Un metodo semplice modificato per l'induzione dell'infarto miocardico nei topi
Summary
In anestesia adeguata, il cuore del topo è stato esternalizzato attraverso lo spazio intercostale e l’infarto del miocardio è stato indotto con successo legando l’arteria discendente anteriore sinistra (LAD) utilizzando materiali prontamente disponibili nella maggior parte dei laboratori.
Abstract
L’infarto del miocardio (IM) rappresenta una delle principali cause di morte. I modelli di infarto miocardico sono ampiamente utilizzati per lo studio dei meccanismi patogenetici del rimodellamento post-infarto miocardico e per la valutazione di nuove terapie. Diversi metodi (ad esempio, trattamento con isoproterenolo, criolesione, legatura dell’arteria coronarica, ecc.) sono stati utilizzati per indurre l’infarto miocardico. Rispetto al trattamento con isoproterenolo e al criolesione, la legatura dell’arteria coronaria può riflettere meglio la risposta ischemica e il rimodellamento cronico dopo l’infarto miocardico. Tuttavia, i metodi tradizionali per la legatura coronarica nei topi sono tecnicamente impegnativi. Il presente studio descrive un processo semplice ed efficiente per l’induzione dell’infarto miocardico nei topi con materiali prontamente disponibili. La pelle del torace del topo è stata tagliata in anestesia stabile. Il cuore è stato immediatamente esternalizzato attraverso lo spazio intercostale dopo la separazione smussata del grande pettorale e del piccolo pettorale. Il ramo discendente anteriore sinistro (LAD) è stato legato con una sutura 6-0 a 3 mm dalla sua origine. Dopo la legatura del LAD, la colorazione con cloruro di 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC) ha indicato l’induzione riuscita dell’infarto miocardico e i cambiamenti temporali delle dimensioni della cicatrice post-infarto del miocardio. Nel frattempo, i risultati dell’analisi di sopravvivenza hanno mostrato mortalità conclamata entro 7 giorni dall’infarto miocardico, principalmente a causa della rottura cardiaca. Inoltre, la valutazione ecocardiografica post-infarto del miocardio ha dimostrato il successo dell’induzione della disfunzione contrattile e del rimodellamento ventricolare. Una volta padroneggiato, un modello di MI può essere stabilito nei topi entro 2-3 minuti con materiali prontamente disponibili.
Introduction
L’infarto del miocardio (IM) rappresenta una delle principali cause di morte e disabilità in tutto il mondo 1,2,3,4,5. Nonostante la riperfusione tempestiva, attualmente mancano terapie efficaci per trattare il rimodellamento cardiaco post-infarto miocardico. Di conseguenza, sono stati compiuti sforzi considerevoli per l’esplorazione meccanicistica e lo sfruttamento terapeutico per l’infarto miocardico 6,7,8. Da notare che l’istituzione di modelli MI è un prerequisito per raggiungere questi obiettivi.
Diversi metodi (ad esempio, il trattamento con isoproterenolo, il criodanno, la legatura delle arterie coronarie, ecc.) sono stati proposti per indurre modelli di infarto miocardico in piccoli animali. Il trattamento con isoproterenolo è un metodo semplice per l’induzione dell’infarto del miocardio, ma non può indurre l’infarto dell’area bersaglio9. La criolesione porta alla necrosi miocardica attraverso la generazione di cristalli di ghiaccio e la rottura della membrana cellulare piuttosto che l’ischemia diretta10. Al contrario, la legatura delle arterie coronarie consente un controllo preciso del sito di occlusione e dell’estensione dell’area dell’infarto e ricapitola fedelmente la risposta di rimodellamento dopo l’infarto11,12. La legatura delle arterie coronarie viene in genere eseguita dopo l’intubazione, la ventilazione meccanica e la toracotomia, che è tecnicamente impegnativa13,14. Sono stati riportati diversi protocolli modificati per la legatura delle arterie coronarie (ad esempio, senza ventilazione) che hanno potenziato l’induzione dell’infarto miocardico, ma mancano dimostrazioni visive dettagliate15,16,17. Questi problemi rappresentano un ostacolo finanziario e tecnico significativo per i gruppi che desiderano impegnarsi nella ricerca utilizzando i modelli MI. Questo rapporto presenta un approccio per l’induzione dell’infarto miocardico nei topi. Il metodo attuale è semplice, fa risparmiare tempo e utilizza strumenti e attrezzature chirurgiche che si trovano facilmente nella maggior parte dei laboratori.
Protocol
Representative Results
Discussion
Il presente rapporto ha dimostrato un semplice protocollo per l’induzione dell’infarto miocardico nei topi con materiali prontamente disponibili, che è stato modificato da un metodo riportato da Gao16. I modelli murini di infarto miocardico sono indispensabili per l’esplorazione meccanicistica e lo screening farmacologico per la disfunzione post-infarto del miocardio e il rimodellamento12. Tra le tecniche esistenti per l’induzione dell’infarto miocardico, la legatura delle…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni della National Natural Science Foundation of China (81930007, 81625002, 81800307, 81470389, 81500221, 81770238), dello Shanghai Outstanding Academic Leaders Program (18XD1402400), della Science and Technology Commission of Shanghai Municipality (201409005200), dello Shanghai Pujiang Talent Program (2020PJD030) e della China Postdoctoral Science Foundation (2020M671161, BX20190216).
Materials
| 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride | SIGMA | T8877-25G | TTC staining |
| 4-0 silk suture | YUANKANG | 4-0 | Surgical instrument |
| Autoclave | HIRAYAMA | HVE-50 | Sterilization for the solid |
| Buprenorphine | Qinghai Pharmaceutical FACTORY Co., Ltd. | H10940181 | reduce post-operative pain |
| Centrifugation tube | Biological Hope | 1850-K | 15ML |
| Depilatory cream | ZIKER BIOTECHNOLOGY | ZK-L2701 | Depilation agent for laboratory animals |
| Forcep | RWD | F12028 | Surgical instrument |
| Gas filter | ZHAOXIN | SA-493 | Operator protection |
| Isoflurane | RWD | 20071302 | Used for anesthesia |
| Light source | Beijing PDV | LG-150B | Operating lamp |
| Micro-mosquito hemostat | FST | 13011-12 | Surgical instrument |
| Needle | BINXIONG | 42180104 | Surgical instrument |
| Needle and the 6-0 silk suture | JIAHE | SC086 | Surgical instrument |
| Needle holder | ShangHaiJZ | J32030 | Surgical instrument |
| Needle holder | ShangHaiJZ | J32010 | Surgical instrument |
| Povidone-iodine swabs | SingleLady | GB26368-2010 | Skin disinfection |
| Scissors | CNSTRONG | JYJ1030 | Surgical instrument |
| Sterile eye cream | Shenyang Xingqi Pharmaceutical Co., Ltd. | H10940177 | prevent corneal dryness |
| Ultra-high resolution ultrasound imaging system for small animals | VisualSonics | Vevo 2100 | Echocardiographic analysis |
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