Summary
Parsiyel siyatik sinir ligasyonu, termal ve mekanik uyaranlara abartılı tepkilerle karakterize uzun süreli kronik nöropatik ağrıya neden olur. Nöropatik ağrının bu fare modeli, ağrı yönetimi için yenilikçi terapileri incelemek için yaygın olarak kullanılır. Bu makalede, standardizasyonu ve tekrarlanabilirliği artırmak için cerrahi prosedür ayrıntılı olarak anlatılmaktadır.
Abstract
Kronik ağrının yönetimi bu güne kadar zor olmaya devam etmektedir ve mevcut tedaviler tolerans ve bağımlılık da dahil olmak üzere olumsuz etkilerle ilişkilidir. Kronik nöropatik ağrı, somatosensoriyel sistemdeki lezyonlardan veya hastalıklardan kaynaklanır. Yan etkileri azaltılmış potansiyel tedavileri araştırmak için, hayvan ağrı modelleri klinik öncesi çalışmalarda altın standarttır. Bu nedenle, iyi karakterize edilmiş ve iyi tanımlanmış modeller, yenilikçi tedavilerin geliştirilmesi ve doğrulanması için çok önemlidir.
Siyatik sinirin kısmi ligasyonu (pSNL), farelerde kronik nöropatik ağrıyı indükleyen, mekanik ve termal aşırı duyarlılık, devam eden ağrı ve uzuv sıcaklığındaki değişiklikler ile karakterize edilen bir prosedürdür ve bu modeli nöropatik ağrıyı preklinik olarak incelemek için mükemmel bir uyum haline getirir. pSNL, nöropatik ağrılı insanlarda gözlenen birçok semptomu yeniden ürettiği için nöropatik ağrıyı incelemek için avantajlı bir modeldir. Ayrıca, cerrahi prosedürün gerçekleştirilmesi nispeten hızlı ve basittir. Bir ekstremitenin tek taraflı pSNL'si, ipsilateral ve kontralateral pençeler arasında karşılaştırmanın yanı sıra merkezi sensitizasyonun değerlendirilmesine izin verir.
Kronik nöropatik aşırı duyarlılığı indüklemek için, siyatik sinirin dorsal üçte birini bağlamak için 9-0 emilemeyen bir naylon iplik kullanılır. Bu makalede cerrahi prosedür anlatılmakta ve kronik nöropatik ağrı gelişimi, yaygın olarak kullanılan birçok davranış testi ile karakterize edilmektedir. Kronik ağrıyı tedavi etmek için çok sayıda yenilikçi tedavi araştırıldığından, bu makale standardizasyon için çok önemli kavramlar ve nöropatik ağrıyı indüklemek için gereken ameliyatların doğru bir tanımını sunmaktadır.
Introduction
Kronik ağrı, dünya çapında önemli bir sağlık sorunudur ve Amerika Birleşik Devletleri'ndeki en pahalı sağlık sorunlarından biridir. Hem farmakolojik hem de farmakolojik olmayan modaliteler multidisipliner bir şekilde kullanıldığında kronik ağrı daha iyi yönetilir1. Kronik ağrının yönetimi zordur ve bazı durumlarda ağrıyı yeterince tedavi etmez2. Bu nedenle, kronik ağrı yönetimini iyileştirmek için yeni ve tamamlayıcı yöntemlere ihtiyaç vardır ve hayvan modelleri yenilikçi tedavileri araştırmak için çok önemlidir.
Kronik nöropatik ağrı, diyabet, enfeksiyonlar, sinir sıkışmaları veya otoimmün hastalıklar dahil olmak üzere somatosensoriyel sistemdeki lezyonlardan veya hastalıklardan kaynaklanır3. Nöropatik ağrı hem periferik hem de santral sensitizasyon mekanizmalarına dayanır ve sinirlerin lezyonundan kaynaklanır. Bu ağrı hem dokunma hem de termal olarak uyarılmış hiperaljezi ve allodinya, devam eden ağrı ve etkilenen ekstremitenin sıcaklığındaki değişiklikler ile karakterize edilebilir4. Mekanizmaları daha iyi anlamak ve yeni tedavileri ilerletmek için, kemirgenlerde nöropatik ağrının semptomlarını ve nedenlerini taklit etmek için çeşitli modeller geliştirilmiştir5. Örneğin, kemoterapötik ajan enjeksiyonları, spinal sinir ligasyonu (SNL), siyatik sinirin kronik daralma hasarı (CCI), pSNL, korunmuş sinir hasarı, siyatik sinir transeksiyonu ve siyatik sinir triseksiyonu6 ile nöropatik ağrı indüklenebilir. Özellikle, siyatik sinirin bağlanması, insanlarda gözlenen nöropatik ağrının, mekanik ve termal aşırı duyarlılık veya etkilenen ekstremitenin sıcaklığındaki değişiklikler, karmaşık bölgesel ağrı sendromunun (CRPS) karakteristiği gibi birçok özelliğini yeniden üretir7. Bu nedenle, bu model CRPS veya kronik nöropatik ağrıya neden olan diğer sinir hasarı etkilerinin incelenmesi için çok uygundur. Model ilk olarak Seltzer tarafından 1990yılında geliştirilmiştir 8 ve ağrı çalışmalarında yeni analjezik bileşikleri araştırmak veya kronik ağrının bilişsel etkilerini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır 9,10,11,12,13. Model yüksek tekrarlanabilirlik sunar ve kısmi ligasyon periferik uyaranlara davranışsal tepkileri korur6.
Şu anda kullanılan modellerin çoğunda pSNL'de gözlenmeyen eksiklikler vardır. CCI modeli, daraltıcının sıkılığına bağlı olarak her hayvan arasında çok daha yüksek bir yaralanma değişkenliğine sahiptir ve ototomi, arka pençe basamaklarını değiştirerek modeli davranışsal analiz için uygun hale getirmez6. SNL modeli, sadece ileri teknik beceriler gerektirmekle kalmayıp aynı zamanda ciddi motor eksiklikleri riski taşıyan çok daha karmaşık ve daha uzun bir ameliyattır3. Bu eksiklikler pSNL modelinde görülmez. Tekrarlanabilirliğin kolaylığı, ameliyatın kısa sürmesi ve postoperatif olarak görülen motor defisit riskinin azalması, bu modeli periferik nöropatik ağrıyı incelemek için değerli kılmaktadır 8,14. Bununla birlikte, kısmi ligasyon prosedürünün kendisi deneyciler arasında değişkenliğe sahip olabilir, bu da bağlanmış sinir liflerinin sayısında daha az tutarlılık sağlar. Bu nedenle, ameliyatın detaylarının sunulması, çalışmalar arasında tekrarlanabilirliği artırmak için çok önemlidir.
Kronik nöropatiyi indüklemek için, siyatik sinirin genişliğinin üçte birini bağlamak için 9-0 emilemeyen bir naylon sütür kullanılır. Ameliyattan sonra, termal ve mekanik uyaranlara verilen yanıtlar abartılır, ameliyat sonrası 1. günde başlar ve 50 günden fazla sürer8. Burada, hem termal hem de mekanik hassasiyetler, Hargreaves'in, sıcak plakanın ve von Frey filament testlerinin kullanıldığı 28 gün boyunca değerlendirildi. Tüm davranışsal analizler, uzun süreli aşırı duyarlılığın tutarlılığını göstermiştir. Bu modelin hem morfin hem de ibuprofenin doza bağımlı etkilerine sahip olduğu gösterilmiştir ve bu da klinik öncesi ağrı çalışmaları için çok uygun olduğunu doğrulamaktadır. Özellikle, bu makalede, "sinir camı kancası" olarak adlandırılan benzersiz bir el yapımı cam aletin talimatları açıklanmaktadır. Bu araç, siniri manipüle etmek ve ameliyat sırasında istenmeyen ek sinir yaralanmasını önlemek için forseps yerine kullanılır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm prosedürler Arizona Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin laboratuvar hayvanlarının kullanımına ilişkin kılavuzlara uygundur (NIH yayını no. 80-23, 1966). Patojen içermeyen, yetişkin C57Bl6 / J fareler (testte ağırlık: 22-28 g), 12 saatlik bir ışık / karanlık döngüsünde iklim kontrollü odalarda standart vivaryum fare kafeslerine (kafes başına beş fare) yerleştirildi ve yiyecek ve su ad libitumuna erişmesine izin verildi. Tüm davranışsal deneyler, tedavi koşullarına kör olmuş deneyciler tarafından gerçekleştirildi.
1. Temel: mekanik hassasiyetin ölçüsü
- Farelerin varışında, 1 hafta boyunca hayvan tesisine alışmalarına izin verin. Ardından, hayvanları bundan sonra ≥7 gün boyunca deneyci kullanımına alıştırın.
- Fareleri testten önce 1 saat boyunca von Frey test cihazına alıştırın, şeffaf Pleksiglas kutulara, bir tel örgü üzerine, test odasıyla aynı odaya, tercihen alışkanlık sırasında odada bulunan deneyci ile birlikte yerleştirin.
- Temel pençe çekilme eşiğini, 3.61 (3.9 mN) filamentten başlayarak, Ek Tablo S1'de açıklanan von Frey filamentlerini kullanarak "yukarı ve aşağı" yöntemiyle belirleyin.
- Orta plantar arka pençenin bir dizi kalibre edilmiş ince (von Frey) monofilamentle araştırılmasına verilen geri çekilme tepkisini ölçün. Her bir filamenti, asılı tel örgü kafeslerde tutulan hayvanların pSNL ipsilateral arka pençesinin plantar yüzeyine bir kez dik olarak uygulayın. "Yukarı ve aşağı" yöntem15'i kullanarak mekanik hassasiyeti değerlendirin: filamentin boyutuna karşılık gelen uyaran mukavemetini sırayla artırarak veya azaltarak geri çekilme eşiğini belirleyin. Her filamenti sırayla bir kez uygulayın.
NOT: Deneyci, hayvanlar arasında tutarlı sonuçlar elde etmek için ayak tabanlarından herhangi birini uyarmaktan kaçınmalıdır. - Örneğin, hayvan 3.61 filamentine cevap vermezse, daha kalın 4.08 filamentini (9.8 mN) kullanın (bir yanıt görsel olarak etkilenen pençenin geri çekilmesi, sallanması veya yalanması olarak belirtilir); Hayvan ilk kez cevap verdiyse, daha ince 3.22 (1.6 mN) filament kullanın. Hayvanın sırasıyla olumlu veya olumsuz sonraki tepkilere sahip olup olmadığına bağlı olarak azalan veya giderek daha kalın filamentler kullanmaya devam edin. Olumsuz ve olumlu yanıtları Ek Tablo S1'de sunulan veri sayfasında raporlayın. İlk olumlu yanıtı takiben aynı pençeyi 4x farklı filamentlerle test edin.
- Orta plantar arka pençenin bir dizi kalibre edilmiş ince (von Frey) monofilamentle araştırılmasına verilen geri çekilme tepkisini ölçün. Her bir filamenti, asılı tel örgü kafeslerde tutulan hayvanların pSNL ipsilateral arka pençesinin plantar yüzeyine bir kez dik olarak uygulayın. "Yukarı ve aşağı" yöntem15'i kullanarak mekanik hassasiyeti değerlendirin: filamentin boyutuna karşılık gelen uyaran mukavemetini sırayla artırarak veya azaltarak geri çekilme eşiğini belirleyin. Her filamenti sırayla bir kez uygulayın.
2. Temel: Hargreaves testini kullanarak termal duyarlılık ölçüsü
- Farelerin varışında, 1 hafta boyunca hayvan tesisine alışmalarına izin verin. Ardından, hayvanları bundan sonra ≥7 gün boyunca deneyci kullanımına alıştırın.
- Fareleri testten önce 1 saat boyunca Hargreaves test cihazına alıştırın, şeffaf Pleksiglas kutulara, test odasıyla aynı odaya, tercihen alışkanlık sırasında odada bulunan deneyci ile birlikte yerleştirin.
NOT: Hargreaves testi, hayvanın birkaç saniye sabit durmasını gerektirir. Farelerde, alışkanlık başarılı bir deneyin anahtarıdır. Bu nedenle, fareler 1 saatlik alışkanlıktan sonra çok aktif kalırsa, gerektiğinde daha uzun süre alışmalarına izin verin.- Hargreaves ve ark.16 tarafından açıklandığı gibi pençe çekilme gecikmelerini belirleyin. Pleksiglas muhafazalardaki fareleri berrak bir Pleksiglas plaka üzerine yerleştirin.
- Radyant bir ısı kaynağını (yüksek yoğunluklu projektör lambası) arka pençenin plantar yüzeyine pSNL'ye ipsilateral olarak odaklayın. Yaklaşık 10 sn'lik bir pençe çekme gecikmesi taban çizgisi elde etmek için ısı kaynağının yoğunluğunu ayarlayın. Ardından, deneyin geri kalanı için yoğunluğu sabit tutun.
- Pençe çekildiğinde bir hareket dedektörünün uyaranı ve zamanlayıcıyı otomatik olarak durdurmasını bekleyin. Doku hasarını önlemek için maksimum 33,5 sn'lik bir kesim kullanın.
NOT: Kesim, herhangi bir ek cilt hasarını önlemek için önceki deneylere ve makalelere dayanarak belirlenir11,17,18. Bu çalışmada kullanılan yoğunlukla, 33.5, Hargreaves aparatını kullanarak 30 (50 W) uyaran yoğunluğuna karşılık gelen kesimdir. Gözlemlenen davranış gönüllü değil, refleks bir davranıştır. - Hargreaves aparatını kullanarak ve pSNL ipsilateral arka pençenin plantar yüzeyini hedefleyerek taban çizgisi pençe geri çekilme gecikmelerini belirleyin. Termal stimülasyonu başlatın ve geri çekilme gecikmesini kaydedin. Isı uyaranının sıcaklığını etkilemekten kaçınmak için, denemeler sırasında idrarı temizleyin.
3. Taban çizgisi: sıcak plaka testini kullanarak termal hassasiyet ölçümü
- Testten önce hayvanları 1 saat boyunca test odasına alıştırın.
NOT: Oda sıcaklığı önemli olduğundan ve sıcak plaka testine verilen yanıtları etkileyebileceğinden, alışma süresi boyunca ve test süresi boyunca odanın sıcaklığının tutarlı bir şekilde 22 ° C civarında olduğundan emin olun. - Sıcak plakayı 52 ° C'ye ayarlayın, çünkü bu sıcaklığın ideal olarak caydırıcı bir termal tepki19 ortaya çıkardığı gösterilmiştir.
- Hayvanı test odasına yerleştirin ve bir kronometre başlatın.
- Gürültülü davranışları gözlemleyin (yani, pençe çekilmesi, yalama, sallama). pSNL ameliyatı arka bacağı etkilediğinden, ön ayaklarda gözlenen davranışları göz ardı edin (özellikle ön ayak yalama).
- Nosifensif davranış gözlenir gözlenmez kronometreyi durdurun.
- Hayvanı odadan çıkarın ve gecikmeyi bu davranışa kaydedin.
NOT: Doku hasarını önlemek için hayvanları en fazla 30 sn sonra hazneden çıkarın. Ek olarak, gözlemlenen davranışın gönüllü bir davranış değil, refleks bir davranış olduğuna dikkat etmek önemlidir. - Kokuların davranışsal etkisini azaltmak için test odasını hayvanlar arasında% 70 etanol ile temizleyin. Isı uyaranının sıcaklığını etkilemekten kaçınmak için, test edilen her hayvan arasındaki herhangi bir idrarın aparatını temizleyin.
- Sonuçları doğrulamak için, hayvanlar test edildikten sonra gözden geçirilmek üzere test sırasında hayvanların videolarını sıcak plaka odasına kaydedin.
NOT: Gecikme sürelerini ölçmek için video incelemesini kullanarak, deneyci testi tekrar tekrar gözlemleyebilir ve gerçek zamanlı gözlem sırasında gözden kaçmış olabilecek nosifensif davranışları yakından analiz edebilir.
4. Preoperatif hazırlık
NOT: Ameliyattan sonra fareleri kurtarmak için temiz kafeslerin mevcut olduğundan emin olun. Ameliyat bölgesini %70 etanol ile temizleyin, ellerinizi %70 etanol ile dezenfekte edin, steril eldivenler kullanın, uygun kişisel koruyucu ekipman (KKD) giyin (laboratuvar önlüğü, saç filesi, ayakkabı örtüleri) ve ameliyat boyunca steril teknikler uygulayın.
- Ameliyatta kullanılacak aletleri (Ek Şekil S1) ve ek kaynakları (gazlı bez) önceden otoklavlayarak hazırlayın.
- Uçucu izofluran kullanarak anesteziyi indükleyin ve cerrahi bir düzlemi korumak için gerektiği gibi ayarlayın. Oksijenin uygun bir akış hızında olduğundan emin olun.
- Hayvanın uyuşturulmasını sağlamak için, pençe refleksinin yokluğundan emin olmak için ayak parmaklarını cımbızla arka pençeye sıkıştırın ve yağlama oftalmik merhem uygulamadan önce kornea göz kırpma refleksini kontrol edin.
NOT: Analjezikler, analiz edilmek istenen ağrı yolunu değiştirebileceğinden, hatta ağrı araştırma hedeflerineuygun olarak ölçülen davranışı nötralize edebileceğinden ve geçersiz kılabileceğinden bu çalışmada önerilememektedir 20,21,22. - Ameliyatın hangi tarafta yapılacağını seçtikten sonra (solda burada gösterilmiştir), hayvanın arka bacağını uyluk bölgesi etrafında, patellaya doğru, kalçaya doğru ve femur üstünde tıraş edin. 3x'i klorheksidin ile bir yönde, ılık steril salin ile dönüşümlü olarak üç ayrı gazlı bezle silin.
NOT: İleriye dönük olarak, tutarlılığı korumak için her hayvanın ameliyatı aynı tarafta gerçekleştirdiğinden emin olun. - Tercih edilen bacağın etrafında steril bir alan oluşturmak için bacağı 10 cm x 10 cm steril bir örtüden yapılmış bir yarıktan geçirin.
5. Cerrahi prosedür
- İnce cerrahi makas kullanarak (Ek Şekil S1F), uyluğun lateral yönünün orta hattında cildin 2 mm'lik küçük bir kesimini yapın. Fasyayı kırmak ve kesi alanını genişleterek bir boşluk oluşturmak için makası cildin altına dairesel bir hareketle kaydırın.
- Bağlama forsepslerini (Ek Şekil S1H) kullanarak, uyluk kaslarında 1 cm derinliğinde 90°'lik bir açıyla dikey olarak keskin bir kesi oluşturun.
- İnce küçük makası (Ek Şekil S1G) aynı insizyona, yine 90° açıyla yerleştirin ve kasları ayırmak için yavaşça açın. Siyatik sinir görselleştirilene kadar bunu yapmaya devam edin.
- Parlak ve ince görünebilen, dikey uyluğa paralel olarak uzanan, kalçadan dize doğru uzanan siyatik siniri bulun. Devam etmeden önce makası ve bağlama forsepslerini vücuttan çıkarın.
- Siniri alttan izole etmek için ekstra ince forseps (Ek Şekil S1D) ve sinir cam kancasını (Ek Şekil S1E) kullanın. Siniri, kalçaya en yakın ve dizden en uzak olan femur trokanterine yakın bir bölgede çevreleyen bağ dokularından dikkatlice serbest bırakın.
- Sinirin cam çubuk üzerinde durmasına izin verin ve çubuğun ucunun sinirin yuvarlanmasını önlediğinden emin olun.
- Siyatik sinirin genişliğinin 1 / 3'ünü 9-0 naylon bir sütür kullanarak bağlamak için cerrahi bir düğüm yerleştirin, ortak peroneal, tibial ve sural sinir dallarına bölünmeden önce3.
NOT: Dallanma, siyatik sinir dizden aşağıya, kalçadan uzağa doğru ilerlerken meydana gelir. Sinirin bu üç dalı üç farklı innervasyona sahip olduğundan, tüm hayvan ameliyatlarında aynı sinir eksikliklerini sağlamak için cerrahi düğümü dallanmadan önce yerleştirmek zorunludur. - İplikleri sıkıca çekerken iplikleri düğüme yakın tutmaya özen gösterin, böylece sinirin cam çubuktan kaymasını önlemek ve daha fazla gerilme yaralanmasını önlemek için siniri aşırı kuvvetle çekmemek için.
- Düğüm tamamlandıktan sonra siniri cam çubuktan dikkatlice kaydırın ve ayrılmış kasların altındaki seviyede orijinal yerine geri yerleştirin.
- Kas insizyonunu emilebilir bir poliglikolik 5-0 sütür kullanarak dikin. Ayrı olarak, emilemeyen bir polipropilen 6-0 sütür kullanarak cildi dikin.
- Ameliyat ve anestezi durma zamanını kaydedin. Yeni bir temiz kafese geri döndürmeden önce fareyi kurtarma kafesinde tek başına uyandırmasına izin verin.
NOT: Ameliyat boyunca, anestezinin yeterli bakımını doğrulamak ve nefes almasını ve vücut perfüzyonunu (kırmızı, pembe, soluk) izlemek için hayvanın ayak parmaklarını sıkıştırın. Solunum önemli ölçüde azalırsa veya hayvan soluk görünüyorsa, anestezi akışını azaltmayı veya oksijen akışını arttırmayı düşünün ve hayvanı yeniden sulandırmak için deri altından enjekte etmeye hazır salinle dolu bir şırınga bulundurun. Her zaman, hayvanın vücut sıcaklığını korumak için altına yerleştirilmiş bir ısı kaynağı olmalıdır.
6. Kontrol hayvanları için sahte cerrahi prosedürü
- Cerrahi prosedürün 5.1-5.11 adımlarını izleyin; 5.4-5.9 arasındaki adımları hariç tutun.
7. Cerrahi sonrası davranış testleri
NOT: Deneycinin herhangi bir tedaviye kör olduğundan emin olun. Kronik nöropatik ağrı, ameliyattan sonraki 2 hafta boyunca gelişecektir, bundan sonra ilgili bileşiklerin uygulanmasını takiben davranış testleri yapılabilir.
- Hem termal hem de mekanik aşırı duyarlılığı ve potansiyel tersine çevrilmesini değerlendirmek için von Frey, Hargreaves veya sıcak plaka testini kullanın.
- Kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından açıklanan son nokta kriterlerini karşılayan herhangi bir hayvanı çalışmadan çıkarın.
- Davranış testinin sonunda kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından açıklanan prosedürleri izleyerek hayvanları ötenazi yapın.
8. Veri analizi
- von Frey:
- Chaplan ve meslektaşları23 tarafından açıklandığı gibi Dixon'un parametrik olmayan yöntemini kullanarak verileri analiz edin ve verileri ortalama geri çekilme eşiği olarak ifade edin.
- Referans verilen yazılımın ana sayfasında (bakınız Malzeme Tablosu), çalışma için kullanılan tüm filamentleri seçin (2.44, 2.83, 3.22, 3.61, 4.08, 4.31 ve 4.56). Grup panelinde, son simülasyona karşılık gelen filamenti seçin. Boş kutuda, olumlu (X) ve olumsuz (o) yanıtları bildirin. Gözlemlenen yanıt düzeninin solundaki kutuda bildirilen eşikleri yazın.
NOT: Bir desen ve niceleme örneği Ek Şekil S2'de sunulmuştur.
- Referans verilen yazılımın ana sayfasında (bakınız Malzeme Tablosu), çalışma için kullanılan tüm filamentleri seçin (2.44, 2.83, 3.22, 3.61, 4.08, 4.31 ve 4.56). Grup panelinde, son simülasyona karşılık gelen filamenti seçin. Boş kutuda, olumlu (X) ve olumsuz (o) yanıtları bildirin. Gözlemlenen yanıt düzeninin solundaki kutuda bildirilen eşikleri yazın.
- Chaplan ve meslektaşları23 tarafından açıklandığı gibi Dixon'un parametrik olmayan yöntemini kullanarak verileri analiz edin ve verileri ortalama geri çekilme eşiği olarak ifade edin.
- Hargreaves ve sıcak plaka:
- Daha fazla istatistiksel analiz için gecikme sürelerini bir elektronik tabloda raporlayın.
- Sonuçları, zamanın bir fonksiyonu olarak hassasiyetlerin (eşikler veya gecikmeler) ortalaması olarak çizin.
9. Sinir cam kancasının nasıl yapılacağına dair talimatlar
NOT: Bu süreç boyunca yangın güvenliği uygulayın. Gerektiğinde ısıya dayanıklı eldivenler veya gözlükler gibi uygun koruma kullanın.
- Bunsen brülörünü açın.
- Cam çubuğun (A) bir ucunu ateşe bir elinizle tutun. Bu cam çubuk eridikçe, çubuk A üzerindeki eriyen camı yönlendirmek ve çekmek için diğer elinizde başka bir cam çubuk (B) kullanın. cam çubuk A'yı ateşten çıkarın ve erimiş kısmın ucunun doğal olarak içe doğru yuvarlanmasına izin vererek küçük bir top şekli oluşturun. Bu şekli yönlendirmek için B cam çubuğunu kullanın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Kronik nöropatik ağrı, C57Bl6/J erkek farelerin siyatik sinirinin kısmi bağlanması ile indüklendi (Şekil 1A). Mekanik duyarlılık von Frey filamentleri ve "yukarı-aşağı" yöntemi kullanılarak değerlendirildi. Isıya karşı termal duyarlılık, Hargreaves ve sıcak plaka testleri kullanılarak değerlendirildi. Tüm veriler, pSNL cerrahisinin zaman içinde sahte hayvanlara etkisini veya farklı dozlarda morfin ve ibuprofenin etkilerini karşılaştırmak için Geisser-Sera düzeltmesi ile tekrarlanan iki yönlü ANOVA ölçümleri ile analiz edildi.
pSNL ameliyatı geçiren fareler, 28 gün boyunca sahte hayvanlara kıyasla mekanik uyaranlara karşı daha düşük eşikler göstermiştir (Şekil 1B). Termal aşırı duyarlılık değerlendirmesi ile benzer sonuçlar elde edildi; radyant ısı uyaranına maruz kaldıktan sonra pençe çekilme gecikmeleri pSNL hayvanlarında artmıştır (Şekil 1C) ve hayvanlar 52 ° C'lik bir plakaya yerleştirildiğinde geri çekilme gecikmeleri artmıştır (Şekil 1D).
Kronik nöropatik ağrının saptanmasını takiben, ameliyattan 14 gün sonra, farklı dozlarda morfin veya ibuprofenin antinosiseptif etkilerini değerlendirdik. Farelere intraperitoneal olarak tuzlu su çözeltisi veya iki farklı dozda morfin (1 ve 5 mg / kg) enjekte edildi. Her iki morfin enjekte edilen grupta da pSNL kaynaklı aşırı duyarlılığın tersine çevrilmesi görüldü ve bu oran 1 (1 mg / kg) ila 2 saat (5 mg / kg) arasında sürdü (Şekil 2A). Mekanik aşırı duyarlılık, morfin enjeksiyonundan 4 saat sonra başlangıç çizgisine geri döndü. Farelere intraperitoneal olarak iki farklı dozda ibuprofen (10 ve 30 mg / kg) uygulandığında, sonuçlar salin enjekte edilen farelere kıyasla mekanik aşırı duyarlılığın azaldığını göstermiştir (Şekil 2B). İbuprofenin antinosiseptif etkileri 2 saate kadar sürdü. Genel olarak, sonuçlar pSNL cerrahisinin uzun süreli kronik nöropatik ağrıya neden olduğunu göstermiştir. Ayrıca, bu modelin farklı analjezik dozlarına duyarlı olduğunu gösterebildik.
Şekil 1: Siyatik sinirin kısmi bağlanmasına bağlı olarak farelerde uzun süreli termal ve mekanik aşırı duyarlılık. Isıya termal duyarlılık (Hargreaves ve sıcak plaka testi) ve von Frey filamentlerine mekanik duyarlılık, kronik nöropatik ağrı (pSNL) modelinde aşırı duyarlılığın indüksiyonunu ve kalıcılığını incelemek için değerlendirildi. Siyatik sinirin bağlanmasından önce bazal değerler ölçüldü ve ameliyattan sonraki 28 gün boyunca aşırı duyarlılık değerlendirildi. (A) Resim, siyatik sinirin kısmi ligasyonunu temsil etmektedir. (B) Mekanik geri çekilme eşikleri, her zaman noktasında sahte ve pSNL fareler arasında karşılaştırılmıştır. Geisser-Sera düzeltmesi ile tekrarlanan iki yönlü ANOVA ölçümleri, pSNL'nin anlamlı bir etkisini ortaya koymuştur (F (1, 10) = 222.3, p < 0.0001, n = koşul başına 5-7). Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi, 1. ve 28. günler arasında hipersensitivitede anlamlı bir artış olduğunu gösterdi (p < 0.05). (C) Hargreaves testi ile ölçülen termal geri çekilme gecikmeleri, sahte ve pSNL fareler arasında karşılaştırıldı. Geisser-Sera düzeltmesi ile tekrarlanan iki yönlü ANOVA ölçümleri, pSNL'nin anlamlı bir etkisini ortaya koymuştur (F(1, 8) = 113.8; p < 0.0001, n = koşul başına 4-6). Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi, 2. ve 14. günlerde hipersensitivitede anlamlı bir artış gösterdi (p < 0.05). (D) Sıcak plaka testi ile ölçülen termal geri çekilme gecikmeleri, sahte ve pSNL fareler arasında karşılaştırılmıştır. Sıradan iki yönlü ANOVA, pSNL'nin anlamlı bir etkisini ortaya koydu (F (1, 32) = 19.10, p = 0.0001, n = koşul başına 4-6). Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi, pSNL ameliyatını takip eden 4 haftada ısıya karşı anlamlı bir duyarlılık artışı gösterdi (p = 0.0026). Veriler S.E.M. kısaltmaları ± ortalama olarak sunulmuştur: pSNL = siyatik sinirin kısmi ligasyonu; BL = taban çizgisi. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: pSNL ile indüklenen mekanik aşırı duyarlılığın intraperitoneal morfin veya ibuprofen enjeksiyonu ile doza bağlı olarak tersine çevrilmesi. Mekanik aşırı duyarlılık (von Frey filamentleri kullanılarak), pSNL'nin bir fare modelinde morfin veya ibuprofenin potansiyel antinosiseptif etkilerini incelemek için değerlendirildi. Başlangıç değerleri (pre-pSNL) siyatik sinir ligasyonundan önce elde edildi. Kronik nöropatik ağrının belirlenmesini takiben, 14. günde pSNL kaynaklı aşırı duyarlılığı (post-pSNL) sağlamak için hayvanlar ikinci kez temel alındı. Daha sonra, iki doz morfin (1/5 mg / kg) veya ibuprofen (10/30 mg / kg) intraperitoneal olarak enjekte edildi. Mekanik aşırı duyarlılığın potansiyel tersine çevrilmesi, enjeksiyonları takiben 4 saat içinde değerlendirildi. (A) Mekanik çekilme eşikleri, salin durumu ile iki doz morfin arasında karşılaştırıldı. Geisser-Sera düzeltmesi ile tekrarlanan iki yönlü ANOVA ölçümleri, 1 mg / kg morfinin anlamlı bir etkisini (F (1, 11) = 11.16, p = 0.0066, n = 6-7 koşul başına) ve 5 mg / kg morfinin anlamlı bir etkisini (F (1, 10) = 21.78, p = 0.0009, n = 6 koşul başına) ortaya koymuştur. Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi, her iki doz için enjeksiyondan 1 saat sonra mekanik aşırı duyarlılıkta anlamlı bir azalma olduğunu, ancak 2 saatte 5 mg / kg durumu için sadece anlamlı bir etki olduğunu göstermiştir (* p < 0.05). (B) Mekanik çekilme eşikleri, salin durumu ile iki doz ibuprofen arasında karşılaştırıldı. Geisser-Sera düzeltmesi ile tekrarlanan iki yönlü ANOVA ölçümleri, 10 mg / kg iburofen (F (1, 11) = 7.788, p = 0.0176, n = 6-7 koşul başına) ve 30 mg / kg ibuprofenin anlamlı bir etkisini (F (1, 10) = 18.79, p = 0.0015, n = 6 koşul başına anlamlı bir etki ortaya koymuştur. Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi, her iki doz için enjeksiyondan 1 ve 2 saat sonra mekanik aşırı duyarlılıkta anlamlı bir azalma olduğunu göstermiştir (* p < 0.05). Veriler S.E.M. kısaltmaları ± ortalama olarak sunulmuştur: pSNL = siyatik sinirin kısmi ligasyonu; IP = intraperitoneal. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
Ek Şekil S1: Cerrahi aletler. İki resim, ameliyat için kullanılan farklı aletleri göstermektedir. (A) İnce Castroviejo iğne tutucu; (B) Castroviejo iğne tutucu; (C) Mikro Adson forseps; (D) ekstra ince Graefe forseps; (E) sinir cam kancası; (F) ince makas (11,5 cm); (G) ince makas (9 cm); (H) forseps bağlama; (I) iris forseps. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Ek Şekil S2: Von Frey filament testi ile ölçülen pençe çekilme tepkilerinin temsili modeli. Bu deneme için, fare ilk üç stimülasyona cevap vermedi, ancak 4.56 filament ile dördüncü stimülasyonda pençesini geri çekti. Olumlu yanıtı (x) takiben, daha ince bir filament kullanıldı (4.31), ardından fare başka bir filamente cevap vermeyene kadar daha küçük boyutlu filamentler izledi (bu durumda, 4.08). Deneyci, filamentlerin boyutunu, yanıt yokluğuna kadar birer birer azaltmalıdır (o). Yanıt eksikliğini takiben, deneyci olumlu bir yanıt elde edene kadar daha kalın bir filament kullandı ve pozitif cevabı takiben boyutlarını azalttı (burada 4.31 filament ile elde edildi). İlk olumlu yanıtı takiben dört uyaran yapıldı; Her bir stimülasyonun kronolojik deseni, panel A'da kırmızı sayılarla açıklanmıştır. Bu durumda, hayvan 3.61 filamenti ile olumlu bir tepki göstermediği için 2.44 ila 3.22 filamentleri asla kullanılmamıştır. (B) Yanıt kalıbı daha sonra Allodynia yazılımında dolduruldu, filamentlerin uygulandığı sırayla (000xx0x0), beyaz renkle vurgulanan kutuda rapor edildi. Elde edilen eşik daha sonra yazılım tarafından hesaplandı (2.60839). Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Ek Tablo S1: von Frey testi için veri toplama sayfası. Bu tablo, deneycilerin von Frey filamentlerini kullanırken yanıt kalıplarını doldurmalarını sağlar. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Kronik ağrı tedavisi genellikle uzun süreli ilaç tedavisi gerektirir ve bu da ağrı yönetimini zorlaştırır. Bu nedenle, preklinik modeller, farmakolojik veya farmakolojik olmayan yaklaşımlara dayanan yenilikçi tedavilerin potansiyel faydalarını değerlendirmek için önemli bir araçtır. Çok sayıda kronik nöropatik ağrı modeli, farklı araştırmacılar arasında cerrahi tekniklerdeki değişkenliğin artması nedeniyle zorluklar getirmekte ve tekrarlanabilirliğin azalmasına neden olmaktadır. Bu nedenle, yeni tedavilerin potansiyel antinosiseptif etkilerini, iyi karakterize edilmiş ve standartlaştırılmış çoklu modellerde karakterize etmek önemlidir.
Bu rapor, siyatik sinirin kısmi ligasyonunun, nispeten ucuz yöntemler kullanılarak farelerde uzun süreli kronik nöropatik ağrının gelişmesine neden olduğunu göstermektedir. pSNL, termal ve mekanik uyaranlara verilen yanıtları abartır ve model, yaygın olarak kullanılan analjeziklerin doza bağımlı bir şekilde uygulanmasına yanıt verir. Bu nedenle, pSNL modeli, yeni ilaçların potansiyel faydalarını değerlendirmek için uygun ve hassas bir model gibi görünmektedir. Nöropatik ağrının başlıca özellikleri hiperaljezi ve allodinidir. Bu rapor mekanik allodinya ve termal hiperaljezinin nasıl etkilendiğini göstermektedir. Ancak mekanik hiperaljezi ölçülmedi. Allodini ve hiperaljezi arasında büyük bir gri örtüşme alanı vardır. Her iki duyu da duyusal bir uyarana karşı genel aşırı duyarlılık şemsiyesi altına girer24. Bu nedenle, uyarılan duyum, soğuk ağrı olarak ısı veya yanma hissi olarak dokunma gibi başka bir his olarak algılanabilir. Bu nedenle, hiperaljezi ve allodinya, özellikle hayvan ağrı modellerinde, ayırt etmek genellikle zordur.
pSNL modeli, analjezik bileşiklerin etkisini, kronik ağrının altında yatan mekanizmaları ve hatta uzun süreli nöropatik ağrının bilişsel etkisini değerlendirmek için birçok kronik ağrı çalışmasında kullanılmıştır. Mekanik aşırı duyarlılığın 70 güne kadar kalıcılığı, yeni ilaçların uzun vadeli etkilerinin incelenmesine izin verir25. Önemli olarak, davranış testi için en uygun dönem, kronikağrı 8,11,26,27 belirlendikten sonra, ameliyattan sonraki birinci, ikinci ve üçüncü haftaları kapsar. Bir ilacın veya farmakolojik olmayan bir tedavinin gücünü ve etkinliğini değerlendirmek için, deneysel tasarıma bağlı olarak morfin veya ibuprofen gibi pozitif kontrol tedavileri düşünülmelidir. Kuyruk hareketi testinden farklı olarak, sıcak plaka testi, supraspinal yolları19 entegre eden pençeye bir uyaran uygular. Sıcak plaka testi, son çalışmalarda kronik nöropatik ağrı modellerinde ilaç antinosiseptif özelliklerini karakterize etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır 19,28,29,30,31,32,33.
Bu model, yeni opioid olmayan tedavileri karakterize etmek ve nörotensin reseptörü tip 211,13'ü içeren yeni bir ağrı yolunu tanımlamak için kullanılmıştır. Ayrıca, kronik ağrı12'de glisinerjik modülasyonların katılımını ve uyku ile ağrının kesişiminde yeni tedavilerin ve yolların geliştirilmesini göstermek için de kullanılmıştır10. Bununla birlikte, bugüne kadar, hiçbir makale açıklayıcı bir video ile tamamlanan ameliyatın ayrıntılı bir açıklamasını sunmamıştır.
pSNL ve benzeri modellerin ortak bir eleştirisi, hayvanlar arasında nöropatik sinir hasarının neden olduğu hasar derecesinin tutarlılığının güvenilirliğidir6. Bu makalede, bu sorunu gidermek için özel bir sinir camı kancası oluşturmak üzere bir cam çubuğu el ile eritmek ve kalıplamak için bir yordam açıklanır. Çoğu hayvan ameliyatı, ince sinirleri veya damarları almak için forseps kullanır. Sinir cam kanca aleti, siniri idare etmek için daha güvenli, daha az yaralanmaya eğilimli bir yöntem sağlar. Bu modelin amacı sinir hasarı yaratmak olsa da, siyatik sinirin genişliğinin üçte biri boyunca yerleştirilen dikişin neden olduğu sinirden başka sinire ek zarar vermemek akıllıca olacaktır. Sinir cam kancası, sinirin üzerinde durması için pürüzsüz, zarar vermeyen bir yüzeydir; Ek olarak, uçtaki top / kanca, toplama ve stabilizasyon kolaylığı sağlar. Ayrıca, siniri dikerken, yukarıda açıklanan teknik (protokol bölümü not 5.7), ipliklerin vücut boşluğunun derinliklerinde, düğümün görüneceği yere en yakın şekilde tutulmasını önerir. Bu, dikişlerin sonunda çekilmeyi önler ve düğümü sıkarken sinire en yakın dikişe gerginlik uygulanmasını teşvik eder. Bu teknik, düğümün daha sıkı bağlanması sürecinde sinirin yanlışlıkla sinir cam kancasından boşluğun dışına doğru çekilmesi durumunda ek gerilme yaralanmasını önler. Ek bir avantaj, ilk kesimi yapmak için ince makas kullanılmasıdır. Bu, neşter bıçaklarıyla yapılan daha büyük kesimlerin aksine, çok daha küçük bir kesi bölgesine ve dolayısıyla daha hızlı iyileşmeye izin verir.
Bu makalede bildirilen yöntemlerin de bazı sınırlamaları vardır. pSNL modelinde kronik ağrının gelişimi, hayvanların cinsiyetinden etkilenir34. Bu nedenle, araştırma çalışmalarının analizlerinde her iki cinsiyeti de içermesi esastır. Bu çalışmanın amacı cerrahi bir işleme odaklanmaktı ve ağrı modelinin cinsel dimorfizmini karakterize etmedi. Hargreaves testini kullanan farelerde termal duyarlılık ölçümlerinin zor olduğunu belirtmekte fayda var; Uyaran uygulanırken hayvanların birkaç saniye boyunca küçük bir muhafazada sabit durmaları gerekir. Bu nedenle, fareleri Pleksiglas muhafazaya alıştırmak, başarılı sonuçlar elde etmede önemli bir faktördür. Uyarılmış ağrının ölçümü de dikkatli bir deneyci eğitimi gerektirir. Termal ve mekanik duyarlılığın yanı sıra uzuvun işlevselliğini değerlendirmek için hem uyarılmış hem de spontan davranış testleri önerilir. Ek olarak, bu çalışmada, antinosiseptif etki için pozitif kontrol olarak morfin ve ibuprofen kullanılmıştır. Bu iki ilaç, çoklu ağrı modellerinde pozitif kontrol olarak yaygın olarak kullanıldıkları ve farklı modeller arasında daha iyi bir karşılaştırmaya izin verdikleri için seçilmiştir. Bununla birlikte, pregabalin ve gabapentinin nöropatik ağrıyı tedavi etmek için sıklıkla reçete edildiğini ve nöropatik ağrı yönetimine odaklanan çalışmaların bu ilaçları pozitif kontroller olarak içermesi gerektiğini belirtmek önemlidir.
Bu yazıda, kronik nöropatik ağrının incelenmesinde yaygın olarak kullanılan bir cerrahi kesin olarak anlatılmaktadır. Araştırmacıların ve kursiyerlerin bu fare modelinin görsel bir açıklamasından yararlanmalarına izin vermek, kronik ağrı mekanizmalarını anlamaya odaklanan veya yenilikçi tedavilerin karakterizasyonunu amaçlayan araştırma projelerinin geliştirilmesini kolaylaştıracaktır. Ayrıca, tekrarlanabilirliği artırmak için birden fazla ağrı modelinin kullanılması esastır ve bu rapor pSNL modelinin yeni laboratuvarlarda uygulanmasını kolaylaştıracaktır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların bildirecek çıkar çatışması yoktur. Makalenin yazarlarından hiçbiri başka bir şekilde herhangi bir ücret veya geri ödeme veya onur ödülü almamıştır. Yazarlar bu çalışma ile ilişkili herhangi bir satıcı veya ilaç şirketi ile bağlantılı değildir.
Acknowledgments
Bu araştırma, Ulusal Tamamlayıcı ve Bütünleştirici Sağlık Merkezi [R01AT009716, 2017] (M.M.I.), Kapsamlı Kronik Ağrı ve Bağımlılık Merkezi-Arizona Üniversitesi (M.M.I.) ve Arizona Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Tucson'daki Tıp Bilimcisi Eğitim Programı (MSTP) tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 5/0, FS-2, 30" Undyed PGA Braided Polyglycolic Acid Synthetic Absorbable Suture | CP Medical | 421A | https://cpmedical.com/suturesearch/product/421a-visorb-50-fs-2-30/ |
| 6/0, P-1, 18" Blue Polypropylene Monofilament Non-Absorbable Suture | CP Medical | 8697P | https://cpmedical.com/suturesearch/product/8697p-polypro-60-p-1-18/ |
| 9/0 (0.3 metric) Nylon Black Monofilament Suture | Crestpoint Ophthalmics | MANI 1407 | https://crestpointophthalmics.com/mani-1407-suture-trape-spatula-nylon-black-mono-box-of-12.html |
| Allodynia Software | National Instruments, LabView 2015 | Quantification of mean withdrawal thresholds (Von Frey data) | |
| C57Bl6/J mice | The Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME | 000664 | https://www.jax.org/strain/000664 |
| Castroviejo needle holder | Fine Science Tools | 12565-14 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Wound-Closure/Needle-Holders/Castroviejo-Needle-Holder/12565-14 |
| Cold Hot Plate Test | Bioseb | BIO-CHP | https://www.bioseb.com/en/pain-thermal-allodynia-hyperalgesia/563-cold-hot-plate-test.html |
| Elevated metal mesh stand for Von Frey | Bioseb | BIO-STD2-EVF | https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1689-elevated-metal-mesh-stand-30-cm-height-to-fit-up-to-2-pvf-cages.html |
| Extra fine Graefe forceps | Fine Science Tools | 11152-10 | https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-curved-medium-point-general-purpose-forceps/16100110 |
| Fine Castroviejo needle holder | Simovision/Geuder | 17565 | https://simovision.com/assets/Uploads/Brochure-Geuder-Ophthalmic-Surgical-Instruments-EN2.pdf |
| Fine scissors (11.5 cm) | Fine Science Tools | 14558-11 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-11 |
| Fine scissors (9 cm) | Fine Science Tools | 14558-09 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-09 |
| Iris forceps | Fine Science Tools | 11064-07 | https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Fine-Forceps/Iris-Forceps/11064-07 |
| Micro Adson forceps | Fine Science Tools | 392487 | https://www.fishersci.com/shop/products/micro-adson-tissue-forceps-1x2-teeth-german-steel/13820072#?keyword=adson%20forceps |
| Modular holder cages for rats and mice | Bioseb | BIO-PVF | https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1206-modular-holder-cages-for-rats-and-mice.html |
| Moretti/Effetre #240 Light Cobalt Blue glass rods 4 mm | Ebay | N/A | https://www.ebay.com/itm/402389491328?hash=item5db0485e80:g:agYAAOS w9CtfnIVJ&amdata=enc %3AAQAHAAAAwCoqvgWRo NTe5Vq8PWOgfE4ygWeW4tL k81J1AFu%2Fkcbsk6pxYtJi6 digE5TL9SzlgMzYUMNDr%2B dku2%2B%2FEvB1qXqFmebE 020SGs9LPDXLL5w21un7jrM0 9xfWYvIzBYQYh6FRWyUJngC uuA9Bkjb9lxtZoYlg5y6PyFR2P 34xFk5xaNC5ib65M1%2Fr%2F 4w2Iw45QqsSyXH2cuUKRom0 AGBoBaIr%2BbJw1VnlMjGuc9dtx 4fbPbqoBNSWjj3RbZPOPTYS8Q %3D%3D%7Ctkp%3ABk9SR4q6- 6LfYA |
| Plantar Test for Thermal Stimulation - Hargreaves Apparatus | Ugo Basile | 37570 | https://ugobasile.com/products/categories/pain-and-inflammation/plantar-test-for-thermal-stimulation |
| Touch-Test Sensory Evaluators, Set of 20 Monofilaments | North Coast Medical | NC12775-99 | https://www.ncmedical.com/products/touch-test-sensory-evaluators_1278.html |
| Tying forceps | Duckworth & Kent | 2-504ER8 | https://duckworth-and-kent.com/product/tying-forceps-9/ |
References
- Hassett, A. L., Gevirtz, R. N. Nonpharmacologic treatment for fibromyalgia: patient education, cognitive-behavioral therapy, relaxation techniques, and complementary and alternative medicine. Rheumatic Disease Clinics of North America. 35 (2), 393-407 (2009).
- Hylands-White, N., Duarte, R. V., Raphael, J. H. An overview of treatment approaches for chronic pain management. Rheumatology International. 37 (1), 29-42 (2017).
- Campbell, J. N., Meyer, R. A.
- Colloca, L., et al.
- Colleoni, M., Sacerdote, P. Murine models of human neuropathic pain. Biochimica et Biophysica Acta. 1802 (10), 924-933 (2010).
- Challa, S. R. Surgical animal models of neuropathic pain: Pros and cons. International Journal of Neuroscience. 125 (3), 170-174 (2015).
- Bennett, G. J., Xie, Y. K. A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man. Pain. 33 (1), 87-107 (1988).
- Seltzer, Z., Dubner, R., Shir, Y. A novel behavioral model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury. Pain. 43 (2), 205-218 (1990).
- Hasnie, F. S., Wallace, V. C., Hefner, K., Holmes, A., Rice, A. S. Mechanical and cold hypersensitivity in nerve-injured C57BL/6J mice is not associated with fear-avoidance-and depression-related behaviour. British Journal of Anaesthia. 98 (6), 816-822 (2007).
- Ito, H., et al. Suvorexant and mirtazapine improve chronic pain-related changes in parameters of sleep and voluntary physical performance in mice with sciatic nerve ligation. PLoS One. 17 (2), 0264386 (2022).
- Martin, L., et al. Conotoxin contulakin-G engages a neurotensin receptor 2/R-type calcium channel (Cav2.3) pathway to mediate spinal antinociception. Pain. 163 (9), 1751-1762 (2021).
- Peiser-Oliver, J. M., et al. Glycinergic modulation of pain in behavioral animal models. Frontiers in Pharmacology. 13, 860903 (2022).
- Ramiro, I. B. L., et al. Somatostatin venom analogs evolved by fish-hunting cone snails: From prey capture behavior to identifying drug leads. Science Advances. 8 (12), (2022).
- Chung, J. M. Encyclopedia of Pain. Schmidt, R. F., Willis, W. D. , Springer. Berlin Heidelberg. 1299-1300 (2007).
- Zahn, P. K., Brennan, T. J. Primary and secondary hyperalgesia in a rat model for human postoperative pain. Anesthesiology. 90 (3), 863-872 (1999).
- Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain. 32 (1), 77-88 (1988).
- Yeomans, D. C., Proudfit, H. K. Characterization of the foot withdrawal response to noxious radiant heat in the rat. Pain. 59 (1), 85-94 (1994).
- Cheah, M., Fawcett, J. W., Andrews, M. R. Assessment of thermal pain sensation in rats and mice using the Hargreaves test. Bio-Protocol. 7 (16), 2506 (2017).
- Hook, M. A., et al. The impact of morphine after a spinal cord injury. Behavioural brain research. 179 (2), 281-293 (2007).
- Loram, L. C., et al. Prior exposure to repeated morphine potentiates mechanical allodynia induced by peripheral inflammation and neuropathy. Brain, behavior, and immunity. 26 (8), 1256-1264 (2007).
- Green-Fulgham, S. M., et al. Oxycodone, fentanyl, and morphine amplify established neuropathic pain in male rats. Pain. 160 (11), 2634-2640 (2019).
- Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. Methods used to evaluate pain behaviors in rodents. Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 284 (2017).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).
- Jensen, T. S., Finnerup, N. B. Allodynia and hyperalgesia in neuropathic pain: clinical manifestations and mechanisms. Lancet Neurology. 13 (9), 924-935 (2014).
- Malmberg, A. B., Gilbert, H., McCabe, R. T., Basbaum, A. I. Powerful antinociceptive effects of the cone snail venom-derived subtype-selective NMDA receptor antagonists conantokins G and T. Pain. 101 (1-2), 109-116 (2003).
- Nakamura, Y., et al. Neuropathic pain in rats with a partial sciatic nerve ligation is alleviated by intravenous injection of monoclonal antibody to high mobility group box-1. PLoS One. 8 (8), 73640 (2013).
- Sherman, K., et al. Heterogeneity in patterns of pain development after nerve injury in rats and the influence of sex. Neurobiology of Pain. 10, 100069 (2021).
- Ba, X., et al. Cinobufacini protects against paclitaxel-induced peripheral neuropathic pain and suppresses TRPV1 up-regulation and spinal astrocyte activation in rats. Biomedicine Pharmacotherapy. 108, 76-84 (2018).
- Hao, Y., et al. Huachansu suppresses TRPV1 up-regulation and spinal astrocyte activation to prevent oxaliplatin-induced peripheral neuropathic pain in rats. Gene. 680, 43-50 (2019).
- Guo, J., et al. Effects of resveratrol in the signaling of neuropathic pain involving P2X3 in the dorsal root ganglion of rats. Acta Neurologica Belgica. 121 (2), 365-372 (2021).
- Ni, W., Zheng, X., Hu, L., Kong, C., Xu, Q. Preventing oxaliplatin-induced neuropathic pain: Using berberine to inhibit the activation of NF-kappaB and release of pro-inflammatory cytokines in dorsal root ganglions in rats. Experimental and Therapeutic Medicine. 21 (2), 135 (2021).
- Wang, J., et al. Selective activation of metabotropic glutamate receptor 7 blocks paclitaxel-induced acute neuropathic pain and suppresses spinal glial reactivity in rats. Psychopharmacology. 238 (1), 107-119 (2021).
- Sun, C., Wu, G., Zhang, Z., Cao, R., Cui, S. Protein tyrosine phosphatase receptor type D regulates neuropathic pain after nerve injury via the STING-IFN-I pathway. Frontiers in Molecular Neuroscience. 15, 859166 (2022).
- Coyle, D. E., Sehlhorst, C. S., Mascari, C. Female rats are more susceptible to the development of neuropathic pain using the partial sciatic nerve ligation (PSNL) model. Neuroscience Letters. 186 (2-3), 135-138 (1995).
