Summary
Här presenterar vi en kvalitetsutvärderingsmetod baserad på en multipel ljusspridningsteknik för att utvärdera kvaliteten på Indigo Naturalis.
Abstract
Kvalitetskontroll av kinesisk örtmedicin är en avgörande komponent i kinesisk örtmedicinforskning och utveckling. Inför utmaningarna med modernisering och internationalisering av kinesisk örtmedicin är det angeläget att etablera grundliga och effektiva förfaranden för kvalitetsidentifiering av kinesisk örtmedicin, och det finns ett akut behov av nya analys- och testtekniker som är effektiva, exakta och miljövänliga.
Multipel ljusspridning är en banbrytande och analytisk metod som exakt och snabbt kan bedöma kvaliteten på kinesisk örtmedicin utan att ändra provets natur eller tillstånd eller använda organiska reagenser. Indigo Naturalis anses vara ett bra botemedel mot pediatrisk hypertermi, psoriasis, leukemi och ulcerös kolit. I denna studie registrerades processen för tillsats av Indigo Naturalis-pulver i vatten exakt med hjälp av ett multipelt ljusspridningsinstrument.
De kvalitativa och kvantitativa mätningarna av instrumentet kan användas för att noggrant fånga den övergripande banan och sjunkbeteendet hos Indigo Naturalis-pulver i vatten och för att etablera en snabb utvärderingsmetod för kvaliteten på Indigo Naturalis med transmissions- och backspridningsspektrogram för provet som kvalitativa indikatorer och stabilitetsindex som en kvantitativ indikator. Analystekniken baserad på multipel ljusspridning ger en snabb, exakt, grön och miljövänlig metod för kvalitetsutvärdering av Indigo Naturalis och stöder utvecklingen och omvandlingen av högkvalitativ Indigo Naturalis.
Introduction
I traditionell kinesisk medicin, under sjukdomsbehandlingen, påverkas den kliniska effektiviteten av mediciner och säkerheten i behandlingsförloppet direkt av kvaliteten på kinesisk örtmedicin. Genom att använda avancerad identifieringsteknik kan man bedöma effekten av kinesisk örtmedicin och garantera användarsäkerheten. Den kinesiska örtmedicinens vattentestmetod hänvisar till att sänka ner örterna i vatten eller lösningsmedel och sedan snabbt och exakt bestämma läkemedlets äkthet genom att observera förändringarna i färg, storlek och form1.
Det var ursprungligen ett bra val för identifiering av kinesisk medicin. Nackdelen med den traditionella vattentestmetoden är dock att noggrannheten och känsligheten för att särskilja äktheten hos kinesisk medicin är låg på grund av subjektiviteten i observationen med blotta ögat2. Ett av de viktigaste medicinska materialen som används i vattentestmetoden är Indigo Naturalis, som anses vara ett effektivt botemedel mot pediatrisk hypertermi, psoriasis, leukemi och ulcerös kolit3. Den äkta Indigo Naturalis flyter på vattenytan och vattnet blir inte mörkblått efter skakning. Den falska Indigo Naturalis har dock partiklar som sjunker, och vattnet blir mörkblått efter att ha skakat4. Dess princip beror på hydrofob och lättflytande indigo, indirubin och andra organiska komponenter i högkvalitativ Indigo Naturalis. Tvärtom, på grund av lågt organiskt material, en stor mängd kalk och tung konsistens, kommer vissa partiklar dopade med falsk Indigo Naturalis att sjunka snabbt5. Denna metod är dock bara en enkel kvalitativ identifiering, och den begränsar den snabba identifieringen av äktheten hos kinesisk örtmedicin och misslyckas med att avslöja förändringarna av Indigo Naturalis i vatten.
Multipel ljusspridningsteknik är en teknik som kan mäta ljussignalskanning med flera vinklar baserat på en laser som passerar genom provet. Det infallande ljuset kommer att spridas när det tränger in i provet eller stöter på partiklar. Om det spridda ljuset tränger igenom provet bildas en transmissionsljussignal; Om provkoncentrationen är hög kommer ljuset att reflekteras av partiklarna och bilda en återspridningsljussignal. Förändringarna i ljusintensitet återspeglar förändringarna i partikelkoncentration och partikelstorlek i vätskeberedning6. De multipla ljusspridningsinstrumenten kan snabbt och exakt analysera fenomen som emulgering, flockning, utfällning och brott av suspension, emulsion och skumvätska med flera ljusspridningsteknik, samt kvantitativt analysera egenskaper såsom förekomsten av ovanstående fenomen.
Teknik med flera ljusspridningsmetoder har visat sig ha betydande fördelar vid övervakning av partikelstabilitet7, klarning av rött vin 8 och kvalitetskontrollav mjölkjäsning9. Med hjälp av denna teknik kan den traditionella vattentestmetoden för Indigo Naturalis vara intuitiv, kvantitativ och vetenskaplig. Därför, baserat på principen om multipel ljusspridningsteknik, etablerade denna studie en snabb utvärderingsmetod för kvaliteten på Indigo Naturalis, med Turbiscans stabilitetsindex (TSI) för provet som index för kvalitetskontroll (figur 1).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Beredning av provet
- Ställ in fyra olika satser av Indigo Naturalis örtpulver för testet. Låt varje prov passera genom den sjunde och nionde sikten i tur och ordning och samla upp provet mellan den sjunde och nionde sikten5.
OBS: Den genomsnittliga öppningsstorleken för den sjunde sikten är 125 μm ± 5.8 μm. Den genomsnittliga öppningsstorleken för den nionde sikten är 75 μm ± 4,1 μm. - Väg upp 0,2 g av provet (Indigo Naturalis-pulver) noggrant på ett vägningspapper och lägg det åt sidan.
2. Tillägg av prov
- Bygg ett stödstativ av järn och sätt en järnring med en tratt med en tratt med en diameter på 5 cm på den.
- Använd en pipett för att tillsätta 20 ml rent vatten till provglasflaskan (bottendiameter 2,6 cm, höjd 6 cm). Placera provglasflaskan direkt under tratten så att trattens nedre kant är i jämnhöjd med flaskans mynning.
OBS: Rengör utsidan av provflaskan med glas med en ren, icke-slipande pappershandduk och inspektera glasytan för synliga märken. Om det finns, byt glasflaska. Var försiktig så att du inte spiller när du tillsätter vätska. - Släpp provet på en höjd av 80 cm från trattens nedre kant så att det kan glida fritt längs tratten ner i provflaskan.
3. Instrumentets funktion
- Slå på Turbiscan Lab-instrumentet och värm upp det i 30 minuter.
- Skapa filen. Klicka på knappen Skapa fil i toppmenyn (eller funktionen Ny fil i Arkiv-menyn) för att skapa en ny tom mätfil. Ange dess namn och lagringsplats (som standard finns datamappen på: "C:/users/admin/Formulaction/FAnalyser/Data".
- Klicka på knappen Visa Turbiscan Lab-temperatur i toppmenyn för att ställa in instrumentets måltemperatur till 25 °C.
OBS: Instrumenttemperaturen påverkas av rumstemperaturen, så var noga med att justera omgivningstemperaturen. - Klicka på Programskanning i toppmenyn för att öppna installationsanalysprogrammet. Lägg till programmet i listan och lägg till 30 s som en cykel och 21 skanningar i analyssekvensen i aktivitetsfältet. Välj detta analysprogram för alla efterföljande mätningar.
- Flytta den förberedda provflaskan till mätsystemet. När du har ställt in programmet klickar du på Start för att starta mätningen.
OBS: Var försiktig så att du inte skakar glasflaskan när du flyttar och bara flytta den något. - Efter datainsamlingen klickar du på listan över beräknade parametrar för att automatiskt beräkna TSD.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 2A-D motsvarar S1, S2, S3 respektive S4 för Indigo Naturalis. A är av högkvalitativ Indigo Naturalis, som visar samma ljusgenomsläpplighet på vilken höjd som helst inom 0-10 min, vilket är mycket stabilt. B är den vanliga Indigo Naturalis, och dess ljustransmittans fluktuerar något med tidens förändring och är i allmänhet stabil. C och D är falska och sämre produkter. Det kan finnas två förhållanden i transmissionsspektrogrammen för falsk Indigo Naturalis, nämligen att transmissionsljuset i C minskade snabbt vid det första mätögonblicket och att transmissionsljuset i botten av provflaskan var betydligt lägre än det i toppen, vilket tyder på att avsättningen inträffade i provflaskan vid första tillfället. Och avsättningen gick mycket snabbt. Transmissionsljuset i D är dock stabilt vid noll och minskar sedan långsamt med tidens förlängning. Jämfört med C indikerar det att det sker en långsam sedimentering i provflaskan.
Figur 3A-D motsvarar S1, S2, S3 respektive S4 för Indigo Naturalis. Från spektraldata för bakåtspridningsljus kan man grovt dra slutsatsen att provdata överensstämmer med transmissionsljuset. Inga eller små fluktuationer (figur 3A respektive figur 3B) tyder på att provet är stabilt. Figur 3C, D kan vara grumlig på grund av provets sedimentering, och fluktuationerna ökar, vilket leder till provets instabilitet.
Genom att jämföra transmissionsspektrogrammet (figur 2) och backscattering-spektrogrammen (figur 3) för de fyra Indigo Naturalis-bilderna med start- och slutbilderna av videorna (figur 4) och Supplemental Video S1, Supplemental Video S2, Supplemental Video S3 och Supplemental Video S4 som fångats av multipelljusspridningsinstrumentet, kan äktheten hos Indigo Naturalis snabbt och grovt identifieras.
Med förlängningen av mättiden bör transmissionsspektrogrammen och återspridningsspektrogrammen för högkvalitativ Indigo Naturalis fluktuera lite eller inte alls, och transmissionsspektrogrammen och återspridningsspektrogrammen för pseudo eller inferior Indigo Naturalis kan gradvis eller kraftigt minska. Kompletterande video S1, kompletterande video S2, kompletterande video S3 och kompletterande video S4 återspeglade också tydligt detta resultat. TSD-värdena återspeglar ackumuleringen av intensitetsförändringarna hos transmissionsljus eller backspridningsljus jämfört med den tidigare mätningen under mättiden, och det är också den omfattande förändringen av provets volymkoncentration och partikelstorlek under hela skanningsperioden. Kvaliteten på de fyra typerna av Indigo Naturalis kan särskiljas noggrant genom att kontrastera deras TSD vid 10 minuter (figur 5 och tabell 1). Ju högre TSI-värde, desto mer instabilt blir systemet och desto större blir provets ändringsområde10. Om TSD-värdet är <10 under skanningsperioden kommer provet att anses vara stabilt. Därför visar det nuvarande protokollet en metod för snabb identifiering av Indigo Naturalis av god kvalitet baserad på TSI i ett multipelt ljusspridningsinstrument.
Figur 1: Princip för utvärdering av kvaliteten på Indigo Naturalis genom multipel ljusspridning. Indigo och indirubin är de främsta orsakerna till den starka hydrofobiciteten hos Indigo Naturalis. Innehållet av indigo och indirubin bestämmer partiklarnas sedimentationshastighet. Med denna egenskap kan ett multipelt ljusspridningsinstrument urskilja olika kvaliteter av Indigo Naturalis. Instrumentet för spridning av flera ljus har teknik för spridning av flera ljus, och dess mätprob består av en pulsad nära-infraröd ljuskälla (λ = 880 nm) och två synkrona detektorer. En av dem är en transmissionsljusdetektor, som används för att ta emot ljuset som passerar genom provflaskan (0° med det infallande ljuset) och för att bestämma det klara provet. Den andra är en detektor för återspridningsljus, som används för att ta emot provets återspridningsljus (45° från det infallande ljuset) och för att bestämma högkoncentrationsprovet. Mätproben skannar hela provcellen från botten till toppen, en gång var 40:e μm, och samlar in data från transmissionsljus (T) och backscattering light (BS). Genom att ställa in mättiderna och skanningstiden kommer provet att skannas upprepade gånger, och signal- och datainsamlingen kommer att bearbetas av strömspänningsomvandlaren för att erhålla en atlas som representerar provets stabilitetsegenskaper. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: Transmissionsspektrogram av fyra Indigo Naturalis i instrumentet för spridning av multipelt ljus. A-D motsvarar S1, S2, S3 respektive S4 för Indigo Naturalis. (A) Högkvalitativ, stabil Indigo Naturalis, som visar samma ljusgenomsläpplighet på vilken höjd som helst inom 0-10 min. (B) Den vanliga Indigo Naturalis och dess ljustransmittans fluktuerar något med tidens förändring och är i allmänhet stabil. (C, D) Falska och sämre produkter. (C) Transmissionslampan i botten av provflaskan var betydligt lägre än den i toppen, vilket tyder på att avsättningen skedde i provflaskan i ett tidigt skede och att avsättningen var mycket snabb. (D) Sändningslampan är dock stabil vid noll och minskar sedan långsamt med tiden. Jämfört med C indikerar det att det sker en långsam sedimentering i provflaskan. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 3: Backscattering-spektrogram för fyra Indigo Naturalis i instrumentet för spridning av multipelt ljus. A-D motsvarar S1, S2, S3 respektive S4 för Indigo Naturalis. Från spektraldata för bakåtspridningsljus kan man grovt dra slutsatsen att provdata överensstämmer med transmissionsljuset. (A) Inga fluktuationer, vilket indikerar att provet är mycket stabilt. (B) Fluktuationen är liten, vilket indikerar att provet är relativt stabilt. (C, D) Grumligheten beror på sedimenteringen av provet och fluktuationen ökar, vilket leder till provets instabilitet. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 4: Start- och slutbilder av videorna av sedimenteringsprocessen för fyra Indigo Naturalis i instrumentet för spridning av multipelt ljus. A-D motsvarar S1, S2, S3 respektive S4 för Indigo Naturalis. I resultaten, genom att jämföra skanningsbilderna på 0 min och 10 min, kan man se att A (Supplemental Video S1) och B (Supplemental Video S2) är mycket tydliga i hela processen. C (Supplemental Video S3) är delvis grumlig till en början och sedan helt grumlig till sist. D (Supplemental Video S4) ändras gradvis från klarning till grumlighet. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 5: TSD för fyra Indigo Naturalis från 0 min till 10 min. Grafen visar kurvan för TSD med skanningstid. Enligt variationen i TSD-kurvan har S4 den högsta lutningen och TSD-värdet förändras särskilt kraftigt. Därefter är lutningen på S3 också relativt stor, och TSI-värdet har ökat långsamt. Lutningarna för S1 och S2 är dock nära noll och TSD-värdena ändras mindre. Klicka här för att se en större version av denna figur.
| Nej. | Indigo-innehåll | Indirubin-innehåll | TSD på 10 min |
| S1 | 9,00 % ± 0,38 % | 0,60 % ± 0,00 % | 0,61 ± 0,06 |
| S2 | 2,07 % ± 0,01 % | 0,20 % ± 0,00 % | 2,74 ± 0,14 |
| S3 | 1,40% ± 0,02% | 0,00 % ± 0,00 % | 28,46 ± 3,51 |
| S4 | 0,00 % ± 0,00 % | 0,00 % ± 0,00 % | 68,75 ± 1,28 |
Tabell 1: TSD för fyra Indigo Naturalis vid 10 min (n=3). Enligt den starka hydrofobiciteten hos Indigo Naturalis kan man dra slutsatsen att indigo- och indirubininnehållet i Indigo Naturalis bestämmer dess kvalitet. När halten av indigo och indirubin är hög flyter provet nästan helt på vattenytan, vilket resulterar i små TSD-värden. Vid 10 minuter är TSD-sekvensen för varje sats S4 > S3 > S2 > S1. För S1 och S2 är TSI-värdet ganska litet, vilket återspeglar att proverna är relativt stabila och av god kvalitet. För S3 och S4 är TSI-värdet extremt högt, vilket också återspeglar provets instabilitet och kvaliteten är sämre.
Kompletterande video S1: Animationsvideo av sedimenteringsprocessen för en Indigo Naturalis av god kvalitet i instrumentet för spridning av flera ljus. I hela animationsvideon kan man se att S1 är nästan oförändrad, vilket indikerar att den är relativt stabil. Klicka här för att ladda ner den här filen.
Kompletterande video S2: Animationsvideo av sedimenteringsprocessen för vanlig Indigo Naturalis i instrumentet för spridning av multipelt ljus. I hela animationsvideon kan man se att S2 är nästan oförändrad, vilket indikerar att den är relativt stabil. Klicka här för att ladda ner den här filen.
Kompletterande video S3: Animationsvideo av sedimenteringsprocessen för falsk Indigo Naturalis i multipelljusspridningsinstrumentet. I hela animationsvideon kan man se att S3 är grumlig vid den tredje minuten av skanningen, vilket indikerar instabilitet. Klicka här för att ladda ner den här filen.
Kompletterande video S4: Animationsvideo av sedimenteringsprocessen för falsk Indigo Naturalis i instrumentet för spridning av flera ljus. I hela animationsvideon kan man se att S4 är grumlig vid den tredje minuten av skanningen, vilket indikerar instabilitet. Klicka här för att ladda ner den här filen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Enligt traditionell kinesisk medicin har Indigo Naturalis kraften att rensa värme och avgiftning, kyla blod, eliminera fläckar, rensa eld och stoppa kramper. Baserat på randomiserade dubbelblinda kontrollerade kliniska prövningar11,12,13 är Indigo Naturalis effektivt vid behandling av psoriasis, ulcerös kolit och akut promyelocytisk leukemi utöver dess traditionella behandling av hosta och slem, hemorragiska symtom, sår och svullnader, levervärme och epilepsi. På grund av variationen av Indigo Naturalis är kvalitetsskillnaden stor och innehållsdetekteringsprocessen är komplicerad. Å ena sidan inkluderar källorna till Indigo Naturalis Strobilanthes cusia (Nees) Kuntze, Persicaria tinctoria (Aiton) Spach och Isatis tinctoria L., den geografiska miljön och olika skördetider leder till de inneboende kvalitetsskillnaderna14. Å andra sidan kräver beredningsprocessen av Indigo Naturalis steg som blötläggningsjäsning, kalkslagning av indigo, raffinering av vattenflugor, etc. Denna process kommer dock sannolikt att ge olika kvaliteter av Indigo Naturalis, och innehållet av Indigo Naturalis varierar från parti till parti. För närvarande har flera studier visat att kvalificeringsgraden för indexkomponentinnehållet i Indigo Naturalis är låg. Falska och sämre produkter orsakar stora kvalitetsproblem, vilket gör det extremt svårt att använda Indigo Naturalis kliniskt15,16,17. Därför är det angeläget och oumbärligt för Indigo Naturalis att utveckla en standardiserad kvalitetskontrollmetod.
Ett viktigt steg i den beskrivna processen är att glasflaskan som innehåller provet ska flyttas in i provtanken så snabbt som möjligt samtidigt som flaskan inte skakas. Annars kan inkonsekvent hantering ge missvisande resultat. För det andra kommer omgivningstemperaturen att påverka instrumentets inställda temperatur. När rumstemperaturen överstiger 30 °C och instrumenttemperaturen är lägre än rumstemperaturen kommer instrumenttemperaturen att stiga. Det är värt att notera att rumstemperaturen bör kontrolleras under instrumenttemperaturen.
Även om multipel ljusspridning har unika fördelar jämfört med traditionella metoder, har den också sina begränsningar. För det första kan multiplex ljusspridning inte definitivt ge det exakta innehållet i ett prov, utan kan bara identifiera äktheten och ett grovt givet intervall. För det andra, utan ytterligare identifiering av kinesisk örtmedicin, är den för närvarande endast relevant för den snabba kvalitetsbedömningen av Indigo Naturalis. För det tredje är kriterierna för samtida kvalitetsutvärderingsforskning långt ifrån uppfyllda genom att man förlitar sig på flera ljusspridningsmetoder och flera ljusspridningsinstrument.
Jämfört med den befintliga vattentestmetoden ligger betydelsen av metoden med multipel ljusspridning i följande punkter. För det första har den hög känslighet och tillförlitlighet. Känsligheten och upplösningen är mycket högre än för observation med blotta ögat. Enheten för spridning av flera ljus kan fånga hur lösningen förändras över tid och skapa en animerad video av hela processen. För det andra kan den analyseras kvalitativt och kvantitativt. Genom beröringsfri mätning kan instrumentet automatiskt bestämma provets stabilitet med hjälp av dess optiska egenskaper (transmissionsljus, återspridningsljus, TSI och partikelstorlek).
I framtiden tror vi att denna metod så småningom kommer att vara till hjälp inom området för traditionell kinesisk medicinkvalitetskontroll, särskilt vid bedömning av äkthet. Denna studie stödde validiteten och noggrannheten av multipel ljusspridningsmetod i den snabba bedömningen av kinesisk medicinkvalitet med Indigo Naturalis som exempel. Följaktligen, i takt med att utrustning och applikationsteknik utvecklas kontinuerligt, kommer flera ljusspridningstekniker att kombineras med andra detektionstekniker för att komplettera varandra, vilket har en större inverkan på kvalitetskontrollen av kinesiska växtbaserade läkemedel i framtiden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inga intressekonflikter att redovisa.
Acknowledgments
Arbetet vill erkänna stöd från National Natural Science Foundation of China (nr 82173976), National Key Research and Development Program (nr 2018YFC1707205) och State Key Laboratory of Innovative Drugs and High Energy Saving Pharmaceutical Equipment, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine (No. GZSYS202003).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Analytical balance (1/10,000) | Sartorious, Germany | BSA224S | www.sartorius.com.cn |
| Funnel | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | Diameter 5 cm | www.cdkelongchem.com |
| Indigo Naturalis S1 | Xianyou, Fujian | 20210501 | |
| Indigo Naturalis S2 | Yaan, Sichuan | 20201102 | |
| Indigo Naturalis S3 | Xianyou, Fujian | 20161012 | |
| Indigo Naturalis S4 | Xianyou, Fujian | 20180305 | |
| Iron ring | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | / | www.cdkelongchem.com |
| Iron stand | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | / | www.cdkelongchem.com |
| Mili-Q ultra-pure water meter | Milipore, USA | Mili-Q | www.merckmillipore.com |
| Ninth sieve | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | Average aperture size 75 µm | www.cdkelongchem.com |
| Sample bottle | French Formulaction Company | Bottom diameter 2.6 cm, height 6 cm | www.formulaction.com |
| Seventh sieve | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | Average aperture size 125 µm | www.cdkelongchem.com |
| Turbisoft Lab multiple light scattering instrument | French Formulaction Company | Turbisoft Lab 2.3.1.125 Fanalyser 1.3.5 | www.formulaction.com |
| Weighing paper | Chengdu Kelong Chemical Co. LTD | / | www.cdkelongchem.com |
References
- Li, G. M. The application of water test in the identification of traditional Chinese medicine. Chinese Medicine Modern Distance Education of China. 19 (23), 153-155 (2021).
- Ye, B. Analysis of application effect of water test method in identification of traditional Chinese medicine. Heilongjiang Medicine Journal. 33 (02), 283-285 (2020).
- Yang, Q. Y., et al. From natural dye to herbal medicine: a systematic review of chemical constituents, pharmacological effects and clinical applications of indigo naturalis. Chinese Medicine. 15 (1), 127 (2020).
- Chen, C. The application value of water test method in the identification of Chinese medicine. Journal of Traditional Chinese Medicine Management. 30 (10), 133-134 (2022).
- Liu, X. M., et al. Establishment and application of a rapid quality inspection method for Indigo Naturalis based on quantitative portrayal of water testing process. Acta Pharmacologica Sinica. 57 (11), 3411-3418 (2022).
- Mengual, O., Meunier, G., Cayre, I., Puech, K., Snabre, P. Characterisation of instability of concentrated dispersions by a new optical analyser: the TURBISCAN MA 1000. Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. 152 (1), 111-123 (1999).
- Olatunji, O. N., Du, J., Hintz, W., Tomas, J. Application of particle sedimentation analysis in sterically-stabilized TiO2 particles stability assessment. Advanced Powder Technology. 27 (4), 1325-1336 (2016).
- Ferrentino, G., et al. Fining of red wine monitored by multiple light scattering. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 65 (27), 5523-5530 (2017).
- Ramezani, M., Ferrentino, G., Morozova, K., Scampicchio, M. Multiple light scattering measurements for online monitoring of milk fermentation. Foods. 10 (7), 1582 (2021).
- Yang, H. B., et al. A new approach to evaluate the particle growth and sedimentation of dispersed polymer microsphere profile control system based on multiple light scattering. Powder Technology. 315, 477-485 (2017).
- Zhang, X. X., et al. Treatment of non-high-risk acute promyelocytic leukemia with realgar-indigo naturalis formula (RIF) and all-trans retinoid acid (ATRA): study protocol for a randomized controlled trial. Trials. 21 (1), 7 (2020).
- Sugimoto, S., et al. Clinical efficacy and safety of oral Qing-Dai in patients with ulcerative colitis: a single-center open-label prospective study. Digestion. 93 (3), 193-201 (2016).
- Lin, Y. K., et al. Clinical assessment of patients with recalcitrant psoriasis in a randomized, observer-blind, vehicle-controlled trial using indigo naturalis. Archives of Dermatology. 144 (11), 1457-1464 (2008).
- Sun, Q., Leng, J., Tang, L., Wang, L., Fu, C. A Comprehensive review of the chemistry, pharmacokinetics, pharmacology, clinical applications, adverse events, and quality control of indigo naturalis. Frontiers in Pharmacology. 12, 664022 (2021).
- Yang, Y. J., et al. Investigation and analysis of the commodity quality of Indigo Naturalis herbs in Beijing area. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 23 (07), 1787-1788 (2012).
- Yao, Z. A., et al. Comparative study of thirty-eight batches of indigo naturalis. Journal of Chengdu University of TCM. 34 (02), 86-88 (2011).
- Bai, Z., et al. Determination of indigo and indirubin in indigo naturalis by HPLC. Modern Chinese Medicine. 12 (08), 27-29 (2010).
