Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

הקמה והערכה של מודל מחלת השתלת ורידים חזיריים

Published: July 25, 2022 doi: 10.3791/63896
Automatic Translation
*1, *1, *2, *1, 2, 1, 3, 1, 1, 1, 1
1Department of Cardiovascular Surgery, the First Affiliated Hospital of Jinan University, 2Guangdong Provincial Key Laboratory of Laboratory Animals, Guangdong Laboratory Animals Monitoring Institute, 3The First Affiliated Hospital of Jinan University
* These authors contributed equally

Summary

בפרוטוקול זה, השתלת מעקף ורידים חזיר חדשה בוצעה דרך חתך קטן בדופן החזה השמאלית ללא מעקף לב-ריאה. נעשה מחקר פתולוגי לאחר הניתוח, שהראה עיבוי אינטימי.

Abstract

מחלת השתל הוורידי (VGD) היא הגורם המוביל לכשל בהשתלת מעקפים כליליים (CABG). מודלים גדולים של בעלי חיים של CABG-VGD נדרשים לחקירת מנגנוני מחלה ופיתוח אסטרטגיות טיפוליות.

כדי לבצע את הניתוח, אנו נכנסים לחדר הלב דרך החלל הבין-קוסטלי השלישי ומנתחים בזהירות את וריד החלב הפנימי וטובלים אותו במי מלח רגילים. העורק הכלילי הראשי הימני מטופל לאחר מכן באיסכמיה. כלי המטרה נחתך, תקע שאנט ממוקם, והקצה הדיסטלי של וריד השתל הוא anastomosed. אבי העורקים העולה חסום חלקית, והקצה הפרוקסימלי של וריד השתל הוא אנסטומוזה לאחר ניקוב. וריד השתל נבדק עבור פטנט, ואת העורק הכלילי הימני פרוקסימלי הוא קשור.

ניתוח CABG מבוצע במיני-חזירים כדי לקצור את וריד החלב הפנימי השמאלי לשימושו כשתל כלי דם. בדיקות ביוכימיות בסרום משמשות להערכת המצב הפיזיולוגי של בעלי החיים לאחר הניתוח. בדיקת אולטרסאונד מראה כי הקצה הפרוקסימלי, האמצעי והדיסטלי של כלי השתל אינם חסומים. במודל הניתוחי, זרימת דם סוערת בשתל נצפית בבדיקה היסטולוגית לאחר ניתוח CABG, והיצרות שתל ורידי הקשורה להיפרפלזיה אינטימית נצפית בשתל. המחקר כאן מספק הליכים כירורגיים מפורטים להקמת מודל VGD המושרה על ידי CABG הניתן לחזרה.

Introduction

למרות שהתמותה ממחלות לב כליליות ירדה באופן משמעותי בשנים האחרונות, מחצית מהמבוגרים בגיל העמידה בארצות הברית מפתחים תסמינים איסכמיים הקשורים ללב מדי שנה, ושליש מהמבוגרים מתים ממחלת לב כלילית1. השתלת מעקף עורקים כליליים (CABG) היא שיטה כירורגית יעילה לשיפור איסכמיה של שריר הלב, וחשוב מכך, זוהי שיטה כירורגית שאין לה תחליף לטיפול במחלת עורקים כליליים רב-כליליים2. עם הזמן, עם זאת, שתלים וסקולריים מפתחים דלקת, היפרפלזיה אינטימית וטרשת עורקים מתקדמת, אשר ידועה כמובילה לכשל השתלת ורידים או מחלת השתלת ורידים (VGD)3. בחולים לאחר CABG, אם רסטנוזיס מתרחשת, רק כלי הדם החולה יכול להיות מוחלף במקרים מסוימים2. חולים מבוגרים יותר ותחלואה נלווית נוספת הופכים את ביצוע מחדש של השתלת מעקפים כליליים למאתגרת למדי. עיכוב או שליטה בבעיות הפתולוגיות הקשורות לכלי דם מושתלים היא בעיה דחופה שיש לפתור. מודלים גדולים של בעלי חיים של CABG-VGD נדרשים לחקירת מנגנוני מחלה ופיתוח אסטרטגיות טיפוליות. חוקרים ביססו בהצלחה מודלים של VGD בבעלי חיים קטנים וגדולים כגון עכברים4, חולדות5, ארנבים6 וחזירים7. בהשוואה לבעלי חיים קטנים, לבעלי חיים גדולים כמו חזירים יש מבנים אנטומיים ומאפיינים פיזיולוגיים דומים לבני אדם ויש להם תוחלת חיים ארוכה יותר 8,9. לפיכך, בעלי חיים גדולים מתאימים יותר לחקר שינויים פתולוגיים ארוכי טווח במחלת השתל הוורידי ולבדיקות פרה-קליניות של תרופות או מכשירים. אנו והצוות המשותף שלנו יישמנו בהצלחה טכניקות כירורגיות כדי לבסס מודל אי ספיקת לב חזירית ותיארנו את השינויים הפתולוגיים הלבביים במודל זה10.

ניתוח CABG עבר סטנדרטיזציה בפרקטיקה הקלינית, אך כאשר הוא מיושם בהקמת מודלים של בעלי חיים VGD, ההבדלים בין המינים, רכישת ציוד ומתקנים לבעלי חיים, פעולות כירורגיות לבעלי חיים והאכלה וסיעוד של בעלי חיים הם אתגרים עצומים לחוקרים. כמו בפרקטיקה הקלינית, הגישות לניתוח CABG המשמשות להקמת מודלים של בעלי חיים VGD כוללות סטרנטומיה בקו האמצע11 ובית החזה השמאלי הצידי12. סטרנטומיה בקו האמצע נפוצה יותר13,14. עם זאת, גישה זו טומנת בחובה סיכונים גבוהים הן לבני אדם והן לבעלי חיים. במחקר שדווח על ידי Thankam et al., שניים מתוך ששת החזירים ששימשו לדוגמנות מתו במהלך ניתוח15. תמותה במודל גבוה מגדילה את עלויות המחקר ומשפיעה על דיוק התוצאות. מחקר הראה מוקדם יותר כי חתך בדופן בית החזה השמאלי היה אפשרי כדי לבסס VGD המושרה על ידי CABG בחזירים11. כאן, מחקר זה נועד לתאר פרוטוקול שלב אחר שלב לביסוס ניתוח הניתן לשחזור עבור מודל VGD המושרה על ידי CABG במיני-חזירים ולהעריך את הפנוטיפ של מודל זה. פרוטוקול הניסוי תוכנן במשותף על ידי צוותי ניתוחי הלב וההרדמה. הגישה הניתוחית לחלל הבין-קוסטלי השלישי השמאלי נקבעה על פי גופות של מיני-חזירים אחרים במעבדה לפני הניתוח, ושיטת ההרדמה בוצעה על פי השיטה הנהוגה במרכז16. בדיקות ביוכימיות בדם, בדיקה קולית ובדיקה היסטולוגית נערכו כדי להעריך מודלים של בעלי חיים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הנהלים לטיפול ולשימוש בחיות מעבדה אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של המכון לניטור חיות מעבדה בגואנגדונג. כל הניסויים נערכו בהתאם למדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (מהדורה 8, 2011, המועצה הלאומית למחקר, ארה"ב). ההליך הכירורגי מוצג באיור 1.

1. הכנה טרום ניתוחית של בעלי חיים

  1. חלקו באופן אקראי 10 מיני-חזירים זכרים בני 3 חודשים במשקל 30-35 ק"ג לקבוצת דמה (n = 5) וקבוצת VGD (n = 5).
  2. להעריך את התנאים הבריאותיים לפני הניתוח ולאחר הניתוח של חזירים באמצעות מדד מסת הגוף (BMI). חשב את ה- BMI כדלקמן:
    BMI = משקל גוף (ק"ג)/(אורך גוף [cm] × אורך גוף [cm])
    הערה: אורך הגוף נמדד מאפו של החזיר ועד לבסיס הזנב.
  3. צום את בעלי החיים במשך 12 שעות לפני הניתוח כדי למנוע שאיפה לאחר הרדמה. הכינו מכשירי הרדמה וכלי ניתוח, לרבות מכונת הרדמה, גז, תרופות הרדמה, צינור הרדמה, לרינגוסקופ מיוחד, כלי ניתוח, משענת צלעות, תפרים, מחזיר בלוטת התריס, מלקחיים כירורגיים ועוד. לעקר את כל המכשירים שישמשו בניתוח.

2. הכנת בעלי החיים לניתוח

  1. לשקול את החיות ולחשב את מינון ההרדמה. יש לתת תוך שרירית את תערובת ההרדמה הכוללת 2 מ"ג/ק"ג של 1:1 טילטמין וזולאזפם, 0.2 מ"ג/ק"ג דיאזפם ו-0.02 מ"ג/ק"ג אטרופין17. השתמש פנטניל (50 מ"ג / ק"ג) להקלה על כאב תוך ניתוחי30.
  2. יש לוודא כי מושגת רמת הרדמה מתאימה ולהחדיר צנתר ורידי (20G) לווריד האוזן השולית כדי ליצור גישה לאוזן. מעבירים את החזיר על שולחן הניתוחים ומניחים אותו במצב שכיבה. לשתק את הגפיים עם תחבושות להרים את הראש עם drape סטרילי.
    הערה: מצב ההרדמה נוטר על ידי קיבוע מרכזי של גלגל העין, מיוזה, אובדן רפלקס אישונים, ואובדן רפלקס כאב.  קצב הלב ולחץ הדם נשמרו ברמה נמוכה יותר מקו הבסיס. המנתח צריך לעקוב אחר HR, BP ופרמטרים אחרים תחת שיתוק ולהגדיל את מינון ההרדמה אם HR עולה > -20% מעל קו הבסיס.
  3. לחשוף את epiglottis ו glottis באמצעות laryngoscope וטרינרי. בצע אינטובציה בקנה הנשימה עם צינור 7.0-7.5Fr וחבר אותו למעגל הנשימה של ההרדמה.
    הערה: מכונת ההנשמה משמשת לאוורור לחץ חיובי מתמשך עם נפח גאות ושפל 280 מ"ל, יחס השראה/תפוגה 1:2, קצב נשימה 20 פעמים לדקה ולחץ חיובי בסוף (5 ס"מ H2O).
  4. הזרקה תוך ורידית של וקורוניום ברומיד (0.1 מ"ג/ק"ג) להרפיית השרירים במהלך ההליכים הכירורגיים ושימוש באיזופלורן 2% לשמירה על הרדמה בקצב נשימה של 16-20 פעימות לדקה ובנפח גאות של 10 מ"ל/ק"ג.
    הערה: Vecuronium ניתן כדי להבטיח עומק מספיק של הרדמה בבעלי חיים משותקים, במיוחד מאז המינון של תרופת אינדוקציה ו isoflurane הוא בקצה התחתון של מומלץ.
  5. יש להשתמש במשחה וטרינרית על עיני החזיר כדי למנוע יובש בזמן הרדמה. השתמש שמיכות חשמליות כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של החזיר ב 38 °C ± 5 °C (75 °F).
  6. השתמש באלקטרוקרדיוגרמה כדי לפקח על קצב הלב, רמות החמצן בדם וטמפרטורת הגוף.

3. הליכים כירורגיים

  1. יש לגלח את דופן בית החזה השמאלי ולמרוח שלושה סיבובים לסירוגין של 0.7% יוד ו-75% אלכוהול כדי להכין את אזור הניתוח עד לזווית המנדיבולרית השמאלית, עד חבל הטבור, משמאל לקו בית השחי האחורי ומימין לחזית בית השחי. הניחו וילון כירורגי סטרילי סביב אזור הניתוח.
  2. בצעו חתך רוחבי בקוטר 7-10 ס"מ בעזרת סכין חשמלית בחלל הבין-קוסטלי השמאלי השלישי והפרידו את הרקמות התת עוריות שכבה אחר שכבה (איור 2A). הסירו קטע של 5-6 ס"מ מהצלע השלישית בעזרת מספריים לעצם וחשפו את וריד החלב הפנימי באמצעות מפרק נסוג לאחר חשיפת מפרק הצלע-עצם החזה השלישי (איור 2B).
  3. אתר את וריד החלב הפנימי יחד עם עורק החלב הפנימי השמאלי בצד שמאל של עצם החזה. בצע דיסקציה קהה של וריד החלב הפנימי עם מלקחיים וסקולריים.
  4. בצע hemostasis על ידי electrocoagulation של ענפי וריד החלב הפנימי השמאלי עם סכין חשמלית. אם המוסטאזיס אינו שלם, השתמש בקשירת חוטי כותנה עבור המוסטאזיס. לקשור ולסמן את שני קצוות הווריד בזמן הקציר (איור 2C).
  5. הכינו מי מלח רגילים של הפרין על ידי הוספת 2 מ"ל של תמיסת נתרן הפרין ו-98 מ"ל של מי מלח רגילים. לאחר הסרת הווריד, הזריקו לווריד מי מלח רגילים של הפרין לצורך טיפול מקדים (איור 2D). לאחר מכן, הכניסו את הווריד לתמיסת מלח רגילה ושמרו אותו לגיבוי.
  6. בצע חתך דומה כמתואר לעיל והסר את וריד החלב הפנימי בקבוצת הדמה. פתח את קרום הלב, ולאחר מכן סגור את קיר החזה בקבוצת דמה. השתמש בווריד החלב הפנימי של קבוצת הדמה לשליטה פתולוגית ללא השתלת מעקף עורקים כליליים.
  7. בצע חתך ~ 7 ס"מ עם סכין חשמלית על קרום הלב כדי לחשוף את תא המטען של העורק הכלילי הימני. השהו את קרום הלב ותפרו על העור בצד האיפסילטרלי עם התפרים הכירורגיים 1-0 (איור 2E). הפרידו את גזע העורק הכלילי הימני מהרקמות הסובבות אותו (איור 2E).
  8. עקפו את הרצועה החוסמת מתחת לקצה הפרוקסימלי של העורק הכלילי הימני המבודד ליד אבי העורקים בעזרת וו תיל וטפלו בשריר הלב בשלושה מחזורים של 2 דקות איסכמיה ורפרפוזיה של 5 דקות על ידי הידוק והרפיה של הרצועה החוסמת (איור 2F). עקבו אחר הפעילות החשמלית של הלב באמצעות מוניטור אלקטרוקרדיוגרמה במהלך ההתניה המוקדמת של איסכמיה/רפרפוזיה (איור 2G).
    הערה: כאשר העורק הכלילי הימני חסום, האק"ג מראה קצב לב מוגבר ועלייה במקטע ST.
  9. הדקו את הרצועה כדי לחסום את זרימת הדם הכלילית הימנית. חותכים את האפיקרדיום המכסה את כלי הדם. לחשוף את דופן העורק הכלילי, לחתוך לאורך עם קצה של להב כירורגי נגד מרכז הקיר הקדמי של כלי הדם.
  10. לאחר חיתוך הלומן, הגדילו את החתך במספריים והניחו שאנט כלילי. הכנס קצה אחד של השאנט עם סליל לעורק הכלילי הדיסטלי דרך הקרע. שאנט את הדם בעורקים הכליליים לתוך השאנט הכלילי החלול כדי להבטיח שדה ניתוחי ברור (איור 2H).
  11. בצעו תפר רציף מקצה לקצה בין וריד החלב הפנימי לבין תא המטען הכלילי הימני עם תפר פוליפרופילן 7-0 (איור 2I). באמצע אבי העורקים העולה, חוסמים את הקיר האנטרולטרלי השמאלי של אבי העורקים העולה עם מהדק חצי חסימה.
  12. השתמש בלהב כירורגי כדי לבצע חתך קטן בדופן אבי העורקים שבו נחתך האדוונטיציה, הכנס את קצה הראש של מוט ההזזה בקצה הראש של האגרוף לתוך חלל אבי העורקים דרך חתך זה, כווץ את מוט ההזזה כלפי חוץ, והסכין העגולה שמעליו חותכת חתיכה מדופן העורק. קוטר גוש הרקמה שנחתך על-ידי האגרוף הוא כ-3 מ"מ (איור 2J).
  13. שלפו את השאנט. בצעו תפר רציף מקצה לקצה בין וריד החלב הפנימי לבין דופן אבי העורקים עם תפר פוליפרופילן 6-0 (איור 2K). פתח את מהדק החסימה למחצה.
  14. רשום את זרימת המעקף של גזע העורק הכלילי הימני פרוקסימלי לאתר האנסטומוזה באמצעות אולטרסאונד. עקבו אחר הפעילות החשמלית של הלב באמצעות אלקטרוקרדיוגרמה (איור 2L).
  15. הכניסו צינור ניקוז זמני (Fr: 16) לחלל החזה כדי לאפשר לדם ולנוזלים להתנקז. תופרים את חתך קרום הלב באמצעות חוט כותנה 1-0 וסוגרים את החזה שכבה אחר שכבה (מבפנים לחוץ: שכבת הצדר, שכבת שריר, שכבת רקמה תת עורית, שכבת עור) תוך הנחת אבקת פניצילין (כ-0.5 גרם) על כל שכבה. יש להסיר את צינור הניקוז לאחר תפירת חתך העור באמצעות חוט כותנה 1-0.

4. טיפול לאחר הניתוח

  1. הסר את הצינור האנדוטרכאלי לאחר שהחיות חזרו לנשימה ספונטנית. הרופא המרדים צריך להעריך את החיוניות של בעל החיים (למשל, קצב נשימה, קצב לב, רוויון חמצן וכו ') ולהסיר את האק"ג לאחר שהחיה מתעוררת וחוזרת לפעילות ספונטנית. שלח את החיות בחזרה לחדר ההאכלה והנח את החיות המזויפות במכלאה אחרת בחדר הרבייה. שמרו על חום בעלי החיים בעזרת שמיכה חשמלית. יש להתבונן בבעלי החיים כל שעה לאחר הניתוח (לפחות 4 פעמים).
  2. להאכיל את החיה יום לאחר הניתוח. הוסף אספירין (200 מ"ג) פעמיים ביום במשך 7 ימים למזון לבעלי חיים כדי למנוע פקקת לאחר הניתוח ולהפחית כאבי פצעים.
    הערה: הימנע מהאכלת בעלי חיים ביום הניתוח כדי למנוע שאיפה.
  3. לנהל את החיה עם זריקה תוך שרירית של פניצילין 1x מדי יום במשך 7 ימים רצופים כדי למנוע זיהום לאחר הניתוח (14,000 יחידות לק"ג).

5. בדיקה קולית

  1. לאחר ניתוח CABG, השתמש בשרוול בדיקה על-קולי סטרילי כדי לעטוף את בדיקת המערך הליניארי בתדר גבוה. הניחו את הבדיקה על פני השטח של השתל הוורידי.
  2. הצג את קווי המתאר של השתל במצב אולטרסאונד דו-ממדי, ולאחר מכן עבור למצב דופלר צבע כדי לזהות את זרימת הדם בשתל.

6. איסוף רקמת שתל ורידי

  1. לאסוף 10 מ"ל של דגימת דם מן המעגל ורידי של וריד האוזן לבדיקה ביוכימית. (טבלה 1). צנטריפוגה את דגימת הדם ב 1,000 x גרם במשך 5 דקות ולבצע בדיקות ביוכימיות עם אנלייזר ביוכימי אוטומטי.
  2. מרדימים את בעל החיים כפי שתואר קודם לכן. עם אישור עומק ההרדמה, יש להזריק 10% אשלגן כלורי 0.5 מ"ל/ק"ג משקל גוף מהווריד השולי באוזן או מווריד הגפיים הקדמיות. לאחר מכן, בצע חתך עצם החזה החציוני של 10 ס"מ עם סכין חשמלית כדי לקצור את שתל הווריד 30 יום לאחר הניתוח. תקן את תנוחת הגוף כמו בשלב 2.2., ולאחר עיקור ומיקום של שקוע, בצע חתך עצם החזה החציוני כדי לפצל את עצם החזה. במהלך ההפרדה, הימנעו מכלי הדם העיקריים ומהלב, והפרידו את כלי הדם המושתלים שכבה אחר שכבה.
  3. נתקו במהירות את כלי הדם הגדולים המתחברים ללב, הניחו את הלב ואת אבי העורקים העולה על שבבי קרח, והוציאו את גשר כלי הדם של השתל, אבי העורקים המחובר והעורק הכלילי הימני. יש לשטוף את כל הדגימות במי מלח רגילים ב-4°C.
  4. לוקחים את כל כלי השתל בגודל של כ 3-4 ס"מ, מחלקים אותו ל 4-5 חלקים שווים, ומעבירים לצינורות הקפאה. הכניסו במהירות את הצינורות לחנקן נוזלי כדי להקפיא במהירות ולעבור למקפיא בטמפרטורה אולטרה נמוכה של -80 מעלות צלזיוס לאחסון.
  5. לניתוח, שטפו את השתל במי מלח קרים כקרח 0.9% וקבעו אותו בתמיסת פרפורמאלדהיד 4%. שמור על יחס בין גודל בלוק הרקמה לתמיסה מקבעת של 1:10 וקבע את הרקמה במשך יותר מ -12 שעות.
  6. מכתימים את הקטעים ב 50 מ"ל של תמיסה מימית של hematoxylin במשך 3 דקות. להפריד את החלקים על ידי שטיפה עם 50 מ"ל של 0.5% אתנול חומצה הידרוכלורית ו 50 מ"ל של 0.2% מי אמוניה במשך 10 שניות כל אחד.
  7. יש לשטוף במים זורמים במשך שעה ולאחר מכן לנקות במים מזוקקים על ידי השריה למשך 3 דקות. יש לייבש באתנול 70% ו-90% למשך 10 דקות כל אחד. מניחים ב-50 מ"ל של תמיסת צביעת אאוזין 0.5% אלכוהול למשך 2-3 דקות.
  8. יש לייבש את החלקים המוכתמים באתנול טהור למשך 10 דקות ולאחר מכן להשרות בקסילן טהור למשך 10 דקות כדי להפוך את הדגימות לשקופות. מטפטפים את החלקים השקופים בדבק נייטרלי ומכסים בכיסוי. התבוננו בקטעים פתולוגיים תחת מיקרוסקופ אור בהגדלה של פי 40.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

מדדי BMI וסרום ביוכימיים
ה-BMI בין קבוצות הדמה וה-VGD לא היה שונה באופן משמעותי (sham לעומת VGD, 22.05 ק"ג/ס"מ 2 ± 0.46 ק"ג/ס"מ 2 לעומת 21.14 ק"ג/ס"מ 2 ± 0.39 ק"ג/ס"מ 2, p = 0.46). התוצאות הביוכימיות של הסרום מפורטות בטבלה 1. שינויים מובהקים סטטיסטית בין הקבוצות נמצאו בארבעה מדדים ביוכימיים, כולל אמינוטרנספראז אספרטט (AST, sham לעומת VGD, 25.25 IU/L ± 1.88 IU/L לעומת 31.5 IU/L ± 2.58 IU/L), בילירובין בסרום (sham לעומת VGD, 2.5 μmol/L ± 0.47 μmol/L לעומת 4.5 μmol/L ± 0.14 μmol/L), סך בילירובין (sham לעומת VGD, 0.025 μmol/L ± 0.14 μmol/L לעומת 0.92 μmol/L ± 0.33 μmol/L), וקריאטינין (sham לעומת VGD, 92.75 μmol/L ± 4.15 μmol/L לעומת 141.75 μmol/L ± 12.65 μmol/L).

בדיקה קולית
כל בעלי החיים בקבוצות הבושה (n = 5) וה- VGD (n = 5) שרדו. ההליכים הכירורגיים של CABG מוצגים באיור 1. זמן הניתוח הממוצע היה 105 דקות ± 25 דקות (טווח: 90-160 דקות), ונפח הדימום התוך ניתוחי הממוצע היה 85 מ"ל ± 35 מ"ל (טווח: 50-200 מ"ל). השפעת זמן הפעולה היא בעיקר מעבר מיומנותו של המפעיל מאדם לחזיר ואין לה משמעות מיוחדת. משך הזמן הממוצע לאחר אנסטומוזיס חתך לאקסטובציה קנה הנשימה היה 17 דקות ± 5 דקות (טווח: 15-30 דקות). בדיקת אולטרסאונד הראתה כי אספקת הדם של כלי הדם המושתל הייתה רגורגיטציה חלקית בהשוואה לעורק הכלילי הרגיל, וכיוון זרימת הדם הכולל היה בדרך כלל תקין (איור 3). Pneumothorax, טמפונדה, זיהום, או סיבוכים חמורים אחרים לא נצפו לאחר הניתוח. לא נמצא הבדל משמעותי במשקל או ב-BMI בין קבוצות הדמה וה-VGD, חודש לאחר הניתוח.

בדיקה על-קולית בוצעה בקצה הפרוקסימלי (איור 3A,B), חלל כלי הדם (איור 3C,D) והקצה הדיסטלי (איור 3E,F) של כלי השתל. זרימת הנסיגה נצפתה בקצוות הפרוקסימליים והדיסטליים של כלי השתל; עם זאת, לא נצפתה חריגת דם.

שינויים פתולוגיים בוורידים
כל שתל ורידי חולק באופן שווה לשלושה מקטעים לפי אורך, ומקטע אחד נבחר מכל מקטע להערכה וסווג לפי סיווג פרוידיליט שונה להיצרות עורקים כליליים18. ערכים ממוצעים משלושת החלקים אומצו כתוצאות למידת החסימה. הסיווג הספציפי היה כדלקמן: כיתה I = 0 נקודות, נורמלי ללא רסטנוזיס; דרגה II = היצרות קלה של נקודה אחת <30%; דרגה III = 2 נקודות, היצרות בין 30% ל -50%; כיתה IV = 3 נקודות, היצרות חמורה בין 50% ל 90%; דרגה V = 4 נקודות, חסימת סכום ביניים >90%; ודרגה VI = 5 נקודות, חסימה מוחלטת, ללא זרימת דם לשתל הוורידי. הסיווג הפרוידיליט המתוקן להיצרות העורקים הכליליים אומץ כדי להעריך את התוצאות המכומתות. התוצאה עבור קבוצת הדמה הייתה 0.00 ± 0.00, מה שמצביע על כך שאין חסימת כלי דם, בעוד שהתוצאה עבור קבוצת CABG הייתה 3.12 ± 1.22. לפיכך, ההבדל היה משמעותי בין שתי הקבוצות (עמ' < 0.05, לוח 2).

תחת המיקרוסקופ, בקבוצת הדמה, הטוניקה אינטימה, הטוניקה מדיה, והדופן הוורידית של השתל הוורידי נראו תקינים. בקבוצת VGD, תווך הטוניקה אינטימה והטוניקה של השתלים הוורידיים התעבו באופן משמעותי 30 יום לאחר ניתוח CABG. הטוניקה אינטימה תוחמה באופן מעורפל מאמצעי הטוניקה. השכבה האלסטית של מצע הטוניקה נעלמה (איור 4). הלומן של השתל הוורידי היה מלא ברקמות היפרפלסטיות (איור 4). לא נצפה שינוי משמעותי בקוטר כלי השיט.

Figure 1
איור 1: מתווה הנוהל. (A-C) לפני הניתוח: שוקלים את המיני-חזירים, בודקים את ביצועי הדפיברילטור ומכשיר ההנשמה ומחברים את צינור האוורור. (ד-ו) הרדמה: יש לבצע הזרקה תוך שרירית של חומר הרדמה למיני-חזירים, לקבע את המיני-חזיר על שולחן הניתוחים, לחשוף באופן מלא את נתיב האוויר לאינטובציה בקנה הנשימה, לחבר את מכונת ההנשמה ולהשתמש בהרדמה באינהלציה כדי לשמור על ההרדמה. (ז-י) במהלך הניתוח: ביצוע הערכת אולטרסאונד טרום ניתוחית של תפקוד הלב במיני-חזירים והשתלת מעקף עורקים כליליים מלאה דרך חתך בדופן בית החזה השמאלי. (י-ל) לאחר הניתוח: אנסטומוז את הפצעים ולשים לב לטיפול לאחר הניתוח והאכלה של המיניחזירים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2: ההליך הכירורגי. (A) לחתוך את דופן בית החזה, (B) לבודד את וריד החלב הפנימי, (C) להסיר את וריד החלב הפנימי, (D) לבצע התניה מוקדמת של הפרין, (E) להשעות את קרום הלב, (F) לבצע זילוח איסכמיה שריר הלב, (G) לפקח על השינויים ECG, (H) לחסום את זרימת הדם הכלילי, (I) anastomose את הקצה הפרוקסימלי של כלי השתל, (J ) אתר אנסטומוזה כלילית דיסטלית, (K) אנסטומוזות דיסטליות לעורקים כליליים, (L) השתלת מעקף עורקים כליליים מלאה. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 3
איור 3: בדיקה על-קולית. לאחר השלמת השתלת מעקף עורקים כליליים, פטנט זרימת הדם של כלי הדם המושתל מוערך על ידי אולטרסאונד. (א,ג,ה) תמונות זרימת דם כלילית תקינה. אותות זרימת דם רציפים נראים בקצוות הפרוקסימליים, (D) האמצעיים ו-(F) הדיסטליים של כלי הדם המושתלים. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 4
איור 4: ניתוח היסטולוגי . (A) החלק הפתולוגי התקין של ורידי החלב הפנימיים הראה היררכיה ברורה של כלי הדם וללא היצרות לומן. (ב,ג) הפתולוגיה של וריד החלב הפנימי 30 יום לאחר השתלת עורקים כליליים הראתה כי האינטימה של כלי הדם התעבתה בדרגות שונות, והלומן הצטמצם כמובן. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

מחוונים קבוצת שאם (n = 5) קבוצת השתל (n = 5)
ALT (IU/L) 46 ±5.11 47.75±7.88
AST (IU/L) 25.25 ±1.88 31.5±2.58*
סה"כ חלבון (IU/L) 63.12 ±.138 60.17±1.91
אלבומין (IU/L) 32.25 ±0.77 23.77±5.61
גלובולין (גר'/ל') 30.87 ±.136 36.4±6.03
סרום בילירובין (μmol/L) 2.5 ±0.47 4.5±0.14*
סה"כ בילירובין (μmol/L) 0.025 ±0.14 0.92±0.33*
אלקליין פוספטאז (IU/L) 103 ±19.3 104±16.04
גלוקוזאמין (mmol / L) 4.44 ±0.36 5.96±0.42
חנקן אוריאה (mmol / L) 2.46 ±0.17 2.89±0.65
סרום קריאטינין μmol/L 92.75 ±4.15 141.75±12.65*
כולסטרול כללי (mmol / L) 2.37 ±0.12 2.16±0.06
טריגליצרידים (mmol / L) 0.48 ±0.10 0.25±0.05
ליפופרוטאין בצפיפות גבוהה mmol / L 1.05 ±0.07 1.03±0.07
ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה מאוד (mmol / L) 1.43 ±0.06 2.29±0.04
לקטט דהידרוגנאז (mmol / L) 384.75 ±26.8 478.25±49.58*

טבלה 1. אינדיקטורים ביוכימיים בסרום. תוכנת ניתוח סטטיסטי שימשה לניתוח. הנתונים בוטאו כממוצע ± שגיאת תקן (n = 5). השוואות של נתוני מדידה נותחו על ידי מבחן t של התלמיד. ערך p קטן מ-0.05 הצביע על מובהקות סטטיסטית. *p < 0.05, CABG לעומת sham.

סיווג Proudilit
ס' מס' של המדגם ציון מיד לאחר ניתוח CABG ציון 30 יום לאחר ניתוח CABG
1 0, 0, 0 2, 2, 2
2 0, 0, 0 1, 2, 2
3 0, 0, 0 2, 3, 2
4 0, 0, 0 3, 2, 2
5 0, 0, 0 2, 1, 2

טבלה 2. תוצאות סטטיסטיות של מעלות חסימת השתל מיד לאחר הניתוח ו -30 יום לאחר הניתוח. סולם הסיווג Proudilit שונה שימש לדרגת חסימת כלי דם: דרגה I = 0 נקודות, נורמלי ללא רסטנוזיס; דרגה II = היצרות קלה של נקודה אחת <30%; דרגה III = 2 נקודות, היצרות בין 30% ל -50%; כיתה IV = 3 נקודות, היצרות חמורה בין 50% ל 90%; דרגה V = 4 נקודות, חסימת סכום ביניים >90%; ודרגה VI = 5 נקודות, חסימה מוחלטת, ללא זרימת דם לשתל הוורידי. הנתונים כוללים תוצאות של חמישה שתלים ורידיים המחולקים באופן שווה לשלושה מקטעים לפי אורך.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

במחקר זה, תיארנו בפירוט את הפרוטוקול לבחירת בעלי חיים, הכנת מכשירים, הליכים כירורגיים והערכה לאחר ניתוח בעת פיתוח מודל VGD המושרה על ידי CABG. ביצענו בדיקה אולטראסונית של השתל הוורידי לפני ואחרי ניתוח CABG ובדיקה היסטולוגית של השתל 30 יום לאחר הניתוח. זרימת הדם בווריד החלב הפנימי הייתה תקינה לפני ניתוח CABG, בעוד זרימה מדרדרית נצפתה בשתל של וריד החלב הפנימי. בהשוואה לקבוצת ניתוח הדמה, תפקודי הכבד והכליות של בעלי החיים בקבוצת הניתוח נפגעו במידה מסוימת. בהתחשב בהתרחשות של מחלת השתל הכלילי, היחלשות התכווצות שריר הלב הביאה לזילוח לא מספיק של רקמות היקפיות. השתל הוורידי הראה היפרפלזיה אינטימית ועיצוב מחדש של כלי הדם 30 יום לאחר ניתוח CABG (איור 4). שינויים פיברוטיים סביב כלי הדם קשורים לריפוי פצעים, התפשטות פיברובלסטים מתרחשת בשלב מוקדם של ריפוי פצעים ביום 1 עד יום 3 19, ייצור קולגן פעיל מסוג I ופיברונקטין מתרחש ביום 4 עד יום 6, וצבירה ציטופלזמית של α-SM אקטין פיבריל מתרחשת ביום 7 עד יום 1419. סיבי מתח מרמזים על היווצרות של myofibroblasts, אשר עולה בקנה אחד עם התכווצות הפצע20. לא ברור אם פיברוזיס פריווסקולרי משפיע על תוצאות הניתוח.

כאן, בחרנו מיני-חזירים כדי לבסס את מודל מחלת השתלת הוורידים. בעוד שבעלי חיים קטנים כמו חולדות שימשו לחקר המנגנונים הפתולוגיים של VGD21, חזירים דומים בגודלם, באנטומיה ובפיזיולוגיה שלהם לבני אדם, ולכן הם מתאימים יותר לחקר הפתוגנזה של מחלות לב אנושיות או ככלי לפיתוח מכשירים22. ורידים פנימיים של החלב נבחרים לעתים קרובות גם כשותלים מבחינה קלינית. מחקרים קליניים משתי קבוצות בלתי תלויות מצאו כי לשתלי ורידים פנימיים בחלב יש את המאפיין של שכיחות גבוהה של נגעים בשתלי ורידים, ואותם שינויים פתולוגיים נצפו במחקר שלנו (איור 4)23,24. כמו בפרקטיקה הקלינית, בחירת גישה כירורגית מתאימה בניתוחי בעלי חיים היא קריטית להצלחת הניתוח; כאן התייחסנו להוראקוטומיה השמאלית של הוקום11. מצאנו כי בית החזה השמאלי יכול לחשוף בבירור את שדה הניתוח, האנטומיה סביב החתך הייתה קלה לזיהוי וכמות הדימום הייתה נמוכה. בנוסף, בהשוואה לתוראקוטומיה החציונית, בית החזה לרוחב אינו דורש ניסור של עצם החזה, ולכן ניתן להפחית את הלחץ הכירורגי.

הרדמה היא קריטית להצלחתו של מודל ניתוחי. במחקר זה, הפרוטוקול שונה מ Kotani et al., עם שילוב של קטמין ודיאזפם המשמש כהשראת הרדמה ושאיפת איזופלורן כהרדמה תחזוקה25. בנוסף, קבוצת מחקר הראתה כי תרופות תוך ורידי מתאימות גם להרדמה תחזוקתית26. אינטובציה אנדוטרכאלית בחזירים עשויה להיות קשה לצוות כירורגי של בעלי חיים. בהשוואה לדרכי הנשימה האנושיות, האנטומיה בקנה הנשימה של חזירים מקשה על חשיפת הגלוטיס27 . כאן, כדי לחשוף טוב יותר את הגלוטיס לחצנו למטה על הלסת העליונה של החזיר כדי לעזור לחשוף את הגלוטיס של החזיר (איור 1D). מצד שני, השימוש של laryngoscopy ישיר או ברונכוסקופיה סיבים אופטיים יעזור לדמיין את glottis באינטובציה endotracheal28.

המצב הפתולוגי של מחלת השתל הוורידי מחולק בעיקר לשלושה שלבים: 1) שלב חריף (תוך חודש) פקקת; 2) שלב תת-חריף (1-12 חודשים) היפרפלזיה אינטימית; 3) היווצרות בשלב מאוחר (מעל 12 חודשים) של טרשת עורקים, המהווה גורם להיצרות השתל ולחסימה29. רוב השינויים בשלב החריף של VGD קשורים לגורמים תפעוליים, וטרשת העורקים הנוצרת בשלב המאוחר היא בלתי הפיכה. המחקר של עיבוי רירית הרחם subacute חשוב מאוד עבור פתוגנזה, טיפול, ומניעה של VGD. כמו כן, קריטי שכלי השתל שנבחרו יהיו שונים מכלי הדם האנכיים של הווריד הספנוס הגדול. וריד החלב הפנימי בדרך כלל נושא פחות לחץ הידרוסטטי, והשינויים הפתולוגיים מהירים יותר לאחר ההשתלה מאשר עבור הווריד הספנוס הגדול. במודל שלנו, היפרפלזיה אינטימית טיפוסית המסתירה את לומן כלי הדם המושתל נראתה בבדיקה ההיסטולוגית 30 יום לאחר הניתוח, ואותם שינויים פתולוגיים נצפו במחקרים קליניים אחרים23,24. תוצאות הדוגמנות של בחירת וריד החלב הפנימי במיניחזירים יציבות בפנוטיפ, זמן הדוגמנות קצר, ומידת ההפחתה של השינויים הפתולוגיים של VGD גבוהה, מה שתורם לפיתוח מחקר המשך.

למודל יש גם כמה מגבלות. כמה ניתוחים עדינים בתהליך מידול בעלי חיים גדולים, ניטור תוך ניתוחי של סימנים חיוניים לבעלי חיים, והחייאה לאחר הניתוח, כולם דורשים ניסיון מעשי מסוים, אשר דורש מנתחים מקצועיים ומרדימים כדי להנחות את ההכשרה ולהפחית באופן משמעותי את התמותה בשוגג של בעלי חיים. ניתוחים בבעלי חיים גדולים דורשים אתרי ניסוי ספציפיים, כוח אדם מקצועי ותמיכה כספית מספקת, מה שעשוי להיות נטל כבד יותר עבור מכונים קטנים יותר.

לסיכום, בהנחיית אנשי מקצוע, מעבדות מאובזרות היטב יכולות להמשיך וללמוד את השינויים הפתולוגיים של VGD על ידי הקמת מודל VGD מיני חזיר זה, שהוא בעל משמעות רבה לטיפול ב- VGD.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

Acknowledgments

המחברים מודים למכון גואנגדונג לניטור חיות מעבדה על התמיכה הטכנית, הטיפול בבעלי חיים ואיסוף הדגימות. הם גם מודים שנג'ן Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd, על התמיכה הטכנית בבדיקה קולית. עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית המדע והטכנולוגיה של גואנגדונג, סין, ופרויקט הוצאות עסקיות בסיסיות של מחקר מדעי בסיסי של אוניברסיטת ג'ינאן (2017A020215076, 2008A08003 ו- 21621409).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Aortic Punch Medtronic Inc. , America 3.0mm, 3.5mm, 4.0mm Used for proximal coronary bridge anastomosis
Automatic biochemical analyzer IDEXX Laboratories, Inc. America Catalyst One
Cardiac coronary artery bypass grafting instrument kit LANDANGER, France
Cardiogram monitor Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co, Ltd MEC-1000
Coronary Shunt AXIUS  OF-1500, OF-2500, OF-3000 The product temporarily blocks the coronary artery during arteriotomy to reduce the amount of bleeding in the surgical field and provide blood flow to the distal end during anastomosis.  The Axius shunt plug is not an implant and should be removed prior to completion of the anastomosis.  
Defibrillator MEDIANA Mediana D500
Diazepam Nanguo pharmaceutical Co. LTD, Guangdong, China H37023039  Narcotic inducer
Disposable manual electric knife Covidien, America E2516H
Electric negative pressure suction machine Shanghai Baojia Medical Instrument Co, Ltd YX932D
Esmolol Guangzhou Wanzheng Pharmaceutical Co. LTD H20055990 Emergency drugs
Ice machine  Local suppliers, Guangzhou, China
Lidocaine  Chengdu First Pharmaceutical Co. LTD H51021662 Emergency drugs
Luxtec headlight system Luxtec, America AX-1375-BIF Used for lighting fine parts during operation
Medical operation magnifier (glasses) Germany Lista co, LTD SuperVu Galilean 3.5× Used for fine site operation during operation
Multi-function high-frequency electrotome Shanghai Hutong Electronics Co, Ltd GD350-B
Nitrogen canister Local suppliers, Guangzhou, China
Nonabsorbable surgical suture (polypropylene suture) Johnson & Johnson, America 6-0, 7-0 Used to suture blood vessels.
Nonabsorbable suture (cotton thread) Covidien, America 1-0 Used for skin and muscle tissue tugging
Open heart surgery instrument kit Shanghai Medical Instrument (Group) Co., LTD
Propofol injection Xi 'an Libang Pharmaceutical Co. LTD H19990282 Anesthetic sedative
Refrigerator Local suppliers, Guangzhou, China
Respiratory anesthesia machine for animal Shenzhen Reward Life Technology Co, Ltd, China R620-S1
Semi-occlusion clamp Xinhua Surgical Instrument Co., Ltd. ZL1701RB Temporarily cut off the aortic flow
vecuronium bromide Richter, Hungary  JX20090127 Muscle relaxant
Veterinary ultrasound system  Royal Philips, Netherlands CX50
Zoletil Virbac, France Zoletil 50  Animal narcotic

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lloyd-Jones, D., et al. Executive summary: Heart disease and stroke statistics--2010 update: A report from the American Heart Association. Circulation. 121 (7), 948-954 (2010).
  2. Taggart, D. P. Contemporary coronary artery bypass grafting. Frontiers of Medicine. 8, 395-398 (2014).
  3. Wolny, R., Mintz, G. S., Pregowski, J., Witkowski, A. Mechanisms, prevention and treatment of saphenous vein graft disease. The American Journal of Cardiology. 154, 41-47 (2021).
  4. Schachner, T., Laufer, G., Bonatti, J. In vivo (animal) models of vein graft disease. European Journal of Cardio-thoracic Surgery: Official Journal of the European Association for Cardio-thoracic Surgery. 30 (3), 451-463 (2006).
  5. Suggs, W. D., et al. Antisense oligonucleotides to c-fos and c-jun inhibit intimal thickening in a rat vein graft model. Surgery. 126 (2), 443-449 (1999).
  6. Jiang, Z., et al. A novel vein graft model: Adaptation to differential flow environments. American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 286 (1), H240-H245 (2004).
  7. O'Brien, J. E., et al. Early injury to the media after saphenous vein grafting. The Annals of Thoracic Surgery. 65 (5), 1273-1278 (1998).
  8. Zou, Y., et al. Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis. The American Journal of Pathology. 153 (4), 1301-1310 (1998).
  9. Klyachkin, M. L., et al. Postoperative reduction of high serum cholesterol concentrations and experimental vein bypass grafts. Effect on the development of intimal hyperplasia and abnormal vasomotor function. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 108 (3), 556-566 (1994).
  10. Tan, W., et al. A porcine model of heart failure with preserved ejection fraction induced by chronic pressure overload characterized by cardiac fibrosis and remodeling. Frontiers in Cardiovascular Medicine. 8, 677727 (2021).
  11. Hocum Stone,, L, L., et al. Magnetic resonance imaging assessment of cardiac function in a swine model of hibernating myocardium 3 months following bypass surgery. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 153 (3), 582-590 (2017).
  12. Gedik, N., et al. Proteomics/phosphoproteomics of left ventricular biopsies from patients with surgical coronary revascularization and pigs with coronary occlusion/reperfusion: Remote ischemic preconditioning. Scientific Reports. 7 (1), 7629 (2017).
  13. Tsirikos Karapanos,, N,, et al. The impact of competitive flow on distal coronary flow and on graft flow during coronary artery bypass surgery. Interactive Cardiovascular and Thoracic Surgery. 12 (6), 993-997 (2011).
  14. Meng, X., et al. Competitive flow arising from varying degrees of coronary artery stenosis affects the blood flow and the production of nitric oxide and endothelin in the internal mammary artery graft. European Journal of Cardio-thoracic Surgery: Official Journal of the. 43 (5), 1022-1027 (2013).
  15. Thankam, F. G., et al. Association of hypoxia and mitochondrial damage associated molecular patterns in the pathogenesis of vein graft failure: A pilot study. Translational Research: The Journal of Laboratory and Clinical. , 38-52 (2021).
  16. Li, X., et al. A surgical model of heart failure with preserved ejection fraction in Tibetan minipigs. Journal of Visualized Experiments: JoVE. 180 (180), 63526 (2022).
  17. Rueda, A. lcalá, I,, et al. A live porcine model for surgical training in tracheostomy, neck dissection, and total laryngectomy. European Archives of Oto-Rhino-Laryngology: Official Journal of the European Federation of Oto-Rhino-Laryngological Societies (EUFOS): Affiliated with the German Society for Oto-Rhino-Laryngology - Head and Neck Surgery. 278 (8), 3081-3090 (2021).
  18. Proudfit, W. L. Prognostic value of coronary arteriography. Cardiovascular Clinics. 12 (2), 1-8 (1981).
  19. Clark, R. A. Regulation of fibroplasia in cutaneous wound repair. TheAmerican Journal of the Medical Sciences. 306 (1), 42-48 (1993).
  20. Darby, I., Skalli, O., Gabbiani, G. Alpha-smooth muscle actin is transiently expressed by myofibroblasts during experimental wound healing. Laboratory Investigation. 63 (1), 21-29 (1990).
  21. Sterpetti, A. V., et al. Formation of myointimal hyperplasia and cytokine production in experimental vein grafts. Surgery. 123 (4), 461-469 (1998).
  22. Shannon, A. H., et al. Porcine model of infrarenal abdominal aortic aneurysm. Journal of Visualized Experiments: JoVE. 153 (153), (2019).
  23. Langille, B. L., O'Donnell, F. Reductions in arterial diameter produced by chronic decreases in blood flow are endothelium-dependent. Science. 231 (4736), 405-407 (1986).
  24. Zwolak, R. M., Adams, M. C., Clowes, A. W. Kinetics of vein graft hyperplasia: Association with tangential stress. Journal of Vascular Surgery. 5 (1), 126-136 (1987).
  25. Kotani, K., et al. A subacute hypoxic model using a pig. Surgery Today. 35 (11), 951-954 (2005).
  26. Liu, D., et al. Comparison of ketamine-pentobarbital anesthesia and fentanyl-pentobarbital anesthesia for open-heart surgery in minipigs. Lab Animal. 38 (7), 234-240 (2009).
  27. Geovanini, G. R., Pinna, F. R., Prado, F. A., Tamaki, W. T., Marques, E. Standardization of anesthesia in swine for experimental cardiovascular surgeries. Revista Brasileira de Anestesiologia. 58 (4), 363-370 (2008).
  28. Alhomary, M., Ramadan, E., Curran, E., Walsh, S. R. Videolaryngoscopy vs. fibreoptic bronchoscopy for awake tracheal intubation: A systematic review and meta-analysis. Anaesthesia. 73 (9), 1151-1161 (2018).
  29. Parang, P., Arora, R. Coronary vein graft disease: Pathogenesis and prevention. Canadian Journal of Cardiology. 25 (2), e57-e62 (2009).
  30. Egan, T. D., et al. Fentanyl pharmacokinetics in hemorrhagic shock: a porcine model. Anesthesiology. 91 (1), 156-166 (1999).

Tags

רפואה גיליון 185 מחלת השתל הוורידי הליך כירורגי מודל בעלי חיים פרוטוקול חזיר
הקמה והערכה של מודל מחלת השתלת ורידים חזיריים
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Li, X., Hu, J., Tan, W., Lin, Z.,… More

Li, X., Hu, J., Tan, W., Lin, Z., Zhu, C., Huang, C., Huang, J., Liu, Y., Liao, Q., Lu, H., Zhang, X. Establishment and Evaluation of a Porcine Vein Graft Disease Model. J. Vis. Exp. (185), e63896, doi:10.3791/63896 (2022).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter