Summary
Um modelo de rato de pancreatite aguda grave é descrito aqui. O procedimento aqui apresentado é muito rápido, simples e acessível, permitindo, assim, potencialmente o estudo dos mecanismos moleculares e diferentes intervenções terapêuticas na pancreatite aguda de forma conveniente.
Abstract
A prevalência de pancreatite aguda (AP), especialmente pancreatite aguda grave (SAP), está aumentando anualmente em faixas etárias mais jovens. No entanto, faltam tratamentos eficazes na prática clínica atual. Com a fácil acessibilidade das cepas transgênicas e eliminatórias e seu pequeno tamanho, que permite doses mínimas de medicamentos necessários para avaliação in vivo , um modelo experimental bem estabelecido em camundongos é preferido para a pesquisa ap. Além disso, a SAP induzida através de taurocholate de sódio (TC) é atualmente um dos modelos mais utilizados e caracterizados. Este modelo tem sido investigado para novas terapias e possíveis eventos moleculares durante o processo de AP. Aqui, apresentamos a geração de um modelo de mouse AP usando taurocholate de sódio e uma simples microsinga caseira. Além disso, também fornecemos a metodologia para a histologia subsequente e testes sorológicos.
Introduction
Pancreatite aguda (AP) é uma inflamação aguda do pâncreas caracterizada pela obstrução do duto pancreático principal com distensão ductal subsequente e autogestão do pâncreas por suas enzimas anormalmente ativadas. Suas manifestações clínicas incluem inflamação local ou sistêmica, dor abdominal e elevação do amilase sérico1,2. De acordo com a classificação de gravidade3, a AP pode apresentar-se em formas leves, moderadas e graves, e entre elas, a pancreatite aguda grave (SAP) é a condição mais preocupante devido à sua alta taxa de mortalidade superior a 30%4. Nos Estados Unidos, a AP é uma das razões mais comuns para a internação, afetando mais de 200.000 pacientes5. Além disso, a AP, especialmente a SAP, está aumentando anualmente e afetando as faixas etárias mais jovens6. No entanto, faltam opções de tratamento eficazes na prática clínica atual6,7. Portanto, é necessário explorar os mecanismos moleculares envolvidos na AP, facilitando assim a melhoria do tratamento.
Modelos experimentais de animais bem estabelecidos são necessários para estudar os mecanismos envolvidos na AP e avaliar a eficácia de diferentes modalidades de tratamento. Com a fácil acessibilidade das cepas transgênicas e eliminatórias e seu pequeno tamanho, o que minimiza as doses de medicamentos necessários para avaliação in vivo, os camundongos são preferidos para a pesquisa ap. Portanto, vários modelos de AP foram desenvolvidos em camundongos8,9.
Trabalhando a partir de um modelo leve de rato de pancreatite induzido através da administração intravenosa de caerulein10, Niederau et al. desenvolveram um modelo de rato SAP apresentado com necrose celular acinar induzida usando a mesma droga e rota de injeção11. Embora este modelo possua várias vantagens, incluindo invasividade, indução rápida, reprodutibilidade ampla e aplicabilidade, a maior desvantagem é que apenas uma forma leve de AP é desenvolvida na maioria dos casos, limitando assim sua relevância clínica. O álcool é considerado um dos principais fatores etiológicos da AP; no entanto, Foitzik et al. relataram que causa lesão pancreática apenas quando combinado com outros fatores, como hiperestimulação exócrina12. Além disso, embora os modelos ap induzidos pelo álcool tenham sido desenvolvidos através de diferentes rotas de administração, e as doses de drogas tenham sido relatadas13,14,15, sua maior desvantagem é a dificuldade em reproduzi-los. A administração intraperitoneal de L-arginina também pode induzir AP em camundongos16; no entanto, sua baixa relevância clínica dificulta sua aplicação. Taurocholate, um sal bile, foi proposto pela primeira vez por Creutzfeld et al. em 1965 por induzir uma condição semelhante à AP humana através da infusão de ducto pancreático17. Embora existam controvérsias quanto à sua relevância clínica na fisiopatologia18,19, a pancreatite induzida por taurocolato continua sendo um modelo indispensável para a SAP.
Como este modelo é simples de perceber e também é eficaz em camundongos, é hoje um dos modelos AP mais utilizados para pequenos estudos in vivo. Perides et al. empregaram taurocholate de sódio (TC) para induzir SAP em camundongos20, fornecendo insights para entender sua patologia. Combinado com técnicas de modificação genética, este modelo nos permitiu confirmar vários genes específicos envolvidos na AP. Por exemplo, Bicozo et al. mostraram que um nocaute do gene CD38 protegeu contra um modelo de pancreatite de infusão TC e atribuiu os mecanismos a alterações na sinalização intracelular Ca2+21. Fanczal et al. investigaram a implicação fisiológica da expressão TRPM2 na membrana plasmática do acinar pancreático do rato e células ductais, e demonstraram gravidade reduzida da SAP induzida por TC em camundongos nocautes TRPM222. Além disso, este modelo também fornece uma maneira simples e eficaz de testar muitas drogas novas in vivo. Por exemplo, este método permitiu a validação dos efeitos terapêuticos da cafeína23, ácido desiddrocólico24, e vários antioxidantes e anticoagulantes25,26. Esta evidência demonstra a versatilidade do modelo SAP induzido por TC. Embora Wittel et al. tenham descrito um modelo semelhante de mouse27, a falta de detalhes sobre os procedimentos de implementação poderia resultar em uma incapacidade de reproduzir os achados. Neste artigo, focamos em métodos utilizando uma simples microsinga caseira e estudamos SAP induzida por TC, fornecendo assim uma possível orientação não apenas para um estudo mais aprofundado da patogênese e tratamento da AP, mas também para um método experimental perfeitamente adaptável para muitas outras substâncias.
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Protocol
Todos os experimentos envolvendo animais foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Soochow. Todos os procedimentos cirúrgicos foram realizados sob anestesia total. Os analgésicos não foram utilizados para evitar interferências no curso natural da doença segundo as literaturas anteriores28,29. A aprovação da falta de analgesia também foi concedida pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Soochow.
1. Preparação
- Acelere um rato C57BL/6 tipo selvagem 8-12 h antes da cirurgia.
- Prepare 5% (p/v) solução TC (93 mM) diluída em cloreto de sódio de 0,9%. Filtre a solução através de um filtro de 0,22 μm.
- Autoclave os instrumentos e materiais cirúrgicos, incluindo fórceps, tesoura, porta-lâminas, porta-agulhas, clipe hemostático, grampos vasculares e cortinas estéreis, utilizando um esterilizador de pressão a uma temperatura de 121 °C por 30 min.
- Prepare uma micro-seringa caseira. Para isso, instale manualmente uma ponta de insulina descartável e uma ponta de pipeta de plástico prolongada sobre uma seringa microliter de ponta plana de 25 μL. Esterilizar através da irradiação.
2. Anestesia e preparação pré-operatória
- Pese camundongos machos de 6 a 8 semanas de idade C57BL/6 (aproximadamente 21-23 g). Induzir anestesia geral com uma injeção intraperitoneal de 1% de solução de sódio pentobarbital a uma dose de 50 mg/kg.
- Fixar o mouse na posição supina na placa plana anirradiatedfoam com a fita.
- Prepare a região de operação de cada animal removendo sua pele com um creme de depilação do nível do processo xifoide até a linha de conexão da coluna ilíca superior bilateral, com os lados esquerdo e direito paralelos à linha axilar frontal.
- Prepare um campo cirúrgico estéril com foco especial na área cirúrgica, consistindo na área preparada no animal e na frente do cirurgião.
- Desinfete o banco.
- Limpe o local de incisão com múltiplas aplicações de solução de esfoliação cirúrgica. Limpe a pele duas a três vezes com iodophor de 0,5% e deixe secar por 1-2 min cada vez.
- Cubra o mouse com cortinas estéreis.
3. Procedimento cirúrgico
NOTA: A Figura 1 retrata a anatomia e a morfologia do pâncreas do rato antes e depois da injeção retrógrada de TC no ducto biliopancreático por microinjeção.
- Faça uma incisão abdominal mediana de aproximadamente 2 a 3 cm de comprimento.
- Localize o duodeno da esquerda para a direita ao longo do estômago. Puxe suavemente o duodeno para fora e para o lado esquerdo usando fórceps cirúrgicos e um cotonete encharcado de desinfetante para expor o pâncreas, o ducto biliopancreático e a papila duodenal. Tome cuidado para não ferir a parede intestinal ou vasos relacionados.
- Use 8-0 suturas para passar através da conexão entre o duodeno e pâncreas ao redor da papila, e puxá-los para o lado esquerdo do corpo do rato para corrigir o duodeno.
- Puxe suavemente a pele e a borda inferior do fígado de lado. Fixar o ducto hepático comum, certificando-se de não fixar a veia do portal ou pâncreas. Aperte o ducto biliopancreático proximal.
- Fure o microinjetor no duto biliopancreático distal retrógrado. Fixar a ponta da agulha perto da papila duodenal com um grampo. Infundir 10 μL de 5% TC no duto pancreático a uma taxa de 5 μL/min.
- Mantenha o duto biliopancreatic fechado por 5 minutos para alcançar uma pressão estável. Em seguida, retire o microinjetor e remova os grampos.
- Restaure o duodeno na posição anatômica original e verifique o sangramento.
- Feche a ferida com suturas 6-0 e desinfete com 0,5% de iodophor.
4. Recuperação e gestão pós-operatória
- Recupere os animais da anestesia em uma almofada térmica de 37 °C. Não envie os animais operados para a sala pós-operatória temporal até que todos os animais tenham acordado.
- Administre 0,8 mL de 0,9% de soro fisiológico subcutâneo e lentamente para suplementação de fluidos.
- Monitore os animais no pós-operatório para sua condição geral e sinais de infecções ou doenças.
5. Teste sorológico e avaliação histologia
- Às 24 horas após a operação, anestesia os camundongos com sódio pentobarbital usando a mesma dose e rota de injeção.
- Coletar todo o sangue da aorta abdominal (cerca de 0,8 mL por rato) e girar a 1.500 x g por 15 minutos para isolar o soro para novos testes.
- Pegue os tecidos do pâncreas.
- Abra a cavidade torácica para coletar os tecidos pulmonares.
- Meça os índices de função bioquímica do soro, incluindo amilase, lipase, função hepática (alanina transaminase (ALT) e transaminase aspartate (AST)), e função renal (ureia e creatina), utilizando kits comerciais de acordo com as instruções dos fabricantes.
- Homogeneize os tecidos pulmonares e pâncreas e meça o nível de mieloperoxidase (MPO) utilizando um kit comercial de acordo com as instruções do fabricante.
- Abra a cavidade torácica e perfuse com 20 mL de soro fisiológico tamponado de fosfato (PBS) duas vezes, depois colete o pâncreas. Mergulhe em solução de paraformaldeído de 4% por 24 h. Desidratar em uma série de concentrações de álcool e incorporar em parafina.
- Use um microtome para preparar seções de tecido de pâncreas de 5 μm de espessura.
- Realizar coloração de H&E para avaliação histológica do pâncreas.
- Avaliar os escores patológicos de acordo com os critérios propostos por Schmidt et al.30.
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Representative Results
Seguindo cuidadosamente as instruções acima, obtivemos uma duração média da cirurgia de aproximadamente 40 min. Os camundongos estavam ligeiramente inativos e perderam aproximadamente 0,5-1,75 g, 0,85-1,85 g e 0,5-4,73 g de peso em 24 h, 48 h e 72 h pós-operação, respectivamente (Figura 2).
Desde o momento da conclusão da cirurgia até 24 horas após a operação, à medida que a doença se desenvolveu, os camundongos ficaram inativos e apresentaram respostas e ações lentas.
As taxas de sobrevivência dos camundongos control e SAP foram de 100% (8/8) e 72,7%(8/11), respectivamente, em 72 h pós-operação (Figura 3).
De acordo com a mancha de H&E (Figura 4) e escore patológico (Figura 5) resulta de seções de pâncreas, edema óbvio (pontuação: 3,14 ± 0,51 vs. 0,10 ± 0,08), inflamação (pontuação: 1,41 ± 0,81 vs. 0) e necrose (pontuação: 3,03 ± 0,77 vs. 0) do tecido do pâncreas poderia ser observada em camundongos SAP em relação aos camundongos de controle. Enquanto isso, não foram encontradas alterações significativas na hemorragia (pontuação: 0,125 ± 0,31 vs. 0) em ambos os grupos de camundongos, resultando em uma pontuação patológica total substancialmente elevada em camundongos SAP (pontuação: 7,72 ± 1,61 contra 0,10 ± 0,08).
Além disso, em comparação com os dos camundongos de controle, aumentou significativamente os níveis de amilase ([46.740,32 ± 12.801,30] U/L vs. [3.324,40 ± 753,66] U/L, p < 0,001), lipase ([545,02 ± 356,28] U/L vs. [18.32 ± 25.22] U/L, p < 0,05), e pâncreas e MPO pulmonar (pâncreas: [5,18 ± 3,26] U/g vs. [0,71 ± 0,41] U/g, p < 0,05; pulmão: pulmão: [11.70 ± 1.31] U/g vs. [1,56 ± 0,45] U/g, p < 0,001) foram encontrados em camundongos SAP (Figura 6).
Além disso, em comparação com os camundongos de controle, os camundongos SAP demonstraram funções hepáticas e renais prejudicadas, conforme ilustrado pelos seguintes índices: ALT ([164,36 ± 47,66] U/L vs. [77,15 ± 31,06] U/L, p < 0,001), AST ([222.35 ± 82.13] U/L vs. [116.61 ± 64.79] U/L, p < 0,01), nitrogênio de ureia sanguínea (BUN) ([37,59 ± 16,36] mM vs. [14,80 ± 3,74] mM, p < 0,001) e creatinina ([40,33 ± 11,53] μM vs. [28,66 ± 4,53] μM, p < 0,01) (Figura 7).
Figura 1. A anatomia e morfologia do pâncreas do rato antes e depois da injeção retrógrada de taurocolato de sódio (TC) no ducto biliopancreático. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2. Tempo de curso das mudanças de peso do controle (n = 8) e pancreatite aguda grave (n = 11) camundongos. As barras de erro representam o desvio padrão (SD). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3. Monitoramento da curva de sobrevivência do controle (n = 8) e pancreatite aguda grave (n = 11) camundongos. Os números em azul e vermelho representam o número de ratos sobreviventes em um ponto de tempo específico nos grupos controle e SAP, respectivamente. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4. Histopatologia de seções pancreáticas do controle e de camundongos de pancreatite aguda grave (SAP). Seta preta indica infiltração de células inflamatórias, seta vermelha indica sangramento, triângulo preto invertido indica necrose acinar. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5. Pontuação de histologia. Escores de histologia (incluindo edema, necrose, inflamação, hemorragia e escores totais) da seção do pâncreas a partir do controle e dos camundongos de pancreatite aguda grave (SAP). Cada ponto preto representa a pontuação correspondente de um mouse. ns: não significativo; **p < 0,01; p < 0,001. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 6. Avaliação sorológica da amilase e lipase e determinação da atividade do pâncreas e mieloperoxidase pulmonar (MPO). Níveis significativamente aumentados de amilase, lipase e pâncreas e MPO pulmonar foram encontrados em camundongos SAP em relação ao controle de camundongos. Um ponto preto representa um rato. As barras de erro representam o desvio padrão (SD). *p < 0,05; p < 0,001. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 7. Índices de função hepática (ALT: alanina aminotransferase, e AST: aminotransferase aspartato) e índices de função renal (creatinina e BUN: nitrogênio de ureia sanguínea), em controle e grave pancreatite aguda (SAP). Níveis significativamente aumentados de ALT, AST, BUN e creatinina foram encontrados em camundongos SAP em relação aos camundongos de controle. Um ponto preto representa um rato. As barras de erro representam o desvio padrão (SD). *p < 0,05; **p < 0,01; p < 0,001. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
O modelo SAP induzido pelo TC é uma excelente ferramenta de pesquisa. Como mostrado neste estudo, este modelo é muito facilmente realizado em laboratórios gerais sem empregar dispositivos específicos. Quando usado em combinação com histologia e análise bioquímica, fornece uma abordagem de custo (reagentes baratos) e economia de tempo (24h de janela de tempo) para induzir e avaliar AP. Ajustar a concentração de TC também oferece a possibilidade de produzir ap. Perides et al. também empregaram TC para induzir SAP em camundongos20, e a grande diferença foi que eles usaram bomba para infusão de TC, que pode fornecer uma dose de infusão mais precisa.
De acordo com nossa experiência, durante o processo cirúrgico do estabelecimento modelo, os fatores mais importantes incluíram exposição total do ducto biliopancreático, punção suave do microinjetor, e injeção de TC no ducto biliopancreático e no ducto pancreático a uma velocidade relativamente constante. Deve-se prestar atenção aos seguintes pontos durante a cirurgia. Primeiro, o duodeno deve ser retirado suavemente para evitar a aplicação de força excessiva, o que pode resultar em necrose duodenal. A abertura do duto biliopancreático está localizada ao longo da borda interna do duodeno (também chamada de papila duodenal), e o ducto biliopancreático pode ser localizado posteriormente. Se for bem-sucedida, a papila duodenal branca e os túbulos que formam o ducto biliopancreático e passam pelo pâncreas em forma de folha devem ser identificáveis. A exposição adequada do ducto biliopancreatic deve facilitar os procedimentos subsequentes. Em segundo lugar, deve-se aplicar força de puxar moderada ao fixar o duodeno no lado inferior esquerdo do mouse colocado na posição supina usando suturas, endireitando assim o duto biliopancreatic sem perda de tensão. Forças de puxar excessivas e insuficientes podem resultar em ruptura da parede do duodeno e exposição inadequada do ducto biliopancreático, respectivamente, o que poderia afetar negativamente a punção subsequente. Recomenda-se um ângulo vertical para garantir uma punção suave quando o duodeno estiver fixado no lado inferior esquerdo usando suturas. Em seguida, durante a punção, certifique-se de que a direção de punção é paralela à direção do ducto biliopancreático. Ao perfurar, o plano inclinado da ponta da agulha deve ser orientado para baixo para passar pela parede do duodeno e, posteriormente, entrar no duto biliopancreático, certificando-se de usar a força apropriada para evitar perfurar o duto biliopancreático. Após uma punção bem sucedida, nenhuma resistência deve ser sentida ao entrar no duto biliopancreatic, e a tensão da parede do ducto biliopancreatic deve ser sentida ao balançar suavemente a ponta da agulha. Finalmente, durante o procedimento, o duodeno deve ser mantido úmido com soro fisiológico quente para manter sua atividade.
No entanto, este método também tem algumas limitações. Primeiro, a reprodutibilidade pode ser afetada por diferentes reações ao TC de cada mouse. Portanto, uma comparação emparelhada de resultados correspondentes de cada mouse poderia ser realizada para minimizar esses impactos. Em segundo lugar, a lesão da papila duodenal é um fenômeno comum durante o processo de punção, que também pode causar pancreatite aguda. Portanto, um tempo de treinamento mais longo pode ser necessário para desenvolver habilidades cirúrgicas adequadas para cumprir esse método de modelagem. Além disso, manter os camundongos de tamanho adequado pode ser benéfico para garantir os resultados cirúrgicos.
Apesar dessas limitações, este modelo é um dos modelos mais utilizados e caracterizados até o momento para induzir AP e investigar novas terapias e possíveis eventos moleculares durante o processo de AP. De acordo com estudos anteriores, a SAP induzida através do TC também foi descrita como adequada para avaliação terapêutica-alvo, pois a gravidade alcançada com este modelo é semelhante à doença humana e pode ser facilmente reproduzida. A intervenção da Quercetina tem sido relatada para atenuar danos patológicos pancreáticos e íleias neste modelo SAP através da inibição da ativação TLR4/MyD88/p38 MAPK e estresse retículo endoplasmático (ERS)31. A administração do CM4620, um bloqueador de canais Orai1 seletivo, poderia diminuir significativamente a gravidade deste modelo SAP; prevenção da ativação do trypsinogênio, morte celular acinar, NF-κB e fator nuclear de ativação ativação de células T ativadas (NFAT) e respostas inflamatórias foram mostrados como os mecanismos subjacentes32. Além do TC, o ácido taurolithocholic 3-sulfato (TLCS) é outro ácido bile frequentemente usado na indução de AP. Conforme revisado por Petersen et al.33, concentrações elevadas de íons de cálcio induzidas por TLCS em células acinar podem afetar não apenas a produção de ATP mitocondrial intracelular, mas também outras células (acinar, estelar e macrófagos) localizadas no pâncreas via exocitose de íons de cálcio; que, TC pode exercer danos indiretos às células acinar através de seu efeito sobre células estelares periacinar.
Portanto, o modelo SAP induzido pelo TC fornece excelentes insights sobre a patogênese da AP e é uma ferramenta altamente relevante para validar pré-clinicamente novas drogas. Além disso, este modelo pode ser adaptado a animais de grande porte para avaliar ainda mais os efeitos desagradáveis e inesperados resultantes de terapias para o tratamento de AP.
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Disclosures
Nenhum.
Acknowledgments
Somos gratos pelo apoio das seguintes bolsas: uma Bolsa de Pesquisa Translacional da NCRCH [2020WSA01], uma Bolsa Científica KJXW da Comissão de Saúde para Jovens Acadêmicos de Suzhou [KJXW2020002], um Plano de Ciência e Tecnologia da Cidade de Suzhou (SKY2021038 e SKJY2021050), uma bolsa do Programa Acadêmico Prioritário de Desenvolvimento das Instituições de Ensino Superior de Jiangsu (PAPD) e um Plano de Pesquisa Primária & Desenvolvimento Social da Província de Jiangsu (BE2018659).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.5% iodophor | Shanghai Likang Disinfectant | 310102 | 4 mL/mouse |
| 0.9% sodium chloride | Sinopharm Group Co., Ltd. | 10019318 | 0.8 mL/mouse |
| 1% Pentobarbital sodium | Sigma | P3761 | 0.2 -0.25 mL/mouse |
| 25 μL flat tip Microliter syringe | Gaoge, Shanghai | A124019 | |
| 4% Paraformaldehyde | Beyotime, Nantong, China | P0099-500ml | |
| 5% sodium taurocholate (TC) | Aladdin | S100834-5g | 10 μL/SAP mouse |
| 6-0 Sterile nylon microsuture with threaded needle (1/2 circle) | Cheng-He | 20093 | |
| 75% alcohol | Sinopharm Group Co., Ltd. | 10009218 | 4 mL/mouse |
| 8-0 Sterile nylon microsuture with threaded needle (3/8 circle) | Cheng-He | 19064 | |
| ALT Activity Assay Kit | EPNK, Anhui, China | ALT0012 | |
| Amylase Assay Kit | EPNK, Anhui, China | AMY0012 | |
| Angled small bulldog clamp with 12 mm jaw (3 cm) | Cheng-He | HC-X022 | |
| aspen shavings or shreds for mouse bedding | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology | VR03015 | |
| AST Activity Assay Kit | EPNK, Anhui, China | AST0012 | |
| Blood Urea Nitrogen (BUN) Assay Kit | EPNK, Anhui, China | BUN0011 | |
| C57BL/6 mouse | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology | 213 | |
| Creatine Assay Kit | EPNK, Anhui, China | CRE0012 | |
| Feature microtome blade | Beyotime, Nantong, China | E0994 | |
| Hemostatic Forceps (9.5 cm, Curved) | JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd. | JC3901 | |
| Lipase Assay Kit | Jiancheng, Nanjing, China | A054-2-1 | |
| Microtome | Leica biosystem, Germany | RM2245 | |
| Mindray biochemistry analyzer | Mindray, Shenzhen, China | BS-420 | |
| MPO Assay Kit | Jiancheng, Nanjing, China | A044-1-1 | |
| Normal mouse chow | Trophic, Nantong, China | LAD 1000 | |
| Phosphate buffered saline | Beyotime, Nantong, China | C0221A | |
| Straight micro-bulldog clamp with 5 mm jaw (1.5 cm) | JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd. | W40130 | |
| Straight or curved forceps (11.0 cm) | Cheng-He | HC-X091A or HC-X090A | |
| Straight Scissors (10.0 cm) | Cheng-He, Ningbo, China | HC-J039102 | |
| Thermo Scientific Centrifuge | Thermo Scientific, USA | Multifuge X1R |
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