Summary
Здесь мы представляем метод оценки качества, основанный на методе множественного рассеяния света для оценки качества Indigo Naturalis.
Abstract
Контроль качества китайской фитотерапии является важнейшим компонентом исследований и разработок в области китайской фитотерапии. Столкнувшись с проблемами модернизации и интернационализации китайской фитотерапии, необходимо срочно установить тщательные и эффективные процедуры для идентификации качества китайской фитотерапии, и существует острая потребность в новых аналитических и испытательных методах, которые являются эффективными, точными и экологически чистыми.
Многократное рассеяние света является передовым аналитическим методом, который позволяет точно и быстро оценить качество китайской фитотерапии, не изменяя природу или состояние образца и не используя органические реагенты. Indigo Naturalis считается хорошим средством при детской гипертермии, псориазе, лейкемии и язвенном колите. В этом исследовании процесс добавления порошка Indigo Naturalis в воду был точно зафиксирован с помощью прибора многократного рассеяния света.
Качественные и количественные измерения прибора могут быть использованы для точного определения общей траектории и поведения порошка Indigo Naturalis в воде, а также для создания метода быстрой оценки качества Indigo Naturalis с использованием спектрограмм пропускания и обратного рассеяния образца в качестве качественных индикаторов и индекса стабильности в качестве количественного показателя. Аналитический метод, основанный на многократном рассеянии света, обеспечивает быстрый, точный, экологичный и экологически чистый метод оценки качества Indigo Naturalis и поддерживает разработку и трансформацию высококачественного Indigo Naturalis.
Introduction
В традиционной китайской медицине во время курса лечения заболеваний клиническая эффективность медикаментов и безопасность курса лечения напрямую зависят от качества китайской фитотерапии. Используя передовые технологии идентификации, можно оценить эффективность китайской фитотерапии и гарантировать безопасность пользователя. Метод тестирования воды в китайской травяной медицине заключается в погружении трав в воду или растворитель, а затем в быстром и точном определении подлинности лекарства путем наблюдения за изменениями цвета, размера и формы1.
Изначально это был хороший выбор для идентификации китайской медицины. Однако недостатком традиционного метода тестирования воды является то, что точность и чувствительность различения подлинности китайской медицины невелики из-за субъективности наблюдения невооруженным глазом2. Одним из ключевых лекарственных материалов, используемых в методе анализа воды, является Indigo Naturalis, который считается эффективным средством от детской гипертермии, псориаза, лейкемии и язвенного колита3. Настоящий Indigo Naturalis плавает на поверхности воды, и вода не становится темно-синей после встряхивания. Однако в поддельном Indigo Naturalis есть частицы, которые тонут, и вода станет темно-синей после встряхивания4. Его принцип обусловлен гидрофобными и легко плавающими индиго, индирубином и другими органическими компонентами высококачественного Indigo Naturalis. Напротив, из-за низкого содержания органики, большого количества извести и тяжелой текстуры некоторые частицы, легированные поддельным Indigo Naturalis, быстро осядут5. Тем не менее, этот метод является лишь простой качественной идентификацией, и он ограничивает быструю идентификацию подлинности китайской фитотерапии и не позволяет выявить изменения Indigo Naturalis в воде.
Технология множественного рассеяния света — это технология, которая может измерять многоугольное сканирование светового сигнала на основе лазера, проходящего через образец. Падающий свет будет рассеиваться при проникновении в образец или при столкновении с частицами. Если рассеянный свет проникает через образец, образуется пропускающий световой сигнал; Если концентрация образца высокая, свет будет отражаться частицами, образуя световой сигнал обратного рассеяния. Изменения интенсивности света отражают изменения концентрации и размера частиц в жидком приготовлении6. Приборы многократного рассеяния света могут быстро и точно анализировать такие явления, как эмульгирование, флокуляция, осаждение и разрыв суспензии, эмульсии и пенообразной жидкости с помощью технологии многократного рассеяния света, а также количественно анализировать такие характеристики, как скорость возникновения вышеуказанных явлений.
Технология многократного рассеяния света продемонстрировала значительные преимущества при мониторинге стабильности частиц7, осветлении красного вина8 и контроле качества ферментации молока9. Используя эту технологию, традиционный метод тестирования воды Indigo Naturalis может быть интуитивно понятным, количественным и научным. Поэтому, основываясь на принципе технологии многократного рассеяния света, в данном исследовании был разработан метод экспресс-оценки качества Indigo Naturalis, в качестве показателя контроля качества был принят индекс стабильности Turbiscan (TSI) образца (рис. 1).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Подготовка испытуемого образца
- Приготовьте четыре разные партии травяного порошка Indigo Naturalis для теста. Пропустите каждую пробу через седьмое и девятое сито по очереди и соберите пробу между седьмым и девятым ситами5.
ПРИМЕЧАНИЕ: Средний размер апертуры седьмого сита составляет 125 мкм ± 5,8 мкм. Средний размер апертуры девятого сита составляет 75 мкм ± 4,1 мкм. - Аккуратно взвесьте 0,2 г образца (порошок Indigo Naturalis) на бумаге для взвешивания и отложите ее в сторону.
2. Добавление образца
- Соорудите железную опорную подставку и наденьте на нее железное кольцо с воронкой диаметром 5 см.
- С помощью пипетки добавьте 20 мл чистой воды в стеклянную бутылку с образцом (диаметр дна 2,6 см, высота 6 см). Поместите стеклянную бутылку с образцом непосредственно под воронку так, чтобы нижний край воронки находился на одном уровне с горлышком бутылки.
ПРИМЕЧАНИЕ: Очистите внешнюю поверхность стеклянного флакона с образцом чистым неабразивным бумажным полотенцем и осмотрите поверхность стекла на наличие видимых следов. Если есть, замените стеклянную бутылку. Будьте осторожны, чтобы не пролить жидкость при добавлении жидкости. - Освободите образец на высоте 80 см от нижнего края воронки, чтобы он мог свободно скользить по воронке во флакон с образцом.
3. Работа прибора
- Включите прибор Turbiscan Lab и прогрейте его в течение 30 минут.
- Создайте файл. Нажмите кнопку «Создать файл» в верхнем меню (или функцию «Создать файл» в меню «Файл»), чтобы создать новый пустой файл измерения. Определите его имя и место сохранения (по умолчанию папка данных находится по адресу: "C:/users/admin/Formulaction/FAnalyser/Data").
- Нажмите кнопку «Показать лабораторную температуру Turbiscan » в верхнем меню, чтобы установить целевую температуру прибора на 25 °C.
ПРИМЕЧАНИЕ: Температура прибора зависит от температуры в помещении, поэтому будьте осторожны при регулировке температуры окружающей среды. - Нажмите Program Scan (Сканирование программ) в верхнем меню, чтобы войти в программу анализа настройки. Добавьте программу в список и на панели задач добавьте 30 с в качестве цикла и 21 сканирование в последовательность анализа. Выберите эту программу анализа для всех последующих измерений.
- Переместите подготовленный флакон с образцом в измерительную систему. После настройки программы нажмите кнопку Старт , чтобы начать измерение.
ПРИМЕЧАНИЕ: Будьте осторожны, не встряхивайте стеклянную бутылку при движении и двигайте ее лишь слегка. - После сбора данных нажмите на список рассчитанных параметров, чтобы автоматически рассчитать TSI.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Рисунки 2A-D соответствуют S1, S2, S3 и S4 Indigo Naturalis, соответственно. A - это высококачественный Indigo Naturalis, демонстрирующий одинаковое светопропускание на любой высоте в течение 0-10 минут, что очень стабильно. B - это обычный Indigo Naturalis, и его светопропускание немного колеблется с изменением времени и в целом стабильно. C и D являются поддельными и некачественными продуктами. На спектрограммах пропускания поддельного Indigo Naturalis могут быть два условия, а именно: пропускающий свет в С быстро уменьшался в первый момент измерения, а пропускающий свет на дне бутылки с образцом был значительно ниже, чем в верхней, что указывает на то, что осаждение произошло в бутылке с образцом в первый раз. И осаждение было очень быстрым. Тем не менее, пропускающий свет в D стабилен в нулевой момент времени, а затем медленно уменьшается с течением времени. По сравнению с С, это указывает на то, что в бутылке с образцом происходит медленное осаждение.
Рисунки 3A-D соответствуют S1, S2, S3 и S4 Indigo Naturalis, соответственно. Из спектральных данных обратного рассеяния света можно сделать приблизительный вывод, что данные выборки согласуются с пропускающим светом. Отсутствие или небольшие флуктуации (рис. 3А и рис. 3Б соответственно) указывают на то, что образец стабилен. Рисунок 3C, D может быть мутным из-за осаждения образца, а флуктуация увеличивается, что приводит к нестабильности образца.
Сравнивая спектрограмму пропускания (рис. 2) и спектрограммы обратного рассеяния (рис. 3) четырех Indigo Naturalis с начальным и конечным снимками видеозаписей (рис. 4) и дополнительных видеозаписей S1, S2, S3 и S4, снятых прибором многократного рассеяния света, можно быстро и приблизительно определить подлинность Indigo Naturalis.
С увеличением времени измерения спектрограммы пропускания и спектрограммы обратного рассеяния высококачественного Indigo Naturalis должны колебаться незначительно или не колебаться вовсе, а спектрограммы пропускания и спектрограммы обратного рассеяния псевдо или низшего Indigo Naturalis могут постепенно или резко уменьшаться. Дополнительное видео S1, Дополнительное видео S2, Дополнительное видео S3 и Дополнительное видео S4 также четко отразили этот результат. Значения TSI отражают накопление изменений интенсивности пропускающего света или света обратного рассеяния по сравнению с предыдущим измерением в течение времени измерения, а также комплексное изменение объемной концентрации и размера частиц образца в течение всего периода сканирования. Качество четырех видов Indigo Naturalis можно точно различить, сравнив их TSI через 10 мин (рис. 5 и табл. 1). Чем выше значение TSI, тем более нестабильной будет система, и тем больший диапазон изменения образца будет равен10. Если в течение периода сканирования значение TSI составляет <10, образец будет считаться стабильным. Таким образом, в действующем протоколе показан метод быстрой идентификации Indigo Naturalis хорошего качества на основе TSI в приборе многократного рассеяния света.
Рисунок 1: Принцип оценки качества Indigo Naturalis по многократному рассеянию света. Индиго и индирубин являются основными причинами сильной гидрофобности Indigo Naturalis. Содержание индиго и индирубина определяет скорость осаждения частиц. Обладая этой характеристикой, прибор многократного рассеяния света может различать различные качества Indigo Naturalis. Прибор для многократного рассеяния света имеет технологию многократного рассеяния света, а его измерительный зонд состоит из импульсного источника света ближнего инфракрасного диапазона (λ = 880 нм) и двух синхронных детекторов. Одним из них является детектор пропускающего света, который используется для приема света, проходящего через бутылку с образцом (0° с падающим светом), и для определения прозрачного образца. Другой — детектор обратного рассеяния света, который используется для получения обратного рассеяния света образца (под углом 45° от падающего света) и определения образца с высокой концентрацией. Измерительный зонд сканирует всю ячейку образца снизу вверх каждые 40 мкм и собирает данные о пропускающем свете (T) и обратном рассеянии (BS). Установив время измерения и время сканирования, образец будет сканироваться повторно, а сигнал и сбор данных будут обрабатываться преобразователем тока и напряжения для получения атласа, представляющего характеристики стабильности образца. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 2: Спектрограммы пропускания четырех Indigo Naturalis в приборе многократного рассеяния света. A-D соответствуют S1, S2, S3 и S4 Indigo Naturalis соответственно. (A) Высококачественный, стабильный Indigo Naturalis, демонстрирующий одинаковый коэффициент светопропускания на любой высоте в течение 0-10 минут. (B) Обыкновенный Indigo Naturalis и его коэффициент светопропускания незначительно колеблется с изменением времени и, как правило, стабилен. (С, Г) Поддельная и некачественная продукция. (C) Просвечивающий индикатор на дне бутылки с пробой был значительно ниже, чем в верхней, что указывает на то, что осаждение происходило в бутылке с образцом на ранней стадии, и осаждение было очень быстрым. (D) Тем не менее, свет пропускания стабилен в нулевой момент времени, а затем медленно уменьшается со временем. По сравнению с С, это указывает на то, что в бутылке с образцом происходит медленное осаждение. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 3: Спектрограммы обратного рассеяния четырех Indigo Naturalis в приборе многократного рассеяния света. A-D соответствуют S1, S2, S3 и S4 Indigo Naturalis соответственно. Из спектральных данных обратного рассеяния света можно сделать приблизительный вывод, что данные выборки согласуются с пропускающим светом. (A) Отсутствие флуктуаций, указывающих на то, что образец очень стабилен. (B) Флуктуация небольшая, что указывает на относительную стабильность выборки. (С, Г) Помутнение происходит из-за осаждения пробы, а колебания увеличиваются, что приводит к нестабильности пробы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 4: Начальные и конечные снимки видеозаписей процесса осаждения четырех Indigo Naturalis в приборе многократного рассеяния света. A-D соответствуют S1, S2, S3 и S4 Indigo Naturalis соответственно. В результатах, сравнивая изображения сканирования 0 мин и 10 мин, можно увидеть, что A (Supplemental Video S1) и B (Supplemental Video S2) очень четкие во всем процессе. C (Supplemental Video S3) сначала частично мутный, а затем, наконец, полностью мутный. D (Supplemental Video S4) постепенно переходит от осветления к мутности. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 5: TSI четырех Indigo Naturalis от 0 мин до 10 мин. На графике показана кривая зависимости TSI от времени сканирования. В соответствии с вариацией кривой TSI, S4 имеет наибольший наклон, и значение TSI изменяется особенно значительно. Во-вторых, наклон S3 также относительно велик, и значение TSI медленно растет. Однако наклоны S1 и S2 близки к нулю, а значения TSI изменяются меньше. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
| Нет. | Контент Indigo | Содержание индирубина | TSI за 10 минут |
| С1 | 9,00% ± 0,38% | 0,60% ± 0,00% | 0,61 ± 0,06 |
| С2 | 2,07% ± 0,01% | 0,20% ± 0,00% | 2,74 ± 0,14 |
| С3 | 1,40% ± 0,02% | 0,00% ± 0,00% | 28.46 ± 3.51 |
| С4 | 0,00% ± 0,00% | 0,00% ± 0,00% | 68,75 ± 1,28 |
Таблица 1: TSI четырех Indigo Naturalis через 10 мин (n=3). Исходя из сильной гидрофобности Indigo Naturalis, можно сделать вывод, что содержание индиго и индирубина в Indigo Naturalis определяет его качество. При высоком содержании индиго и индирубина образец почти полностью плавает на поверхности воды, что приводит к малым значениям TSI. Через 10 минут последовательность TSI каждой партии выглядит следующим образом: S4 > S3 > S2 > S1. Для S1 и S2 значение TSI довольно мало, что свидетельствует об относительной стабильности образцов и хорошем качестве. Для S3 и S4 значение TSI чрезвычайно велико, что также отражает нестабильность образца и низкое качество.
Дополнительный видеоролик S1: Анимационное видео процесса осаждения высококачественного Indigo Naturalis в приборе многократного рассеяния света. Во всем анимационном ролике видно, что S1 практически не изменился, что указывает на его относительную стабильность. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.
Дополнительный видеоролик S2: Анимационное видео процесса осаждения обыкновенного Indigo Naturalis в приборе многократного рассеяния света. Во всем анимационном ролике видно, что S2 практически не изменился, что говорит о том, что он относительно стабилен. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.
Дополнительное видео S3: Анимационное видео процесса осаждения поддельного Indigo Naturalis в приборе многократного рассеяния света. Во всем анимационном ролике видно, что S3 мутнеет на третьей минуте сканирования, что указывает на нестабильность. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.
Дополнительное видео S4: Анимационное видео процесса осаждения поддельного Indigo Naturalis в приборе многократного рассеяния света. Во всем анимационном ролике видно, что S4 мутнеет на третьей минуте сканирования, что указывает на нестабильность. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы скачать этот файл.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Согласно традиционной китайской медицине, Indigo Naturalis обладает способностью очищать тепло и выводить токсины, охлаждать кровь, устранять пятна, очищать огонь и останавливать конвульсии. Основываясь на рандомизированных двойных слепых контролируемых клинических исследованиях11,12,13, Indigo Naturalis эффективен при лечении псориаза, язвенного колита и острого промиелоцитарного лейкоза в дополнение к традиционному лечению кашля и мокроты, геморрагических симптомов, язв и отеков, жара печени и эпилепсии. Из-за разнообразия Indigo Naturalis разница в качестве велика, а процесс определения содержимого сложен. С одной стороны, источниками Indigo Naturalis являются Strobilanthes cusia (Nees) Kuntze, Persicaria tinctoria (Aiton) Spach и Isatis tinctoria L., географическая среда и различные сроки сбора урожая приводят к присущим им качественным различиям14. С другой стороны, процесс приготовления Indigo Naturalis требует таких этапов, как ферментация методом замачивания, измельчение индиго известью, рафинирование водяной мухи и т. Д. Тем не менее, этот процесс, вероятно, приведет к получению различных качеств Indigo Naturalis, и содержание Indigo Naturalis варьируется от партии к партии. В настоящее время несколько исследований показали, что квалифицирующий показатель содержания компонентов индекса Indigo Naturalis низкий. Поддельные и некачественные продукты вызывают серьезные проблемы с качеством, что чрезвычайно затрудняет клиническое использование Indigo Naturalis15,16,17. Поэтому для Indigo Naturalis срочно и необходимо разработать стандартизированный метод контроля качества.
Ключевым этапом описанного процесса является то, что стеклянную бутылку, содержащую образец, следует перемещать внутрь резервуара для образцов как можно быстрее, избегая при этом встряхивания бутылки. В противном случае непоследовательная обработка может привести к неверным результатам. Во-вторых, температура окружающей среды будет влиять на установленную температуру прибора. Когда температура в помещении превышает 30 °C, а температура прибора ниже комнатной, температура прибора повышается. Стоит отметить, что температура в помещении должна быть ниже температуры прибора.
Несмотря на то, что многократное рассеяние света имеет уникальные преимущества по сравнению с традиционными методами, оно также имеет свои ограничения. Во-первых, мультиплексное рассеяние света не может дать точного содержимого образца, а может только определить подлинность и приблизительно заданный диапазон. Во-вторых, без дальнейшей идентификации китайской фитотерапии, в настоящее время она имеет отношение только к экспресс-оценке качества Indigo Naturalis. В-третьих, критерии современных исследований по оценке качества далеки от зависимости от методологий множественного рассеяния света и приборов многократного рассеяния света.
По сравнению с существующим методом испытаний на воде, значение метода многократного рассеяния света заключается в следующих моментах. Во-первых, он обладает высокой чувствительностью и надежностью. Чувствительность и разрешение намного выше, чем при наблюдении невооруженным глазом. Устройство многократного рассеяния света может фиксировать, как изменяется решение с течением времени, и создавать анимированное видео всего процесса. Во-вторых, его можно проанализировать качественно и количественно. Благодаря бесконтактному измерению прибор может автоматически определять стабильность образца, используя его оптические характеристики (пропускающий свет, свет обратного рассеяния, TSI и размер частиц).
Мы верим, что в будущем этот метод в конечном итоге будет полезен в области контроля качества традиционной китайской медицины, в частности, в оценке подлинности. Это исследование подтвердило валидность и точность подхода множественного рассеяния света при быстрой оценке качества китайской медицины на примере Indigo Naturalis. Следовательно, по мере того, как оборудование и технологии применения постоянно совершенствуются, технологии множественного рассеяния света будут комбинироваться с другими методами обнаружения, чтобы дополнять друг друга, что окажет большее влияние на контроль качества китайских растительных лекарств в будущем.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.
Acknowledgments
В работе выражается признательность за поддержку со стороны Национального фонда естественных наук Китая (No 82173976), Национальной программы ключевых исследований и разработок (No 2018YFC1707205) и Государственной ключевой лаборатории инновационных лекарств и высокоэнергосберегающего фармацевтического оборудования Цзянсийского университета традиционной китайской медицины (No 2018YFC1707205). GZSYS202003).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Analytical balance (1/10,000) | Sartorious, Germany | BSA224S | www.sartorius.com.cn |
| Funnel | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | Diameter 5 cm | www.cdkelongchem.com |
| Indigo Naturalis S1 | Xianyou, Fujian | 20210501 | |
| Indigo Naturalis S2 | Yaan, Sichuan | 20201102 | |
| Indigo Naturalis S3 | Xianyou, Fujian | 20161012 | |
| Indigo Naturalis S4 | Xianyou, Fujian | 20180305 | |
| Iron ring | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | / | www.cdkelongchem.com |
| Iron stand | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | / | www.cdkelongchem.com |
| Mili-Q ultra-pure water meter | Milipore, USA | Mili-Q | www.merckmillipore.com |
| Ninth sieve | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | Average aperture size 75 µm | www.cdkelongchem.com |
| Sample bottle | French Formulaction Company | Bottom diameter 2.6 cm, height 6 cm | www.formulaction.com |
| Seventh sieve | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | Average aperture size 125 µm | www.cdkelongchem.com |
| Turbisoft Lab multiple light scattering instrument | French Formulaction Company | Turbisoft Lab 2.3.1.125 Fanalyser 1.3.5 | www.formulaction.com |
| Weighing paper | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | / | www.cdkelongchem.com |
References
- Li, G. M. The application of water test in the identification of traditional Chinese medicine. Chinese Medicine Modern Distance Education of China. 19 (23), 153-155 (2021).
- Ye, B. Analysis of application effect of water test method in identification of traditional Chinese medicine. Heilongjiang Medicine Journal. 33 (02), 283-285 (2020).
- Yang, Q. Y., et al. From natural dye to herbal medicine: a systematic review of chemical constituents, pharmacological effects and clinical applications of indigo naturalis. Chinese Medicine. 15 (1), 127 (2020).
- Chen, C. The application value of water test method in the identification of Chinese medicine. Journal of Traditional Chinese Medicine Management. 30 (10), 133-134 (2022).
- Liu, X. M., et al. Establishment and application of a rapid quality inspection method for Indigo Naturalis based on quantitative portrayal of water testing process. Acta Pharmacologica Sinica. 57 (11), 3411-3418 (2022).
- Mengual, O., Meunier, G., Cayre, I., Puech, K., Snabre, P. Characterisation of instability of concentrated dispersions by a new optical analyser: the TURBISCAN MA 1000. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. 152 (1), 111-123 (1999).
- Olatunji, O. N., Du, J., Hintz, W., Tomas, J. Application of particle sedimentation analysis in sterically-stabilized TiO2 particles stability assessment. Advanced Powder Technology. 27 (4), 1325-1336 (2016).
- Ferrentino, G., et al. Fining of red wine monitored by multiple light scattering. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (27), 5523-5530 (2017).
- Ramezani, M., Ferrentino, G., Morozova, K., Scampicchio, M. Multiple light scattering measurements for online monitoring of milk fermentation. Foods. 10 (7), 1582 (2021).
- Yang, H. B., et al. A new approach to evaluate the particle growth and sedimentation of dispersed polymer microsphere profile control system based on multiple light scattering. Powder Technology. 315, 477-485 (2017).
- Zhang, X. X., et al. Treatment of non-high-risk acute promyelocytic leukemia with realgar-indigo naturalis formula (RIF) and all-trans retinoid acid (ATRA): study protocol for a randomized controlled trial. Trials. 21 (1), 7 (2020).
- Sugimoto, S., et al. Clinical efficacy and safety of oral Qing-Dai in patients with ulcerative colitis: a single-center open-label prospective study. Digestion. 93 (3), 193-201 (2016).
- Lin, Y. K., et al. Clinical assessment of patients with recalcitrant psoriasis in a randomized, observer-blind, vehicle-controlled trial using indigo naturalis. Archives of Dermatology. 144 (11), 1457-1464 (2008).
- Sun, Q., Leng, J., Tang, L., Wang, L., Fu, C. A Comprehensive review of the chemistry, pharmacokinetics, pharmacology, clinical applications, adverse events, and quality control of indigo naturalis. Frontiers in Pharmacology. 12, 664022 (2021).
- Yang, Y. J., et al. Investigation and analysis of the commodity quality of Indigo Naturalis herbs in Beijing area. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 23 (07), 1787-1788 (2012).
- Yao, Z. A., et al. Comparative study of thirty-eight batches of indigo naturalis. Journal of Chengdu University of TCM. 34 (02), 86-88 (2011).
- Bai, Z., et al. Determination of indigo and indirubin in indigo naturalis by HPLC. Modern Chinese Medicine. 12 (08), 27-29 (2010).
