Summary
प्लेटलेट लाइसेट ओकुलर सतह रोगों के उपचार के लिए एक उभरते उपकरण का प्रतिनिधित्व करते हैं। यहां, हम प्लेटलेट दाताओं से एकत्र किए गए प्लेटलेट लाइसेट की तैयारी, वितरण, भंडारण और लक्षण वर्णन के लिए एक विधि का प्रस्ताव करते हैं।
Abstract
विभिन्न ओकुलर सतह रोगों का इलाज रक्त-व्युत्पन्न आंखों की बूंदों के साथ किया जाता है। उनका उपयोग नैदानिक अभ्यास में उनके मेटाबोलाइट और विकास कारक सामग्री के कारण पेश किया गया है, जो आंखों की सतह पुनर्जनन को बढ़ावा देता है। रक्त-आधारित आंखों की बूंदों को विभिन्न स्रोतों (यानी, पूरे रक्त या प्लेटलेट एफेरेसिस दान) के साथ-साथ विभिन्न प्रोटोकॉल (जैसे, विभिन्न कमजोर पड़ने और फ्रीज / पिघलना चक्र) से तैयार किया जा सकता है। यह परिवर्तनशीलता नैदानिक प्रोटोकॉल के मानकीकरण और परिणामस्वरूप, उनकी नैदानिक प्रभावकारिता के मूल्यांकन में बाधा डालती है। पद्धतिगत प्रक्रियाओं का विवरण और साझा करना सामान्य दिशानिर्देशों को परिभाषित करने में योगदान दे सकता है। पिछले वर्षों में, एलोजेनिक उत्पाद ऑटोलॉगस उपचार के विकल्प के रूप में अलग हो रहे हैं क्योंकि वे उच्च प्रभावकारिता मानकों की गारंटी देते हैं; उनमें से, प्लेटलेट समृद्ध प्लाज्मा लाइसेट (पीआरपी-एल) आई ड्रॉप सरल विनिर्माण प्रक्रियाओं के साथ तैयार किए जाते हैं। एयूएसएल-आईआरसीसीएस डी रेजियो एमिलिया, इटली में आधान चिकित्सा इकाई में, पीआरपी-एल प्लेटलेट-एफेरेसिस दान से प्राप्त किया जाता है। इस उत्पाद को शुरू में0.9 % NaCl में 0.3 x 10 9 प्लेटलेट्स / एमएल (1 x 109 प्लेटलेट्स / एमएल की औसत एकाग्रता से शुरू होता है) तक पतला किया जाता है। पतला प्लेटलेट्स जमे हुए / पिघलाए जाते हैं और बाद में, मलबे को खत्म करने के लिए सेंट्रीफ्यूज किए जाते हैं। अंतिम मात्रा को 1.45 एमएल एलिकोट में विभाजित किया जाता है और -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जाता है। रोगियों को वितरित करने से पहले, आंखों की बूंदों को बाँझपन के लिए परीक्षण किया जाता है। रोगी प्लेटलेट लाइसेट को 1 महीने तक -15 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर कर सकते हैं। विकास कारक संरचना का मूल्यांकन यादृच्छिक रूप से चयनित एलिकोट से भी किया जाता है, और औसत मूल्यों को यहां रिपोर्ट किया गया है।
Introduction
रक्त-व्युत्पन्न उत्पादों का व्यापक रूप से घाव देखभाल1, मैक्सिलोफेशियल और आर्थोपेडिक सर्जरी में और विभिन्न ओकुलर सतह रोगों के उपचार के लिए उपयोग किया जाता है2 जैसे शुष्क आंख रोग (डीईडी)3। डीईडी में, आंसू उत्पादन और ओकुलर सतह अखंडता 4,5 में शामिल विभिन्न कारकों के असामान्य कामकाज के परिणामस्वरूप आंसू फिल्म होमियोस्टेसिस बिगड़ा हुआ है।
डीईडी को कारणों और गंभीरता 6,7,8 में विविधता की विशेषता है और यह उम्र बढ़ने, सेक्स9, संपर्क लेंस, सामयिक या प्रणालीगत दवाओं 10, या स्जोग्रेनसिंड्रोम 10 जैसी पूर्व-मौजूदा स्थितियों जैसे विभिन्न कारकों का परिणाम हो सकता है। हल्के लक्षण होने के बावजूद, डीईडी दुनिया भर में लाखों लोगों को प्रभावित करता है, जिससे उनके जीवन की गुणवत्ता और स्वास्थ्य प्रणाली भी प्रभावितहोती है।
इस विकृति के लिए कई उपचार बताए गए हैं, लेकिन अभी भी सबसे प्रभावी समाधान12 पर कोई सहमति नहीं है। आज तक, कृत्रिम आँसू आंसू फिल्म की जलीय संरचना को बहाल करने के उद्देश्य से चिकित्सा की पहली पंक्ति है, हालांकि इन विकल्पों में प्राकृतिक आँसू 6,11 के मुख्य जैविक रूप से सक्रिय विलेय शामिल नहीं हैं। प्लेटलेट-आधारित उत्पादों को कृत्रिम आँसूके लिए एक वैध विकल्प माना जाता है, हालांकि उनकी नैदानिक प्रभावकारिता, उपयोग के लिए सिफारिशें, और तैयारी के तरीके अभीभी बहस का विषय हैं।
रक्त आधारित उत्पाद आंसुओं के साथ मेटाबोलाइट्स14, प्रोटीन, लिपिड, विटामिन, आयन, विकास कारक (जीएफ), एंटीऑक्सिडेंट यौगिक11 और ऑस्मोलरिटी (300 एमओएसएम / एल) 11 के संदर्भ में एक समान संरचना साझा करते हैं। अपने घटकों की सहक्रियात्मक गतिविधि के माध्यम से, वे कॉर्नियल एपिथेलियम के उत्थान को बढ़ावा देते हैं, भड़काऊ साइटोकिन्स की रिहाई को रोकते हैं, और गोब्लेट कोशिकाओं की संख्या और नेत्रश्लेष्मला 2,3 में म्यूसिन की अभिव्यक्ति में वृद्धि करते हैं।
अब तक, नेत्र रक्त-आधारित उत्पादों में विषमता को साहित्य में प्रलेखित किया गया है; इन उत्पादों को रक्त दाताओं की उत्पत्ति, यानी, ऑटोलॉगस, या एलोजेनिक, साथ ही रक्त स्रोत, यानी परिधीय रक्त, कॉर्ड रक्त, सीरम, या प्लेटलेट्स के अनुसार वर्गीकृत किया जा सकता है।
यद्यपि ऑटोलॉगस उत्पाद सबसे व्यापकथे 3, एलोजेनिक अब पसंदीदा विकल्प बन रहे हैं, क्योंकि वे लागत 16,17 में महत्वपूर्ण कमी के साथ उच्च प्रभावकारिता और सुरक्षामानकों को सुनिश्चित करते हैं। पिछले अध्ययनों ने वास्तव में साबित किया कि ऑटोइम्यून और / या प्रणालीगत बीमारियों वाले रोगियों से प्राप्त रक्त-आधारित उत्पाद परिवर्तित गुणवत्ता और कार्यक्षमता 6,16,17 दिखा सकते हैं। इस तथ्य के बावजूद कि सीरम-आधारित आई ड्रॉप सबसे व्यापक हैं, प्लेटलेट्स-आधारित उत्पाद हाल ही में एक वैध विकल्प के रूप में पुष्टि की जा रही हैं, क्योंकि प्रभावकारिता 3,11 के महत्वपूर्ण स्तर को बनाए रखते हुए उन्हें आसानी से तैयार किया जा सकता है। वर्तमान में उपलब्ध प्लेटलेट-आधारित उत्पादों को प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज्मा (पीआरपी), प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज्मा लाइसेट (पीआरपी-एल), और विकास कारकों (पीआरजीएफ) 3 में समृद्ध प्लाज्मा में विभाजित किया जा सकता है।
उनमें से, पीआरपी-एल को लंबे समय तक जमे हुए उत्पाद होने का लाभ है। पीआरपी-एल को एफेरेसिस, बफी-कोट, या यहां तक कि समाप्त प्लेटलेट्स (पीएलटी) 18,19 से भी तैयार किया जा सकता है, जो उनकी बर्बादी को कम करता है। एलिकोट को रक्त आधान केंद्रों में -80 डिग्री सेल्सियस पर महीनों तक या यहां तक कि रोगियों के घरों में -15 डिग्री सेल्सियस पर छोटी अवधि के लिए संग्रहीत किया जा सकता है।
पीआरपी-एल जीएफ में अत्यधिक समृद्ध हैं, जो आंखों की सतह पुनर्जनन12,20,21 को प्रोत्साहित करने के लिए साबित हुए हैं। फिर भी, इस क्षेत्र में केवल कुछ नैदानिक अध्ययन हैं, और उनमें से सभी ने ऑटोलॉगस स्रोतों 3,22 का उपयोग किया। पीआरपी-एल को अभी भी आंखों की सतह के रोगों के उपचार के लिए नियमित रूप से उपयोग किए जाने से पहले और सत्यापन और लक्षण वर्णन की आवश्यकता है, क्योंकि इसकी तैयारी, वितरण और भंडारणके लिए कोई मानकीकृत दिशानिर्देश नहीं हैं।
इसमें, एयूएसएल-आईआरसीसीएस डी रेजियो एमिलिया, इटली में ट्रांसफ्यूजन मेडिसिन यूनिट में उपयोग किए जाने वाले पीआरपी-एल के उत्पादन और डीईडी के रोगियों के लिए वितरण के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल साझा किया गया है। हमारा उद्देश्य वैज्ञानिक समुदाय को तैयारी के मानक तरीकों को विकसित करने में मदद करना है, जो दुनिया भर में अध्ययन और नैदानिक दृष्टिकोण में एकरूपता और स्थिरता बढ़ा सकता है।
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Protocol
विकास कारकों के मात्रात्मक मूल्यांकन के लिए उपयोग किए जाने वाले पीआरपी-एल को पुनर्योजी उद्देश्यों के लिए पीआरपी उत्पादों के लक्षण वर्णन पर एक व्यापक अध्ययन के भीतर एकत्र किया गया था, जो एयूएसएल-आईआरसीसीएस डी रेजियो एमिलिया में किया गया था और 10 जनवरी, 2019 (प्रोटोकॉल नंबर 2019/0003319) को एरिया वास्टा एमिलिया नॉर्ड एथिकल कमेटी द्वारा अनुमोदित किया गया था। दाताओं ने हेलसिंकी की घोषणा के अनुसार अपनी सूचित सहमति दी। ओकुलर सरफेस डिजीज इंडेक्स (ओएसडीआई) प्रश्नावली के समेकित, अनाम डेटा एकत्र करने के लिए कोई नैतिक अनुमोदन आवश्यक नहीं था, जो शुष्क आंख सिंड्रोम के लक्षणों की निगरानी के लिए चिकित्सकों द्वारा नियमित रूप से उपयोग किया जाता है। चित्रा 1 ए प्रोटोकॉल की एक रूपरेखा दिखाता है, जबकि चित्रा 1 बी में चित्र प्रक्रिया के मुख्य चरणों को दर्शाते हैं।
1. प्लेटलेट समृद्ध प्लाज्मा (पीआरपी) संग्रह
- पीआरपी एफेरेसिस
- इस प्रोटोकॉल के लिए, इतालवी कानूनों के अनुसार प्लेटलेट दाताओं का चयन करें: प्लेटलेट दाताओं को सामान्य दबाव और रक्त गणना मापदंडों के साथ 18-65 वर्ष का होना चाहिए और प्लेटलेट काउंट 180 x 109 प्लेटलेट्स / एल23 से कम नहीं होना चाहिए। योग्य दाता दान से पहले 1 सप्ताह के भीतर एंटीप्लेटलेट या एंटीकोआगुलेंट दवाएं नहीं ले सकते हैं।
- निर्माताओं के निर्देशों और राष्ट्रीयकानूनों 23 के अनुसार, एकल-दाता प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज्मा (पीआरपी) की 1 इकाई प्राप्त करने के लिए, एक स्वचालित रक्त संग्रह प्रणाली का उपयोग करके प्लाज्मा-प्लेटलेट-एफेरेसिस करें। एडेनिन साइट्रेट डेक्सट्रोज सॉल्यूशन ए (एसीडी-ए) एंटीकोआगुलेंट समाधान में पीआरपी एकत्र करें।
नोट: प्लेटलेट-एफेरेसिस एक निरंतर प्रक्रिया के साथ आयोजित किया जाता है; संग्रह का समय 40 मिनट और 90 मिनट के बीच की सीमा में है। दाताओं को वितरित एसीडी की मात्रा और प्रक्रियाओं का समय दाता विशेषताओं पर निर्भर करता है, जैसे, हेमटोक्रिट और सुई गेज।
- पीआरपी इकाइयों की विशेषताएं
नोट: निम्नलिखित चरण आमतौर पर प्लाज्मा-प्लेटलेट-एफेरेसिस प्रक्रिया के दौरान स्वचालित रक्त संग्रह प्रणाली द्वारा स्वचालित रूप से किया जाता है। कृपया निर्माता के निर्देश के मैनुअल की जांच करें।- एफेरेसिस द्वारा एकत्र की गई पीआरपी इकाइयों को अवशिष्ट प्लाज्मा की न्यूनतम मात्रा के साथ पर्याप्त मात्रा में परिरक्षक समाधान में पुन: निलंबित करें, जो पूरे भंडारण समय के दौरान पीएच > 6.4 को बनाए रखने के लिए आवश्यक है, एंटीकोआगुलेंट समाधान (लगभग 40 एमएल) के 180 एमएल नेट की औसत अंतिम मात्रा तक।
नोट: इतालवी कानून के अनुसार, गुणवत्ता नियंत्रण को यह आकलन करना होगा कि प्लेटलेट (पीएलटी) गिनती कम से कम 2.0 x10 11 पीएलटी / यूनिट है, जबकि अवशिष्ट ल्यूकोसाइट्स को 1 x 106 कोशिकाओं / इकाई से कम होना चाहिए। - आगेहेरफेर से पहले प्लेटलेट शेकर पर अधिकतम 5 दिनों के लिए 22 डिग्री सेल्सियस ± 2 डिग्री सेल्सियस पर ल्यूकोडेटेड और विकिरणित पीआरपी स्टोर करें।
- एफेरेसिस द्वारा एकत्र की गई पीआरपी इकाइयों को अवशिष्ट प्लाज्मा की न्यूनतम मात्रा के साथ पर्याप्त मात्रा में परिरक्षक समाधान में पुन: निलंबित करें, जो पूरे भंडारण समय के दौरान पीएच > 6.4 को बनाए रखने के लिए आवश्यक है, एंटीकोआगुलेंट समाधान (लगभग 40 एमएल) के 180 एमएल नेट की औसत अंतिम मात्रा तक।
- पीआरपी कमजोर पड़ना
- पीआरपी कमजोर पड़ने शुरू करने से तुरंत पहले, एक छेदने वाले स्पाइक के माध्यम से मुख्य बैग से एकत्र किए गए नमूने का उपयोग करके हेमोसाइटोमीटर के साथ पीएलटी गिनती करें।
नोट: द्वितीय श्रेणी के बायोहैजार्ड हुड के तहत बाँझपन में अगले चरणों का प्रदर्शन करें। प्रक्रिया के दौरान व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (लैब कोट, दस्ताने और चश्मे) पहनें। - 0.32 x 10 9 ± 0.03 x 109 पीएलटी / एमएल की अंतिम सांद्रता के लिए बाँझ0.9 % एनएसीएल की पर्याप्त मात्रा के साथ पीआरपी पतला करें, जो परिधीय रक्त में औसत पीएलटी एकाग्रता का अनुकरण करता है।
- ब्लड बैग के लिए एक छेदने वाली स्पाइक का लाभ उठाते हुए, पतला पीआरपी को 300 एमएल खाली संग्रह बैग में विभाजित करें ताकि 190 एमएल / बैग की शुद्ध मात्रा तक पहुंच सकें।
- संभावित माइक्रोबियल संदूषण का आकलन करने वाले गुणवत्ता नियंत्रण करने के लिए अवशिष्ट पतला पीआरपी (आमतौर पर 1 एमएल) के एलिकोट का उपयोग करें। माइक्रोबायोलॉजी प्रयोगशाला में निर्माता के निर्देशों के बाद एक बाँझपन परख करें ( सामग्री की तालिका देखें)।
नोट: एरोबिक रक्त संस्कृतियों के लिए विशिष्ट संस्कृति शीशियों का उपयोग करें, जो छोटी मात्रा में रक्त नमूनों से एरोबिक सूक्ष्मजीवों (मुख्य रूप से बैक्टीरिया और खमीर) की गुणात्मक संस्कृति और वसूली करने में सक्षम हैं। - पिघलने से पहले अधिकतम 2 महीने के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर पतला पीआरपी बैग स्टोर करें।
- पीआरपी कमजोर पड़ने शुरू करने से तुरंत पहले, एक छेदने वाले स्पाइक के माध्यम से मुख्य बैग से एकत्र किए गए नमूने का उपयोग करके हेमोसाइटोमीटर के साथ पीएलटी गिनती करें।
2. प्लेटलेट समृद्ध प्लाज्मा लाइसेट (पीआरपी-एल) तैयारी
- विगलन
- पिघलने की प्रक्रिया शुरू करने से पहले, सुनिश्चित करें कि एक गर्म स्नान 37 डिग्री सेल्सियस पर सेट किया गया है। पीआरपी बैग को गर्म स्नान में रखें और पूरी तरह से पिघलने तक प्रतीक्षा करें।
- पीआरपी-एल संग्रह
- कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए 3000 x g पर पीआरपी बैग को सेंट्रीफ्यूज करें।
नोट: अगले चरणों को द्वितीय श्रेणी के बायोहाजार्ड हुड के तहत बाँझपन में किया जाना चाहिए। - ट्रांसफर बैग के छेदने वाले स्पाइक का फायदा उठाते हुए, सेंट्रीफ्यूज्ड बैग को एक खाली बाँझ 300 एमएल ट्रांसफर बैग से कनेक्ट करें। सावधानी से, मलबे से बचते हुए, पीआरपी-एल सुपरनैटेंट को नए बैग में स्थानांतरित करें। जब संभव हो, बैग प्रेस का उपयोग करें।
- बैग सीलर के साथ पीआरपी-एल इकाई की कनेक्शन ट्यूब को सील करें।
- कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए 3000 x g पर पीआरपी बैग को सेंट्रीफ्यूज करें।
- पीआरपी-एल एलिकोटेशन
नोट: 190 एमएल पीआरपी युक्त एक प्रारंभिक इकाई (चरण 1.3.3 देखें) दो आई ड्रॉप किट भरने के लिए पर्याप्त है (रक्त घटकों से आंखों की बूंदों के आवेदन और संरक्षण के लिए उपयोग किए जाने वाले विशिष्ट चिकित्सा उपकरणों के विवरण के लिए, सामग्री की तालिका देखें)। आई ड्रॉप किट को द्वितीय श्रेणी के हुड के तहत खोला जाना चाहिए, जिसमें पहले से जुड़े सिरिंज के ऊपर पूरी स्ट्रिंग शीशियां और एंटी-बैक्टीरियल फिल्टर को बाहर करने के लिए स्टॉपकॉक के केंद्रीय तीर को बाईं ओर इंगित किया जाना चाहिए।- एक बाँझ सिरिंज के साथ 30-60 एमएल पीआरपी-एल एकत्र करें और सिरिंज को भरने लाइन पर ल्यूर / लॉक कनेक्शन से लिंक करें।
- निर्माता के निर्देशों के अनुसार, पीआरपी-एल युक्त सिरिंज और पूर्व-कनेक्टेड सिरिंज के बीच की रेखा को खोलने के लिए स्टॉपकॉक को आधे मोड़ से मोड़ें। पीआरपी-एल के साथ पूर्व-कनेक्टेड सिरिंज भरें।
- पीआरपी-एल सिरिंज को डिस्कनेक्ट करें, ल्यूर/लॉक कनेक्शन की ट्यूब कैप को बंद करें और स्टॉपकॉक को मूल स्थिति में घुमाएं। पीआरपी-एल के साथ शीशियों को भरने के लिए आई ड्रॉप किट सिरिंज का उपयोग करें।
- चरण 2.3.1.-2.3.3 से प्रक्रिया दोहराएँ। जब तक कि सभी आवेदक शीशियां भर न जाएं। सुनिश्चित करें कि प्रत्येक आवेदक ठीक से भरा हुआ है, फिर व्यक्तिगत रूप से उन्हें बैग सीलर के साथ सील करें।
- एक नई आई ड्रॉप किट के साथ प्रक्रिया को दोहराएं।
- संभावित माइक्रोबियल संदूषण का आकलन करने के लिए अवशिष्ट पतला पीआरपी-एल के एक छोटे से एलिकोट का उपयोग करें (चरण 1.3.4 देखें)।
नोट: यदि तरल गलती से स्ट्रिंग के अंत में एंटी-बैक्टीरियल फिल्टर तक पहुंच जाता है, तो सक्शन सिरिंज प्रतिरोध का विरोध कर सकती है, भरने में बाधा डाल सकती है। भरने के चक्र को जारी रखने के लिए, स्ट्रिंग के अंत में एंटी-बैक्टीरियल हाइड्रोफोबिक फिल्टर से लगभग 5/6 एलिकोट के लिए स्ट्रिंग के अंत खंड को उठाएं। इस स्थिति में, एक नई बाँझ सिरिंज (30 एमएल मात्रा) का उपयोग करें जो पहले से ही हवा से भरा हुआ है। एंटी-बैक्टीरियल फिल्टर के मादा ल्यूर /लॉक को कनेक्ट करें और रक्त घटक के सभी अवशेषों को हटाने के लिए सिरिंज के प्लंजर पर जोर से और बार-बार दबाएं और एंटी-बैक्टीरियल फिल्टर की झिल्ली को तरल से मुक्त करें। सिरिंज को हटा दें और शेष शीशियों को भरें।
- पीआरपी-एल भंडारण
- प्रत्येक एप्लिकेटर को ठीक से लेबल करें और उन्हें प्लास्टिक बैग में डालें। प्लास्टिक बैग को भी लेबल करें, दाता के रक्त समूह को उजागर करने का ध्यान रखें।
- इतालवी कानून23 और दिशानिर्देश 24 के अनुसार, रोगी असाइनमेंट से पहले अधिकतम 24 महीनों के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
3. पीआरपी-एल व्यवस्था
- पीआरपी-एल रक्त समूह का मिलान करके अधिमानतः रोगी असाइनमेंट करें। एक शांत बॉक्स का उपयोग करके पीआरपी-एल एप्लिकेटर शीशियों को वितरित करें और सुनिश्चित करें कि प्रत्येक एप्लिकेटर शीशी में 1.45 एमएल पीआरपी-एल है, जो लगभग 45 बूंदों से मेल खाती है। रोगी को निर्देश दें कि आवेदक शीशियों को -15 डिग्री सेल्सियस पर 1 महीने तक रोगियों के घरों में संग्रहीत किया जा सकता है।
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Representative Results
सीरम-व्युत्पन्न आई ड्रॉप (जो आंखों की सतह की बीमारियों के उपचार के लिए सबसे अधिक बार उपयोग किया जाने वाला रक्त-आधारित उत्पाद है) के उपयोग का तर्क जीएफ की उनकी सामग्री में निहित है, जो लगभग पूरी तरह से प्लेटलेट्स को प्रसारित करने से प्राप्त होते हैं। पीआरपी में परिधीय रक्त सीरम की तुलना में प्लेटलेट्स (और, परिणामस्वरूप, प्लेटलेट-व्युत्पन्न जीएफ) की काफी अधिक संख्या होती है, जो 0.15 x 10 9-0.45 x 109 पीएलटी / एमएल के बीच होती है। इतालवी कानूनों के अनुसार, पीआरपी इकाइयों में प्लेटलेट काउंट कम से कम 0.9 x 109-1 x 109 पीएलटी / एमएल होना चाहिए। इसलिए, सीरम आई ड्रॉप की प्रभावकारिता का अनुकरण करने वाले उत्पाद को प्राप्त करने के लिए, पीआरपी को लाइसेट तैयार करने से पहले शारीरिक प्लेटलेट सामग्री को पतला किया जाना चाहिए।
फिर भी, चूंकि ऊतक की मरम्मत मुख्य रूप से प्लेटलेट-व्युत्पन्न जीएफ द्वारा संचालित होती है, इसलिए अकेले पीएलटी गिनती आंखों की सतह के रोगों की प्रभावी चिकित्सा के लिए भ्रामक हो सकती है। डीईडी में, जो आंखों की बीमारी है जो आमतौर पर रक्त-व्युत्पन्न आंखों की बूंदों के साथ इलाज की जाती है, आंसू फिल्म उत्पादन और होमियोस्टेसिस बिगड़ा हुआ है। डीईडी के उपचार के लिए प्लेटलेट-आधारित उत्पाद, इसलिए, आँसू की शारीरिक सामग्री की नकल भी करनी चाहिए।
आंखों की सतह की बीमारियों के इलाज के लिए सबसे उपयुक्त पीआरपी-एल की पहचान करने के लिए, चरण 1.3.2 में वर्णित है। वर्तमान प्रोटोकॉल के अनुसार, हमने प्रारंभिक रूप से विभिन्न पीआरपी कमजोर पड़ने का आकलन किया, उनकी पीएलटी सामग्री (0.7 x 109/एमएल और 0.3 x 109/एमएल के बीच), और उन लोगों में से कुछ प्रतिनिधि जीएफ जो आंखों के ऊतकों की मरम्मत में शामिल होने के लिए जाने जाते हैं12,20,21।
प्लेटलेट काउंट एक हेमोसाइटोमीटर के साथ किया गया था, जबकि जीएफ का मूल्यांकन मल्टीप्लेक्स प्रोटीन परिमाणीकरण परख के माध्यम से किया गया था। परख निर्माता के निर्देशों के अनुसार पहले वर्णित25 के रूप में किया गया था। इस पांडुलिपि में दिखाए गए जीएफ को अर्ध-मात्रात्मक प्रोटीन सरणी के साथ पीआरपी लाइसेट पर किए गए 36 जीएफ और जीएफआर की प्रारंभिक स्क्रीनिंग के बाद परिमाणीकरण के लिए चुना गया था। ल्यूमिनेक्स परिमाणीकरण 36 स्क्रीनिंग किए गए जीएफ में से 3 पर किया गया था: ईजीएफ और पीडीजीएफ (जो हमारे पीआरपी लाइसेट में सबसे प्रचुर मात्रा में निकले) और टीजीएफ -1,2,3 आइसोफॉर्म (जिसके लिए सामग्री आंख की सतह उपचार के लिए महत्वपूर्ण है21)। ईजीएफ और पीडीजीएफ सामग्री को मापा गया क्योंकि वे पीआरपी-एल22 की प्रभावकारिता को प्रभावित कर सकते हैं, जबकि टीजीएफ आइसोफॉर्म को प्रतिरक्षा सिग्नलिंग21 में उनकी ज्ञात भूमिका के लिए चुना गया था।
चूंकि प्रोटीन सरणियां विभिन्न पीआरपी26 के लक्षण वर्णन पर एक और इन विट्रो अध्ययन का हिस्सा हैं, इसलिए उन आंकड़ों को इस पांडुलिपि में प्रस्तुत नहीं किया गया है।
हमने मात्रात्मक रूप से दो अलग-अलग दाताओं (डी 1 और डी 2) से पीआरपी लाइसेट में ईजीएफ, पीडीजीएफ और टीजीएफ का मूल्यांकन किया, जो पहले 0.7 x 10 9-0.3 x 10 9 पीएलटी / एमएलके बीच 0.9% एनएसीएल में पतला था। चित्रा 2 0.3 x 109 पीएलटी / एमएल कमजोर पड़ने के परिणामों को दर्शाता है, जो आंसू संरचना के समान निकला।
आंसू रचना पर साहित्य डेटा के आधार पर 0.3 x 109 PLTs / mL कमजोर पड़ने का चयन किया गया था। औसत आंसू मूल्य की तुलना में ईजीएफ मान काफी कम पाए गए लेकिन फिर भी सामान्यता27 की सीमा में। यहां तक कि पीडीजीएफ, दो दाताओं के बीच अत्यधिक परिवर्तनशील होने के बावजूद, हमेशा सामान्य आँसू20 में पाए जाने वाले एकाग्रता के बराबर था। अंत में, टीजीएफ -1 को पीआरपी-एल में सबसे प्रचुर मात्रा में आइसोफॉर्म पाया गया, जो आँसू21 के समान था।
एक बार जब एफेरेसिस पीआरपी-एल तैयार करने के लिए सबसे उपयुक्त पीएलटी कमजोर पड़ने की पहचान की गई थी, तो ट्रांसफ्यूजन मेडिसिन यूनिट ने 2015 में आंखों की सतह विकारों से प्रभावित रोगियों को इन उत्पादों को वितरित करना शुरू कर दिया था। नेत्र रोग विशेषज्ञों ने डीईडी लक्षणों की निगरानी के लिए नियमित रूप से ओएसडीआई प्रश्नावली एकत्र की; ओएसडीआई परीक्षण जीवन की गुणवत्ता के उपायों का आकलन करता है, जैसे कि ओकुलर जलन की धारणा और यह दृष्टि से संबंधित कामकाज को कैसे प्रभावित करता है। प्रश्नावली, 1995 में एलर्गन इंक में परिणाम अनुसंधान समूह द्वारा बनाई गई थी और अब डीईडी की निगरानी के लिए एक वैध साधन के रूप में स्वीकार की जाती है, रोगियों को प्रस्तुत की जाती है और पहले वर्णित28,29 के रूप में विश्लेषण किया जाता है।
यहां, हम जनवरी 2020 और जनवरी 2021 (एन = 27) के बीच इलाज किए गए डीईडी रोगियों के ओएसडीआई परीक्षणों के कुल परिणाम दिखाते हैं। पीआरपी-एल के साथ 6 महीने की चिकित्सा के बाद, ओएसडीआई स्कोर 21 ± 56 से घटकर 21 ± 45 हो गया, जो रोगियों के जीवन की गुणवत्ता में सुधार का संकेत देता है (चित्रा 3)।
इन आंकड़ों के अभी भी गंभीर सीमा में होने और प्रभावकारिता के नैदानिक परिणामों से संबंधित नहीं होने के बावजूद, वे सुझाव देते हैं कि डीईडी रोगी पीआरपी-एल को एक उपयोगी उत्पाद मानते हैं जो ओकुलर असुविधा को सुधारता है; ओकुलर सतह रोगों के इलाज में इसकी प्रभावकारिता का आकलन करने के उद्देश्य से संभावित नैदानिक परीक्षणों में इस पहलू की आगे जांच की जानी चाहिए।
तालिका 1 में, हम आई ड्रॉप30 और अन्य उद्देश्यों के लिए एलोजेनिक पीआरपी-एल तैयार करने के लिए एक अन्य विधि के साथ उत्पादन की वर्तमान विधि की तुलना की रिपोर्ट करतेहैं। हमारे ज्ञान के लिए, झांग के30 प्रोटोकॉल और वर्तमान प्रोटोकॉल आंखों की सतह के लिए पीआरपी-एल का उत्पादन करने के लिए एकमात्र प्रकाशित तरीके हैं। दोनों में, पीआरपी-एल एफेरेसिस से प्राप्त होता है; पीआरपी-एल उत्पादन में सुधार के लिए दो प्रोटोकॉल के बीच अंतर, मुख्य रूप से फ्रीज और पिघलने चक्रों और सेंट्रीफ्यूजेशन चरणों की संख्या से संबंधित है, की तुलना की जानी चाहिए। फिर भी, ये पद्धतिगत अंतर अन्य ऊतकों पर परीक्षण किए गए पीआरपी-एल की पुनर्योजी क्षमता के लिए हानिकारक साबित नहीं हुएहैं।
चित्र 1: प्रोटोकॉल की पीआरपी-एल (ए) योजना की तैयारी के लिए प्रोटोकॉल के मुख्य चरण, पीआरपी संग्रह से पीआरपी-एल तैयारी और वितरण तक। (बी) प्रोटोकॉल के मुख्य चरणों के प्रतिनिधि चित्र। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: पीआरपी-एल के 0.3 x 109/एमएल कमजोर पड़ने के लिए प्लेटलेट-व्युत्पन्न विकास कारकों का ल्यूमिनेक्स परिमाणीकरण (ए) एपिडर्मल ग्रोथ फैक्टर (ईजीएफ); (बी) प्लेटलेट-व्युत्पन्न विकास कारक (पीडीजीएफ); (सी) ट्रांसफॉर्मिंग ग्रोथ फैक्टर-बीटा आइसोफॉर्म 1 (टीजीएफ1); (डी) ट्रांसफॉर्मिंग ग्रोथ फैक्टर-बीटा आइसोफॉर्म 2 (टीजीएफ2); (ई) ट्रांसफॉर्मिंग ग्रोथ फैक्टर-बीटा आइसोफॉर्म 3 (टीजीएफ3)। मान pg / mL के रूप में व्यक्त किए जाते हैं, औसत ± तीन स्वतंत्र मापों का मानक विचलन। डी 1 और डी 2 दो अलग-अलग प्लेटलेट दाता हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3: जनवरी 2020 और जनवरी 2021 के बीच पीआरपी-एल के साथ इलाज किए गए डीईडी रोगियों के कुल ओएसडीआई स्कोर एयूएसएल-आईआरसीसीएस डी रेजियो एमिलिया की ओप्थाल्मोलॉजी यूनिट में। एन = 27 रोगी। ओएसडीआई स्कोर कुल परिणामों को मानक त्रुटि के औसत ± रूप में दर्शाया जाता है, पी-वैल्यू की गणना डेटा विश्लेषण सॉफ्टवेयर के साथ युग्मित टी-टेस्ट के साथ की गई थी। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
| यह लेख | आंख के लिए पीआरपी-एल (इन विट्रो अध्ययन) 29 | अन्य प्रयोजनों के लिए पीआरपी-एल21 | |
| स्रोत | PLTs apheresis | PLTs apheresis | एफेरेसिस और पूरा खून |
| फ्रीज और पिघलना चक्र | 1 (-80 डिग्री सेल्सियस पर) | 2 (-80 डिग्री सेल्सियस पर) | 1-3 (-20 डिग्री सेल्सियस और -80 डिग्री सेल्सियस पर) |
| भंडारण तापमान | -80 डिग्री सेल्सियस पर | -80 डिग्री सेल्सियस पर | -20 डिग्री सेल्सियस और -80 डिग्री सेल्सियस पर |
| भंडारण से पहले सेंट्रीफ्यूजेशन की गति | 3000 x g/30 min | 3500 x g/30 min | 400-3000 x g/6 मिनट -30 मिनट |
| भंडारण से पहले निस्पंदन | नहीं | हाँ | नहीं/ हाँ |
तालिका 1: एफेरेसिस द्वारा एकत्र किए गए प्लेटलेट-आधारित उत्पादों से एलोजेनिक पीआरपी-एल तैयार करने के लिए प्रोटोकॉल की तुलना।
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Discussion
हाल के वर्षों में, ओकुलर सतह विकृति के लिए प्लेटलेट-आधारित उत्पादों का नैदानिक उपयोग बढ़ गया है, लेकिन वैज्ञानिक मजबूती की कमी से उनका प्रसार बाधित होता है। यह मुख्य रूप से दाता स्रोतों और तैयारी प्रोटोकॉल में व्यापक विषमता के कारण होता है, जो अक्सर पूरी तरह से प्रकट नहीं होते हैं या विशेष रूप से उस उद्देश्य के लिए डिज़ाइन नहीं किए जाते हैं जिसके लिए उन्हें वितरित किया जाता है। विशेष रूप से, एफेरेसिस द्वारा एकत्र किए गए प्लेटलेट-आधारित उत्पादों के बारे में जानकारी अभी भी कमी है। इसलिए, वर्तमान कार्य का उद्देश्य डीईडी के उपचार के लिए एफेरेसिस द्वारा प्राप्त प्लेटलेट-समृद्ध प्लाज्मा लाइसेट (पीआरपी-एल) के चरण-दर-चरण प्रसंस्करण का वर्णन करना था।
पीआरपी-एल आंखों की बूंदों के उत्पादन के लिए एक इष्टतम स्रोत है क्योंकि इसमें अन्य रक्त-आधारितउत्पादों की तुलना में अधिक जीएफ होते हैं, और, सीरम या पीआरपी की तुलना में, इसका उत्पादन या भंडारण सस्ती और सरल होता है। पीआरपी-एल प्राप्त करने के लिए, प्लेटलेट्स को अपनी सामग्री जारी करने के लिए लाइसिस (आमतौर पर एक या अधिक फ्रीज और पिघलना चक्र के माध्यम से) के अधीन किया जाता है। यह प्रक्रिया सक्रिय अणुओं में समृद्ध समाधान की गारंटी देती है जो ऊतक पुनर्जनन22,26 को उत्तेजित करती है। पीआरपी-एल22 के साथ बीमारियों की बढ़ती संख्या का इलाज किया गया है, लेकिन प्लेटलेट संग्रह और पीआरपी-एल उत्पादन 3,22 में कम मानकीकरणमानदंडों के कारण नेत्र विज्ञान में उपयोग के लिए संकेत अभी भी कमजोर है।
एलोजेनिक प्लेटलेट-आधारित उत्पादों को प्राथमिकता दी जानी चाहिए क्योंकि वे दाता विशेषताओं और तैयारी की विधि दोनों के संदर्भ में ऑटोलॉगस लोगों की तुलना में अधिक मानक हैं। रोगी स्वास्थ्य की स्थिति उत्पाद 6,16,17 की गुणवत्ता को प्रभावित कर सकती है, जबकि ट्रांसफ्यूजन सेवाएं सीधे उपलब्ध नहीं होने पर पूरे रक्त से ऑटोलॉगस प्लेटलेट्स एकत्र करने के लिए इन-हाउस किट ट्रांसफ्यूजन दवा31 में आवश्यक मानक गुणवत्ता को पूरा नहीं करती हैं।
हमारे ज्ञान के लिए, नेत्र विज्ञान3 में एलोजेनिक पीआरपी-एल के उपयोग को दर्शाने वाले कोई नैदानिक अध्ययन नहीं हैं, जबकि ऑटोलॉगस पीआरपी-एल आई ड्रॉप्स 3 के बारे में कुछ रिपोर्टें हैं और आंखों की सतह की बीमारियों वाले रोगियों के इलाज के लिए कॉर्ड रक्त से प्राप्त एलोजेनिक पीआरपी-एल का उपयोग करके केवल एक अध्ययन कियागया है। यद्यपि एलोजेनिक पीआरपी-एल नैदानिकदिशानिर्देशों 24 में सूचीबद्ध है और इसका उपयोग3,30 प्रस्तावित किया गया है, फिर भी अन्य उपचारों और अन्य रक्त-आधारित उत्पादों (जैसे, सीरम) की तुलना में इसकी प्रभावकारिता पर सबूतों की कमी है। यहां, प्रस्तुत प्रोटोकॉल का उद्देश्य वैज्ञानिक समुदाय को उत्पादन के सामान्य तरीकों को विकसित करने और पद्धतिगत मतभेदों पर प्रकाश डालने में मदद करना है।
यहां, हमने एफेरेसिस द्वारा एकत्र किए गए एलोजेनिक पीआरपी से शुरू होने वाले पीआरपी-एल उत्पादन का वर्णन किया। प्लेटलेट लाइसेट प्राप्त करने के लिए प्लेटलेट-आधारित एलोजेनिक उत्पादों को बफी-कोट (बीसी) से भी एकत्र किया जा सकता है, और दोनों स्रोतों को समान रूपसे रिपोर्ट किया गया है। बीसी पूल किए गए दाताओं (आमतौर पर चार या पांच) से प्राप्त किए जाते हैं, इस प्रकार अंतर-व्यक्तिगत मतभेदों को कम करते हैं। इसके विपरीत, पूलिंग संक्रामक एजेंटों या प्रियोन्स को प्रसारित करने या एलोजेनिक प्रतिक्रिया को उत्तेजित करने के जोखिम को बढ़ाती है 31,33. एफेरेसिस एक जटिल और आक्रामक प्रक्रिया है, और केवल दाताओं का एकअल्पसंख्यक इसके लिए पात्र या अनुपालन है। फिर भी, एफेरेसिस द्वारा प्राप्त प्लेटलेट-आधारित उत्पाद अन्य अवशिष्ट परिसंचारी रक्त कोशिकाओं से मुक्त होते हैं और इसमें पीएलटी35 की उच्च मात्रा होती है। इन कारणों से, वर्तमान काम इन दो अलग-अलग स्रोतों से पीआरपी-एल की तुलना करने के लिए नैदानिक अध्ययन विकसित करने पर केंद्रित है।
इस प्रोटोकॉल में, एफेरेसिस द्वारा एकत्र की गई पीआरपी इकाइयों में पीएलटी की प्रारंभिक एकाग्रता औसतन 1 x 109 / एमएल थी, जो अन्य प्लेटलेट-आधारितउत्पादों के लिए रिपोर्ट की गई सांद्रता के अनुरूप है। इस विधि में, पीएलटी को बाद में 0.9% NaCl समाधान के साथ 0.3 x 109 / mL तक पतला किया जाता है। अन्य प्रोटोकॉल कमजोर पड़ने के लिए प्लाज्मा के उपयोग की रिपोर्ट करतेहैं।
कुछ अध्ययनों ने नेत्र विज्ञान में पीआरपी-एल के उपयोग की सूचना दी है; इन मामलों में, ऑटोलॉगस आई ड्रॉप्स को पीएलटी की सांद्रता पर तैयार किया गया था जो 0.5 x 109 / एमएल -1 एक्स 109 / एमएल 36,37,38 से लेकर था। जैसा कि पहले चर्चा की गई है, मानकीकरण मार्कर वांछनीय हैं और उचित कमजोर पड़ने का निर्धारण करने में भी मदद करेंगे। यहां, उदाहरण के लिए, हम पीआरपी-एल में कुछ महत्वपूर्ण जीएफ की एकाग्रता की रिपोर्ट करते हैं। ईजीएफ और पीडीजीएफ सामग्री पीआरपी-एल22 की प्रभावकारिता को प्रभावित करती है, जबकि टीजीएफ आइसोफॉर्म प्रतिरक्षा सिग्नलिंग 21,39 को विनियमित करने में शामिल हैं, और उनकी एकाग्रता को बारीकी से विनियमित किया जाता है। इसलिए, प्लेटलेट-आधारित आंखों की बूंदों में टीजीएफ एकाग्रता न केवल प्रभावकारिता को प्रभावित कर सकती है, बल्कि संभावित हानिकारक प्रभाव भी प्राप्तकर सकती है; इस प्रकार, उचित कमजोर पड़ने को परिभाषित करने से पहले इसकी सावधानीपूर्वक जांच की जानी चाहिए। बहरहाल, चयनित कमजोर पड़ने का चयन - 0.3 x 109 पीएलटी / एमएल - आँसू21,25 में जीएफ सामग्री पर आधारित था। झांग एट अल ने पहले सीरम-आधारित आई ड्रॉप्स, ऑटोलॉगस और एलोजेनिक दोनों, और प्लेटलेट-आधारित लाइसेट की तुलना जीएफ में उनकी सामग्री के लिए और विट्रो30 में कॉर्नियल कोशिकाओं के उत्थान को बढ़ावा देने की उनकी क्षमता के लिए की थी। अध्ययन से पता चला है कि इन उत्पादों में तुलनीय विशेषताएं हैं, पीआरपी-एल में उच्च ईजीएफ एकाग्रता है लेकिन फाइब्रोनेक्टिन कम है। उनके प्रोटोकॉल में, फ्रीज / पिघलने की प्रक्रिया को दो बार दोहराया गया था, सेंट्रीफ्यूज 30 मिनट के लिए 3500 x g पर किया गया था, और प्लेटलेट लाइसेट -80 डिग्री सेल्सियस30 पर संग्रहीत किया गया था।
ठंड और पिघलना वास्तव में एक महत्वपूर्ण कदम है; अधिकांश प्रोटोकॉल (इस सहित) -80 डिग्री सेल्सियस ठंड और 37 डिग्री सेल्सियस पिघलने के साथ विकसित किए गए थे, लेकिन फ्रीजिंग को -24 डिग्री सेल्सियस, -196 डिग्री सेल्सियस और -150 डिग्री सेल्सियस 22,33 पर भी रिपोर्ट किया गया है। सीमित संख्या में अध्ययनों ने प्लेटलेट लाइसेट22,33 प्राप्त करने के लिए सोनिकेशन या विलायक / डिटर्जेंट उपचार की भी सूचना दी। पीआरपी-एल की तैयारी में पहले रिपोर्ट किए गए अन्य पद्धतिगत चर सेंट्रीफ्यूजेशन चरण से संबंधित हैं - 300 x g और 10000 x g के बीच, 2 मिनट से 60 मिनट तक - और दीर्घकालिक भंडारण, जो ज्यादातर मामलों में, -80 डिग्री सेल्सियस पर है, हालांकि समान उत्पादों को सीधे -20डिग्री सेल्सियस पर भी संग्रहीत किया गया है। भंडारण की स्थिति, विशेष रूप से, सावधानीपूर्वक निगरानी की जानी चाहिए क्योंकि वे लाइसेट में निहित जीएफ की उपलब्धता और गतिविधि को प्रभावित कर सकते हैं। इस अत्यधिक विषम संदर्भ में, बायोजेनिक कारकों की रिहाई और चिकित्सीय प्रभाव में अंतर को ध्यान में रखते हुए गुणवत्ता नियंत्रण और नैदानिक अध्ययनों का तत्काल मूल्यांकन किया जाना चाहिए।
अंत में, यहां हम दिखाते हैं कि 6 महीने के लिए पीआरपी-एल प्राप्त करने वाले शुष्क आंख रोग वाले रोगियों के समग्र विश्लेषण से सकारात्मक परिणाम के साथ इस विधि का महत्वपूर्ण मूल्यांकन कैसे किया गया है (ओएसडीआई प्रश्नावली3)। हालांकि आशाजनक, अकेले ओएसडीआई डीईडी और अन्य ओकुलर सतह रोगों के उपचार में पीआरपी-एल की प्रभावकारिता निर्धारित करने के लिए पर्याप्त नहीं है, और एलोजेनिक पीआरपी-एल के उपयोग पर नैदानिक अध्ययन की आवश्यकता है। इसके अलावा, पद्धतिगत प्रक्रिया को अनुकूलित करने के लिए वैकल्पिक पद्धतिगत चरणों (यानी, फ्रीज और पिघलना, सेंट्रीफ्यूजेशन, स्टोरेज) के कारण संभावित उत्पाद संरचना अंतर की तुलना की जानी चाहिए।
अंत में, रक्त स्रोतों और प्रोटोकॉल की उच्च विविधता अभी भी ओकुलर सतह रोगों के नैदानिक उपचार के लिए रक्त-आधारित उत्पादों के निश्चित अनुवाद में बाधा डालती है। यद्यपि पीआरपी-एल कुछ लाभप्रद विशेषताओं के साथ एक उभरता हुआ उत्पाद है, इसके उपयोग को मान्य करने और सामान्य दिशानिर्देशों को विकसित करने के लिए आगे के अध्ययन आवश्यक हैं। तैयारी के प्रोटोकॉल को साझा करना और विवरण देना प्रयोज्यता का विस्तार कर सकता है और महत्वपूर्ण कदमों पर प्रकाश डाल सकता है।
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Disclosures
लेखक ों ने हितों के टकराव की घोषणा नहीं की है।
Acknowledgments
लेखक दाता-व्युत्पन्न प्लेटलेट एकाग्रता प्रदान करने के लिए "कासा डेल डोनो डी रेजियो एमिलिया" को धन्यवाद देना चाहते हैं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipments | |||
| CompoSeal Mobilea II | Fresenius Kabi, Germany | bag sealer | |
| HeraSafe hood | Heraeus Instruments, Germany | Class II biohazard hood | |
| MCS+ 9000 Mobile Platelet Collection System | Haemonetics, Italy | automated plasma and multicomponent collection equipment for donating platelet, red cell, plasma, or combination blood components | |
| Platelet shaker, PF396i | Helmer, USA | Platelet shaker | |
| Raycell X-ray Blood Irradiator | MDS Nordion, Canada | X-ray Blood Irradiator | |
| ROTIXA 50RS | Hettich Zentrifugen, Germany | High speed entrifuge | |
| Sysmex XS-1000i | Sysmex Europe GMBH, Germany | haemocytometer for platelet count | |
| Warm bath, WB-M15 | Falc Instruments, Italy | Warm bath | |
| Materials | |||
| ACD-A anticoagulant solution A | Fenwal Inc., USA | DIN 00788139 | anticoagulant solution for platelet apheresis (1000 ml) |
| BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials | BD Biosciences, USA | BD 442020 | Sterility assay |
| BD BACTEC Peds Plus/F Culture vials | BD Biosciences, USA | 442020 | At least 2 vials for sterility assay |
| BD Luer Lok Syringe | BD Plastipack, USA | 300865 | At least 4 sterile syringes (50 ml) |
| Bio-Plex Human Cancer Panel 1 | BioRad Laboratories, USA | 171AC500M | Standard panel for PDGF isoforms assessment |
| Bio-Plex Human Cancer Panel 2 | BioRad Laboratories, USA | 171AC600M | Standard panel for EGF assessment |
| Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader | BioRad Laboratories, USA | Magpix | This instrument allows multiple immunoassays using functionalized magnetic beads. |
| Bio-Plex Pro TGF-b Assay | BioRad Laboratories, USA | 10024984 | Set and standards for TGFb isoforms assessment |
| BioRet | ARIES s.r.l., Italy | A2DH0020 | At least 4 piercing spike for blood bags |
| Blood collection tube | BD Vacutainer, USA | 367835 | 1 tube, necessary to perform platelet counts |
| Eye drops kit. COL Medical Device for the application and preservation of eye drops from haemocomponents | Biomed Device s.r.l., Italy | COLC50 | Eye drops kit. At least 2 kits for each PRP unit collected |
| Human Cancer PDGF-AB/BB Set 1x96well | BioRad Laboratories, USA | 171BC511 | Set for PDGF isoforms assessment |
| Human Cancer2 EGF Set 1x96well | BioRad Laboratories, USA | 171BC603M | Set for EGF assessment |
| NaCl 0.9% sterile solution | Baxter S.p.A., Italy | B05BB01 | 1000 ml |
| OSDI Questionnaire | Allergan Inc., USA | OSDI | Ocular Surface Disease Index Questionnaire |
| Piercing spike | BioRet ARIES s.r.l., Italy | BS051004 | Spike |
| Platelet Additive Solution A+ T-PAS+ | TERUMO BCT Inc., Italy | 40842 | preservative solution for platelet concentrates (1000 ml) |
| Software Excel | Microsoft, USA | Excel | Data analysis software |
| Teruflex Transfer bag 1000 ml | TERUMO BCT Inc., Italy | BB*T100BM | 1 for PRP dilution |
| Teruflex Transfer bag 300 ml | TERUMO BCT Inc., Italy | BB*030CM | At least 6 for each PRP unit collected |
References
- Everts, P. A., et al. Platelet-rich plasma and platelet gel: A review. The Journal of Extra-Corporeal Technology. 38 (2), 174 (2006).
- Giannaccare, G., et al. Blood derived eye drops for the treatment of cornea and ocular surface diseases. Transfusion and Apheresis Science. 56 (4), 595-604 (2017).
- Bernabei, F., et al. Blood-based treatments for severe dry eye disease: The need of a consensus. Journal of Clinical Medicine. 8 (9), 1478 (2019).
- Findlay, Q., Reid, K. Dry eye disease: When to treat and when to refer. Australian Prescriber. 41 (5), 160-163 (2018).
- Clayton, J. A.
- Jones, L., et al. TFOS DEWS II management and therapy report. The Ocular Surface. 15 (3), 575-628 (2017).
- Holland, E. J., Darvish, M., Nichols, K. K., Jones, L., Karpecki, P. M. Efficacy of topical ophthalmic drugs in the treatment of dry eye disease: A systematic literature review. The Ocular Surface. 17 (3), 412-423 (2019).
- Shih, K. C., Lun, C. N., Jhanji, V., Thong, B. Y. H., Tong, L. Systematic review of randomized controlled trials in the treatment of dry eye disease in Sjogren syndrome. Journal of Inflammation. 14, 26 (2017).
- Rusciano, D., et al. Age-related dry eye lactoferrin and lactobionic acid. Ophthalmic Research. 60 (2), 94-99 (2018).
- Craig, J. P., et al. TFOS DEWS II definition and classification report. The Ocular Surface. 15 (3), 276-283 (2017).
- Drew, V. J., Tseng, C. L., Seghatchian, J., Burnouf, T. Reflections on dry eye syndrome treatment: Therapeutic role of blood products. Frontiers in Medicine. 5, 33 (2018).
- Giannaccare, G., et al. Blood derived eye drops for the treatment of cornea and ocular surface diseases. Transfusion and Apheresis Science. 56 (4), 595-604 (2017).
- Acebes-Huerta, A., et al. Platelet-derived bio-products: Classification update, applications, concerns and new perspectives. Transfusion and Apheresis Science. 59 (1), 102716 (2020).
- Quartieri, E., et al. Metabolomics comparison of cord and peripheral blood-derived serum eye drops for the treatment of dry eye disease. Transfusion and Apheresis Science. 60 (4), 103155 (2021).
- Badami, K. G., McKellar, M. Allogeneic serum eye drops: Time these became the norm. British Journal of Ophthalmology. 96 (8), 1151-1152 (2012).
- Hwang, J., et al. Comparison of clinical efficacies of autologous serum eye drops in patients with primary and secondary Sjögren syndrome. Cornea. 33 (7), 663-667 (2014).
- Chiang, C. C., Lin, J. M., Chen, W. L., Tsai, Y. Y. Allogeneic serum eye drops for the treatment of severe dry eye in patients with chronic graft-versus-host disease. Cornea. 26 (7), 861-863 (2007).
- Jonsdottir-Buch, S. M., Lieder, R., Sigurjonsson, O. E. Platelet lysates produced from expired platelet concentrates support growth and osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. PLoS One. 8 (7), 68984 (2013).
- Altaie, A., Owston, H., Jones, E. Use of platelet lysate for bone regeneration - Are we ready for clinical translation. World Journal of Stem Cells. 8 (2), 47-55 (2016).
- Vesaluoma, M., Teppo, A. M., Grönhagen-Riska, C., Tervo, T. Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) in tear fluid: A potential modulator of corneal wound healing following photorefractive keratectomy. Current Eye Research. 16 (8), 825-831 (1997).
- Zheng, X., et al. Evaluation of the transforming growth factor β activity in normal and dry eye human tears by CCL-185 cell bioassay. Cornea. 29 (9), 1048 (2010).
- Zamani, M., et al. Novel therapeutic approaches in utilizing platelet lysate in regenerative medicine: Are we ready for clinical use. Journal of Cellular Physiology. 234 (10), 17172-17186 (2019).
- Ministro della Salute. Disposizioni relative ai requisiti di qualità e sicurezza del sangue e degli emocomponenti. Italian Ministry of Health. , DECRETO 2 Novembre 2015 (2015).
- Aprili, G., et al. Raccomandazioni SIMTI sugli emocomponenti per uso non trasfusionale. Società Italiana di Medicina Trasfusionale e Immunoematologia. , (2012).
- Schiroli, D., et al. Comparison of two alternative procedures to obtain packed red blood cells for β-thalassemia major transfusion therapy. Biomolecules. 11 (11), 1638 (2021).
- Pulcini, S., et al. Apheresis platelet rich-plasma for regenerative medicine: An in vitro study on osteogenic potential. International Journal of Molecular Science. 22 (16), 8764 (2021).
- Ohashi, Y., et al. Presence of epidermal growth factor in human tears. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 30 (8), 1879-1882 (1989).
- Vitale, S., Goodman, L. A., Reed, G. F., Smith, J. A. Comparison of the NEI-VFQ and OSDI questionnaires in patients with Sjögren's syndrome-related dry eye. Health Quality of Life Outcomes. 2, 44 (2004).
- Schiffman, R. M., Christianson, M. D., Jacobsen, G., Hirsch, J. D., Reis, B. L. Reliability and validity of the Ocular Surface Disease Index. Archives of Ophthalmology. 118 (5), 615-621 (2000).
- Zhang, J., et al. Characteristics of platelet lysate compared to autologous and allogeneic serum eye drops. Translational Vision Science and Technology. 9 (4), 24 (2020).
- Henschler, R., Gabriel, C., Schallmoser, K., Burnouf, T., Koh, M. B. Human platelet lysate current standards and future developments. Transfusion. 59 (4), 1407-1413 (2019).
- Samarkanova, D., et al. Clinical evaluation of allogeneic eye drops from cord blood platelet lysate. Blood Transfusion. 19 (4), 347-356 (2021).
- Strunk, D., et al. International Forum on GMP-grade human platelet lysate for cell propagation: Summary. Vox Sanguinis. 113 (1), 80-87 (2018).
- Schiroli, D., et al. The impact of COVID-19 outbreak on the Transfusion Medicine Unit of a Northern Italy Hospital and Cancer Centre. Vox Sanguinis. 117 (2), 235-242 (2021).
- Klatte-Schulz, F., et al. Comparative analysis of different platelet lysates and platelet rich preparations to stimulate tendon cell biology: An in vitro study. International Journal of Molecular Science. 19 (1), 212 (2018).
- Fea, A. M., et al. The effect of autologous platelet lysate eye drops: An in vivo confocal microscopy study. BioMed Research International. 2016, 8406832 (2016).
- Abu-Ameerh, M. A., et al. Platelet lysate promotes re-epithelialization of persistent epithelial defects: A pilot study. International Ophthalmology. 39 (7), 1483-1490 (2019).
- Geremicca, W., Fonte, C., Vecchio, S. Blood components for topical use in tissue regeneration: evaluation of corneal lesions treated with platelet lysate and considerations on repair mechanisms. Blood Transfusion. 8 (2), 107-112 (2010).
- De Paiva, C. S., et al. Disruption of TGF-β signaling improves ocular surface epithelial disease in experimental autoimmune keratoconjunctivitis sicca. PLoS One. 6 (12), 29017 (2011).
