Summary
Ce protocole décrit la procédure pour enlever le lobe ventral du foie dans le poisson zèbre adulte pour permettre l’étude de la régénération de foie.
Abstract
L’insuffisance hépatique est l’une des principales causes de décès dans le monde, et la mortalité due aux maladies chroniques du foie augmente fortement aux États-Unis. Les foies sains sont capables de se régénérer des dommages toxiques, mais dans les maladies hépatiques avancées, la capacité naturelle du foie à se régénérer est altérée. Le poisson zèbre est devenu un puissant système expérimental pour l’étude de la régénération. Ils sont un modèle idéal pour étudier la régénération du foie à partir d’une hépatectomie partielle, une procédure ayant une pertinence clinique directe dans laquelle une partie du foie est enlevée chirurgicalement, laissant le reste intact. Il n’y a aucun protocole standard pour l’hépatectomie partielle; des études antérieures utilisant ce modèle ont utilisé des protocoles légèrement différents et ont rapporté des résultats disparates. Décrit ici est un protocole efficace et reproductible pour effectuer une hépatectomie partielle chez le poisson zèbre adulte. Nous utilisons cette technique pour démontrer que les poissons zèbres sont capables de régénération épimorphe du lobe réséqué. Ce protocole peut être utilisé pour interroger davantage les mécanismes nécessaires à la régénération du foie chez le poisson zèbre.
Introduction
Parmi les organes solides chez l’homme, le foie est le seul organe capable de régénération1. Ceci est essentiel, car le foie est un organe essentiel, responsable des fonctions métaboliques clés, du stockage de l’énergie, de la désintoxication du sang, de la sécrétion de protéines plasmatiques et de la production de bile2. Les hépatocytes perdus en raison de dommages toxiques ou inflammatoires sont remplacés principalement par division des hépatocytes restants1. Un modèle expérimental classique pour l’étude de la régénération du foie est l’hépatectomie partielle, où les lobes individuels du foie sont enlevés, laissant les lobes restants intacts3. Cette procédure a été initialement développée chez le rat, dans laquelle environ deux tiers de la masse hépatique est enlevée. Après hépatectomie partielle chez les mammifères, une régénération compensatoire se produit dans les lobes restants jusqu’à ce que le foie récupère sa masse initiale. Notamment, le foie des mammifères ne remplace pas les lobes manquants.
Le poisson zèbre (Danio rerio) représente un modèle traitable pour l’étude de la régénération des organes adultes4. Le foie de poisson zèbre, bien que structurellement différent du foie de mammifères, est composé des mêmes types de cellules et remplit la même fonction que chez les mammifères2. Il est composé de trois lobes, avec deux lobes dorsaux et un seul lobe ventral qui sont aplatir le long de l’intestin. L’hépatectomie partielle a été précédemment réalisée chez le poisson zèbre, avec des récits contradictoires quant au mode précis de régénération. Typiquement, une hépatectomie partielle d’un tiers est réalisée par ablation de l’ensemble du lobe ventral. Les rapports initiaux ont indiqué qu’après l’élimination du lobe ventral, il a été complètement régénéré en une semaine5,6,7,ce qui suggère que contrairement au foie de mammifère, le foie de poisson zèbre est capable de régénération épimorphique. Des études ultérieures ont démontré que l’ablation du lobe ventral entraînait une régénération compensatoire dans les lobes dorsaux, plutôt que la régénération du lobe ventral manquant, et finalement la récupération de la masse hépatique dans un délai de8,9. Le profilage transcriptomique des lobes dorsaux après la résection du lobe ventral a indiqué les changements significatifs liés à la régénération compensatoire10. Étant donné que le mode de régénération du foie peut varier avec l’étendue de la blessure8, nous avons spéculé que les écarts dans les résultats peuvent être dus à la variation technique dans le protocole partiel d’hépatectomie entre les groupes de recherche.
Ce protocole décrit un procédé pour exécuter un hepatectomy partiel d’un tiers sur le poisson zèbre adulte en enlevant le lobe ventral. Cette technique sera utile pour évaluer les mécanismes de régénération du foie.
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Protocol
Les poissons zèbres ont été élevés et élevés selon les procédures standard. Les expériences ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux du Brigham and Women’s Hospital (2016N000405). Les poissons zèbres adultes ont été jeûnés pendant 24 h avant le début du protocole. L’eau du système fait référence à l’eau dans les réservoirs abritant des poissons zèbres dans l’installation aquatique.
1. Préparation et anesthésie
- Préparer une solution de tricaine à 0,016% dans l’eau du système.
ATTENTION: La tricaine est un irritant si elle entre en contact avec les yeux, la peau ou les voies respiratoires. - Préparez une éponge pour contenir le poisson zèbre anesthésié pendant le protocole de dissection. Couper une éponge complète en quartiers. À l’aide d’une lame de rasoir, retirez un mince coin d’éponge qui est parallèle au long axe du quart de l’éponge.
- La fente doit être assez longue pour accueillir un poisson adulte (cela variera selon les tailles de poisson). Par exemple, pour un poisson adulte de 35 mm de longueur, la longueur de la fente doit être de 20 mm. La tête et le corps sont bien maintenus dans l’éponge, mais la queue passe devant le bord de l’éponge(figure 1B).
- Faire tremper l’éponge dans une solution de tricaine à 0,016%.
- Placer le poisson zèbre adulte (mâle ou femelle) dans 625 mL de solution de tricaine à 0,016 %.
- Incuber pendant 6 min ou jusqu’à ce que le poisson ne réponde pas au toucher.
- À l’aide d’une pince, retirez soigneusement le poisson du réservoir de Tricaine et placez la face ventrale du poisson dans la rainure de l’éponge(Figure 1A - B).
- Placez l’éponge sous un microscope de dissection avec éclairage descendant.
2. Chirurgie
- À l’aide d’une pince fine, pincer la peau et les écailles par voie médiale, juste en arrière du cœur (Figure 1B).
- À l’aide de ciseaux à ressort, faites une coupe sous la pince pour créer un trou dans la cavité du corps(Figure 1C - D). Prenez soin de ne pas blesser le cœur ou un vaisseau sanguin majeur, car cela entraînerait une mortalité accrue.
- À l’aide de ciseaux à ressort, faire une incision de 3-4 mm le long de l’abdomen, traitement postérieur jusqu’à ce que l’incision arrive aux nageoires pelviennes (Figure 1D - E). À ce stade, le lobe ventral du foie peut être visible à travers l’incision.
- Pressez les côtés de l’éponge d’une main pour forcer les organes viscéraux à sortir de la cavité corporelle. Le lobe ventral du foie sera visible sur le dessus de l’intestin (Figures 1F,2A-B). Le foie apparaîtra sous la forme d’une structure rose ou orange étalée sur l’intestin brun doré. Les animaux désignés comme témoins fictifs sont récupérés à ce stade.
- Pressez la pince fine pour que les deux dents se touchent. Tout en maintenant la pression sur l’éponge, faites glisser les dents de la pince fine entre le foie et l’intestin (Figure 1G). Prenez soin de ne pas percer l’intestin, car cela entraînera une augmentation de la mortalité.
- Relâchez lentement la pression sur la pince afin que les dents s’éloignent les unes des autres(Figure 1H). Cette action glissante coupe les nombreuses attaches de veines portiques entre le lobe ventral et l’intestin(figure 2B),et est nécessaire pour enlever proprement le lobe ventral. Répétez ce processus jusqu’à ce que toutes les connexions portales entre le foie et l’intestin aient été sectionné.
- Décoller le lobe ventral de l’intestin à l’aide d’une pince fine et couper le lobe ventral libre du reste du foie (Figure 1I).
- Cette procédure entraîne une hépatectomie partielle d’un tiers (figure 1J).
3. Rétablissement
- Retirez soigneusement le poisson de l’éponge et placez-le dans un réservoir d’eau du système.
- Le système de pipettes arrose les branchies pendant quelques minutes jusqu’à ce que le poisson nage seul(figure 1K).
- Surveillez les poissons pendant 2 à 4 heures avant de les replacer dans le système. Ne nourrissez pas le poisson pendant 24 h après la chirurgie.
- Surveiller les poissons quotidiennement pendant toute la durée de l’expérience.
- Avec le temps, l’incision dans la paroi du corps guérira naturellement sans avoir besoin de sutures(Figure 1L,2C).
4. Analyse de la longueur du lobe ventral à l’intestin
- Euthanasier tous les animaux destinés à l’analyse dans l’eau glacée pendant 10 min jusqu’à ce que tous les mouvements operculaires cessent.
- Retirez le poisson de l’eau glacée et placez-le côté ventral dans la rainure d’une éponge.
- À l’aide de ciseaux à ressort, faites une incision dans la paroi ventrale du corps à la position antérieure-postérieure du cœur. Ensuite, faites deux autres incisions qui longent l’axe antérieur-postérieur de la première incision jusqu’aux nageoires pelviennes. (Figure 2A).
- Décollez la peau et les muscles pour révéler les organes viscéraux (Figure 2A).
- Acquérir des images fluorescentes et en champ lumineux des organes viscéraux à l’aide d’un microscope à épifluorescence. Ce champ de vision comprendra la zone où le lobe ventral a été réséqué. Étant donné que les animaux sont euthanasiés avant l’analyse, ce type d’analyse empêche l’imagerie à long terme du même poisson.
5. Analyse du rapport poids du foie au corps
- Euthanasier tous les animaux destinés à l’analyse dans l’eau glacée pendant 10 min jusqu’à ce que tous les mouvements operculaires cessent.
- Placer le poisson dans un tube conique de 50 mL.
- Ajouter 25 mL de paraformaldéhyde à 4 % dans 1x PBS et 0,3 % tween dans le tube.
ATTENTION : Le formaldéhyde est toxique et les solutions contenant du formaldéhyde doivent toujours être traitées dans une hotte chimique. - Nutate pendant 48 h à 4 °C.
- Effectuez quatre lavages de 10 minutes en 1x PBS et 0,3% Tween.
- Récupérez le poisson avec une pince et séchez-le sur une serviette en papier.
- Notez le poids du poisson entier.
- À l’aide de ciseaux à ressort, faites une incision dans la paroi ventrale du corps à la position antérieure-postérieure du cœur. Ensuite, faites deux autres incisions qui longent l’axe antérieur-postérieur de la première incision jusqu’aux nageoires pelviennes. (Figure 2A).
- Décollez la peau et les muscles pour révéler les organes viscéraux (Figure 2A).
- Acquérir des images en champ lumineux du foie à l’aide d’un microscope à épifluorescence.
- Disséquer le foie, en plaçant les morceaux de foie sur un bateau de pesée.
- Notez le poids du foie.
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Representative Results
Afin d’examiner le potentiel régénérateur du foie adulte de poisson zèbre, nous avons exécuté hepatectomy partiel (PHX) dans le poisson zèbre adulte. En général, de grands adultes (30-40 mm de longueur) ont été sélectionnés, allant de 1,5 à 2,5 ans. Dans le cadre d’expériences individuelles, les animaux ont été sélectionnés dans le même réservoir et ont été appariés selon l’âge et la taille. Comme contrôle approprié, nous avons utilisé des chirurgies simulées dans lesquelles l’animal a été anesthésié et a reçu une grande incision dans la paroi ventrale du corps, mais a été récupéré sans enlever aucun tissu. Les taux de survie des témoins fictifs variaient de 90 % à 100 % pour les poissons zèbres mâles et femelles. Les taux de survie des animaux PHX variaient de 60% à 75% pour les poissons zèbres mâles et de 60% à 90% pour les poissons zèbres femelles, tous les décès se produisant dans les 24 premières h suivant la chirurgie.
La norme de référence pour quantifier la récupération du foie après PHX est le rapport foie / poids corporel, ou LBR. Ce test a été utilisé à la fois pour mesurer la récupération de masse hépatique dans les modèles de mammifères11 et de poissonszèbres 8. Pour quantifier de manière fiable le poids du foie, nous avons effectué des mesures de poids sur des animaux fixes, comme décrit précédemment8. Nous avons effectué des mesures de LBR sur le type sauvage, les poissons zèbres non blessés, et avons constaté que, comme indiqué précédemment8, les poissons zèbres femelles avaient presque le double du LBR par rapport aux poissons zèbres mâles (3,3 % pour les poissons zèbres femelles et 1,8 % pour les poissons zèbres mâles) (figure 3A). Nous avons effectué à la fois du sham et du PHX sur des poissons zèbres adultes des deux sexes et analysé le LBR à 0 et 7 jours après la blessure (dpi) (Figure 3B). À 0 dpi, les animaux fictifs avaient un lobe ventral clairement visible, tandis que chez les animaux PHX, le lobe ventral était complètement absent (Figure 3C). Il en est à noter que cela a entraîné une réduction importante de la LBR (réduction de 30 % chez les poissons mâles, réduction de 20 % chez les poissons femelles)(figure 3D). Dans la cohorte de poissons analysés à 7 dpi, nous avons constaté que le lobe ventral ne s’était pas régénéré(figure 3E),et pourtant le LBR du PHX et les témoins fictifs étaient comparables(figure 3F). Ces mesures indiquent qu’à 7 dpi, le foie a retrouvé de la masse par rapport aux témoins factices, vraisemblablement par régénération compensatoire dans les lobes dorsaux, en accord avec les rapports précédents8,9.
Nous avons décidé d’étudier si, donné assez de temps, le lobe ventral du foie était capable de régénération. Les poissons adultes Tg(fabp10a:CFP-NTR) ont été sélectionnés pour l’expérimentation, car ces poissons expriment le CFP dans les hépatocytes, permettant la visualisation du foie à l’aide de la microscopie à fluorescence. Une cohorte d’animaux a été soumise au plein protocole partiel d’un tiers hepatectomy. Les animaux ont été analysés à 1 ou 36 dpi(figure 4A). Pour chaque animal, le rapport entre la longueur du lobe ventral et l’intestin a été mesuré(figure 4B).
Les animaux soumis aux chirurgies de feinte ont eu un lobe ventral en avant qui a occupé 50%-100% de la longueur d’intestin, tandis que les animaux soumis au hepatectomy partiel d’un tiers ont eu un lobe ventral sévèrement réduit. De façon frappante, de nombreux animaux hépatectomie partielle à 36 dpi avaient un rapport lobe ventral/intestin accru par rapport aux animaux hépatectomie partielle à 1 dpi(figure 4C). Il n’y avait aucune augmentation de la taille du lobe ventral dans les commandes de feinte ; cependant, une augmentation statistiquement significative de la taille du lobe ventral a été observée après la récupération de l’hépatectomie partielle (figure 4D). Nous avons noté qu’il y avait une grande variation dans la réponse à la chirurgie, certains animaux ne présentant aucune régénération, et d’autres régénérant clairement un lobe ventral bien défini (Figure 4E). Ces résultats démontrent que le lobe ventral est capable de se régénérer de la résection chirurgicale de foie dans le poisson zèbre adulte. Pris ensemble, nos travaux indiquent que le foie de poisson zèbre est capable de régénération épimorphe et compensatoire.
Figure 1: Le protocole d’hépatectomie partielle. (A)Schéma d’un poisson zèbre adulte, avec les axes antérieur-postérieur et dorsal-ventral notés. (B) Après anesthésie, un animal est encastré dans une éponge (en bleu) de sorte qu’il est ventral vers le haut. Les pinces fines sont utilisées pour pincer la peau juste après le cœur. L’éponge n’est pas représentée dans les panneaux suivants pour plus de clarté. (C) Les ciseaux sont utilisés pour casser la peau juste après le cœur. (D-E) Les ciseaux sont utilisés au niveau de la plaie maintenant ouverte pour faire une incision de 3-4 mm allant de l’antérieur au postérieur, se terminant juste avant les nageoires pelviennes. (F) En serrant les côtés de l’éponge, les organes viscéraux sortent de la plus grande plaie. (G) Les pinces fines avec les deux dents qui se touchent sont glissées entre le lobe ventral du foie et l’intestin. (H) Les pinces sont détendues, ce qui les amène à briser les attaches de la veine porte entre le foie et l’intestin. Ce processus est répété le long du lobe ventral. (I-J) Le lobe ventral est tiré vers le haut de son extrémité postérieure, tandis que les ciseaux sont utilisés pour couper le lobe ventral du reste du foie. (K) L’animal est placé dans une chambre de récupération avec de l’eau système, où il reprend conscience et ses droits lui-même. (L) Avec le temps, les viscères sont ramenés dans la cavité corporelle et la plaie guérit. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 2: Anatomie du poisson zèbre et récupération après hépatectomie partielle. (A) Pour l’analyse des organes viscéraux, les animaux sont euthanasiés et placés côté ventral sur une éponge. Tout d’abord, une incision est effectuée à la position antérieure-postérieure du cœur (ligne rouge). Ensuite, deux incisions sont générées qui longent l’axe antérieur-postérieur jusqu’aux nageoires pelviennes (ligne bleue). Ensuite, la peau et les muscles sont décollés en arrière, révélant les organes viscéraux. Marqués sont l’intestin, le lobe ventral du foie, et la veine centrale dans ce lobe. (B) Image vivante d’une vue ventrale d’un poisson zèbre préparé pour l’analyse des organes viscéraux. Le lobe ventral du foie est délimité par une ligne blanche pointillée. La zone jaune de l’image 2x indique l’emplacement de l’image 8x. Les pointes blanches indiquent les connexions de veine porte entre l’intestin et le foie. (C) Vue ventrale de la blessure générée par le procédé partiel d’hépatectomie aux points de temps indiqués. Au fil du temps, l’incision guérit complètement. Barres d’échelle, 500 μm. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 3: Régénération compensatoire après hépatectomie partielle. (A) Les rapports foie/poids corporel (LBR) ont été mesurés pour le type sauvage, poisson zèbre non blessé. Les poissons zèbres femelles ont presque le double du LBR par rapport aux poissons zèbres mâles. Les animaux femelles ont été comparés aux animaux mâles à l’aide d’un test de la somme de rang de Wilcoxon, **p < 0,0001. (B) Schéma indiquant que des poissons zèbres de type sauvage ont été utilisés pour cette expérience. Des animaux ont été soumis au feinte ou à l’hepatectomy partiel (PHX), et puis réparés à 0 ou 7 jours de blessure de poteau (dpi). Des animaux fixes ont été essiés et soumis à des mesures de LBR. (C,E) Sont montrées des images représentatives d’animaux soumis à la imposture ou phx à 0 dpi(C)et 7 dpi(E). Notez l’absence totale des lobes ventraux chez les animaux PHX. Pour toutes les images, montré est une vue ventrale des organes viscéraux. Les images sont des images à champ vif. Le lobe ventral du foie est bordé de blanc. Barres d’échelle, 500 μm. (D,F) Graphiques à barres des rapports de poids du foie au poids corporel pour les poissons zèbres mâles et femelles après des chirurgies sham et PHX à 0 dpi(D)et 7 dpi(F). La hauteur de la barre est la valeur moyenne, et les barres d’erreur représentent le SEM. Alors qu’il y a une réduction de LBR après hépatectomie partielle à 0 dpi, il n’y a pas de différence significative entre phx et animaux fictifs à 7 dpi, indiquant la restauration de LBR. Des échantillons partiels de hepatectomy ont été comparés aux contrôles de feinte utilisant un essai de somme de rang de Wilcoxon, ns = non significatif, *p < 0,05, **p < 0,01. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 4: Les poissons zèbres peuvent régénérer leurs lobes ventraux après hépatectomie partielle. (A)Schéma indiquant que Tg(fabp10a:CFP-NTR) ont été utilisés pour cette expérience. La chirurgie et l’analyse par formation image ont été exécutées aux points de temps indiqués. (B) Un exemple d’image pour montrer comment les animaux ont été analysés. Les animaux ont été quantifiés en mesurant la longueur du lobe ventral (en rouge), la longueur de l’intestin (en jaune) et en calculant le pourcentage de l’intestin que le lobe ventral occupe (en blanc). (C) Est montrée une image représentative d’animaux soumis à une hépatectomie simulée ou partielle (PHX) à 1 et 36 jours après la blessure (dpi). (D) Diagrammes de violon du rapport entre la longueur du lobe ventral et la longueur de l’intestin pour les animaux soumis à une hépatectomie simulée ou partielle à 1 et 36 dpi. Chaque point représente la valeur d’un seul poisson. Les valeurs pour les poissons mâles sont en bleu, les poissons femelles en rouge. Des échantillons partiels de hepatectomy ont été comparés aux contrôles de feinte utilisant un essai de somme de rang de Wilcoxon, ns = non significatif, *p < 0,05. (E) Sont montrés deux exemples d’animaux hépatectomie partielle à 36 dpi qui ne se sont pas régénérés, et deux exemples qui se sont régénérés. Pour toutes les images, montré est une vue ventrale des organes viscéraux. Les images sont une fusion d’une image de fluorescence CFP et d’une image en champ lumineux. La fluorescence CFP n’est présente que dans le foie. Le lobe ventral du foie est bordé de rouge. Le pourcentage de l’intestin occupé par le lobe ventral est en blanc. Barres d’échelle, 500 μm. Veuillez cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
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Discussion
Les différences anatomiques entre les modèles de régénération hépatique chez le poisson zèbre et les mammifères présentent des défis uniques pour la résection hépatique. Le foie chez le poisson zèbre est à proximité du cœur et de l’intestin; Endommageant par inadvertance l’un ou l’autre organe a comme conséquence la mortalité accrue. Le foie de poisson zèbre n’est pas encapsulé, ce qui le rend plus difficile à séparer de l’intestin. Le foie reçoit du sang riche en nutriments de l’intestin par les veines portiques. Chez les mammifères, les veines qui quittent l’intestin convergent vers une veine porte primaire qui se divise ensuite lorsqu’elle pénètre dans le foie12. En revanche, le foie de poisson zèbre reçoit la circulation porte d’une série de minuscules vaisseaux qui se déplacent directement de l’intestin vers le foie (Figure 2B). Ainsi, chaque lobe du foie, aplati sur l’intestin, est solidement attaché à l’intestin par ces vaisseaux. Tenter d’enlever le lobe ventral sans d’abord sectionr les veines portiques peut souvent entraîner une résection incomplète (données non montrées). Certains des protocoles initiaux décrivent l’extraction du lobe ventral par une incision relativement mineure, ce qui ne permet pas de couper ces attaches portailes5,6.
Le protocole décrit ici est conçu pour adresser ces défis pour permettre le déplacement cohérent de lobe ventral. Les poissons zèbres anesthésiés sont placés confortablement dans la rainure de l’éponge pour garder leurs branchies humides et leur corps immobile pendant toute la durée de la procédure. Pincer la peau juste après le cœur permet de placer une incision dans la peau sans endommager aucun des organes internes. L’ouverture d’une grande incision (3-4 mm) rend l’ablation du foie simple et l’évaluation du degré d’ablation(figure 2C). Il est important de faire en sorte que le poisson zèbre puisse se remettre d’une plaie de cette taille et finalement la guérir sans fermeture de plaie primaire. En serrant l’éponge et en comprimant la paroi du corps, les organes viscéraux deviennent plus accessibles et il est possible de glisser les dents d’une pince entre le foie et l’intestin. La pince peut ensuite être utilisée pour couper les connexions portales entre le foie et l’intestin. Une fois que cela a été réalisé, une pince fine peut être utilisée pour décoller le lobe ventral afin qu’il puisse être séparé du reste du foie.
Nous avons mesuré les rapports de poids du foie au corps (LBR) des animaux soumis aux chirurgies de feinte et de PHX. Nous avons constaté qu’à 7 dpi, le LBR des animaux PHX était comparable aux témoins(figure 3F). Étant donné que le lobe ventral ne s’était pas régénéré à ce stade(figure 3E),nous en avons déduit que la régénération s’était produite par compensation dans les lobes dorsaux. Pour répondre à la question de savoir si le lobe ventral peut finalement se régénérer chez le poisson zèbre, nous avons effectué du PHX et examiné la re-croissance du foie. En moyenne, le rapport entre la longueur du lobe ventral et l’intestin était plus élevé à 36 dpi qu’à 1 dpi, ce qui indique une régénération du lobe ventral (Figure 4C-D). Il existe une grande variation dans la réponse des animaux aux blessures, certains animaux connaissant très peu de croissance et d’autres connaissant une récupération substantielle du lobe ventral (figure 4E). Nous concluons que le foie peut régénérer avec un mélange de régénération épimorphe du lobe ventral et de régénération compensatoire dans les lobes dorsaux, bien qu’à différentes échelles de temps. Comme des études antérieures ont utilisé des hepatectomies partielles pour analyser le rôle des gènes individuels5,7,9 et des voies de signalisation6,8,10 après la résection, nous prévoyons que ce protocole fera progresser notre compréhension des mécanismes moléculaires et cellulaires de la régénération hépatique chez un vertébré adulte.
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Disclosures
Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.
Acknowledgments
I.M.O. est pris en charge par la NIAAA (F32AA027135). W.G. est soutenu par R01DK090311, R01DK105198, R24OD017870 et le Claudia Adams Barr Program for Excellence in Cancer Research. W.G. est boursier Pew en sciences biomédicales.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 16% Paraformaldehyde Aqueous Solution, EM Grade | Electron Microscopy Sciences | 15700 | |
| 50 mL Falcon Centrifuge Tubes, Polypropylene, Sterile | Corning | 352098 | |
| AS 82/220.R2 PLUS Analytical Balance | Bay State Scale & Systems, INC. | WL-104-1051 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| EMS Kuehne Coverglass/Specimen Forceps | Electron Microscopy Sciences | 72997-07 | |
| Epifluorescence microscope | Zeiss | Discovery.V8 | |
| Mastertop Cellulose Cleaning Scrub Sponge | Amazon | B07CBSM53Z | |
| PBS10X Liquid Conc 4L | EMD Millipore | 6505-4L | |
| Super Fine Micro Scissors, 3 1/4" straight | Biomedical Research Instruments | 11-1020 | |
| Tricaine methanesulfonate | Syndel | TRIC-M-GR-0010 | |
| Tween 20, Fisher BioReagents | Fischer Scientific | BP337-500 |
References
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