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एंजियोटेंसिन द्वितीय इन्फ्यूश़न द्वारा प्रेरित उच्च रक्तचाप में सुधार

Published: May 26, 2022 doi: 10.3791/63719
Automatic Translation
*1,2, *1,2, 1,2, 1,2, 1,2, 1,2
1Department of Cardiology, Huadong Hospital Affiliated to Fudan University, 2Shanghai Key Laboratory of Clinical Geriatric Medicine
* These authors contributed equally

Summary

यहां, हम एंजियोटेंसिन II जलसेक से प्रेरित उच्च रक्तचाप वाले चूहों में गुर्दे सहानुभूति डेनेरवेशन (आरडीएन) के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। प्रक्रिया दोहराने योग्य, सुविधाजनक है और उच्च रक्तचाप और कार्डियक हाइपरट्रॉफी पर आरडीएन के नियामक तंत्र का अध्ययन करने की अनुमति देती है।

Abstract

रक्तचाप पर गुर्दे सहानुभूति डेनेरवेशन (आरडीएन) के लाभ हाल के वर्षों में बड़ी संख्या में नैदानिक परीक्षणों में साबित हुए हैं। हालांकि, उच्च रक्तचाप पर आरडीएन का नियामक तंत्र अभी भी अस्पष्ट है। इस प्रकार, चूहों में एक सरल आरडीएन मॉडल स्थापित करना आवश्यक है। इस अध्ययन में, एंजियोटेंसिन II से भरे आसमाटिक मिनी पंप 14 सप्ताह के C57BL /6 चूहों में प्रत्यारोपित किए गए थे। मिनी-आसमाटिक पंप के आरोपण के एक सप्ताह बाद, फिनोल का उपयोग करके चूहों के द्विपक्षीय गुर्दे की धमनियों पर एक संशोधित आरडीएन प्रक्रिया की गई थी। आयु-लिंग-मिलान चूहों को खारा दिया गया और शाम समूह के रूप में परोसा गया। रक्तचाप को बेसलाइन पर मापा गया और हर हफ्ते बाद में 21 दिनों के लिए। फिर, एच एंड ई और मैसन स्टेनिंग का उपयोग करके हिस्टोलॉजिकल परीक्षा के लिए गुर्दे की धमनी, पेट की महाधमनी और हृदय एकत्र किए गए थे। इस अध्ययन में, हम एक सरल, व्यावहारिक, दोहराने योग्य और मानकीकृत आरडीएन मॉडल प्रस्तुत करते हैं, जो उच्च रक्तचाप को नियंत्रित कर सकता है और कार्डियक हाइपरट्रॉफी को कम कर सकता है। तकनीक गुर्दे की धमनी क्षति के बिना परिधीय गुर्दे सहानुभूति तंत्रिकाओं को कम कर सकती है। पिछले मॉडलों की तुलना में, संशोधित आरडीएन उच्च रक्तचाप के पैथोबायोलॉजी और पैथोफिज़ियोलॉजी के अध्ययन की सुविधा प्रदान करता है।

Introduction

उच्च रक्तचाप दुनिया भर में एक प्रमुख पुरानी कार्डियोवैस्कुलर बीमारी है। अनियंत्रित उच्च रक्तचाप लक्षित अंगों को नुकसान पहुंचा सकता है और दिल की विफलता, स्ट्रोक और क्रोनिक किडनी रोगों में योगदान कर सकता है 1,2,3. चीन में 1991 और 2007 के बीच उच्च रक्तचाप की व्यापकता 20% से बढ़कर 31% हो गई है। चीन में उच्च रक्तचाप वाले वयस्कों की संख्या उच्च रक्तचाप (130/80 मिमीएचजी) के लिए नैदानिक मानदंडों के हालिया संशोधन के बाद दोगुनी हो सकती है। उच्च रक्तचाप को दवा द्वारा नियंत्रित किया जा सकता है, हालांकि, लगभग 20% रोगी अपने उच्च रक्तचाप को नियंत्रित करने में असमर्थ होते हैं, यहां तक कि अधिकतम सहनशील खुराक पर कम से कम तीन एंटीहाइपरटेंसिव दवाएं (एक मूत्रवर्धक सहित) प्राप्त करते समय, जिससे दवा प्रतिरोधी उच्च रक्तचाप का विकास हो सकताहै।

गुर्दे सहानुभूति अवसाद (आरडीएन) उच्च रक्तचाप के लिए एक संभावित उपचार साबित हुआ है। 2009 में, क्रुम और सहयोगियों ने पहली बार आरडीएन का उपयोग करके प्रतिरोधी उच्च रक्तचाप उपचार की सूचना दी। यह पाया गया कि पर्क्युटेनियस रीनल आर्टरी एब्लेशन प्रभावी रूप से रोगियों में लगातार रक्तचाप में कमी का कारण बनसकता है। हालांकि, सिम्पिसिटी हाइपरटेंशन 3 (एचटीएन -3) परीक्षण की विफलता ने आरडीएन7 के आवेदन को बाधित किया, आरडीएन को एक विवादास्पद चिकित्सा में बदल दिया। फिर भी, आरडीएन की संभावना को अभी तक खारिज नहीं किया गया है। रेडियंस-एचटीएन सोलो, स्पायरल एचटीएन-ऑफ मेड/ऑन मेड और स्पायरल एचटीएन-ऑफ मेड सि्टिक्शन सहित हाल के नैदानिक परीक्षणों ने उच्च रक्तचाप 8,9,10,11,12 पर आरडीएन की प्रभावकारिता की पुष्टि की है। इस प्रकार, आरडीएन के प्रभावों का पता लगाने के लिए अधिक विस्तृत यांत्रिक अनुसंधान करने की आवश्यकता है।

इस अध्ययन का समग्र उद्देश्य यह प्रदर्शित करना है कि चूहों में आरडीएन को एक सरल और अधिक स्थिर सर्जरी का उत्पादन करने के लिए कैसे संशोधित किया जा सकता है। बड़ी संख्या में प्रयोगों ने आरडीएन के विभिन्न दृष्टिकोणों का अध्ययन किया है, जैसे कि इंट्रावास्कुलर क्रायोएबलेशन, एक्स्ट्राकोर्पोरियल अल्ट्रासाउंड और विभिन्न पशु मॉडल13,14,15,16,17 में एक रासायनिक या न्यूरोटॉक्सिन का स्थानीय अनुप्रयोग। फिनोल के साथ रासायनिक पृथक्करण का उपयोग करके उत्पन्न आरडीएन मॉडल उच्च रक्तचाप पर सहानुभूति सक्रियण के रोगजनन का अध्ययन करने के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित प्रयोगात्मक मॉडल है। यह मॉडल कपास के स्वैब18 का उपयोग करके 10% फिनोल / इथेनॉल समाधान के साथ गुर्दे सहानुभूति तंत्रिकाओं के रासायनिक संक्षारण द्वारा उत्पन्न होता है। एक तरफ, पारंपरिक आरडीएन संभावित रूप से गुर्दे की सहानुभूति गतिविधि को रोकता है, जो तब रेनिन स्राव और सोडियम पुन: अवशोषण को कम करता है, और गुर्दे के रक्त प्रवाह को बढ़ाता है। दूसरी ओर, यह रेनिन-एंजियोटेंसिन-एल्डोस्टेरोन सिस्टम19 को दबा देता है। जिससे आरडीएन का उच्च रक्तचाप पर लाभकारी प्रभाव पड़ता है। हालांकि, रासायनिक पृथक्करण उत्पन्न आरडीएन मॉडल में पृथक्करण मानदंड और पृथक्करण समय का अभाव है और प्रयोगात्मक प्रक्रिया का विवरण अभी तक स्पष्ट नहीं है। इसके अलावा, कोई तकनीकी रिपोर्ट उपलब्ध नहीं है। इस रिपोर्ट में, हम सी 57बीएल / 6 चूहों में एंजियोटेंसिन II (एंग द्वितीय) प्रेरित उच्च रक्तचाप में वजन कागज का उपयोग करके फिनोल के साथ आरडीएन मॉडल की पीढ़ी के लिए एक सर्जिकल प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। हम फिनोल युक्त वजन पेपर के साथ गुर्दे की धमनी को लपेटते हैं और पृथक्करण समय को एकीकृत करते हैं, जो एक अधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य, विश्वसनीय आरडीएन मॉडल स्थापित करने में मदद करता है। इस प्रयोगात्मक मॉडल का उद्देश्य उच्च रक्तचाप पर आरडीएन के प्रभाव का मूल्यांकन करना है।

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Protocol

सभी पशु प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं ने प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए प्रासंगिक नैतिक गाइड (एनआईएच प्रकाशन संख्या 85-23, संशोधित 2011) का अनुपालन किया और फुदान विश्वविद्यालय से संबद्ध हुआडोंग अस्पताल के पशु अनुसंधान पर समितियों द्वारा अनुमोदित किया गया। चौदह सप्ताह के नर C57BL/6 चूहों (28-30g) को यादृच्छिक रूप से चार समूहों में विभाजित किया गया था: शाम समूह, शाम + अंग II समूह, RDN समूह, RDN + Ang II समूह, n = 6 प्रत्येक समूह में। सभी जानवरों को 24 ± 1 डिग्री सेल्सियस पर तापमान-नियंत्रित कमरे में विशिष्ट बंद रोगज़नक़-मुक्त परिस्थितियों में 12 घंटे प्रकाश / अंधेरे चक्र और मानक कृंतक चाउ और पानी एड लिबिटम तक मुफ्त पहुंच के साथ बनाए रखा गया था।

1. ऑपरेशन क्षेत्र की तैयारी

  1. 70% इथेनॉल के साथ ऑपरेशन टेबल को कीटाणुरहित करें। हीटिंग पैड तापमान को 37 डिग्री सेल्सियस पर समायोजित करें।
  2. सुनिश्चित करें कि सभी सर्जिकल उपकरणों को सर्जरी से पहले 30 मिनट के लिए या अन्य तरीकों से 121 डिग्री सेल्सियस पर निष्फल किया जाता है। इस प्रक्रिया के लिए माइक्रो सर्जिकल कैंची, दो महीन सीधे बल, दो महीन घुमावदार बल, हेमोस्टैटिक फोर्स, बाँझ धुंध और वजन कागज की आवश्यकता होती है।

2. एंजियोटेंसिन द्वितीय प्रेरित उच्च रक्तचाप

  1. संज्ञाहरण प्रेरण से कुछ समय पहले सी 57बीएल / 6 चूहों को मेलोक्सिकैम (0.5 मिलीग्राम / किग्रा, एससी) प्रदान करें। फिर, सोडियम पेंटोबार्बिटल इंजेक्शन का उपयोग करके चूहों को एनेस्थेटाइज करें जैसा कि पहले वर्णित20,21 है। यदि पसंद किया जाता है, तो आइसोफ्लुरेन का भी उपयोग किया जा सकता है। नकारात्मक पैर की अंगुली पिंच रिफ्लेक्स के साथ संज्ञाहरण गहराई की पुष्टि करें।
  2. दाढ़ी से पीठ के बालों को हटा दें। एनेस्थीसिया के तहत सूखापन को रोकने के लिए आंखों पर पशु चिकित्सक मलहम लागू करें।
  3. पृष्ठीय स्थिति में एक ऑपरेटिंग टेबल पर जानवर रखें। पोविडोन-आयोडीन के साथ मुंडा क्षेत्र को स्वैब और पोंछें और उसके बाद 70% इथेनॉल के साथ तीन पोंछे।
  4. सामने के पैर के कंधे के ब्लेड पर कान के पीछे, पूंछ के लंबवत, बाँझ स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करके 1 सेमी चीरा लगाएं।
  5. त्वचा के नीचे एक चमड़े के नीचे सुरंग बनाने के लिए एक बाँझ हेमोस्टैट का उपयोग करें और पंप22 के लिए एक जेब बनाएं। एंजियोटेंसिन II (1,000 ng/ kg / min) से भरा एक आसमाटिक पंप धीरे से जेब में डालें। सुनिश्चित करें कि त्वचा को खींचने के बिना घाव को सीवन करने के लिए पर्याप्त खाली जगह है।
  6. बाधित 6-0 विक्रिल सीवन के साथ मांसपेशियों को सींच करें और बाधित 4-0 नायलॉन सीवन के साथ त्वचा को बंद करें। घाव स्थल को पॉविडोन-आयोडीन से पोंछें। नियंत्रण समूह के लिए खारा की समान मात्रा के साथ एक ही सर्जरी करें।
  7. सभी सर्जिकल उपकरणों को 10 सेकंड के लिए स्टरलाइज़र में रखें और सर्जरी के बीच बाँझ दस्ताने बदलें। पूरी तरह से ठीक होने तक सभी चूहों की निगरानी करें।
  8. पहले सप्ताह के दौरान दिन में कम से कम दो बार और बाद में हर दिन एक बार चूहों में घाव भरने की बारीकी से निगरानी और निरीक्षण करें, जिसमें लालिमा, सूजन और संक्रमण शामिल हैं। यदि एंग II जलसेक के दौरान चूहे मर जाते हैं तो तुरंत विच्छेदन करें।
  9. सचेत चूहों में पूंछ-कफ प्लेथिस्मोग्राफ़ी विधि23 के साथ एंग II जलसेक के बाद बेसलाइन पर और हर हफ्ते रक्तचाप को मापें। सुनिश्चित करें कि रक्तचाप माप प्रयोग 22 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर एक शांत क्षेत्र में आयोजित किए जाते हैं, जहां प्रयोग शुरू होने से पहले चूहों को 1 घंटे के लिए अनुकूलित किया जाता है। बेसलाइन रक्तचाप माप23,24 से पहले कम से कम 5 लगातार दिनों के लिए चूहों की आदत डालें।

3. द्विपक्षीय गुर्दे की कमी

  1. एंग II जलसेक के 1 सप्ताह बाद, ऊंचा रक्तचाप (बीपी) ≥140/90 मिमीएचजी या सिस्टोलिक बीपी / डायस्टोलिक बीपी में 25% की वृद्धि वाले चूहों का चयन करें।
  2. सर्जरी से पहले जानवरों के वजन को रिकॉर्ड करें और गुर्दे की निर्जलीकरण सर्जरी के लिए 24 ग्राम के न्यूनतम वजन वाले जानवरों का चयन करें।
  3. सोडियम पेंटोबार्बिटल का उपयोग करके चूहों को एनेस्थेटाइज करें। नकारात्मक पैर की अंगुली पिंच रिफ्लेक्स के साथ संज्ञाहरण गहराई की पुष्टि करें।
  4. पेट के बालों को शेवर से हटा दें। किसी भी सर्जिकल संदूषण से बचने के लिए इस प्रक्रिया को सावधानीपूर्वक और अच्छी तरह से करें।
  5. चूहों को ऑपरेटिंग टेबल पर रखें, पेट को ऊपर रखें और टेप के साथ अपने अंगों को ठीक करें। पोविडोन-आयोडीन के साथ पेट की त्वचा को कीटाणुरहित करें, इसके बाद 70% इथेनॉल के साथ तीन वाइप्स।
  6. स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करके 2 सेमी वेंट्रल मिडलाइन पेट चीरा लगाएं। बाईं गुर्दे की धमनी को उजागर करने के लिए 37 डिग्री सेल्सियस खारा में भिगोए गए धुंध के साथ आंत को वापस खींचें। घुमावदार चिमटी का उपयोग करके गुर्दे की धमनी से वसा को सावधानीपूर्वक लेकिन स्पष्ट रूप से विच्छेदित करें। (चित्र 1ए-सी)।
  7. वजन करने वाले कागज को बाँझ तेज कैंची के साथ गुर्दे की धमनी के समान आकार के आयत में काटें। संदर्भ के लिए, वजन वाले कागज को उसी आकार में काटें जैसा कि चित्र 1 सी में डॉटेड लाइन द्वारा दिखाया गया है।
    नोट: यह सर्जरी का एक महत्वपूर्ण हिस्सा है, एक ही आकार रखने के लिए एक समय में वजन कागज के कई टुकड़ों को काटने का प्रयास करें।
  8. वजन पेपर को कम से कम 30 सेकंड के लिए 10% फिनोल / इथेनॉल घोल में डुबोएं। बाएं गुर्दे की धमनी की सतह को कवर करें और पोत को वजन कागज के साथ लपेटें, 2 मिनट के लिए रखें (चित्रा 1 डी)। आसपास के ऊतकों की रक्षा के लिए धुंध का उपयोग करें ताकि वजन कागज को आसपास के गुर्दे और आंत को छूने से बचा जा सके।
    नोट: फिनोल समाधान प्लास्टिक ट्यूबों में स्थिर है लेकिन कांच की शीशियों में नहीं। इसलिए, समाधान को हर प्रयोग18 के लिए ताजा तैयार किया जाना चाहिए।
  9. दाहिने गुर्दे की धमनी के लिए एक ही प्रक्रिया करें। नमकीन में डूबे हुए तौल कागज के साथ शाम सर्जरी करें।
  10. मांसपेशियों को उनकी प्रारंभिक स्थिति में पुनर्स्थापित करें और पेरिटोनियम को बाधित सीवन में 6-0 विक्रिल सीवन के साथ बंद करें। फिर, बाधित 4-0 नायलॉन सीवन के साथ त्वचा को बंद करें। पूरी तरह से ठीक होने तक सभी चूहों की निगरानी करें।

4. पोस्ट-ऑपरेटिव देखभाल

  1. चीरा पर पोविडोन-आयोडीन लागू करें और जानवर को वसूली और पोस्ट-ऑपरेटिव निगरानी के लिए गर्म बिजली के कंबल में रखें।
  2. लालिमा, सूजन और दर्द या पेट के संक्रमण का आकलन करने के लिए दिन में दो बार चूहों की निगरानी करें। आरडीएन प्रक्रिया से लगभग 1 घंटे पहले और 24 घंटे बाद सभी चूहों को मेलोक्सिकैम (0.5 मिलीग्राम / किग्रा, एससी) प्रदान करें।

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Representative Results

सांख्यिकी
सभी डेटा को औसत ± मानक विचलन के रूप में व्यक्त किया जाता है। वन-वे एनोवा का उपयोग तीन या अधिक स्थितियों के साथ प्रयोगों के लिए किया गया था, जिसके बाद अलग-अलग समूहों के बीच तुलना के लिए बोनफेरोनी पोस्टहॉक परीक्षण किए गए थे। 0.05 के बराबर या उससे कम पी-मान को महत्वपूर्ण मानें। सभी सांख्यिकीय विश्लेषण करने के लिए एक वाणिज्यिक सॉफ्टवेयर का उपयोग किया गया था।

RDN के बाद Ang II द्वारा प्रेरित रक्तचाप में वृद्धि क्षीण हो गई थी
एंग II जलसेक के 1 सप्ताह बाद सिस्टोलिक बीपी (एसबीपी) में महत्वपूर्ण वृद्धि देखी गई। आरडीएन प्रक्रिया के 21 दिनों बाद शाम + एंग II समूह की तुलना में आरडीएन + एंग II समूह ने एसबीपी में महत्वपूर्ण कमी दिखाई (143.50 ± 5.43 बनाम 196.67 ± 14.26 मिमीएचजी, पी < 0.01)। आरडीएन के 2 सप्ताह बाद शाम समूह और आरडीएन समूह (113.33 ± 9.35 बनाम 113.17 ± 8.47 मिमीएचजी, पी > 0.05) के बीच कोई अंतर नहीं था (चित्रा 2)।

आरडीएन की पुष्टि और गुर्दे की धमनी की क्षति
एंग II जलसेक के 21 दिनों के बाद, जानवरों को सोडियम पेंटोबार्बिटल (250 मिलीग्राम / किग्रा) के इंट्रापरिटोनियल इंजेक्शन के साथ इच्छामृत्यु दी गई थी। दिल और गुर्दे एकत्र किए गए थे। गुर्दे की तंत्रिका और गुर्दे की धमनियों को नुकसान का पता लगाने के लिए एच एंड ई धुंधला किया गया था। परिणामों से पता चला कि प्रत्येक समूह में गुर्दे की संवहनी आंत की परत का कोई स्पष्ट मोटापन नहीं था (चित्रा 3 ए-डी)। गुर्दे की नसों के एच एंड ई धुंधला होने से आरडीएन (चित्रा 3 ई-एच) के कारण बड़ी संख्या में पाइनोटिक नाभिक, पाचन कक्ष और सूजन तंत्रिका नाभिक दिखाई दिए। तंत्रिका बंडलों के इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री से पता चला है कि आरडीएन समूह और आरडीएन + एंग द्वितीय समूह (चित्रा 4) में टायरोसिन हाइड्रॉक्सिलेज (टीएच, 1: 500 कमजोर पड़ने) की अभिव्यक्ति में काफी कमी आई थी। आरडीएन ने नॉर्मोटेंसिव और उच्च रक्तचाप से ग्रस्त समूह (शाम समूह बनाम आरडीएन समूह, 18.60 ± 6.91 बनाम 180.76 ± 11.47 एनजी / जी, पी < 0.01) दोनों में गुर्दे की कॉर्टिकल नॉरपेनेफ्रिन सामग्री को कम कर दिया; चित्र 5)।

आरडीएन उपचार ने एंग द्वितीय जलसेक प्रेरित पैथोलॉजिकल कार्डियक हाइपरट्रॉफी को कम किया
मैसन स्टेनिंग ने इन समूहों के बीच पेट की महाधमनी के इंटिमा मीडिया में कोई उल्लेखनीय वृद्धि नहीं दिखाई। आरडीएन उपचार द्वारा एंग II इन्फ्यूजन प्रेरित कार्डियक हाइपरट्रॉफी में सुधार किया गया था, जैसा कि अंतरालीय फाइब्रोसिस (0.28 ± 7.45% बनाम 4.53% ± 0.32, पी < 0.01) और कार्डियोमायोसाइट्स आकार (348.39 ± 31.56 बनाम 322.21 ± 22.26 μm, p = 0.37) में कमी से पता चला है; चित्र 6)।

Figure 1
चित्र 1: वजन कागज के साथ आरडीएन की प्रक्रिया( ए, बी) सी 57बीएल /6 (एक्स विवो) चूहों से गुर्दे की धमनी की शारीरिक छवियां। (सी) दो बिंदीदार रेखाओं के भीतर का हिस्सा वजन कागज द्वारा कवर किए गए क्षेत्र को संदर्भित करता है। (डी) द्विपक्षीय गुर्दे की धमनी की सतह को 10% फिनोल / इथेनॉल समाधान में डूबे हुए उचित वजन कागज के साथ कवर करना। डॉटेड लाइन से परे फ़िल्टर पेपर को कवर न करें। * वजन कागज को इंगित करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्रा 2: आरडीएन एंग II जलसेक द्वारा प्रेरित उच्च रक्तचाप को कम करता है। रक्तचाप को बेसलाइन पर टेल-कफ प्लेथिस्मोग्राफी विधि द्वारा मापा गया था और हर हफ्ते एंग II जलसेक के बाद। * सांख्यिकीय महत्व को इंगित करता है (पी < 0.05), ** सांख्यिकीय महत्व (पी < 0.01) को इंगित करता है। मानों को औसत ± मानक त्रुटि के रूप में दर्शाया जाता है; प्रत्येक समूह में एन = 6; आरडीएन + एंग II समूह इंगित करता है कि सी 57बीएल /6 चूहों में एंग II जलसेक के 1 सप्ताह बाद गुर्दे की कमी का ऑपरेशन किया गया था। संक्षिप्तीकरण: एसबीपी = सिस्टोलिक रक्तचाप। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्र 3: गुर्दे की सहानुभूति तंत्रिका और गुर्दे की धमनी की प्रतिनिधि छवियां (ए-डी) चार समूहों में गुर्दे की धमनी की आंत परत का मोटा होना नहीं देखा गया था। आरडीएन के बाद क्षतिग्रस्त गुर्दे की नसों की प्रतिनिधि छवियां। (ई-एच) आरडीएन और आरडीएन + एंग द्वितीय समूह दोनों में खंडित और पाइनोटिक नाभिक, पाचन, एंडोन्यूरल ऊतक की सूजन देखी गई। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्र 4: गुर्दे की सहानुभूति तंत्रिका में टायरोसिन हाइड्रॉक्सिलेज का इम्यूनोस्टेनिंग( ए) शाम-संचालित चूहों में टीएच-एंटीबॉडी धुंधला होने के लिए मजबूत सकारात्मक प्रतिक्रिया देखी गई, जबकि आरडीएन-संचालित चूहों में एक कमजोर प्रतिक्रिया देखी गई। स्केल बार = 50 μm. (B) गुर्दे की नसों में TH अभिव्यक्ति का परिमाणीकरण। ** सांख्यिकीय महत्व को इंगित करता है (पी < 0.01), एनएस महत्वपूर्ण नहीं दर्शाता है। मान मानक त्रुटि ± माध्य हैं; प्रत्येक समूह में एन = 6; आरडीएन + एंग II समूह इंगित करता है कि सी 57बीएल /6 चूहों में एंग II जलसेक के 1 सप्ताह बाद गुर्दे की कमी का ऑपरेशन किया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 5
चित्रा 5: एलिसा द्वारा विश्लेषण किए गए गुर्दे के कॉर्टिकल ऊतक नॉरपेनेफ्रिन के स्तर। इनरवेट किडनी की तुलना में डिनेरवेट किडनी में रीनल कॉर्टिकल नॉरपेनेफ्रिन सामग्री में स्पष्ट रूप से कमी आई थी। ** सांख्यिकीय महत्व को इंगित करता है (पी < 0.01), एनएस महत्वपूर्ण नहीं दर्शाता है। मान मानक त्रुटि ± माध्य हैं; प्रत्येक समूह में एन = 6; आरडीएन + एंग II समूह इंगित करता है कि सी 57बीएल / 6 में एंग II जलसेक के 1 सप्ताह बाद गुर्दे की कमी का संचालन किया जाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 6
चित्र 6: आरडीएन एंग द्वितीय प्रेरित पैथोलॉजिकल कार्डियक हाइपरट्रॉफी से राहत देता है। इन समूह (मैसन धुंधला) में पेट की महाधमनी की आंत परत का कोई मोटापन नहीं देखा गया था। (बी, सी) विभिन्न समूहों में मायोकार्डियम की प्रतिनिधि छवियां (एच एंड ई, मैसन धुंधला)। (डी) बाएं वेंट्रिकुलर क्षेत्र में फाइब्रोसिस के प्रतिशत का परिमाणीकरण और फाइब्रोसिस क्षेत्र के प्रतिशत (प्रति चूहों के दृश्य क्षेत्रों की संख्या) का विश्लेषण। स्केल बार = 50 μm. प्रत्येक समूह में N = 6; आरडीएन + एंग II इंगित करता है कि सी 57बीएल /6 में एंग II जलसेक के 1 सप्ताह बाद गुर्दे की कमी का ऑपरेशन किया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

क्या आरडीएन रक्तचाप को कम कर सकता है, यह विवादास्पद हो गया है क्योंकि एचटीएन -3 परीक्षण 7,25 के नकारात्मक परिणाम के प्रकाशन के बाद से। हालांकि, कई नैदानिक परीक्षणों और पशु प्रयोगों ने उच्च रक्तचाप से ग्रस्त मनुष्यों और जानवरों 9,10,11,12,13,14,15,16,17 पर आरडीएन के सकारात्मक और प्रभावी परिणामों का प्रदर्शन किया है। फिनोल का उपयोग जानवरों में गुर्दे की तंत्रिका के विनाश के लिए किया जाता है, और पिछले शोध में पृथक्करण का विवरण अज्ञात रहता है, जैसे कि पृथक्करण क्षेत्र और पृथक्करण समय, जिसनेविभिन्न परिणामों में योगदान दिया हो सकता है।

आरडीएन के लिए पारंपरिक तरीके, जैसे चूहों में फिनोल के साथ कपास के स्वैब का उपयोग करना, कैथेटर-आधारित पृथक्करण, और सूअर में स्टीरियोटैक्टिक रेडियोथेरेपी, गुर्दे की तंत्रिका 18,26,27,28 को नुकसान पहुंचाती है। ये विधियां चूहों के लिए भी उपयुक्त नहीं हैं, जिनका वजन केवल दसियों ग्राम है, और मृत्यु की अधिक संभावना है। इसके अलावा, ये विधियां गुर्दे की धमनी स्टेनोसिस का कारण बनती हैं। वास्तव में, हमने आरडीएन मॉडल तैयार किए और हमारे पूर्व-प्रयोग में इन तरीकों का उपयोग किया। हालांकि, 40/50 चूहों की मृत्यु हो गई। फिनोल के साथ कपास के स्वैब का उपयोग करने की विधि के परिणामस्वरूप उच्च मृत्यु दर हुई।

इस प्रकार, इस अध्ययन में, एक विधि जो आरडीएन के मानकीकृत प्रदर्शन को सक्षम करती है, लेकिन कम शल्य चिकित्सा कौशल और कम ऑपरेशन समय की आवश्यकता होती है। इथेनॉल समाधान-भिगोए हुए वजन वाले कागज का उपयोग किया, जिसे गुर्दे की धमनी पर 2 मिनट के लिए रखा गया था, जो चूहों में गुर्दे की सहानुभूति तंत्रिका को खराब करने के लिए एक विश्वसनीय विधि प्रदान करता है। गुर्दे की तंत्रिका के हिस्टोपैथोलॉजी द्वारा इसकी प्रभावशीलता की पुष्टि की जाती है। इसने एंग II द्वारा प्रेरित एसबीपी ऊंचाई को काफी कम कर दिया। इसके अलावा, इसने एंग द्वितीय-प्रेरित कार्डियक हाइपरट्रॉफी को भी कम किया। इसके अलावा, बेहतर प्रक्रिया में कई विशेषताएं हैं, जिनमें प्रदर्शन करने में आसान और पारंपरिक प्रक्रियाओं की तुलना में सफलता दर और जीवित रहने की दर में वृद्धि शामिल है।

प्रोटोकॉल का सबसे महत्वपूर्ण हिस्सा यह है कि फिनोल के साथ वजन कागज को आसपास के ऊतकों को नहीं छूना चाहिए, अन्यथा, यह घातक आंतों की रुकावट, पेट में संक्रमण और गुर्दे की धमनी स्टेनोसिस का कारण बन सकता है। यह सलाह दी जाती है कि गुर्दे के समाधान को न छुएं क्योंकि फिनोल की केवल थोड़ी मात्रा संभवतः गुर्दे की सहानुभूति अति सक्रियता का कारण बन सकतीहै। इसके अलावा, वजन कागज काटते समय विशेष ध्यान दिया जाना चाहिए। सर्जिकल कैंची के साथ माइक्रोस्कोप के नीचे इसे तैयार करना बेहतर है। हम सूक्ष्म-चिमटी के साथ गुर्दे की नसों को अलग करने की सलाह नहीं देते हैं, क्योंकि यह गुर्दे की रक्त वाहिकाओं को नुकसान पहुंचा सकता है। आमतौर पर, प्रक्रिया को धीमी गति से प्रदर्शन के साथ भी 20 मिनट के भीतर सुरक्षित रूप से किया जा सकता है। इसके अलावा, फिनोल का पिघलने बिंदु 40.5 डिग्री सेल्सियस है।

बेहतर आरडीएन प्रक्रिया की प्रमुख सीमा यह है कि पोस्टऑपरेटिव फॉलो-अप समय केवल 2 सप्ताह था। बीपी और गुर्दे की तंत्रिका पुनर्जनन पर दीर्घकालिक आरडीएन का प्रभाव स्पष्ट नहीं है।

इस मॉडल का भविष्य का अनुप्रयोग अधिक मानकीकृत डीनेरवेशन पशु मॉडल का उत्पादन करना है जो उच्च रक्तचाप और कार्डियक हाइपरट्रॉफी की प्रक्रिया को रेखांकित करने वाले मार्गों की व्याख्या करने में योगदान कर सकता है।

अंत में, यह विधि व्यावहारिक और दोहराने योग्य है। सबसे महत्वपूर्ण बात, यह उच्च रक्तचाप को नियंत्रित करने और हृदय संबंधी बीमारियों जैसे हृदय संबंधी बीमारियों का मुकाबला करने वाले तंत्र का अध्ययन करने के लिए मानकीकृत आरडीएन मॉडल उत्पन्न कर सकता है।

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Disclosures

लेखकों द्वारा घोषित हितों, वित्तीय या अन्यथा का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81770420), शंघाई नगर पालिका के विज्ञान और प्रौद्योगिकी आयोग (20140900600), शंघाई कुंजी प्रयोगशाला नैदानिक जेरियाट्रिक चिकित्सा (13dz2260700), शंघाई नगरपालिका कुंजी नैदानिक विशेषता (shslczzk02801) और वृद्धावस्था कोरोनरी धमनी रोग केंद्र, फुदान विश्वविद्यालय से संबद्ध हुआडोंग अस्पताल द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Angiotensin II Sangon Biotech CAS:4474-91-3 To make a hypertensive animol model
Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody Abcam ab137869 To evaluate the expression of TH of renal nerves
Blood Pressure Analysis Visitech Systems BP-2000 Measure the blood pressure of mice
Mini-osmotic pump DURECT Corporation CA 95014 To fill with Angiotensin II
Norepinephrine ELISA Kit Abcam ab287789 to measure renal norepinephrine levels
Phenol Sangon Biotech CAS:108-95-2 Damage the renal sympathetic nerve
Weighing paper Sangon Biotech F512112 To destroy renal nerve with weighing paper immersed with phenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112. 

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References

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चिकित्सा अंक 183 आरडीएन उच्च रक्तचाप एंजियोटेंसिन द्वितीय फिनोल आसमाटिक पंप कार्डियक हाइपरट्रॉफी
एंजियोटेंसिन द्वितीय इन्फ्यूश़न द्वारा प्रेरित उच्च रक्तचाप में सुधार
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Wang, M., Zhang, S., Han, W., Ye,… More

Wang, M., Zhang, S., Han, W., Ye, M., Qu, X., Han, W. Improved Renal Denervation Mitigated Hypertension Induced by Angiotensin II Infusion. J. Vis. Exp. (183), e63719, doi:10.3791/63719 (2022).

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