Summary
血小板裂解物是治疗眼表疾病的新兴工具。在这里，我们提出了一种从血小板供体收集的血小板裂解物的制备，分配，储存和表征的方法。
Abstract
各种眼表疾病用血液来源的眼药水治疗。它们的使用已被引入临床实践，因为它们的代谢物和生长因子含量，可促进眼表再生。血液滴眼液可以由不同的来源（即全血或血小板单采捐献）以及不同的方案（例如，不同的稀释液和冻融循环）制备。这种可变性阻碍了临床方案的标准化，从而阻碍了对其临床疗效的评估。详细说明和分享方法程序可能有助于确定共同准则。在过去的几年中，同种异体产品作为自体治疗的替代品一直在扩散，因为它们保证了更高的疗效标准;其中，富血小板血浆裂解物（PRP-L）滴眼液是通过简单的制造程序制备的。在意大利雷焦艾米利亚的AUSL-IRCCS的输血医学部门，PRP-L是通过血小板单采捐赠获得的。本品最初在0.9%NaCl中稀释至0.3 x 10 9血小板/mL（从平均浓度1 x 109血小板/mL开始）。稀释的血小板被冷冻/解冻，然后离心以消除碎片。将最终体积分成 1.45 mL 等分试样并储存在 −80 °C。 在分配给患者之前，对眼药水进行无菌测试。患者可将血小板裂解物在-15°C下储存长达1个月。生长因子组成也从随机选择的等分试样中评估，并在此处报告平均值。
Introduction
血液衍生产品广泛用于伤口护理1、颌面和骨科手术，以及治疗不同的眼表疾病2，如干眼病（DED）3。在DED中，泪膜稳态由于泪液产生和眼表完整性所涉及的不同因素的异常功能而受损4，5。
DED的特征是病因和严重程度6，7，8的异质性，可能是不同因素的结果，如衰老，性别9，隐形眼镜，局部或全身药物10，或干燥综合征10等预先存在的疾病。尽管症状轻微，但DED影响了全世界数百万人，影响了他们的生活质量和卫生系统6。
已经报道了许多针对这种病理的治疗方法，但对于最有效的解决方案仍未达成共识12。迄今为止，人工泪液是旨在恢复泪膜水成分的第一线治疗，尽管这些替代品不含天然泪液的主要生物活性溶质6，11。基于血小板的产品被认为是人工泪液的有效替代品12，13，尽管它们的临床疗效，使用建议和制备方法仍然是一个有争议的问题3。
血液产品在代谢物14、蛋白质、脂质、维生素、离子、生长因子（GFs）、抗氧化化合物11和渗透压（300 mOsm/L）11方面与泪液具有相似的成分。通过其组分的协同活性，它们促进角膜上皮的再生，抑制炎性细胞因子的释放，并增加杯状细胞的数量和结膜中粘蛋白的表达2，3。
到目前为止，文献中已经记录了眼科血液制品的异质性;这些产品可以根据献血者的来源（即自体或同种异体）以及血液来源（即外周血、脐带血、血清或血小板）进行分类。
尽管自体产品是最普遍的3，但同种异体产品现在已成为首选，因为它们确保了更高的功效和安全性标准15，同时显着降低了成本16，17。事实上，先前的研究证明，从自身免疫和/或全身性疾病患者获得的血液产品可能会显示出改变的质量和功能6，16，17。尽管基于血清的滴眼液是最普遍的，但基于血小板的产品最近被确认为一种有效的替代品，因为它们可以很容易地制备，同时保持显着的功效水平3，11。目前可用的基于血小板的产品可分为富血小板血浆（PRP），富血小板血浆裂解物（PRP-L）和富含生长因子的血浆（PRGF）3。
其中，PRP-L具有长寿命冷冻产品的优点。PRP-L可以由单采术，血沉棕黄层甚至过期血小板（PLT）制备18，19，从而大大减少其浪费。等分试样可以在-80°C的输血中心储存数月，甚至可以在-15°C的患者家中储存较短的时间。
PRP-L富含GFs，已被证明可以刺激眼表再生12，20，21。然而，该领域只有很少的临床研究报道，并且所有研究都使用自体来源3，22。PRP-L在常规用于治疗眼表疾病之前仍需要进一步的验证和表征，因为没有关于其制备，分配和储存的标准化指南3。
在此，分享了一个详细的方案，用于生产在意大利雷焦艾米利亚的AUSL-IRCCS输血医学部门使用的PRP-L，并向DED患者分配。我们的目标是帮助科学界开发标准的制备方法，这可能会提高全球研究和临床方法的同质性和一致性。
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Protocol
用于生长因子定量评估的PRP-L是在AUSL-IRCCS di Reggio Emilia进行的关于再生目的PRP产品表征的更广泛研究中收集的，并于2019年1月10日由Vasta Emilia Nord地区伦理委员会批准（协议号2019 / 0003319）。捐助者根据《赫尔辛基宣言》表示知情同意。收集眼表疾病指数（OSDI）问卷的汇总匿名数据不需要伦理批准，临床医生常规使用该问卷来监测干眼综合征症状。图 1A 显示了所遵循的协议的轮廓，而 图1B 中的图片描述了该过程的主要步骤。
1. 富血小板血浆 （PRP） 收集
- PRP 单采术
- 对于此协议，根据意大利法律选择血小板供体：血小板供体必须为18-65岁，具有正常的压力和血细胞计数参数，血小板计数不低于180 x 109 血小板/ L23。符合条件的捐献者在捐献前 1 周内不能服用抗血小板或抗凝药物。
- 根据制造商的说明和国家法律23，使用自动采血系统进行血浆 - 血小板 - 血液分离术，以获得1单位的单供体富血小板血浆（PRP）。收集柠檬酸腺嘌呤葡萄糖溶液 A （acd-A） 抗凝剂溶液中的 PRP。
注意：血小板单采术是通过连续程序进行的;收集时间在40分钟到90分钟之间。提供给供体的ACD量和手术时间取决于供体的特征，例如血细胞比容和针规。
- PRP单元的特点
注意：以下步骤通常由自动采血系统在血浆-血小板-单采过程中自动执行。请查看制造商的说明手册。- 将通过单采术收集的PRP单位重悬于足够量的防腐剂溶液中，并具有最少量的残留血浆，这是在整个储存时间内保持pH值>6.4所必需的，平均最终体积为抗凝剂溶液净值180 mL（约40 mL）。
注意：根据意大利法律，质量控制必须评估血小板（PLT）计数至少为2.0 x 10 11 PLT/单位，而残留的白细胞必须小于1 x10 6 个细胞/单位。 - 在进一步操作之前，在血小板振荡器上将白细胞去除和照射的PRP在22°C±2°C下储存最多5天23。
- 将通过单采术收集的PRP单位重悬于足够量的防腐剂溶液中，并具有最少量的残留血浆，这是在整个储存时间内保持pH值>6.4所必需的，平均最终体积为抗凝剂溶液净值180 mL（约40 mL）。
- 枸杞子稀释
- 在开始PRP稀释之前，使用血细胞计数器使用通过穿刺尖峰从主袋收集的样品进行PLT计数。
注意：在II类生物危害罩下执行无菌后续步骤。在手术过程中穿戴个人防护设备（实验室外套、手套和护目镜）。 - 用足量的无菌 0.9% NaCl 稀释 PRP，最终浓度为 0.32 x 10 9 ± 0.03 x 109 PLT/mL，模拟外周血中的平均 PLT 浓度。
- 利用血袋的刺穿尖峰，将稀释的PRP分成300 mL空收集袋，以达到190 mL/袋的净体积。
- 使用等分试样残留稀释的PRP（通常为1 mL）进行质量控制，评估可能的微生物污染。按照制造商的说明在微生物实验室进行无菌测定（见 材料表）。
注意：使用专门用于好氧血液培养的培养瓶，这些培养瓶能够从小体积血液标本中进行需氧微生物（主要是细菌和酵母）的定性培养和回收。 - 在解冻前将稀释的PRP袋在-80°C下储存最多2个月。
- 在开始PRP稀释之前，使用血细胞计数器使用通过穿刺尖峰从主袋收集的样品进行PLT计数。
2. 富血小板血浆裂解物（PRP-L）制备
- 解冻
- 在开始解冻程序之前，请确保将温浴设置为37°C。 将PRP袋放入温水浴中，等待完全解冻。
- PRP-L 系列
- 在室温下以3000× g 离心PRP袋30分钟。
注意：后续步骤应在II类生物危害罩下无菌进行。 - 利用转印袋的刺穿尖刺，将离心袋与空的无菌 300 mL 转印袋连接起来。小心地将PRP-L上清液转移到新袋中，同时避免碎屑。如果可能，请使用袋式压滤机。
- 用袋子封口机密封PRP-L装置的连接管。
- 在室温下以3000× g 离心PRP袋30分钟。
- PRP-L等分
注意：含有 190 mL PRP 的起始单位（参见步骤 1.3.3.）足以填充两个滴眼液套件（有关用于应用和保存血液成分滴眼液的特定医疗设备的详细信息，请参阅 材料表）。滴眼液套件应在II类罩下打开，整个小瓶位于预连接的注射器上方，旋塞阀的中心箭头指向左侧以排除抗菌过滤器。- 用无菌注射器收集 30-60 mL PRP-L，并将注射器连接到灌装线上的鲁尔/锁连接。
- 根据制造商的说明，将旋塞阀旋转半圈，以打开含PRP-L的注射器和预连接注射器之间的线。用PRP-L填充预连接的注射器。
- 断开PRP-L注射器，关闭鲁尔/锁连接的管帽并将旋塞阀旋转到原始位置。使用滴眼液试剂盒注射器用PRP-L填充小瓶。
- 重复步骤 2.3.1.-2.3.3 中的过程。直到所有涂抹器小瓶都装满。确保每个涂抹器都已正确填充，然后用袋子封口机单独密封它们。
- 使用新的眼药水套件重复该过程。
- 使用少量残留稀释的PRP-L来评估可能的微生物污染（见步骤1.3.4）。
注意：如果液体不小心到达绳子末端的抗菌过滤器，吸吸器可能会抵抗阻力，阻碍填充。要继续填充循环，请从字符串末端的抗菌疏水过滤器中将字符串的末端部分升高约 5/6 等分试样。在这个位置，使用已经充满空气的新无菌注射器（30 mL体积）。连接抗菌过滤器的母鲁尔/锁，用力反复按压注射器的柱塞，以去除所有血液成分残留物，并使抗菌过滤器的膜不含液体。取出注射器并填充剩余的小瓶。
- PRP-L 存储
- 正确标记每个涂抹器并将它们放入塑料袋中。也给塑料袋贴上标签，注意突出捐赠者的血型。
- 根据意大利法律23 和指南24，在患者分配前在-80°C下储存最多24个月。
3. PRP-L 分配
- 最好通过匹配PRP-L血型来分配患者。使用冷藏箱运送 PRP-L 涂抹器小瓶，并确保每个涂抹器小瓶含有 1.45 mL PRP-L，相当于大约 45 滴。指导患者，施用器小瓶可以在-15°C下在患者家中储存长达1个月。
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Representative Results
使用血清源性滴眼液（这是最常用于治疗眼表面疾病的血液产品）的基本原理在于其GF的含量，GF几乎完全来自循环血小板。与外周血血清相比，PRP 含有的血小板数量（因此也含有血小板来源的 GF），范围在 0.15 x 10 9-0.45 x 109 PLT/mL 之间。根据意大利法律，以PRP为单位的血小板计数应至少为0.9 x 10 9-1 x 109 PLT/mL。因此，为了获得模拟血清滴眼液功效的产品，应在裂解物制备前将PRP稀释至生理血小板含量。
然而，由于组织修复主要由血小板衍生的GF驱动，因此仅PLT计数可能会误导眼表疾病的有效治疗。在DED中，这是最常用血液来源的眼药水治疗的眼病，泪膜的产生和体内平衡受损。因此，用于治疗DED的基于血小板的产品也应模仿眼泪的生理成分。
为了确定最适合治疗眼表疾病的PRP-L，在步骤1.3.2中描述。在本协议中，我们根据其PLT含量（在0.7 x 10 9 / mL和0.3 x 109 / mL之间）以及已知参与眼组织修复的一些代表性GF初步评估了不同的PRP稀释度12，20，21。
用血细胞计数器进行血小板计数，而GFs则通过多重蛋白质定量测定法进行评估。根据制造商的说明，如前所述25 进行测定。本手稿中显示的GF在对PRP裂解物进行初步筛选后，选择进行定量。对36种筛选的GF中的3种进行了Luminex定量：EGF和PDGF（结果证明是我们的PRP裂解物中最丰富的GF）和TGFβ-1，2，3亚型（其含量对眼表面治疗很重要21）。测量EGF和PDGF含量，因为它们可能影响PRP-L 22的功效，而TGFβ亚型因其在免疫信号传导中的已知作用而被选择21。
由于蛋白质阵列是另一项关于不同PRP26表征的体外研究的一部分，因此这些数据未在本手稿中提供。
我们定量评估了来自两种不同供体（D1 和 D2）的 PRP 裂解物中的 EGF、PDGF 和 TGFβ，这些供体先前在 0.9% NaCl 中稀释在 0.7 x 10 9-0.3 x 109 PLT/mL 之间。图2显示了0.3 x 109 PLT/mL稀释的结果，结果与泪液成分最相似。
根据泪液成分的文献数据选择0.3 x 109 PLT/mL稀释液。与平均撕裂值相比，EGF值相当低，但仍在正常范围27。即使是PDGF，尽管在所考虑的两个供体之间差异很大，但总是与正常泪液中的浓度相当20。最后，TGFβ-1被发现是PRP-L中最丰富的亚型，类似于泪液21。
一旦确定了最合适的PLT稀释液来制备单采PRP-L，输血医学部门于2015年开始向受眼表疾病影响的患者分发这些产品。眼科医生定期收集OSDI问卷以监测DED症状;OSDI测试评估生活质量指标，例如对眼部刺激的感知以及它如何影响与视力相关的功能。该问卷由Allergan Inc.的结果研究小组于1995年创建，现在被接受为监测DED的有效工具，已提交给患者并如前所述进行分析28，29。
在这里，我们显示了 2020 年 1 月至 2021 年 1 月期间接受治疗的 DED 患者的 OSDI 测试的总结果 （n = 27）。使用PRP-L治疗6个月后，OSDI评分从56±21下降到45±21，表明患者的生活质量有所改善（图3）。
尽管这些数据仍处于严重范围内，与疗效的临床结果无关，但他们表明DED患者认为PRP-L是一种改善眼部不适的有用产品;这方面应该在前瞻性临床试验中进一步研究，旨在评估其治疗眼表疾病的疗效。
在 表1中，我们报告了本生产方法与另一种制备用于滴眼液30 和其他目的的同种异体PRP-L的方法的比较22。据我们所知，Zhang的30 方案和目前的协议是唯一已发表的为眼睛表面产生PRP-L的方法。在这两种情况下，PRP-L都是通过单采术获得的;应比较两种方案之间的差异，主要涉及冻融循环次数和离心步骤，以提高PRP-L产量。然而，这些方法学差异尚未被证明对在其他组织上测试的PRP-L的再生能力有害22。
图1：制备PRP-L的方案的主要步骤 。 （A）方案，从PRP收集到PRP-L制备和分配。（B） 协议主要步骤的代表性图片。 请点击此处查看此图的大图。
图 2：0.3 x 109/mL 稀释度 PRP-L 的血小板衍生生长因子的 Luminex 定量。 （A） 表皮生长因子 （EGF）;（B）血小板衍生生长因子（PDGF）;（C）转化生长因子-β亚型1（TGFβ1）;（D）转化生长因子-β亚型2（TGFβ2）;（E）转化生长因子-β亚型3（TGFβ3）。数值以 pg/mL 表示，即三次独立测量的平均±标准偏差。D1和D2是两种不同的血小板供体。 请点击此处查看此图的大图。
图 3：2020 年 1 月至 2021 年 1 月期间在 AUSL-IRCCS di 雷焦艾米利亚眼科接受 PRP-L 治疗的 DED 患者的 OSDI 评分汇总。 N = 27例患者。OSDI分数汇总结果表示为平均值±标准误差，p值是用数据分析软件配对t检验计算的。 请点击此处查看此图的大图。
| 本文 | 眼睛的PRP-L（体外 研究）29 | 用于其他目的的PRP-L21 | |
| 源 | PLT单采术 | PLT单采术 | 单采和全血 |
| 冻融循环 | 1 （在 -80 °C 时） | 2 （在 -80 °C 时） | 1-3 （在 -20 °C 和 -80 °C 下） |
| 储存温度 | 在 -80 °C 时 | 在 -80 °C 时 | 在 -20 °C 和 -80 °C |
| 储存前的离心速度 | 3000 x g/30 分钟 | 3500 x g/30 分钟 | 400-3000 x g/6 分钟 -30 分钟 |
| 储存前的过滤 | 不 | 是的 | 否/是 |
表1：从通过单采收集的基于血小板的产品制备同种异体PRP-L的方案比较。
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Discussion
近年来，基于血小板的产品用于眼表病变的临床使用有所增加，但由于缺乏科学稳健性，它们的扩散受到阻碍。这主要是由于供体来源和制备方案存在很大差异，而供体来源和制备方案通常没有完全披露或不是专门为分配目的而设计的。特别是，仍然缺乏有关通过单采术收集的基于血小板的产品的信息。因此，本工作的目的是描述通过单采术获得的富血小板血浆裂解物（PRP-L）用于治疗DED的逐步处理。
PRP-L是生产滴眼液的最佳来源，因为它比其他血液产品含有更多的GFs22，并且与血清或PRP相比，其生产或储存既便宜又简单。为了获得PRP-L，对血小板进行裂解（通常通过一个或多个冻融循环）以释放其内容物。该过程保证了富含刺激组织再生的活性分子的溶液22，26。越来越多的疾病已经用PRP-L 22治疗，但由于血小板收集和PRP-L生产的标准化标准较低，用于眼科的适应症仍然很弱3，22。
应首选基于同种异体血小板的产品，因为它们在供体特征和制备方法方面都比自体产品更标准化。患者的健康状况可能会影响产品的质量6，16，17，而当输血服务无法直接获得时，从全血中收集自体血小板的内部试剂盒不符合输血医学所需的标准质量31。
据我们所知，没有临床研究表征同种异体PRP-L在眼科中的应用3，而关于自体PRP-L滴眼液3的报告很少，只有一项研究使用从脐带血中获得的同种异体PRP-L治疗眼表疾病患者32。尽管同种异体PRP-L列在临床指南24中，其用法已被提出3，30，但与其他治疗方法和其他血液产品（例如血清）相比，仍然缺乏关于其疗效的证据。在这里，提出的协议旨在帮助科学界开发共同的生产方法并阐明方法差异。
在这里，我们描述了从单采术收集的同种异体PRP开始的PRP-L生产。也可以从血沉棕黄层（BCs）中收集基于血小板的同种异体产物以获得血小板裂解物，并且这两个来源已被同样报道31。BC是从汇集的供体（通常为4或5个）获得的，从而最大限度地减少了个体间的差异。相反，汇集会增加传播传染因子或朊病毒或刺激同种异体反应的风险31，33。单采术是一种复杂且侵入性的手术，只有少数捐赠者有资格或遵守它34。然而，通过单采获得的基于血小板的产品不含其他残留的循环血细胞，并且含有更大量的PLTs35。由于这些原因，目前的工作重点是开发临床研究，以比较来自这两个不同来源的PRP-L。
在该协议中，通过单采收集的PRP单位中PLT的起始浓度平均为1 x 109 / mL，这与报告的其他血小板产品浓度一致22。在该方法中，PLT之后用0.9%NaCl溶液稀释至0.3 x 109/mL。其他方案报告使用血浆进行稀释22。
很少有研究报告PRP-L在眼科中的应用;在这些情况下，制备PLT浓度为0.5 x 10 9 / mL-1 x 109 / mL 36，37，38的自体滴眼液。如前所述，标准化标记是可取的，也有助于确定适当的稀释度。例如，在这里，我们报告了PRP-L中一些关键GF的浓度。EGF和PDGF含量影响PRP-L 22的功效，而TGFβ亚型参与调节免疫信号21，39，且其浓度受到精细调控。因此，基于血小板的滴眼液中的TGFβ浓度不仅可能影响疗效，还可能引发潜在的有害影响39;因此，在定义适当的稀释度之前，应仔细研究。尽管如此，选择的稀释度 - 0.3 x 109 PLT/mL - 是基于眼泪中的GFs含量21，25。Zhang等人先前比较了基于血清的自体和同种异体滴眼液以及基于血小板的裂解物，因为它们在GF中含量以及它们在体外促进角膜细胞再生的能力30。该研究显示了这些产品如何具有可比的特征，PRP-L具有较高的EGF浓度，但纤连蛋白较低。在他们的方案中，将冻融过程重复两次，离心机以3500×g进行30分钟，并将血小板裂解物储存在-80°C30。
冷冻和解冻确实是一个关键步骤;大多数方案（包括这个方案）是在-80°C冷冻和37°C解冻下开发的，但也报道了在-24°C，-196°C和-150°C下冷冻22，33甚至执行的冻融循环次数也是可变的，范围从1到522，33。少数研究还报告了超声处理或溶剂/洗涤剂处理以获得血小板裂解物22，33。先前在制备PRP-L中报告的其他方法学变量涉及离心步骤（在300×g和10000×g之间，从2分钟到60分钟）和长期储存，在大多数情况下，其温度为-80°C，尽管类似的产物也已直接储存在-20°C22。尤其应仔细监测储存条件，因为它们可能会影响裂解物中所含GF的可用性和活性。在这种高度异质的背景下，应紧急评估考虑到生物因子释放和治疗效果差异的质量控制和临床研究。
最后，在这里，我们展示了如何通过对接受PRP-L治疗6个月的干眼病患者进行汇总分析（OSDI问卷3）的阳性结果对该方法进行显着评估。尽管前景广阔，但仅靠OSDI不足以确定PRP-L治疗DED和其他眼表疾病的疗效，因此有必要对同种异体PRP-L的使用进行临床研究。此外，应比较由于替代方法步骤（即冻融、离心、储存）而可能出现的产品成分差异，以优化方法程序。
总之，血液来源和方案的高度异质性仍然阻碍了血液产品在眼表疾病的临床治疗中的最终转化。尽管PRP-L是一种具有一些有利功能的新兴产品，但还需要进一步的研究来验证其用途并制定通用指南。分享和详细说明准备方案可能会扩大可用性并阐明关键步骤。
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Disclosures
作者声明不存在利益冲突。
Acknowledgments
作者希望感谢“Casa del Dono di Reggio Emilia”提供供体来源的血小板浓缩物。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipments | |||
| CompoSeal Mobilea II | Fresenius Kabi, Germany | bag sealer | |
| HeraSafe hood | Heraeus Instruments, Germany | Class II biohazard hood | |
| MCS+ 9000 Mobile Platelet Collection System | Haemonetics, Italy | automated plasma and multicomponent collection equipment for donating platelet, red cell, plasma, or combination blood components | |
| Platelet shaker, PF396i | Helmer, USA | Platelet shaker | |
| Raycell X-ray Blood Irradiator | MDS Nordion, Canada | X-ray Blood Irradiator | |
| ROTIXA 50RS | Hettich Zentrifugen, Germany | High speed entrifuge | |
| Sysmex XS-1000i | Sysmex Europe GMBH, Germany | haemocytometer for platelet count | |
| Warm bath, WB-M15 | Falc Instruments, Italy | Warm bath | |
| Materials | |||
| ACD-A anticoagulant solution A | Fenwal Inc., USA | DIN 00788139 | anticoagulant solution for platelet apheresis (1000 ml) |
| BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials | BD Biosciences, USA | BD 442020 | Sterility assay |
| BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials | BD Biosciences, USA | 442020 | At least 2 vials for sterility assay |
| BD Luer Lok Syringe | BD Plastipack, USA | 300865 | At least 4 sterile syringes (50 ml) |
| Bio-Plex Human Cancer Panel 1 | BioRad Laboratories, USA | 171AC500M | Standard panel for PDGF isoforms assessment |
| Bio-Plex Human Cancer Panel 2 | BioRad Laboratories, USA | 171AC600M | Standard panel for EGF assessment |
| Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader | BioRad Laboratories, USA | Magpix | This instrument allows multiple immunoassays using functionalized magnetic beads. |
| Bio-Plex Pro TGF-b Assay | BioRad Laboratories, USA | 10024984 | Set and standards for TGFb isoforms assessment |
| BioRet | ARIES s.r.l., Italy | A2DH0020 | At least 4 piercing spike for blood bags |
| Blood collection tube | BD Vacutainer, USA | 367835 | 1 tube, necessary to perform platelet counts |
| Eye drops kit. COL Medical Device for the application and preservation of eye drops from haemocomponents | Biomed Device s.r.l., Italy | COLC50 | Eye drops kit. At least 2 kits for each PRP unit collected |
| Human Cancer PDGF-AB/BB Set 1x96well | BioRad Laboratories, USA | 171BC511 | Set for PDGF isoforms assessment |
| Human Cancer2 EGF Set 1x96well | BioRad Laboratories, USA | 171BC603M | Set for EGF assessment |
| NaCl 0.9% sterile solution | Baxter S.p.A., Italy | B05BB01 | 1000 ml |
| OSDI Questionnaire | Allergan Inc., USA | OSDI | Ocular Surface Disease Index Questionnaire |
| Piercing spike | BioRet ARIES s.r.l., Italy | BS051004 | Spike |
| Platelet Additive Solution A+ T-PAS+ | TERUMO BCT Inc., Italy | 40842 | preservative solution for platelet concentrates (1000 ml) |
| Software Excel | Microsoft, USA | Excel | Data analysis software |
| Teruflex Transfer bag 1000 ml | TERUMO BCT Inc., Italy | BB*T100BM | 1 for PRP dilution |
| Teruflex Transfer bag 300 ml | TERUMO BCT Inc., Italy | BB*030CM | At least 6 for each PRP unit collected |
References
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