गंध ड्रोसोफिला लार्वा में संचालित व्यवहार की उच्च संकल्प मापन

Summary

इस वीडियो लेख में, हम एक नए स्थिर और नियंत्रणीय geometries के साथ odorant gradients के निर्माण की अनुमति विधि का वर्णन. हमें संक्षेप में वर्णन कैसे इन gradients घ्राण दोष (पूर्ण और आंशिक anosmia) के लिए स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और chemotaxis व्यवहार के अधिक सूक्ष्म सुविधाओं का अध्ययन.

Abstract

ड्रोसोफिला लार्वा में घ्राण प्रतिक्रियाओं परंपरागत पेट्री एक एकल परिधीय गंध स्रोत शामिल बर्तन में अध्ययन किया गया है. इस व्यवहार प्रतिमान में experimenter आम तौर पर मानता है कि स्रोत से odorant अणुओं का तेजी से प्रसार पकवान में एक स्थिर ढाल के निर्माण के लिए होता है. संवेदी आदानों और व्यवहार प्रतिक्रियाओं के बीच एक मात्रात्मक संबंध स्थापित करने के लिए, यह odorant प्रोत्साहन शर्तों के एक अधिक संपूर्ण लक्षण वर्णन प्राप्त करने के लिए आवश्यक है. इस वीडियो लेख में, हम एक नए स्थिर और नियंत्रणीय geometries के साथ odorant gradients के निर्माण की अनुमति विधि का वर्णन. हमें संक्षेप में वर्णन कैसे इन gradients घ्राण दोष (पूर्ण और आंशिक anosmia) के लिए स्क्रीन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और chemotaxis व्यवहार के अधिक सूक्ष्म सुविधाओं का अध्ययन.

Protocol

1. उपकरण और अभिकर्मकों

गंध dilutions:

• पैराफिन तेल (सिग्मा, कैस संख्या: 8012-95-1)
• उच्चतम शुद्धता उपलब्ध है जो ^{ड्रोसोफिला} एक लार्वा में आकर्षण elicits के odors . इस वीडियो लेख में, जानवरों isoamyl एसीटेट (सिग्मा: 123-92-2, कैस संख्या) के साथ परीक्षण किया गया.
• 1.5ml Teflon टोपी के साथ कांच की शीशियों (Agilent टेक्नोलॉजीज)
• वजन द्वारा डिजिटल सटीक कमजोर पड़ने के लिए मापने के पैमाने

परख क्षेत्र सेट अप:

• Agarose (Promega)
• 96 अच्छी तरह से Microplate (: 353071 बी.डी. फाल्कन, सूची संख्या) के Lids. हमारा व्यवहार क्षेत्र तीन खड़ी lids के होते हैं.
• एकल चैनल 1-20 μl pipetter या मल्टी चैनल के ढेर के ऊपर ढक्कन में odorant छोटी बूंद (ओं) को लोड pipetter. एकाधिक स्रोत परख सेट करने के लिए, हम Rainin से 5-50 μl Pipet लाइट pipetter मल्टी चैनल का उपयोग करें.

ड्रोसोफिला के व्यवहार परीक्षण के लिए तैयार लार्वा:

• 15% (w / w) sucrose के समाधान
• नियमित पेट्री डिश (बी फाल्कन) धोने और लार्वा की दुकान
• पेंट ब्रश (4-5mm बाल खड़े लंबाई) हेरफेर करने के लिए और लार्वा हस्तांतरण

लार्वा गति की रिकॉर्डिंग:

• अखाड़े में लार्वा को स्थानांतरित करने के लिए एक फ्लैट सिर के साथ छोटे पिन
• संदंश या रिकॉर्डिंग के बाद लार्वा हटायें तूलिका
• एक सजातीय गैर हीटिंग प्रकाश स्रोत के साथ प्रबुद्ध मंच, "स्लिम" एज लाइट पैड लोगान इलेक्ट्रिक द्वारा निर्मित
• कैबिनेट व्यवहार क्षेत्र और नियंत्रण प्रकाश की स्थिति के चारों ओर
• जानवर आंदोलन की रिकॉर्डिंग के लिए वीडियो ट्रैकिंग प्रणाली. हम Ethovision सॉफ्टवेयर (Noldus, नीदरलैंड) का उपयोग कर रहे हैं.
• सीसीडी कैमरा और फ्रेम धरनेवाला वीडियो कार्ड (EureCard मूल Piccolo) Ethovision सॉफ्टवेयर के साथ खरीदा
• थर्मामीटर और नमी रिकॉर्डर व्यवहार परीक्षण (वैकल्पिक) के दौरान वायुमंडलीय स्थितियों की निगरानी
• अनुकूलित डेटा विश्लेषण के लिए (Mathworks) Matlab (वैकल्पिक)

2. व्यवहार अखाड़ा

व्यवहार क्षेत्र तीन खड़ी 96 अच्छी तरह से पकवान lids के होते हैं. नीचे ढकने के लिए पैड से प्रकाश प्रणाली के बाकी को अलग है और क्षेत्र में संवहन कम करने के लिए प्रयोग किया जाता है. दूसरा ढक्कन, एक 3% agarose जेल 25ml के साथ कवर, लार्वा पर चलने के लिए एक मंच के रूप में कार्य करता है. ऊपर ढक्कन गंध बूंदों जो सतह तनाव द्वारा निलंबित रहते हैं रखती है.

गंध बूंदों 96 अच्छी तरह से पकवान ढक्कन के कुओं में सीधे pipetted हैं. एक एकल या एकाधिक गंध स्रोतों अलग, निरीक्षण ² प्रोफाइल के साथ gradients उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. Anosmia और chemotaxis लार्वा में दोष के लिए परीक्षण करने के लिए, हम निम्नलिखित दो assays उपयोग का प्रस्ताव है.

2.1. एकल गंध स्रोत परख: एक एकल गंध # अच्छी तरह से E7 में रखी छोटी बूंद (96 अच्छी तरह से मानक प्लेट संदर्भ प्रणाली).

• प्रोत्साहन: पैराफिन तेल में पतला गंध के 10μl
• प्रारंभिक स्थितियों: एक एकल लार्वा गंध स्रोत (या अपने निकट पड़ोस में) के तहत शुरू की है.
• मूल टिप्पणियों: आकर्षक उत्तेजनाओं के लिए (जैसे isoamyl एसीटेट), wildtype लार्वा स्रोत के नीचे जमा है. Anosmic जानवरों या जानवरों घ्राण दोष के अधीन जल्दी छोटी बूंद से दूर भटकना.
• एक परीक्षण की अवधि: 3 मिनट. किसी भी जानवर की गति जब तक परीक्षण के समय बीता है या जानवर दीवार प्लेट के संपर्कों के रूप में जल्द दर्ज की गई है.
• व्यवहार मात्रा का ठहराव के लिए संभावित मैट्रिक्स: गंध के स्रोत पर केंद्रित एक छोटे परिपत्र के क्षेत्र में एक जानवर द्वारा बिताए समय का प्रतिशत, गंध स्रोत से दूरी मतलब, गंध स्रोत से दूरी के समय पाठ्यक्रम, आदि

यह परख कुशलता उत्परिवर्ती लार्वा में बुनियादी anosmia के लिए परीक्षण. यह भी मज़बूती से ^{विशेष} 2 odors के लिए पता लगाने की दहलीज निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

2.2. एकाधिक गंध स्रोत परख

कई गंध बूंदों ऊपर ढक्कन के कुएं में रखी हैं. वर्तमान वीडियो लेख में हम मध्य पंक्ति ई. साथ gradients सेट छह बूंदों के एक कुल कुओं # E2, # E4, E6 #, # E8, # E10 और E12 # में शुरू किए गए थे (96 अच्छी तरह से थाली संदर्भ प्रणाली मानक ). पेट्री डिश और एकल गंध स्रोत assays के साथ इसके विपरीत, कई गंध स्रोत परख ढाल और क्षेत्र की लंबाई और चौड़ाई के साथ स्थापना की ज्यामिति के गुणात्मक नियंत्रण की अनुमति देता है. इस परख संवेदी ² chemotax ड्रोसोफिला लार्वा की अनुमति तंत्र विशेषताएँ इस्तेमाल किया गया था .

• प्रोत्साहन: 10μl गंध बूंदों एक पंक्ति के साथ कुओं बारी में रखी हैं. यह व्यवस्था एक ढाल चयनित पंक्ति केन्द्रित के सृजन की ओर जाता है है. क्षेत्र की चौड़ाई के साथ एक समरूप ढाल स्थापित करने के लिए, कई पंक्तियाँ एकाधिक स्रोतों के साथ लोड किया जा सकता है.
• प्रारंभिक स्थितियों: एक एकल लार्वा कुओं # E3 और # के बीच में गंध के स्रोत के तहत शुरू की हैE4.
• मूल phenotypes: anosmic लार्वा यादृच्छिक पर प्रारंभिक बिंदु से भटकना. आकर्षक उत्तेजनाओं (जैसे isoamyl एसीटेट), जो जानवरों गंध गंध एकाग्रता बढ़ाने की दिशा के साथ नेविगेट करने में सक्षम हैं. सटीकता के साथ जो एक जानवर गंध निशान ascends भावना और odorant उत्तेजना प्रक्रिया करने की क्षमता के साथ सहसंबद्ध है. कपटपूर्ण पथ अक्सर संवेदी दोष की वजह से कर रहे हैं. एक बार एक जानवर परीक्षण में सर्वोच्च एकाग्रता के बिंदु तक पहुँच गया है, यह इस स्थिति के आसपास के क्षेत्र में बनी हुई है.
• एक परीक्षण के अवध्ि: 3 मिनट अधिकतम (अब ट्रैकिंग durations के शोर परिचय करते हैं के रूप में लार्वा ब्याज खोना और अंततः ढाल का परित्याग). इस वीडियो लेख में सचित्र gradients के लिए, एक व्यक्ति के लार्वा की गति जब तक जानवर सर्वोच्च एकाग्रता स्रोत (# अच्छी तरह से E12) के पड़ोस तक पहुँच दर्ज की गई थी. रिकॉर्डिंग के रूप में जल्द ही बंद कर दिया गया था के रूप में जानवर लक्षित क्षेत्र तक पहुँच या क्षेत्र के किसी भी दीवार से संपर्क.
• व्यवहार मात्रा का ठहराव के लिए संभव मैट्रिक्स: odorant लाइन (नीले आयत) के तहत एक जानवर द्वारा बिताए समय का प्रतिशत, गंध ढाल के स्थानीय दिशा करने के लिए सम्मान के साथ शीर्ष मतलब है, एक संयुक्त chemotaxis स्कोर एक जानवर की वैश्विक प्रवृत्ति odorant का पालन मापने पंक्ति ^2.

3. ढाल प्रोफ़ाइल सत्यापन

एक विशेष ढाल में लार्वा के परीक्षण से पहले, यह समय के साथ इसकी स्थिरता को निर्धारित करने के लिए महत्वपूर्ण है. इस आधार पर, experimenter प्रत्येक परीक्षण के लिए एक पर्याप्त अवधि और लार्वा की संख्या है कि एक ही क्षेत्र में क्रमिक रूप से लगाया जा सकता है निर्धारित कर सकते हैं. ढाल की स्थिरता का परीक्षण करने के लिए, ^हम एक आईआर स्पेक्ट्रोस्कोपी 2 पर आधारित विधि विकसित किया है. इस विधि इस प्रोटोकॉल के दायरे से परे है और आगे सविस्तार नहीं हो जाएगा.

4. एक प्रयोग की तैयारी के लिए प्रोटोकॉल

4.1. Agarose प्लेट और गंध dilutions की तैयारी:

1. 1. एक 96 अच्छी तरह से डिश ढक्कन के फ्लैट शीर्ष पर 3% agarose के 25ml डालो, agarose शांत करने के लिए और जमना (~ 30 मिनट) की अनुमति है.
   
   महत्वपूर्ण: सुनिश्चित करें कि 96 अच्छी तरह lids agarose जम agarose जेल पर एक ढलान की उपस्थिति के रूप में गिरने से पहले एक फ्लैट सतह पर लार्वा के व्यवहार को प्रभावित कर सकते हैं. जब जेल डालने के लिये, किसी भी बुलबुले कि सतह पर फार्म को हटा दें.
   
   
2. 2. पैराफिन तेल में वांछित सांद्रता एक डिजिटल पैमाने का उपयोग करने के लिए सही आयल में तेल की गंध और प्रत्येक कमजोर पड़ने की मात्रा को मापने के लिए odors पतला.

नोट: जब कम गंध सांद्रता का इस्तेमाल कर रहे हैं, यह स्रोत पर आधारित धारावाहिक dilutions सांद्रता का एक सेट तैयार करने के लिए बेहतर है. एक 1.0m समाधान के साथ, उदाहरण के लिए, आरंभ और एक 1:02 कमजोर पड़ने के लिए एक समाधान 0.5m प्राप्त करने. Recurrently कार्यवाही करके, एक प्रगति ज्यामितीय 1.0m, 0.5m, 0.25M, 0.12M, 0.06M, 0.03M, 0.015M के बाद एक कमजोर पड़ने श्रृंखला प्राप्त है.

महत्वपूर्ण: के बाद से कई जैविक odors को प्लास्टिक के साथ प्रतिक्रिया करते हैं, गंध dilutions Teflon टोपियां के साथ कांच की शीशियों में संग्रहित किया जाना चाहिए. आदर्श रूप में, odors को ताजा तैयार किया जाना चाहिए से पहले एक प्रयोग प्रयोगों भर में वास्तविक गंध एकाग्रता में उतार चढ़ाव को कम करने के लिए. उच्च वाष्पशील रसायनों का उपयोग करते समय यह विशेष रूप से सच है.

4.2. लार्वा तैयारी:

1. 1. आसुत जल में 15% sucrose के समाधान तैयार है.
   
   नोट: 15% sucrose के समाधान लार्वा की तुलना में denser है और उन्हें समाधान की सतह के लिए उत्साहित करने के लिए कारण होगा . हालांकि, undissolved मक्खी भोजन हिस्सा समाधान की तुलना में एक अधिक से अधिक घनत्व है और तेजी से नीचे सिंक. इस प्रकार, इस sucrose के समाधान का उपयोग भोजन से लार्वा को अलग करने का एक कारगर साधन प्रदान करता है. Sucrose समाधान जैविक contaminants के लिए एक उत्कृष्ट माध्यम है, अगर समाधान बादल बन जाता है यह फिल्टर करने के लिए संक्रमण को दूर निष्फल कर सकते हैं.
   
   
2. 6 दिन पुरानी या वांछित विकास के चरण में लार्वा लार्वा के साथ एक शीशी प्राप्त करते हैं.
   
   नोट: हमारे सभी प्रयोगों के बाहर 6 दिन पुरानी लार्वा (तीसरे instar विकास मंच के बीच) के साथ किया जाता है, इस विकास के चरण में लार्वा हमारे ट्रैकिंग सॉफ़्टवेयर के साथ पता लगाने के आराम के लिए काफी बड़े हैं, लेकिन यह भी अत्यधिक सक्रिय.
   
   
3. भोजन लार्वा युक्त शीशी में sucrose डालो.
4. एक रंग का प्रयोग, टूटने और मक्खी भोजन धीरे भंग करने लार्वा रिलीज. विमोचन लार्वा सतह के लिए जारी करेगी.
5. मक्खी भोजन विखंडू के लिए एक कुछ मिनट शीशी के नीचे सिंक करने की अनुमति दें, तो, sucrose और एक पेट्री डिश में लार्वा डालना. यदि लार्वा के पूर्व चयन के लिए आवश्यक है, पशुओं के लिए एक फिल्टर के माध्यम से sucrose के गिरने से एकत्र किया जा सकता है. लार्वा तो एक तूलिका के साथ चयन के लिए एक डिश के लिए हस्तांतरित किया जा सकता है.
6. एस में लगभग 30 मिनट के लिए छोड़ दो लार्वापहले व्यवहार परीक्षण के साथ आगे बढ़ने से जानवरों sucrose के समाधान के लिए अभ्यस्त करने की अनुमति ucrose समाधान. के रूप में लार्वा को sucrose पर फ़ीड नहीं दिखाई देते हैं, जानवरों को भुखमरी की एक राज्य है जो chemotaxis प्रदर्शन में सुधार का अनुभव होगा.
7. पेट्री डिश के ढक्कन पानी (या sucrose) से भरा जा सकता है और व्यवहार परीक्षणों के बाद खारिज कर दिया जानवरों के लिए एक गोदाम के रूप में इस्तेमाल किया.

5. प्रोटोकॉल व्यवहार रिकॉर्डिंग प्रदर्शन करने के लिए

5.1. Arena के सेट अप:

1. 1. एक ताजा 96 अच्छी तरह से पकवान ढक्कन के नीचे (welled पक्ष) गंध बूंदों लागू करें.
   
   महत्वपूर्ण: अलग odors और गंध सांद्रता से संक्रमण से बचने के लिए, एक ताजा ढक्कन प्रत्येक लोड हो रहा है सेट अप के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए. गंध स्रोतों से युक्त lids के कोई भी प्रयोग के बाद साफ कर रहे हैं. गंध एकाग्रता रेंज इस्तेमाल किया पर निर्भर करता है, odorant gradients के एक बंद व्यवस्था में केवल 10 से 20 मिनट के लिए स्थिर होना पाया गया है. इसलिए यह सेट अप ढाल और व्यवहार परीक्षण की वास्तविक शुरुआत के बीच के समय को कम करने के लिए महत्वपूर्ण है.
   
   
2. ढक्कन उलटें और यह एक दूसरे 3% agarose परत के साथ लेपित ढक्कन के ऊपर ढेर.
   
   महत्वपूर्ण: ध्यान से ढक्कन गंध बूंदों आसन्न कुओं को फैलने से रोकने के उलटें.
   
   
3. Agarose सतह पर ऊपर ढक्कन के उलटा होने पर, गंध लार्वा शुरू करने से पहले 30 सेकंड के लिए फैलाना को अनुमति देते हैं.

5.2. लोड हो रहा है लार्वा:

1. शीर्ष odorant बूंदों बस लार्वा की लोडिंग की अनुमति के लिए पर्याप्त युक्त ढक्कन लिफ्ट.
2. Sucrose के समाधान से agarose परत लार्वा स्थानांतरण. जानवर के शुरू करने की स्थिति परख इस्तेमाल किया जा रहा है पर निर्भर करता है:
   
   एकल गंध स्रोत परख के लिए, लार्वा odorant छोटी बूंद के तहत जारी किए हैं .
   
   कई गंध स्रोत परख के लिए, लार्वा कुओं # E3 और # E4 के बीच जारी किए हैं .
   
   महत्वपूर्ण: ओरिएंट एक सुसंगत तरीके में नव शुरू जानवरों. पूरबी हम ढाल की दिशा में अपने पशुओं, यह सुनिश्चित करना है कि पशुओं के शरीर और सिर सर्वोच्च एकाग्रता का सामना. एक अभिविन्यास विपरीत में ढाल के पेश पशु एक खोज व्यवहार आरंभ करें. हमारी राय में, इस प्रारंभिक खोज अवधि के शोर के एक अनावश्यक स्रोत का प्रतिनिधित्व करता है. सिर उन्मुखीकरण नियंत्रण पशुओं की संख्या है जो उनके खोजपूर्ण व्यवहार के दौरान मैदान की दीवार से संपर्क को कम कर देता है. इस अभ्यास जानवर की गति के प्रधानमंत्री दिशा या काफी anosmic मौका द्वारा odorant रेखा के साथ chemotaxing पशुओं की संख्या में वृद्धि नहीं करता है (यानी गंध परीक्षण में झूठी सकारात्मक).
   
   
3. ऊपर ढक्कन बदलें और तुरंत रिकॉर्डिंग शुरू.
   
   नोट: स्वस्थ लार्वा क्षेत्र में उनके परिचय पर तुरंत रेंगने शुरू करने और पहले 10 सेकंड के भीतर 1cm की दूरी को कवर कर सकते हैं . यदि experimenter रिकॉर्डिंग की शुरुआत में धीमी गति से है, प्रारंभिक datapoints खो जाएगा. हम इस कारण के लिए सिफारिश है कि experimenter सॉफ्टवेयर आदेशों के साथ अच्छी तरह परिचित एक प्रयोग चलाने के लिए प्रयास करने से पहले रिकॉर्डिंग आरंभ हो जाता है.
   
   
4. लार्वा रिकॉर्डिंग (आमतौर पर 3 मिनट) की अवधि के लिए व्यवहार करने की अनुमति दें.
   
   नोट: रिकॉर्डिंग 3 मिनट के अंत से पहले समाप्त कर रहे हैं अगर लार्वा क्षेत्र दीवार हिट या एक लक्षित क्षेत्र (जैसे के रूप में ढाल परख में) तक पहुँचता है.
   
5. रिकॉर्डिंग के अंत में, तुरंत ढक्कन उठा और संदंश या एक तूलिका के साथ लार्वा को निकालने के. पेट्री डिश ढक्कन युक्त पानी (या sucrose) में ट्रैक किए गए जानवरों रखें.
   
   महत्वपूर्ण: रिकॉर्ड जानवर नहीं reused हैं. पानी पकवान महज एक सुविधाजनक प्रयोगों चल रहा है जबकि गोदाम दर्ज की है और संयुक्त राष्ट्र दर्ज पशुओं अलग है.
   
6. अगर एक क्षेत्र के अंतर्गत कई जानवरों ट्रैकिंग सेट अप करने के लिए, तुरंत अगले लार्वा लोड और रिकॉर्डिंग शुरू करने के रूप में ऊपर दिखाए.
   
   महत्वपूर्ण: सेट अप इसी क्षेत्र में प्रदर्शन परीक्षणों की संख्या जो किसी भी व्यवहार ² प्रयोग का प्रदर्शन करने से पहले सत्यापित किया जाना चाहिए ढाल स्थिरता के आधार पर तय होना चाहिए.
   
7. एक बार सभी क्षेत्र सेट अप ट्रैक किए गए किया गया है और क्षेत्र से हटा के तहत परीक्षण किया लार्वा ऊपर ढक्कन और agarose परत त्यागें. मध्यवर्ती ढक्कन (यानी agarose ढक्कन) पुनर्नवीनीकरण किया जा सकता है.
   
   नोट: हम Ethovision उपयोगकर्ताओं की सलाह 'पृष्ठभूमि घटाव' का पता लगाने की विधि का चयन.

6. नमूना वीडियो लेख में प्रदर्शन प्रयोगों

6.1. Isoamyl एसीटेट की 1.0m के साथ सिंगल गंध स्रोत परख.

जिनमें से प्रत्येक का एक नंबर आवंटित किया गया था म्यूटेंट और दस जंगली प्रकार (W1118) लार्वा - हम आँख बंद करके दस Or83b / परीक्षण किया. ट्रैकिंग प्रयोगएर प्रत्येक जानवर के जीनोटाइप के बारे में कोई जानकारी प्राप्त नहीं किया था. प्रत्येक रिकॉर्डिंग के बाद, एक भविष्य कहनेवाला phenotype प्रत्येक परीक्षण जानवर के लिए सौंपा गया था: smellers, अगर संचय स्रोत के तहत पूरे परीक्षण के लिए मनाया गया, गैर - smellers अगर, पथ जल्दी से गंध के स्रोत के पड़ोस छोड़ दिया. 20 पशुओं के व्यवहार दर्ज होने के बाद, पथ phenotype के लिए अनुसार समूहीकृत किया गया. इस समूह का परिणाम तो लार्वा की वास्तविक जीनोटाइप के साथ तुलना में किया गया था: सभी कार्य करने के लिए सही पाए गए.

6.2. Isoamyl एसीटेट के घातीय और रैखिक gradients के साथ एकाधिक गंध स्रोत परख.

इस प्रयोग में, हम जंगली प्रकार एक रैखिक और एक घातीय ढाल के साथ chemotaxing लार्वा के प्रदर्शन की तुलना में. Chemotactic व्यवहार दो gradients 0.5m के एक ही सर्वोच्च एकाग्रता के साथ सेट के लिए दर्ज किए गए. के रूप में लेख में समझाया, घातीय ढाल की गंध स्रोतों 0.015 और 0.5m के बीच लेकर. रैखिक ढाल के सूत्रों 0.25 और 0.5m (आम 0.05M अंतर के साथ अंकगणितीय प्रगति) के बीच लेकर.

रैखिक ढाल एक अधिक चुनौतीपूर्ण chemotaxis पर्यावरण का प्रतिनिधित्व के रूप में एकाग्रता में स्थानीय अंतर लगातार और अपेक्षाकृत छोटा था, और एकाग्रता संकीर्ण सीमा (0.25M). इसके विपरीत, घातीय ढाल की एकाग्रता रेंज निशान के साथ एकाग्रता में स्थानीय अंतर में वृद्धि के साथ बड़ा किया गया था.

पंद्रह लार्वा दो ढाल geometries के प्रत्येक और एक ग्राफ में आरोपित पथ के लिए दर्ज किए गए. दो रेखांकन के एक दृश्य निरीक्षण से पता चलता है कि जंगली प्रकार लार्वा मज़बूती से दोनों geometries के लिए ढाल चढ़ना करने में सक्षम थे, लेकिन कि meandering की राशि रैखिक ढाल हालत के लिए अधिक से अधिक था. यह पता चलता है कि ढाल लंबाई के साथ मौजूद संकेत अधिक मज़बूती से एक रेखीय के लिए की तुलना में एक घातीय आकार के लिए पता चला है.

6.3. Isoamyl एसीटेट ढाल के साथ एक "छत" ज्यामिति में एकाधिक गंध स्रोत परख.

यहाँ हम सत्यापित करें कि एक गंध ढाल में शुरू लार्वा बजाय बस या गंध की उपस्थिति अनुपस्थिति गंध एकाग्रता में स्थानीय परिवर्तन के प्रति संवेदनशील हैं. 0.06, 0.12, 0.25, 0.5, 0.25, 0.12M: एक isoamyl ढाल गंध बूंदों के आवेदन के द्वारा निम्न सांद्रता के साथ स्थापित किया गया था. आगामी ढाल ज्यामिति एक विषम "छत" 0.5m पर peaking जैसे लगते थे.

लार्वा 0.06M और 0.12M गंध बूंदों के बीच जारी किए गए. हमारी परिकल्पना यह थी कि अगर लार्वा केवल गंध की उपस्थिति कंप्यूटिंग थे वे एकाग्रता अधिकतम के लिए एक विशेष वरीयता के बिना पूरे ढाल का पालन करेंगे. इसके विपरीत, यदि लार्वा एकाग्रता में स्थानीय परिवर्तन वे 0.5m छोटी बूंद के नीचे जमा करने के लिए संवेदनशील हैं. पंद्रह लार्वा दर्ज थे, और यह पाया गया कि एक छोटी खोजपूर्ण अवधि के बाद सभी लार्वा अधिक अच्छी तरह से एकाग्रता के नीचे जमा है. यह पता चलता है कि गंध एकाग्रता में स्थानीय परिवर्तन का अभिकलन और ड्रोसोफिला लार्वा chemotactic व्यवहार को सूचित.