Summary
Denne protokol optimerer leveren in situ perfusion / decellularisering og to-foton mikroskopi metoder til at etablere en pålidelig platform til at visualisere dynamikken i ekstracellulær matrix (ECM) remodellering under ikke-alkoholisk steatohepatitis (NASH).
Abstract
Ikke-alkoholisk steatohepatitis (NASH) er den mest almindelige kroniske leversygdom i USA, der rammer mere end 70 millioner amerikanere. NASH kan udvikle sig til fibrose og til sidst til skrumpelever, en betydelig risikofaktor for hepatocellulært karcinom. Den ekstracellulære matrix (ECM) giver strukturel støtte og opretholder leverhomeostase via matricellulære signaler. Leverfibrose skyldes en ubalance i den dynamiske ECM-remodelleringsproces og er kendetegnet ved overdreven ophobning af strukturelle elementer og tilhørende ændringer i glycosaminoglycaner. Det typiske fibrosemønster af NASH kaldes "kyllingetråd", som normalt består af zone 3 perisinusformet / pericellulær fibrose, baseret på træk observeret af Massons trikrome plet og Picrosirius røde pletter. Imidlertid kan disse traditionelle tynde todimensionelle (2D) vævsdiasbaserede billeddannelsesteknikker ikke demonstrere de detaljerede tredimensionelle (3D) ECM-strukturelle ændringer, hvilket begrænser forståelsen af den dynamiske ECM-remodellering i leverfibrose.
Det nuværende arbejde optimerede en hurtig og effektiv protokol til at afbilde den oprindelige ECM-struktur i leveren via decellularisering for at løse ovenstående udfordringer. Mus blev fodret enten med chow eller fastfood kost i 14 uger. Decellularisering blev udført efter in situ portalveneperfusion, og to-fotonmikroskopiteknikkerne blev anvendt til at afbilde og analysere ændringer i den oprindelige ECM. 3D-billederne af normal- og NASH-leveren blev rekonstitueret og analyseret. Udførelse af in situ perfusionsdecellularisering og analyse af stilladset ved to-fotonmikroskopi gav en praktisk og pålidelig platform til at visualisere den dynamiske ECM-remodellering i leveren.
Introduction
Ikke-alkoholisk fedtleversygdom (NAFLD) er den mest almindelige leversygdom, der rammer 20% -25% af den voksne befolkning. 25% af NAFLD-patienterne udvikler sig til ikke-alkoholisk steatohepatitis (NASH), hvor risikoen for skrumpelever, leversvigt og hepatocellulært karcinom øges1. I de næste 20 år anslås det, at NASH vil tegne sig for 2 millioner leverrelaterede dødsfald i US2. Da der ikke er nogen godkendte behandlinger, er der et presserende behov for at dechifrere de mekanismer, der forårsager leverfibrose hos NASH-patienter og udvikle målrettet behandling3.
Den ekstracellulære matrix (ECM) er et dynamisk, komplekst mikromiljø, der udøver tovejskommunikation med celler for at regulere vævshomeostase4. Lever-ECM består af strukturelle elementer såsom proteoglycaner, kollagener, fibronectin, elastin og andre ikke-strukturelle proteiner (fx olfactomedin og thrombospondin) for at yde fysisk og strukturel støtte4.
Leverfibrose er et kronisk sårhelende respons på leverskader af forskellige ætiologier, herunder NASH3. Det skyldes en ubalance i den dynamiske ECM-matrixremodelleringsproces og er kendetegnet ved overdreven strukturelle proteiner i den skadede lever4. Fibrogenese afhænger af den dynamiske celle-celle kommunikation mellem forskellige hepatiske celletyper. Hepatiske stellatceller (HSC'er), når de aktiveres, differentieres til Smooth Muscle Alpha 2 Actin-udtrykkende, migrerende og prolifererende myofibroblastlignende celler og syntetiserer ECM-proteiner som en sårlukkende handling. Aktiverede HSC'er er de centrale kollagenproducerende celler i leveren1.
Den molekylære mekanisme for ECM-remodellering, fibrosemønstre og deres forhold til cellulære begivenheder er ikke klare. En bedre forståelse af den tredimensionelle (3D) ECM-struktur er stadig nødvendig, selvom massespektrometriteknikker har hjulpet med at analysere ECM-proteinsammensætning4. Traditionelt er Massons trikrome plet, Picro Sirius Red pletter og anden harmonisk generation (SHG) billeddannelse blevet udført på todimensionelle (2D) tynde leversektioner. Det typiske fibrosemønster af NASH kaldes "kyllingetråd", som strækker sig til zone 3 og er perisinusformet / pericellulær fibrose 5,6. Der har imidlertid været mangel på undersøgelser med fokus på 3D-strukturen i den indfødte lever, især dem, der ikke involverer vævssektionering. Robuste billeddannelsesmetoder til at identificere mønstre og karakteristika ved fibrose gennem dynamisk ECM-remodellering i leverfibrose ville betydeligt styrke forståelsen af NASH-mekanismer og identificere nye terapeutiske mål.
For at løse disse udfordringer blev en hurtig og effektiv protokol optimeret til at afbilde den indfødte lever-ECM via decellularisering7. Helleverdecellularisering er en tilgang til at fjerne levercellulært indhold, samtidig med at det oprindelige 3D ECM-netværk opretholdes gennem vaskemiddelperfusion. Mus blev fodret med enten chow eller fastfood diæt (FFD) i 14 uger. Decellularisering blev udført efter in situ portalveneperfusion med mildt rengøringsmiddel og lave strømningshastigheder for at bevare triple-spiralformede og native fibrillære kollagenstrukturer. To-fotonmikroskopi blev anvendt til at analysere ændringer i kollagenstrukturer i ECM. 3D-billederne af den oprindelige ECM-struktur i normale og NASH-lever blev rekonstitueret og analyseret. Udførelse af in situ perfusionsdecellularisering og analyse af stilladset ved to-fotonmikroskopi giver en praktisk og overkommelig platform til at visualisere den dynamiske ECM-ombygning i leveren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyreforsøg udføres i henhold til de eksperimentelle procedurer, der er godkendt af de institutionelle dyrepleje- og brugskomiteer (IACUC'er) ved Stanford University og Veterans Affairs Hospital i Palo Alto. 6-8 uger gamle C57BL/6J-hanmus blev fodret med enten chow eller fastfoodkost suppleret med 4,2% majssirup med høj fruktose (se materialetabel) i drikkevand i 14 uger5. Musene blev holdt i standardbure i en 12 timers mørk/lys cyklus.
1. Kirurgisk forberedelse og procedurer for leverperfusion
- Væg musen før proceduren.
- Bedøv musen ved at administrere ketamin (90 mg / kg) og xylazin (10 mg / kg) (se materialetabel) via en intraperitoneal injektion. Sørg for, at musen er fuldt bedøvet ved at klemme tåen, før du fortsætter til næste trin.
BEMÆRK: Isofluran er ikke nødvendig her, da dette er en ikke-overlevelsesoperation. - Barber det ventrale område ved hjælp af en hårklipper og desinficer huden med 70% ethanol. Placer musen på ryggen, og immobiliser benene på operationspladen med tape.
- Efter at have bekræftet dybden af anæstesi ved en tåklemme, skal du bruge Mayo-saks og Adson-tang (se materialetabel) til at lave et 3 cm snit sideværts i underlivet og derefter et 5 cm snit lodret fra den lave mave til xiphoid-processen. Pas på ikke at åbne brysthulen.
- Efter åbning af bughinden skal du forsigtigt placere tarmene til dyrets venstre side og hæve leverens højre lap med en Rayon-spidsapplikator (se materialetabel) for at udsætte portalvenen.
- Kateteriser portalvenen ved hjælp af et 24 G IV-kateter. Indfør kateteret i den distale ende af portalvenen. Placer kateterspidsen, før portalvenen forgrener sig ud i leverlapperne.
- Træk nålen ud med det samme, når kateteret kommer ind i venen. Kontroller, at kateteret er korrekt placeret inde i venen ved at perfusere leveren med PBS ved hjælp af en 1 ml sprøjte via kateteret.
BEMÆRK: Ved PBS-perfusion skal alle lapper straks blanchere. Hvis kateteret er korrekt placeret, vil venøst blod hurtigt strømme gennem kateteret. - Brug Dumont mikrotang, en Castroviejo-mikronåleholder og 4-0 sutur (se materialetabellen) til at placere en søm under forgreningen af portalvenen og en anden søm 1 cm under for at fastgøre kateteret.
2. Decellularisering af væv
- Tilslut kateteret til en silikoneslange (~ 1 m længde, 3 mm indvendig diameter og 4,1 mm ydre diameter) med et Luer-stik. Tilslut silikoneslangen til en peristaltisk pumpe og et reservoir, der indeholder deioniseret vand (se materialetabel).
- Fjern forsigtigt luftboblerne inde i røret og undgå at generere nye bobler under perfusionen. Indstil den peristaltiske pumpe til en floweffekt på 0,2 ml/min (dvs. 288 ml/24 timer).
- Perfus først med deioniseret vand (~ 50 ml / mus) i 2 timer. Leverens farve ændres fra rød til gul under perfusion.
BEMÆRK: Dyret udløber efter 10 minutters perfusion. - Skift perfusionsopløsningen til 0,5% (vægt/vol) natriumdeoxycholat (DOC, se materialetabellen) og fortsæt natten over (18 timer, ~250 ml/mus). Leveren bliver hvid i slutningen af perfusionen (figur 1).
- Perfusionsopløsningen skiftes til deioniseret vand (~50 ml/mus) og perfuseres i 2 timer.
- Brug Dumont mikrotang og mikrofjedersaks (se materialetabel) til at opsamle den decellulariserede lever og vask den omhyggeligt i en petriskål med PBS.
- Skær det decellulariserede væv i små stykker til øjeblikkelig billeddannelse eller frys ved -80 ° C til yderligere biokemisk analyse såsom tandem massespektrometri, ELISA eller western blot.
3. Diasforberedelse til billeddannelse (med et multifoton/konfokal fluorescensmikroskop)
- Overfør et lille stykke decellulariseret lever (<3 x 3 x 3 mm) til et mikroskopglas og placer vævet i midten.
- Tilsæt 10 μL antifade monteringsmedium (se materialetabellen) til vævet med en pipette for at undgå vævstørring.
- Dæk vævet med et dækglas og påfør en lille kraft for at flade prøven. Forsegl kanterne på dækglasset med farveløs og gennemsigtig neglelak (figur 2).
BEMÆRK: På grund af indstillingen af den opretstående to-foton gennem mikroskopet blev der brugt et dækglas på prøven. Prøver kan dog placeres anderledes, hvis der anvendes et omvendt mikroskop.
4. Optagelse af billeder
- Placer en dråbe nedsænkningsolie på toppen af dækglasset, og placer diaset på mikroskopets diasholder. Sænk objektivet med 20x olie, indtil det kommer i kontakt med nedsænkningsolien.
- Skift til den violette kanal (405 nm), tænd lukkeren, og fokuser på prøven. Naviger og placer interesseområdet til billedbehandling. Sluk lukkeren, før du går over til billedoptagelse ved hjælp af laserlys.
- Skift til computerstyringen, og start to-fotonlaseren. Tænd først to-fotonlaseren (figur 3A), og tænd derefter to-foton-lasercontrolleren (se materialetabellen) og lukkeren (figur 3B,C). Sørg for, at udgangseffekten er højere end 2,5 W.
Reducer lasereffekten for at forhindre fluorescensdæmpning. Vælg og juster detektorer (både fotomultiplikatorer og hybrid) for at imødekomme de valgte fluoroforer.
BEMÆRK: To-fotonbilleddannelse blev udført ved en excitationsbølgelængde på 860 nm. To kanaler blev valgt til henholdsvis kollagen SHG og to-foton exciteret fluorescens (TPEF) billeder. En kanal svarende til bølgelængdeområdet 415-445 nm detekterede den detaljerede struktur af kollagen fra SHG-signaler. En anden kanal dækkede området 465-669 nm for at indsamle TPEF-signaler. - Vælg samtidige eller sekventielle billedoptagelser. Juster pinhole til den højeste værdi. Juster laserbølgelængder, forstærkning, effekt og forskydning. Juster pixelopholdstid, pixelstørrelse, gennemsnit og zoom (figur 4A).
- Rul computerens z-controller, og indstil z-dimensionerne, definer start- og slutpunkterne, og vælg antallet af billeder, der er angivet inden for en lydstyrke (z-stak). Hent billeder.
BEMÆRK: Her blev der valgt en 20 μm Z-volumen og 1 μm Z-trinstørrelse (figur 4B).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Kollagenfibrene blev påvist med anden harmonisk generation og to-fotonmikroskopi. Signalet kommer fra de frangible triple-helical og native fibrillære kollagenstrukturer. Specifikke antistoffer blev ikke brugt til at analysere kollagenundertyper; Dette kan dog føjes til billeddannelsesteknikken.
Når levervævet studeres uden decellularisering, er det udfordrende at få billeder i høj opløsning af kollagennetværket (figur 5A). I decellulariseret ECM vises kollagenfibre (grøn) parallelt eller sammenvævet (figur 5B). Der var tydelige forskelle i morfologien og den rumlige fordeling af ECM-komponenterne mellem Chow- og FFD-lever. Kollagenfibre hos mus på en chow-diæt udviste et sammenvævet og velorganiseret netværk. Hos mus på FFD blev kollagenbundter imidlertid observeret med mindre forbindelse (figur 5B).
For yderligere at studere 3D-strukturen af lever-ECM blev billeder af skiverne taget med et 20 μm Z-volumen (tykkelse) og 1 μm Z-trinstørrelse. Kollagenfibre i mus på chow-diæt viste et velorganiseret netværk, men ikke i musene på FFD (figur 6). For at bekræfte kvaliteten af det fibrillære kollagen i det decellulariserede ECM blev diasene fastgjort og indlejret i paraffin og farvet med hæmatoxylin og eosin (H&E) og Picrosirius rød (PSR) (se materialetabel). H&E viser, at alle cellerne er fjernet. PSR er en almindeligt anvendt histologisk teknik til at fremhæve kollagen i paraffinindlejrede vævssektioner (figur 7).
Figur 1: Muselever under perfusion. Leveren bliver hvid og halvgennemsigtig i slutningen af perfusionen. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Diasforberedelse til billeddannelse. Vævet er dækket af et dækglas, og en lille kraft påføres for at flade prøven. Dækglassets kanter er forseglet med farveløs og gennemsigtig neglelak. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Skærmbillede af to-foton-lasersoftwaren, der starter to-foton-laseren. (A) Først tændes to-fotonlaseren. (B) (C) To-foton-lasercontrolleren og lukkeren er tændt. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 4: Skærmbillede af to-foton-lasersoftwaren under billedoptagelse. (A) Sørg for at indstille pinhole til den højeste værdi (røde pile). Juster laserbølgelængder, forstærkning, effekt og forskydning. Juster pixelopholdstid, pixelstørrelse, gennemsnit og zoom. (B) Indstil Z-lydstyrken til 20 μm og Z-trinstørrelsen til 1 μm. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 5: Decellulariseret ECM afbildet med to-fotonmikroskopi . (A) SHG-billeder af kollagenfibre fra en 6 μm leverskive (friskfrosset) uden decellularisering. (B) SHG-billeder viser et velorganiseret kollagennetværk i lever af mus på normal kontrol, chow diæt. Ombygget kollagennetværk hos mus på fastfood-diæt (FFD). Pil, fibrose område. Stjerne, ombygget kollagennetværk. Skalabjælke = 100 μm. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 6: 3D-struktur af leverkollagennetværk. Kollagenfibrene i mus på chow-diæten viste et velorganiseret netværk, men ikke i fastfood-diæt (FFD) mus. Billederne blev taget med en 20 μm Z-volumen (tykkelse) og 1 μm Z-trinstørrelse. Skalabjælke = 100 μm. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 7: Hæmatoxylin og eosin farvning (H&E) og Picrosirius rød (PSR) farvning af den decellulariserede ECM. H&E viser, at alle cellerne er fjernet. I PSR-farvningsbillederne afslørede ECM fra de chow-fodrede mus et velorganiseret netværk, og i modsætning hertil viste mus på fastfood-diæt (FFD) tættere kollagenfibre. Z-volumen (tykkelse) = 6 μm. Skalabjælke = 100 μm. Klik her for at se en større version af denne figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den nuværende protokol viser, at decellularisering gennem en lav strømningshastighed DOC in situ perfusion bevarer de frangible triple-helical og native fibrillære kollagenstrukturer, hvilket giver en pålidelig og omkostningseffektiv platform til at fange dynamisk ECM-remodellering i NASH leverfibrose. Selvom decellularisering blev udført i normale og fibrotiske lever, før ECM-komponenter blev identificeret eller genereret biologiske stilladser til cellekultur, er dynamikken i ECM-remodellering i leverfibrose ikke blevet undersøgt godt 8,9,10. Denne metode gør det muligt for efterforskere at drage sammenligninger på tværs af forskellige fibrosemodeller.
I øjeblikket er der sorter af perfusionsprotokoller, der bruger DNase, natriumdodecylsulfat (SDS) eller Triton X-10011. Omkostningerne ved DNase er høje, fordi der kræves store mængder løsninger. SDS er en hård denatureringsopløsning, et anionisk rengøringsmiddel, der forstyrrer cellemembranerne og denaturerer proteiner. Derfor er det udfordrende at bevare hele kollagennetværket efter SDS-perfusion. I modsætning hertil forstyrrer Triton X-100, som et mildt ikke-denaturerende, ikke-ionisk vaskemiddel, lipid-lipid- og lipid-proteininteraktioner og bevarer protein-protein-interaktioner. Det er imidlertid blevet rapporteret, at Triton X-100 forstyrrer ECM-stilladserne, hvilket gør den decellulariserede lever-ECM uegnet til yderligere massespektrometrianalyse11.
Perfusionsprotokollen med DOC blev modificeret fra det tidligere arbejde7, hvilket demonstrerer bedre bevarelse af de triple-spiralformede og native fibrillære kollagenstrukturer i de fleste væv. Kollagennetværket blev undersøgt med anden harmonisk generation (SHG) mikroskopi uden antistoffer, hvilket afspejler de triple-spiralformede og native fibrillære kollagenstrukturer. Den decellulariserede lever-ECM fra FFD-mus blev også testet, og strukturelle ændringer i NASH blev bekræftet.
De mest kritiske trin i protokollen er kateterplacering og opsætning af perfusionssystemet. Portalvenekateteriseringen er afgørende, men den ringere vena cava kan også bruges, hvis portalvenen er beskadiget. Bobler i buffer og rør skal undgås, fordi de påvirker perfusionen. Fordi der blev brugt et opretstående to-fotonmikroskop, var prøvestørrelsen begrænset. Dette kan ændres, hvis der skal anvendes et omvendt mikroskop.
Der er en stigende interesse for den ombyggede ECM i kroniske leversygdomme og hepatocarcinogenese12,13,14. Decellulariserede ECM-stilladser er blevet anvendt i kirurgisk reparation og regenerativ medicin som et passende biologisk stilladsmateriale15,16,17. Denne milde decellulariseringsproces har imidlertid også begrænsninger, da nogle cellulære komponenter såsom DNA eller lipidrester muligvis ikke fjernes helt. Længere DOC-perfusionstid og en stigning i strømningshastigheden kan hjælpe med at få ultrarensede decellulariserede stilladser. Tilsætning af DNase i vaskeopløsningen efter DOC-perfusionen kan også hjælpe med at fjerne DNA. Protokollen kan justeres for humane leverbiopsier og dermed øge forståelsen af ECM-ændringer under NASH-progression.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at der ikke er nogen interessekonflikter vedrørende denne artikel.
Acknowledgments
Vi takker Hyesuk Park for den tekniske hjælp. Denne forskning blev støttet af midler fra National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases (NIDDK), NIH (R01 2DK083283, til NJT), National Institute on Aging (NIA), NIH (1R01AG060726, til NJT). Vi anerkender taknemmeligt Jon Mulholland og Kitty Lee fra Cell Sciences Imaging Facility i Beckman Center for teknisk assistance med to-fotonmikroskopi-billeddannelsen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4-0 MONOCRYL UNDYED 1 x 18" P-3 | MONOCRYL | Y494G | |
| 4-0 suture | fisher scientific | 10-000-649 | https://www.fishersci.com/shop/products/monomid-nylon-non-absorbable-sutures-7/10000649?keyword=true |
| AnaSed Injection (xylazine) | AnaSed | NDC 59399-110-20 | this drug to use by or on the order of a licensed veterinarian. |
| BD INSYTE AUTOGUARD I.V. CATHETER WITH BC TECHNOLOGY | BD | 382612 | |
| Chow diet | Envigo | # 2918 | Control diet. A fixed formula, non-autoclavable diet manufactured with high quality ingredients and designed to support gestation, lactation, and growth of rodents. |
| Fast-food diet (AIN76A Western Diet) | Test Diet | 1810060 | https://www.testdiet.com/cs/groups/lolweb/@testdiet/documents/web_content/mdrf/mdux/~edisp/ducm04_051601.pdf |
| Hematoxylin and Eosin Stain Kit | vectorlabs | H-3502 | https://vectorlabs.com/hematoxylin-and-eosin-stain-kit.html |
| Kent Scientific Rat Surgical Kit | fisher scientific | 13-005-205 | https://www.fishersci.com/shop/products/rat-surgical-kit/13005205#?keyword=mouse%20surgery%20kit |
| KETAMINE HYDROCHLORIDE INJECTION | Vedco | NDC 50989-996-06 - 10 mL - vial. | KetaVed has been clinically studied in subhuman primates in addition to those species listed under Administration and Dosage. |
| Leica SP5 upright Confocal, multi-photon | Leica | SP5 | |
| Luer connector (Three-way stopcock with SPIN-LOCK®) | bbraun | D300 | https://www.bbraunusa.com/en/products/b0/three-way-stopcockwithspin-lock.html |
| Picrosirius Red Stain Kit | Polysciences, Inc. | 24901 | https://www.polysciences.com/default/picrosirius-red-stain-kit-40771 |
| Rayon tipped applicator | puritan | 25-806 1PR | |
| Sodium deoxycholate | sigmaaldrich | D6750-100G | |
| Syrup | www.target.com | 24 fl oz | https://www.target.com/p/pancake-syrup-24-fl-oz-market-pantry-8482/-/A-13007801 |
| Variable Speed Peristaltic Pump | INTLLAB | BT100 | https://www.amazon.com/gp/product/B082K97W5W/ref=ox_sc_saved_title_2?smid=A12NUUP87ZRRAR&psc=1 |
| VECTASHIELD Antifade Mounting Medium | vectorlabs | H-1000-10 | https://vectorlabs.com/vectashield-mounting-medium.html |
References
- Friedman, S. L., Pinzani, M. Hepatic fibrosis: 2022 unmet needs and a blueprint for the future. Hepatology. 75 (2), 473-488 (2021).
- Ye, Q., et al. Global prevalence, incidence, and outcomes of non-obese or lean non-alcoholic fatty liver disease: A systematic review and meta-analysis. The Lancet Gastroenterology and Hepatology. 5 (8), 739-752 (2020).
- Schwabe, R. F., Tabas, I., Pajvani, U. B. Mechanisms of fibrosis development in non-alcoholic steatohepatitis. Gastroenterology. 158 (7), 1913-1928 (2020).
- Arteel, G. E., Naba, A. The liver matrisome - looking beyond collagens. JHEP Reports. 2 (4), 100115 (2020).
- Jiang, J. X., et al. Nonphagocytic activation of NOX2 is implicated in progressive non-alcoholic steatohepatitis during aging. Hepatology. 72 (4), 1204-1218 (2020).
- Dehnad, A., et al. AGER1 downregulation associates with fibrosis in non-alcoholic steatohepatitis and type 2 diabetes. Journal of Clinical Investigation. 130 (8), 4320-4330 (2020).
- Mayorca-Guiliani, A. E., et al. Decellularization and antibody staining of mouse tissues to map native extracellular matrix structures in 3D. Nature Protocols. 14 (12), 3395-3425 (2019).
- Mazza, G., et al. Cirrhotic human liver extracellular matrix 3D scaffolds promote smad-dependent tgf-beta1 epithelial mesenchymal transition. Cells. 9 (1), 83 (2019).
- Klaas, M., et al. The alterations in the extracellular matrix composition guide the repair of damaged liver tissue. Scientific Reports. 6, 27398 (2016).
- Mattei, G., et al. Mechanostructure and composition of highly reproducible decellularized liver matrices. Acta Biomaterialia. 10 (2), 875-882 (2014).
- Ren, H., et al. Evaluation of two decellularization methods in the development of a whole-organ decellularized rat liver scaffold. Liver International. 33 (3), 448-458 (2013).
- Piersma, B., Hayward, M. K., Weaver, V. M. Fibrosis and cancer: A strained relationship. Biochimica et Biophysica Acta - Reviews on Cancer. 1873 (2), 188356 (2020).
- Cox, T. R.
- Mirdamadi, E. S., Kalhori, D., Zakeri, N., Azarpira, N., Solati-Hashjin, M. Liver tissue engineering as an emerging alternative for liver disease treatment. Tissue Engineering Part B: Reviews. 26 (2), 145-163 (2020).
- Mazza, G., et al. Decellularized human liver as a natural 3D-scaffold for liver bioengineering and transplantation. Scientific Reports. 5, 13079 (2015).
- Jia, Z., et al. 3D culture system for liver tissue mimicking hepatic plates for improvement of human hepatocyte (C3A) function and polarity. BioMed Research International. 2020, 6354183 (2020).
- Shimoda, H., et al. Decellularized liver scaffolds promote liver regeneration after partial hepatectomy. Scientific Reports. 9 (1), 12543 (2019).
