하여 각 Petri 접시에 기본 설정 지수(PI)를 할당합니다.
PI = (실험적인 음식을 먹는 파리의 수) - (파리가 대조 음식을 먹는 횟수) / (실험적인 음식을 먹는 파리의 수) + (파리가 대조음식을 먹는 횟수) + (둘 다 먹는 파리의 수)
PI > 0은 실험 화합물에 대한 선호도를 나타내고, PI < 0은 실험 화합물에 대한 혐오감을 나타내고, PI = 0은 수유 동작에 화합물의 영향을 나타내지 않는다.
8. 분석 실 청소
- 페트리 요리를 음식 기판을 긁어내고 무향 비누와 물로 헹구어 페트리 요리를 즉시 청소하십시오. 페트리 요리를 증류수에 밤새 담급니다. 각 접시의 분할 씰이 여전히 방수되어 있는지 확인한 다음 접시를 건조하게하십시오.
참고: 잔류 아가로즈나 염료 염색이 없는지 확인한 후 페트리 요리는 다시 사용할 준비가 되어 있습니다.
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Representative Results
이 분석에서 35mm 접시는 두 개의 동등한 수유 칸으로 나누어졌으며, 각 반은 아가로즈 식품을 함유하고 있으며, 식도식품과 함께 청색 또는 붉은 염료(그림1A)를결합하였다. 염료 바이어스를 배제하기 위해, 파란색과 적색 염료 농도는 이 두 개의 염료만 첨가되었을 때 대략 "0" PI를 산출하기 위해 신중하게 정제되었다(도1B). 페트리 요리에 테스트된 음식이 적재되면, 젖은 굶주림에 70피트가 걸리면 2-4일 된 성인 파리가 접시로 옮겨져 어둠 속에서 두 가지 음식 중 하나를 선택할 수 있었습니다. 90 분 후, 파리의 복부 색상은 해부 현미경으로 검사되었다. 일반적으로, 동물이 주로 파란색 또는 붉은음식(그림 2A)을소비하는 경우, 플라이 복부는 각각 파란색 또는 빨간색으로 나타납니다. 플라이가 파란색과 빨간색을 모두 소모하면 복부가 보라색으로 바뀝니다(그림2A).
상당한 양의 음식을 섭취하는 파리는 음식 섭취량이 부족한 파리를 건너뛰는 동안득점(그림 2B)을채취하였다(그림2C). 이 페트리 접시 기반 분석은 다중 웰 플레이트 기반 분석과 비교되었습니다. 결과는 이 두 먹이 방법이 야생형 파리의 달콤하고 쓰라리거나 짠 음식에 대한 먹이반응(그림 3A-C)에대한 반응과 본질적으로 동일한 결과를 제공하는 것으로 나타났습니다. 특히, 60개의우물(도 3D)을함유한 멀티웰 플레이트보다 페트리 접시에 음식을 준비하고 분배하는 것이 훨씬 빠릅니다. 페트리 접시 기반 분석법은 파리에 대한 식품 선호도를 신속하게 결정하는 데 사용할 수 있는 강력하고 빠른 급식 방법입니다.
그림 1: 2-선택 분석 장치 및 염료 투여 곡선. (A)페트리 접시의 두 반쪽은 두 가지 다른 음식 옵션을 제시하는 데 사용된다. 요리의 절반은 청색 염색 식품을 포함하고, 나머지 절반은 붉은 염색 식품을 포함합니다. 프리스타베드 파리는 그들이 선호하는 음식을 섭취할 수 있도록 접시에 넣습니다. (B)야생형 파리에 대한 식품 선호도는 50μM 청색염 또는 다양한 붉은 염료 농도를 함유한 아가로즈 1% 플러스 2m 자당 사이를 선택한다. 최적의 적색 염료 농도는 210 μM입니다. 데이터는 평균의 표준 오차를 ± 평균을 나타냅니다. 각 데이터 포인트에 대해 n = 6 개의 예심. 각 시험에서 약 70개의 파리가 테스트되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2: 파란색, 빨간색 또는 파란색과 빨간색 음식을 모두 먹은 후 복부 색상을 비행합니다. (A)블루 푸드 (오른쪽 위), 빨간 음식 (왼쪽 위), 또는 둘 다를 섭취 한 후 파리의 대표적인 이미지는 복부가 보라색 (아래)으로 나타납니다. (B)블루 푸드의 충분한 소비를 보여주는 플라이. (C)소량의 청색 음식을 섭취한 후 날아다니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3: 야생형 파리의 다른 태극기에 대한 반응, 60웰 플레이트 대 페트리 접시 기반 급식 장치에 대한 식품 적재 시간. (A)2m mm 자당과 10m 자당 사이를 선택하는 야생형 파리에 대한 식품 선호도. n = 12 시험, 짝을 이루는 학생의 t-test. (B)10mM 카페인 유무에 관계없이 2m 자당을 함유한 식품에 대한 야생형 파리의 식품 선호도. n = 10 시험, 짝을 이루는 학생의 t-test. (C)20mM NaCl 유무에 관계없이 2m 자당을 함유한 식품에 대한 야생형 파리의 식품 선호. n = 10 시험, 짝을 이루는 학생의 t-test. (D)음식을 60웰 접시와 페트리 접시에 채우는 데 소요되는 시간. n = 12 접시 또는 요리, *p < 0.0001, 짝을 이루는 학생의 t-test. 데이터는 SEM. 약어± 의미: n.s. = 통계적으로 유의하지 않음; SEM = 평균의 표준 오류; NaCl = 염화나트륨. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
이 메서드에는 문제가 발생할 수 있는 몇 가지 중요한 단계가 포함됩니다. 첫째, 안정적인 데이터를 제공하기 위해 충분한 양의 음식을 섭취해야 합니다. 파리가 제대로 먹지 않으면 파리가 적어도 24시간 동안 젖은 상태로 굶주리고 실험 매체에 최소 한도의 자당 농도(2mM)를 함유하고 있는지 확인합니다. 음식 소비를 더욱 자극하기 위해, 파리의 생리적 상태에 따라 젖은 기아 기간을 24 시간 이상 연장하십시오. 너무 많은 파리가 장기간 기아에서 살아남지 못하면 바이알에서 젖은 기아를 수행 할 때 충분한 물이 티슈 페이퍼에 추가되도록하십시오. 파리를 익사시킬 수 있는 과도한 물을 피하십시오. 둘째, 파리는 농도가 신중하게 균형을 이루지 않으면 파란색 또는 붉은 염료를 향한 먹이 편향을 표시하는 경향이 있습니다. 염료 농도의 작은 변화는 심오한 먹이 효과가있을 수 있습니다(도 1B). 따라서 염료 편향을 방지하기 위해 염료 농도가 정확해야 합니다. 파리가 염료의 영향을 받는 경우, 1 μM의 증분에서 염료 농도를 신중하게 정제한 다음, 다른 염료 조합을 테스트하여 PI=0을 산출하는 적색/파란색 염료 농도 쌍을 식별하여 자당의 낮은 농도(예를 들어, 2mMM)를 제외한 실험 화합물이 첨가된다. 최적의 적색 또는 파란색 염료 협착은 새로운 플라이 라인을 테스트하거나 새로운 염료 주식을 만들 때 재조정되어야합니다. 셋째, 분석이 90분으로 제한되는지 확인합니다. 이전 연구에 따르면22,장기간 된 먹이 맛 적응 또는 둔감으로 이어질 수 있습니다.
FLIC27 또는 CAFE25 분석과 같은 다른 먹이 기법과 비교하여, 이 페트리 접시 기반 의 두 가지 선택 분석법은 다음과 같은 특징과 장점을 가지고 있습니다: (1) 단순함: 이 장치는 플라스틱 칸막이로 양분된 작은 페트리 접시만을 포함한다. 접시와 플라스틱 칸막이가 저렴하고 조립하기 쉽기 때문에 전체 실험에는 최소한의 투자만 필요합니다. (2) 편편의: 페트리 접시 기반 장치는 먹이분석(도 3D)을상당히 가속화합니다. 색상 채점 과정은 또한 일반 해부 현미경을 사용하여 빠르고 간단합니다. 이 방법으로, 특정 식품 성분에 대한 파리의 맛 선호는 신속하게 테스트 할 수 있습니다. 따라서 소규모 연구와 대규모 유전 적 스크린 모두에 적합합니다. (3) 안정성: 각 장치에서 몇 개의 파리만 분석하는 다른 수유 방법과 는 달리,이 방법은 한 번에 많은 수의 성인 파리에 대한 수유 반응의 정량화를 허용하여 개별 파리 중 의 먹이 변동의 영향을 현저히 최소화합니다. 이 염료 기반의 2선택 수유 분석서는 엄격하고 재현 가능한 것으로 입증되었으며, 식품 의 맛과 질감을 인식하는 데 결함이있는 중요한 비행 돌연변이를 분리하는 데 사용되었습니다11,22,33.
이러한 결과에 의해 입증된 바와 같이, 페트리 접시 기반 분석은 페트리 접시 기반 분석이 작은변형(그림 3A-C)을갖는 경향이 있지만 달콤하고 쓰라리하며 짠 맛 반응을 위한 다중웰 기반 의 먹이 분석과 본질적으로 동일한 결과를 생성합니다. 염료 기반 급식 분석의 한 번 소요되는 단계는 먹이실로 음식을 배출하는 것입니다. 60개 이상의 우물이 들어 있는 멀티웰 플레이트는 녹은 아가로즈 식품을 접시당 60개 이상의 우물로 정확하게 적재해야 하기 때문에 설치하기가 어려울 수 있습니다. 페트리 접시에는 두 개의 별도 구획(그림3D)만포함되어 있기 때문에 페트리 접시에 음식을 준비하고 적재하는 것이 훨씬 빠릅니다. 따라서, 이러한 페트리 식기 기반 방법은 염료 기반 분석기의 견고성을 유지할 뿐만 아니라 분석 준비에 소요되는 시간과 노력을 현저히 감소시켜 수유 분석의 용량과 속도를 크게 확장시킨다. 따라서 유전적 스크린 프로젝트와 같은 많은 수의 플라이 라인을 분석하기 위해 용이하게 사용될 수 있다.
염료 기반 분석법은 단순성과 속도로 인해 높은 처리량 의 학습 방법을 제공하지만, 지속 시간 이나 부피와 같은 공급의 더 상세한 정량적 측면에 대한 정보를 캡처 할 수 없습니다. 이 문제를 극복하기 위해, 고속 카메라는 각 챔버의 공급 기간 및 빈도와 같은 공급 과정의 자세한 정보를 보여주는 접시 위에 설치될 수 있습니다. 더욱이, 몇몇 그밖 먹이 패러다임은 염료 기지를 둔 실험에서 집합된 데이터를 보충하기 위하여 이용될 수 있습니다. FLIC27 및 플라이 프로보시스 및 활동 검출기(FlyPAD)(FlyPAD) (34)와같은 자동 공급 장치는 수유의 시간적 역학을 기록할 수 있습니다. CAFE 분석25 또는 수동 급식분석35는 소비되는 음식의 양을 측정할 수 있습니다. 그럼에도 불구하고, 이러한 접근 방식은 자신의 주의 사항이 있습니다. 예를 들어, 페트리 접시 또는 멀티웰 플레이트와 비교하여 자동 급식 장치는 실험실에 설치하는 데 매우 비쌉합니다. 또한 각 장치는 한 번에 몇 마리만 비행하므로 개별 동물의 가변성에 더 취약합니다. CAFE 분석체는 먹이실 내부에 매달려 있는 모세관 튜브의 끝까지 자신의 몸을 기동하는 파리의 능력에 의존하기 때문에, 결과는 맛 감각과 관련이없는 모터 장애에 의해 혼동 될 수있다.
다른 접근 방식은 그 자체로 강력하지만, 염료 기반 분석법은 파리의 음식 선호도를 빠르게 발견하고 분석하는 보다 효율적인 도구가 될 수 있습니다. 더욱이, 2선택 설정은 비행의 먹이 행동을 선택적으로 그리고 심각하게 조작하기 위하여광유전학(36)과 같은 최첨단 기술과 통합될 수 있다. 이것은 빛 활성화를 위해 접시의 절반을 사용하고 다른 절반은 빛 비활성 제어로 수행 할 수 있습니다. 특정 뉴런의 직접적인 활성화 또는 불활성화는 먹이 행동을 조절하는 데 역할이 있는지 여부를 결정하는 데 도움이 됩니다. 요약하자면, 이러한 결과는 Petri-dish 기반의 2선택 수유 분석법이 연구원이 다른 생리및 대사 상태하에서 수유 행동을 분석하는 데 도움이 되는 신속하고 강력한 공급 방법입니다.
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Disclosures
저자는 이해 상충이나 경쟁적인 재정적 이익을 선언하지 않습니다.
Acknowledgments
저자는 팅웨이 미 박사가 2선택 수유 분석서를 최적화하도록 도와준 것에 대해 감사를 표하고 싶습니다. 그들은 또한 원고에 대한 자신의 의견에 대한 사무엘 찬과 와이엇 쿨미에 감사드립니다. 이 프로젝트는 국립 보건원 보조금 R03 DC014787 (Y.V.Z.) 및 R01 DC018592 (Y.V.Z.) 및 앰브로스 모넬 재단에 의해 지원되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 35 mm Petri dish | Fisher Scientific | 08-772E | |
| Agarose | Thomas Scientific | C756P56 | |
| Clear adhesive | Fisher Scientific | NC9884114 | |
| Conical centrifuge tubes | Fisher Scientific | 05-527-90 | |
| Dissection microscope | Amscope | SM-2T-6WB-V331 | |
| FCF Brilliant Blue | Wako Chemical | 3844-45-9 | |
| Fly CO2 anesthesia setup | Genesee Scientfic | 59-114/54-104M | |
| Fly incubator with programmable day/night cycle | Powers Scientific Inc. | IS33SD | |
| Fly lines | |||
| Glass dish (microwave-safe) | |||
| Kimwipes | Fisher Scientific | 06-666A | |
| Media storage bottle | Fisher Scientific | 50-192-9998 | |
| Plastic divider cut to fit the dish from a sheet no thicker than 5 mm | |||
| Plastic fly vials | Genesee Scientific | 32-116 | |
| Sucrose | Millipore Sigma | S9378 | |
| Sulforhodamine B | Millipore Sigma | S9012 | |
| Tastant compound of interest | |||
| Vortex mixer | Benchmark Scientific | BV1000 | |
| Water bath | Fisher Scientific | FSGPD05 |
References
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