Summary
Das vorliegende Protokoll beschreibt eine standardisierte chirurgische Methode für das Elastase-induzierte AAA-Modell durch die direkte Anwendung von Elastase auf die Adventitia der infrarenalen abdominalen Aorta bei Mäusen.
Abstract
Abdominales Aortenaneurysma (AAA), obwohl in erster Linie asymptomatisch, ist potenziell lebensbedrohlich, da der Bruch von AAA in der Regel ein verheerendes Ergebnis hat. Derzeit gibt es mehrere verschiedene experimentelle Modelle von AAA, die jeweils einen anderen Aspekt in der Pathogenese von AAA betonen. Das Elastase-induzierte AAA-Modell ist das am zweithäufigsten verwendete Nagetier-AAA-Modell. Dieses Modell beinhaltet eine direkte Infusion oder Anwendung der porcinen Pankreaselastase (PPE) auf das infrarenale Segment der Aorta. Aufgrund technischer Herausforderungen werden die meisten Elastase-induzierten AAA-Modelle heutzutage mit der externen Anwendung und nicht mit einer intraluminalen Infusion von PSA durchgeführt. Die Infiltration der Elastase führt zu einem Abbau elastischer Lamellen in den medialen Schichten, was zum Verlust der Integrität der Aortenwand und zur anschließenden Erweiterung der Bauchaorta führt. Ein Nachteil des Elastase-induzierten AAA-Modells ist jedoch die unvermeidliche Variation der Art und Weise, wie die Operation durchgeführt wird. Insbesondere die chirurgische Technik der Isolierung des infrarenalen Segments der Aorta, das Material, das für die Aortenwicklung und die PSA-Inkubation verwendet wird, die enzymatische Aktivität von PSA und die zeitliche Dauer der PSA-Anwendung können wichtige Determinanten sein, die die eventuelle AAA-Bildungsrate und den Aneurysmadurchmesser beeinflussen. Insbesondere der Unterschied in diesen Faktoren aus verschiedenen Studien zu AAA kann zu Reproduzierbarkeitsproblemen führen. Dieser Artikel beschreibt einen detaillierten chirurgischen Ablauf des Elastase-induzierten AAA-Modells durch direkte Anwendung von PSA auf die Adventitia der infrarenalen Bauchaorta in der Maus. Nach diesem Verfahren ist eine stabile AAA-Bildungsrate von etwa 80% bei männlichen und weiblichen Mäusen erreichbar. Die Konsistenz und Reproduzierbarkeit von AAA-Studien unter Verwendung eines Elastase-induzierten AAA-Modells kann durch die Etablierung eines chirurgischen Standardverfahrens erheblich verbessert werden.
Introduction
Das Abdominalaortenaneurysma (AAA) ist definiert als eine segmentale Erweiterung der Bauchaorta mit einer Zunahme des Gefäßdurchmessers1 um mindestens 50%. AAA ist potenziell tödlich, da der Bruch zu einer extrem hohen Sterblichkeitsrate führen kann, selbst beiIntervention 2,3,4. Es wurde berichtet, dass AAA in den USA jährlich für etwa 13.000 Todesfälle verantwortlich ist, was sie zur 10. häufigsten Todesursache von 1,5 macht.
Die Pathogenese von AAA ist noch nicht vollständig verstanden 6,7,8. Um den molekularen Mechanismus von AAA zu untersuchen und potenzielle therapeutische Ziele zu testen, wurden mehrere experimentelle AAA-Modelle erstellt 9,10. Nagetiermodelle von AAA umfassen Elastase-, Calciumchlorid-, Angiotensin-II- und Xenograft-Modelle, unter denen das Elastase-induzierte AAA-Modell das am zweithäufigsten verwendete Modell 10,11,12,13,14,15,16,17 ist. Dieses Modell beinhaltet eine direkte Infusion oder Anwendung der porcinen Pankreaselastase (PPE) auf das infrarenale Segment der Aorta. Das Eindringen von Elastase in die mediale Schicht der Aorta führt zum Abbau elastischer Lamellen und zur Infiltration von Entzündungszellen, was zum Verlust der Integrität der Aortenwand und zur anschließenden Erweiterung der Bauchaortaführt 7,18. Das Elastase-induzierte AAA-Modell wurde erstmals 1990 von Anidjar et al. an Ratten berichtet, bei denen ein isoliertes Segment der Aorta mit Elastase17 durchblutet wurde. Später im Jahr 2012 wurde ein modifiziertes Modell mit einer periadventitiellen Anwendung von PSA von Bhamidipati et al.19 berichtet. Heutzutage sind die meisten Operationen für das Elastase-induzierte AAA-Modell von Bhamidipatis Gruppe inspiriert und werden mit der externen Anwendung und nicht mit intraluminaler Perfusion von PSA durchgeführt. Obwohl die externe Anwendung weniger Anforderungen an feine chirurgische Fähigkeiten stellt, ist die Inzidenzrate von AAA relativ niedriger und die Größe etwas kleiner als die der intraluminalen Perfusion11,19.
Obwohl das Elastase-induzierte AAA-Modell in AAA-Studien weit verbreitet ist, weist es bestimmte Einschränkungen auf. Ein Vorbehalt dieses Modells sind die unvermeidlichen Variationen der Art und Weise, wie die Operation durchgeführt wird, was zu dem Problem der Reproduzierbarkeit führen kann. Zum Beispiel kann der Unterschied im chirurgischen Verfahren bestehen, wie das infrarenale Segment der Aorta isoliert wird und welcher Teil des Segments für die PSA-Anwendung in verschiedenen Labors ausgewählt wird. Die enzymatische Aktivität von PSA und die Zeitdauer der PSA-Inkubation können ebenfalls variieren. Dies sind jedoch alles wesentliche Determinanten, die die eventuelle AAA-Bildungsrate und den Aneurysmadurchmesser beeinflussen. Die Variation dieser kritischen Determinanten macht den Datenvergleich von AAA-Studien aus verschiedenen Gruppen mit diesem Modell sehr schwierig. Daher ist ein standardisierter chirurgischer Eingriff als Werkzeug erforderlich, um vergleichbare Ergebnisse von verschiedenen Institutionen zu erhalten.
Dieser Artikel beschreibt ein standardisiertes chirurgisches Protokoll für das Elastase-induzierte AAA-Modell durch direkte Anwendung von PSA auf die Adventitia der infrarenalen Bauchaorta bei Mäusen. Details über chirurgisches Material und Verfahren, die für eine erfolgreiche und robuste Erzeugung von AAA bei Mäusen mit diesem Modell unerlässlich sind, werden ebenfalls diskutiert.
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Protocol
Die Tierprotokolle wurden vom University of Michigan Institutional Animal Care and Use Committee (PRO00010092) genehmigt. Männliche und weibliche C57BL/6J Wildtyp-Mäuse (WT) im Alter von ~ 7 Wochen wurden für die Experimente verwendet.
1. Tierpräparation
- Füttern Sie die Mäuse vor und nach der Operation mit der Standard-Chow-Diät (siehe Materialtabelle).
HINWEIS: Verschiedene Stämme und Altersstufen von Mäusen können verwendet werden. Es wird jedoch empfohlen, ein Alter von 5,5 bis 12 Wochen alt zu sein, um eine maximale Inzidenzrate zu erreichen. - Verabreichen Sie für jede Maus 30 Minuten vor der Einleitung der Anästhesie 5 mg/kg Carprofen subkutan.
- Nach 30 min 100 mg/kg Ketamin und 5 mg/kg Xylazine über intraperitoneale Injektion verabreichen, um eine Anästhesie zu induzieren.
2. Vorbereitung auf die Operation
- Bereiten Sie das chirurgische Material vor.
- Schneiden Sie die Nitrilhandschuhe in Streifen von 4 cm x 4 mm. Schneiden Sie die Wattepads in Stücke von 3 cm x 2 mm. Autoklavieren Sie diese mit anderen chirurgischen Instrumenten, einschließlich chirurgischer Scheren, Gewebezange und Halsted-Moskito-Hämostaten (siehe Materialtabelle).
- Legen Sie die Maus in Rückenlage auf ein steriles, saugfähiges Verbandspad. Immobilisieren Sie die Vorder- und Hinterpfoten mit chirurgischem Klebeband.
- Verwenden Sie Applikatoren mit Baumwollspitze (siehe Materialtabelle), um die Haarentfernerlotion über den mittleren und unteren Bauchbereich zu bürsten, und tupfen Sie dann den Bereich mit chirurgischer Gaze ab, um die Haare zu entfernen.
- Desinfizieren Sie den Operationsbereich mindestens dreimal in einer kreisförmigen Bewegung mit abwechselnden Anwendungen von 70% Alkohol und einem Peeling auf Jod- oder Chlorhexidinbasis. Trocknen lassen.
3. Chirurgischer Eingriff
- Führen Sie die folgenden Schritte aus, um auf die Bauchhöhle zuzugreifen.
- Testen Sie die Maus auf das Fehlen einer Zehenklemmreaktion vor dem Hautschnitt.
- Machen Sie einen 2,5 cm langen Längseinschnitt auf der Haut entlang der Mittellinie des Mittel- und Unterbauches mit einer chirurgischen Schere.
- Ziehen Sie den darunter liegenden Muskel vorsichtig hoch und machen Sie einen 2,5 cm langen Längseinschnitt entlang der Linea alba, um Zugang zur Bauchhöhle zu erhalten.
- Legen Sie die Bauchaorta frei.
- Verwenden Sie benetzte Applikatoren mit Baumwollspitze, um den Darm und den Magen auf die rechte Seite der Maus zu bewegen.
HINWEIS: Im Idealfall wird dadurch das infrarenale Segment der Aorta freigelegt. Wenn die Aorta schwer zu lokalisieren ist, können die rechte Niere und die rechte Nierenarterie die Aorta identifizieren (da die rechte Niere eine etwas niedrigere anatomische Lage hat als die linke Niere). - Verwenden Sie eine Pinzette, um das Bindegewebe, das die Bauchaorta und die Hohlvene inferior (IVC) bedeckt, vorsichtig zu entfernen.
HINWEIS: Die Bauchaorta und IVC sind in derselben Gefäßscheide enthalten. Es ist unnötig, das gesamte Bindegewebe zu entfernen, da eine vollständige Entfernung das Risiko einer Beschädigung dieser beiden Gefäße erhöhen würde. - Verwenden Sie eine Pinzette, um die Rückseite der Bauchaorta und IVC sanft von den darunter liegenden Muskeln zu sezieren.
HINWEIS: Spitzen der Pinzette sollten quer in die Rückseite der Scheide gehen und ein Loch in der Faszie erzeugen, das die Hülle mit den darunter liegenden Muskeln verbindet. Sobald das Loch gemacht ist, erweitern Sie seine Größe, indem Sie die Pinzette langsam loslassen. - Legen Sie ein Stück des 4 cm x 4 mm großen Handschuhstreifens (wie bereits erwähnt, Schritt 2.1.1) durch die Rückseite der Bauchaorta und IVC, dann richten Sie den Streifen aus. Platzieren Sie den Streifen ~ 0,5 cm von der rechten Nierenarterie entfernt.
HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass das Loch groß genug ist, damit die umgebende Faszie den Streifen nicht verdreht. - Über dem Streifen ein Stück 3 cm x 2 mm Wattepad durch die Rückseite der Bauchaorta und IVC legen und dann das Wattepad begradigen.
- Verwenden Sie benetzte Applikatoren mit Baumwollspitze, um den Darm und den Magen auf die rechte Seite der Maus zu bewegen.
- Inkubieren Sie die Elastase.
- Verwenden Sie eine Pipette, um 30 μL Schweinepankreas-Elastase (Gesamtenzymaktivität von 1,8 Einheiten, siehe Materialtabelle) auf das Aortensegment über dem Wattepad zu tropfen, wickeln Sie dann das Wattepad und streifen Sie es um die Aorta und IVC. Spülen Sie ein Stück 10 cm x 10 cm Gaze mit steriler 0,9% Kochsalzlösung ab und legen Sie es auf den Bauch.
HINWEIS: Die Gaze muss nur teilweise gespült werden, da eine Übertreibung die darunter liegende Elastase verdünnen könnte. - Nach 30 min den Streifen und das Wattepad mit einer Pinzette entfernen.
- Verwenden Sie eine Pipette, um 30 μL Schweinepankreas-Elastase (Gesamtenzymaktivität von 1,8 Einheiten, siehe Materialtabelle) auf das Aortensegment über dem Wattepad zu tropfen, wickeln Sie dann das Wattepad und streifen Sie es um die Aorta und IVC. Spülen Sie ein Stück 10 cm x 10 cm Gaze mit steriler 0,9% Kochsalzlösung ab und legen Sie es auf den Bauch.
- Schließen Sie die Bauchhöhle mit den folgenden Schritten.
- Bewässern Sie die Aorta und die Bauchhöhle mit 500 μL steriler 0,9% Kochsalzlösung. Verwenden Sie eine 10 cm x 10 cm große Gaze, um die verbleibende Kochsalzlösung zu absorbieren.
- Reapproximieren Sie die Muskelschichten mit einer laufenden 6-0 nicht resorbierbaren monofilen Naht.
- Schließen Sie die Haut mit 3-4 unterbrochenen 6-0 nicht resorbierbaren monofilen Nähten.
4. Nachsorge
- Verabreichen Sie 5 mg/kg Carprofen subkutan am postoperativen Tag 1.
- Entfernen Sie Hautnähte am postoperativen Tag 10.
5. Messung des Durchmessers des Bauchaortenaneurysmas
- Euthanasie die Mäuse durch CO2 Überdosierung am postoperativen Tag 14. Dies stellt den Zeitpunkt der maximalen Dilatation dar.
- Greifen Sie wie in Schritt 3.1 beschrieben auf die Bauchhöhle zu.
- Führen Sie eine vaskuläre Perfusion durch, indem Sie 10 ml 0,9% Kochsalzlösung durch den linken Ventrikel in den Kreislauf injizieren.
- Belichten Sie das infrarenale Segment der Bauchaorta, wie in den Schritten 3.1-3.2 beschrieben. Entfernen Sie vorsichtig das umgebende Bindegewebe und trennen Sie die Bauchaorta von IVC.
- Messen Sie den Durchmesser der Bauchaorta mit einem Bremssattel.
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Representative Results
Insgesamt dreiundzwanzig 7 Wochen alte Wildtyp-Mäuse (WT), darunter 12 Weibchen und 11 Männchen, wurden nach dem vorgestellten Protokoll operiert. Die Überlebensrate betrug 100% (chirurgische Mortalität ausgeschlossen). Der maximale Durchmesser der Bauchaorta wurde mit einem Bremssattel gemessen.
AAA wurde definiert als Erweiterung der Bauchaorta mit einer 50%igen Gefäßdurchmesserzunahme. Daher wurde eine 50%ige Erhöhung des maximalen Bauchaortendurchmessers als Cut-off-Punkt für eine erfolgreiche AAA-Induktion gewählt. Basierend auf diesem Kriterium betrug die Inzidenzrate von AAA am postoperativen Tag 14 91,7% für weibliche Tiere, wobei 11 von 12, die sich einer Operation unterzogen hatten, AAA entwickelten; während die Inzidenzrate für männliche Tiere 72,7% betrug, entwickelten 8 von 11, die sich einer Operation unterzogen, AAA (Abbildung 1A). Unter den 19 Tieren, bei denen AAA auftritt, gibt es eine 1,7-fache und 1,6-fache Zunahme des maximalen Bauchaortendurchmessers bei Frauen und Männern im Vergleich zu nicht-chirurgischen Kontrollen (Abbildung 1B). Repräsentative Bilder der Aorten von nicht-chirurgischen und chirurgischen Gruppen am postoperativen Tag 14 sind in Abbildung 1C dargestellt.
Abbildung 1: Charakterisierung der AAA bei Mäusen, die einer Operation unterzogen wurden. Alle Messungen werden am postoperativen Tag 14 durchgeführt. (A) Die Inzidenzrate von AAA bei Mäusen, die operiert wurden. (B) Maximaler Durchmesser der infrarenalen Aorta bei Mäusen sowohl aus nicht-chirurgischen (n = 4 für weibliche als auch männliche Gruppen) und chirurgischen Gruppen (n = 12 für weiblich; n = 11 für männlich). Die Daten sind gemein ± SEM. *p < 0,05. (C) Repräsentative Bilder von Aorten bei Mäusen sowohl aus nicht-chirurgischen als auch aus chirurgischen Gruppen. Maßstabsleiste = 2 mm. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung zu sehen.
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Discussion
Das Elastase-induzierte AAA-Modell wurde erstmals 1990 von Anidjar et al. mit Ratten berichtet17. In den letzten dreißig Jahren wurde eine Vielzahl von modifizierten Versionen eingeführt, zusammen mit einer signifikanten Verbesserung der chirurgischen Techniken 19,20,21,22. Hunderte von Instituten verwenden Elastase-induzierte AAA-Modelle als das am zweithäufigsten verwendete experimentelle Nagetiermodell für AAA-Studien12. Es ist nur natürlich, dass verschiedene Gruppen die Operation für dieses Modell etwas anders durchführen. Infolgedessen ist ein Vorbehalt dieses Modells die unvermeidlichen Variationen der Art und Weise, wie die Operation durchgeführt wird, was den Vergleich von Daten aus verschiedenen Gruppen mit diesem Modell sehr schwierig macht. Zu den Variationen gehören unter anderem, wie infrarenales Segment der Aorta freigelegt wird, wie umfangreich die Faszienschicht, die die Aorta bedeckt, gereinigt wird, wie lange die Inkubationszeit ist, sowie das Material, das für die Aortenumhüllung und Elastaseinkubation verwendet wird, und das Volumen der Elastase, die dem Wickelmaterial zugesetzt wird. Dies sind jedoch alles wesentliche Determinanten, die die eventuelle Inzidenzrate und den Durchmesser von AAA beeinflussen. Ein standardisierter chirurgischer Eingriff ist erforderlich, um das Problem der Reproduzierbarkeit zu lösen, das durch diese Variationen verursacht wird. Hier wird ein standardisiertes Operationsprotokoll für das Elastase-induzierte AAA-Modell durch direkte Anwendung von PSA auf die Adventitia der infrarenalen Bauchaorta in der Maus vorgestellt.
Abgesehen von der konsistenten Induktionsrate von AAA besitzt dieses Protokoll die Vorteile niedriger Kosten und kurzer Betriebszeiten. Das in diesem Protokoll verwendete chirurgische Material kann leicht zu niedrigen Kosten beschafft werden. Die durchschnittliche Betriebszeit dieses Protokolls beträgt 50 min, einschließlich 30 min PSA-Inkubation. Diese Vorteile werden die Durchführung vieler Tierversuche erleichtern und zu einer größeren statistischen Aussagekraft und Reproduzierbarkeit beitragen.
Die Exposition der Bauchaorta ist der kritischste Schritt in diesem Protokoll. Es ist wichtig, das Bindegewebe in der Gefäßscheide, die die Bauchaorta und IVC umgibt, zu entfernen, damit die Elastase eine bessere Chance hat, in die mediale Schicht der Aorta einzudringen. Die vollständige Entfernung dieses Bindegewebes ist jedoch zeitaufwendig und birgt das Risiko, die darunter liegende Aorta und IVC zu schädigen. Dies ist der Schritt, aus dem die meisten chirurgischen Mortalitäten verursacht werden. Wenn IVC oder Aorta beschädigt ist, werden die meisten Tiere die folgenden 48 h nicht überleben, selbst wenn sie die Operation überleben, möglicherweise aufgrund der anhaltenden Blutung nach der Operation, die zur Exsanguination führt. Aus diesem Grund muss über ein empfindliches Gleichgewicht zwischen der größtmöglichen Exposition der Aorta und der Nichtbeschädigung der großen Gefäße nachgedacht werden. Wenn Sie eine kleine Menge Bindegewebe auf der Gefäßscheide belassen, wird die perioperative Mortalität signifikant reduziert, ohne das Auftreten von AAA zu beeinflussen. Daher wird nicht empfohlen, das Bindegewebe, das die Aorta und IVC bedeckt, für die Exposition gegenüber der Bauchaorta vollständig zu entfernen. Dennoch ist bei der Bauchaorta und der IVC-Dissektion aus dem angrenzenden Bindegewebe äußerste Vorsicht geboten.
Anatomisch sind die Bauchaorta und IVC über eine dünne Faszienschicht eng verbunden und in derselben Gefäßscheide enthalten. Einige experimentelle Modelle wie venöse Thrombosen erfordern möglicherweise die Trennung der Aorta von der benachbarten IVC. Dies ist jedoch im Elastase-induzierten AAA-Modell23 nicht erforderlich. Einige ziehen es vor, die Gefäßscheide im Uhrzeigersinn zu drehen, so dass die Aorta direkt über IVC liegt und Elastase dann direkt auf die Aorta aufgetragen werden kann. Dies ist unnötig, da das Wattepad darunter mit Elastase gesättigt ist und die Aorta unabhängig von ihrer anatomischen Beziehung zu IVC kontinuierlich Elastase ausgesetzt ist. Es wird empfohlen, die Rückseite der Aorta und IVC über eine Pinzette ausreichend von den darunter liegenden Muskeln zu trennen. Falls die Dissektion in diesem Schritt nicht umfangreich genug ist, wird eine Spannungskraft durch die umgebenden Faszien und Muskeln auf dem Streifen und Wattepad erzeugt, was zu ihrer Verdrehung und anschließender ineffizienter Absorption von Elastase führt.
Eine Einschränkung dieses Protokolls ist die letztendliche Form der induzierten AAA. Es ist unvermeidlich, dass beim Fallen auf die Aorta etwas Elastase in andere Segmente der Aorta fließt, die nicht vom Wattepad umwickelt sind. Darüber hinaus können Blutungen in der Nähe, die durch Dissektion verursacht werden, selbst von geringer Menge, Elastase während der 30-minütigen Inkubationszeit vom Wattepad zu anderen Aortensegmenten abwaschen. Diese führen dazu, dass Elastase in andere Segmente der Aorta eindringt, wodurch der Abbau der medialen Schicht und die Erweiterung der Bauchaorta verursacht werden, die nicht auf das vom Wattepad umwickelte Segment beschränkt ist. Infolgedessen zeigen einige Tiere, anstatt fusiforme Aneurysmen zu zeigen, die durch fokale Dilatation verursacht werden, eine allgemeine Dilatation eines langen Abschnitts der Bauchaorta. Der maximale Aortendurchmesser bei diesen Tieren, die eine kontinuierliche Erweiterung der Aorta aufweisen, zeigt jedoch im Vergleich zu Kontrollen immer noch eine Zunahme von mehr als 50%. In der Zwischenzeit wird kein Unterschied im maximalen Aortendurchmesser zwischen Tieren beobachtet, die eine kontinuierliche Dilatation und fokale Dilatation der Bauchaorta aufweisen, was darauf hindeutet, dass die Form des Aneurysmas weder ein Indikator für eine erfolgreiche AAA-Induktion noch für die tatsächliche AAA-Größe in diesem Fall ist.
Eine weitere Einschränkung dieses Protokolls ist die Anwendung dieser Methode auf größere Tiere. Das topische Elastase-induzierte AAA-Modell sollte leicht auf andere Kleintiere wie Ratten angewendet werden können. Elastase allein reicht jedoch möglicherweise nicht aus, damit größere Tiere wie Schweine oder Primaten einen konsistenten AAA-Phänotyp induzieren. Zum Beispiel berichteten Marinov et al., dass die Elastaseperfusion allein bei Schweinen einige histologische Veränderungen verursachen könnte, einschließlich Elastinstörungen, aber kein konsistentes Aneurysmainduzieren konnte 24. Shannon A et al. berichteten über ein porcines Modell der infrarenalen AAA, die durch Elastase induziert wurde. Es erfordert jedoch eine Kombination aus Ballonangioplastie, Perfusion, topischer Elastase und einer Diät, die BAPN (ein Lysyloxidase-Hemmer, der die Kollagenvernetzung verhindert) enthält, da die Aorta25 erheblich haltbar ist. Daher scheint es, dass die Anwendung eines standardisierten Elastase-induzierten AAA-Protokolls bei größeren Tieren aufgrund des Unterschieds in Größe und Haltbarkeit der Aorta zwischen Mäusen und größeren Tieren, der technischen Herausforderungen und der potenziell hohen Kosten immer noch eine ziemliche Herausforderung darstellt.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass AAA trotz einiger Einschränkungen in diesem standardisierten Protokoll sowohl bei männlichen als auch bei weiblichen Mäusen konsistent induziert werden kann. Es wird erwartet, dass die Konsistenz und Reproduzierbarkeit von AAA-Studien unter Verwendung des Elastase-induzierten AAA-Modells durch die Etablierung dieses chirurgischen Standardverfahrens erheblich verbessert wird.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts offenzulegen.
Acknowledgments
Wir danken der Abteilung für Labortiermedizin der University of Michigan für ihre Hilfe bei der Tierfütterung und -zucht. Diese Studie wird von NIH RO1 HL138139, NIH RO1 HL153710 an J. Zhang, NIH RO1 HL109946, RO1 HL134569 an Y.E. Chen und dem American Heart Association Grant 20POST35110064 an G. Zhao unterstützt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 6-0 non-absorbable monofilament suture | Pro Advantage | P420697 | |
| Carprofen | Zoetis Inc. | NDC: 54771-8507 | |
| Chow Diet | LabDiet | 3005659-220 | PicoLab 5L0D |
| Cotton Applicator | Dynarex | 4303 | |
| Cotton Pad | Rael | UPC: 810027130969 | |
| GraphPad Prism 8 | GraphPad Software Inc. | Version 8.4.3 | |
| Grarfe Forceps | Fine Science Tools | 11051-10 | |
| Halsted Mosquito Hemostats | Fine Science Tools | 13009-12 | |
| Ketamine | Par Pharmaceutical | NDC: 42023-0115-10 | |
| Nitrile gloves | Fisherbrand | 19-130-1597 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15140122 | |
| Porcine pancreatic elastase | Sigma-Aldrich | E1250-100MG | |
| Scissors | Fine Science Tools | 14068-12 | |
| Sterile 0.9% saline solution | Baxter | 2B1324X | |
| Xylazine | Akorn | NDC: 59399-110-20 |
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