Summary
プロトコルは膝の変形性関節症のウサギ モデルにおけるTuinaの介在のための方法を記述する。
Abstract
変形性膝関節症(KOA)は、主に膝関節の軟骨と周囲の軟部組織の変性変化を特徴としています。KOAの治療における推拿の有効性が確認されていますが、根本的なメカニズムを調査する必要があります。本研究は、科学的に実現可能なKOAウサギモデルを確立し、そのメカニズムを明らかにすることを目的としています。このために、生後6か月の正常グレードのオスのニュージーランドウサギ18匹を偽ウサギ、モデルウサギ、およびトゥイナグループにランダムに分け、各グループに6匹のウサギを配置しました。KOAモデルは、膝関節腔内に4%パパイン溶液を注入することによって確立されました。推拿群は、膝関節回転矯正法と組み合わせた推拿を4週間介入した。標準的な把持と固定のみが、偽群およびモデル群で実施されました。1週間の介入の終わりに、膝関節の可動域(ROM)が観察され、軟骨ヘマトキシリン-エオシン(HE)染色が行われました。この研究は、Tuinaが軟骨細胞のアポトーシスを阻害し、軟骨組織を修復し、膝関節ROMを回復させる可能性があることを示しています。結論として、この研究は、KOAモデルウサギに対する推拿治療の科学的実現可能性を実証し、KOAおよび同様の膝関節関連疾患の研究におけるその潜在的な応用を強調しています。
Introduction
変形性膝関節症(KOA)は、膝関節の変性疾患であり、主に膝の痛み、腫れ、変形、動きの制限によって現れ、障害率が高く、女性で有病率が高く、2019年には世界で5億2,781万人の変形性関節症患者がおり、その世界的な有病率はOAの世界の総有病率の60.6%を占めています1.臨床的には、KOAの治療は通常、非外科的治療と外科的治療に分けられます。非外科的療法には、理学療法、薬物療法、多血小板血漿注射療法などがあります2,3。推拿は、漢方薬における一般的で、安全で、信頼性が高く、効果的な治療法です。この研究では、膝関節回転矯正法と組み合わせた Tuina を使用して KOA を治療します。回転混練や圧搾法などの推拗技術は、筋肉組織のバランスを取り、痛みを軽減し、炎症因子レベルを調整し、組織の代謝を改善し、関節軟骨の変性を抑制することができます4,5。膝関節回転矯正法は、下肢の骨と関節のアライメントを調整し、膝関節のギャップを改善し、正常な力線を回復し、下肢のバイオメカニクスのバランスをとることができます6,7,8,9。レジスタンスエクササイズは、筋肉量と筋力を高め、軟骨組織の再生を促進することができます10,11。予備調査はこのTuinaのプロトコルが損傷した軟骨組織の軟骨細胞の変性そして修理の行為のより速い開始そして重要な阻止のKOAの処置の口頭グルコサミンの硫酸塩のカプセルよりかなり有効であることが分った12。KOAの治療では、推拿療法と比較して、非ステロイド性抗炎症薬は副作用と不十分な長期的有効性、比較的高い外科的リスクとコスト、および術後の問題と人工周囲合併症を伴う外科的治療のための特定の適応を必要とします13,14,15.薬物療法や手術と比較した場合、KOAの推拿治療には、副作用の軽減、リスクの低減、安全性の向上、費用対効果、効果の長期化など、いくつかの利点があります。さらに、膝関節の痛み、腫れ、飛び出し、動きの制限を効果的に緩和できます6,13,16,17。
しかし、KOAの治療のための推拿のメカニズムを明らかにする必要があり、KOAの治療プロトコルの改善と完成を制限します。そのため、KOAにおける推拿介入のメカニズムを動物実験で調べることは有効な方法である。ウサギは、ラットと比較して、従順な気質と大きな膝関節を持っています。解剖学的構造と軟骨の生化学的指標は人間のものと似ているため、Tuina18による膝関節疾患のメカニズムを研究するのに適した主題です。ウサギの膝関節腔にパパインを注射して確立したKOAモデルは、モデリング時間が短く、外傷が少なく、成功率が高く、生存率が高く、KOA19と同様の病理学的メカニズムという利点があります。本研究は、KOAにおける推拗化のための科学的に実現可能な動物実験プロトコルを確立し、推拿のメカニズムを調査することを目的としています。
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Protocol
この研究は、山東中医薬大学付属病院の倫理委員会によって承認されました(承認番号:2020-29)。
1. 実験動物
- 生後6ヶ月の通常グレードのオスのニュージーランドウサギ18匹(2.7±5〜0.25kg)を標準的なシングルケージ(明暗サイクル12時間、温度20〜24°C、湿度40%〜60%)で飼育します。
2. グルーピング方法
- 乱数法を使用して、18匹のニュージーランドウサギから6匹を偽グループとして選択し、残りの12匹のウサギをモデリンググループに割り当てます。
- モデリングが成功したら、モデリンググループウサギを乱数法に従ってモデルグループと推拿グループに分割し、各グループに6匹のウサギを配置します。
- 推拿群で推拿介入を行う。推拿を使わずに、偽グループとモデルグループで同じ把持と固定を行います。4週間、1日おきに操作します(図1)。
3. KOAモデルの確立
- 1週目に標準状態でウサギに適応給餌を行います。水と食料への自由アクセス。ウサギの固定ボックスにウサギを右側に置いて、1日15分間落ち着かせます。ヘッド固定プレートに頭を固定します。ウサギが動かないように固定プレートとネジを固定します。ウサギをつかんで固定するときは、保護手袋を着用してください(図1)。
- 2週目の1日目、4日目、7日目に、18匹のウサギすべてをウサギの固定ボックスの右側に置きます(図1)。以下の操作を実行します。
- 3%ペントバルビタールナトリウム(1 ml / kg)をウサギの辺縁耳静脈に注射します。.ウサギの左膝関節を動物のシェーバーで剃り、露出した皮膚に毛が生えないようにします。
- ウサギの左膝関節を、医療用ヨードフォアと75%アルコールを使用して内側から外側に消毒します(図2A)。
- ウサギの左膝関節を60°に曲げます。Waixiyanの針(22G、0.7mm x 30mm)を挿入します。4%パパイン溶液(0.1 mL / kg、2.5 kgの動物で平均0.275 mL)をモデリンググループの膝関節腔に注入します。等量の0.9%塩化ナトリウム溶液を偽基に注入する。この注射用量は、痛みや苦痛の証拠を引き起こすことなく、動物によって十分に忍容されます(図2B)。
注:Waixiyan(EX-LE5)は膝蓋靭帯の外側くぼみにあり、Neixiyan(EX-LE4)は膝蓋靭帯の内側くぼみにあります20,21,22。 - 溶液がこぼれないように、ピンホールを2分間押します。
- ウサギの左膝関節の上下に手を置きます。ウサギの膝関節を穏やかかつ受動的に曲げ、生理学的可動域(ROM)内で10倍伸ばして、溶液を膝関節腔に均等に浸透させます15。モデリングの間、8時間ごとにウサギを観察します。ウサギが隠れたり、手足が震えたり、浅くて速い呼吸をしたり、噛んだり引っ掻いたりする兆候が見られる場合は、ブプレノルフィンSR(0.18 mg / kg)を投与します。.
- 7週目に、ウサギの左膝が腫れ、膝の周りの筋肉の緊張が増加し、結節と線条があり、局所的な痛みを伴う刺激反応が増加し、膝ROMが減少し、足が不自由になり、重心が健康な側に移動するのを観察します。これは、KOAモデルの成功を決定します(図1、図2C)23,24。
4.推拿操作
- 推拿操作の前に、推拿技術パラメータ決定装置を使用してトレーニングを実行します。同じ専門家による1日1時間のトレーニングを1ヶ月間行います。
- Tuinaマニピュレーションシミュレーションプラットフォーム上で、親指で5Nの力と60回/分の頻度で回転混練およびプレス法を実行します(図3A、C)。
- Puina操作パラメータ処理ソフトウェアでX、Y、Z軸の3方向の力を解析し、画面に表示される力の大きさ、周波数、作用時間を確認します(図3B、D)。
- 学習中に Tuina 操作の機械的パラメーターを評価し、ソフトウェアを使用して Tuina 操作を標準化します。親指で5Nの力、60回/分の頻度、10分の連続運転時間で標準化された回転混練および加圧方法を維持します。図3B、D25、26、27の操作の標準化された定量的波形を参照してください。
- ウサギ固定ボックスの右側にウサギを置きます。ウサギを10秒間優しく撫でて、ウサギ21を落ち着かせてリラックスさせます。次に、推拿介入を実行します。
- ウサギの左膝周囲の筋肉のこわばり、腱の結び目、膝蓋骨に親指を当てて、5Nの力と60回/分の頻度で上下の往復操作を5分間行う回転揉み込み法を行う。
- 親指の端を使用して、Yanglingquan(GB 34)、Yinlingquan(SP 9)、Waixiyan(EX-LE5)、Neixiyan(EX-LE4)、Heding(EX-LE2)、Xuehai(SP 10)、Liangqiu(ST 34)、およびWeizhong (BL 40)20,21,22を5Nの力と60回/分の頻度で押し、各ポイントで30秒間操作します。
- ウサギの膝関節に回転矯正法を実行し、グループ内の動物ごとにこれを3回個別に実行します。
- 片手で大腿骨を固定します。まずもう片方の手を膝関節の後ろに置き、次に親指と薬指で外側脛骨顆と内側脛骨顆をそれぞれ固定します。人差し指と中指で膝窩を固定します。牽引力とねじれ力を加えます。
- 片手で大腿骨を固定します。膝蓋骨の内側と外側の端をもう一方の手の親指と小指で固定します。膝蓋骨の基部を人差し指、中指、薬指で固定します。ねじれ力を加えます。
- 牽引力の方向を脛骨の長軸と平行に保ち、ねじり力の方向を下西燕の方向と一直線に保ちます。皮膚と指の間の摩擦を避けるために、指を使って皮膚を所定の位置に保持します。
5.膝関節ROMの測定
注意: 測定する前に、ウサギを落ち着かせてください。測定統計家と測定者は互いに異なります。
- 各グループのウサギの左膝関節の可動性を実験の開始時と各週の終わりに測定します。
- ウサギ固定ボックスの右側にウサギを置き、片手で左大腿骨を固定します。
- 医療用関節鏡の円の中心をウサギの左膝関節の外側の中心に合わせます。円の中心と大転子をつなぐ線の延長と平行になるように固定アームを伸ばします。脛骨の縦軸と平行になるように可動アームを伸ばします。
- もう一方の手を脛骨の縦軸、膝関節から約9cmの位置に置きます。750°/ sの角速度で約850〜28gのトルクを手動で適用します。
- ウサギの膝関節が動かなくなるまでこれを行います。関節の動きが止まったときにゴニオメーターが表示する度数を記録します。これが膝関節ROMです。読むときは、視線が定規の表面に対して垂直であることを確認してください。
- 各膝のROMを3回測定し、平均値28を取ります。
6. ヘマトキシリン-エオシン(HE)染色
- サンプル収集
- 介入終了から1週間後(図1)、ウサギをウサギ固定ボックスに右側に置きます(ウサギは右側に横たわっているときにリラックスしたままである可能性が高くなります)。人道的な安楽死のためにウサギの耳辺縁静脈にペントバルビトン(100 mg / kg)を注射します29,30。
- メス、ハサミ、止血鉗子で左膝腔をすばやく開き、大腿骨遠位部の軟骨の周りに付着している軟部組織を取り除きます。
- 大腿骨遠位部の約1 cm x 1 cmの軟骨-骨標本を噛み鉗子で採取し、生理食塩水に入れて洗浄します。
- 固定と脱灰
- 軟骨を4%パラホルムアルデヒド溶液に入れ、72時間固定します。
- 流水で12時間すすいでください。エチレンジアミン四酢酸(EDTA)脱灰液で6週間脱灰します。EDTA脱灰液は3日ごとに交換してください。骨組織が柔らかく柔軟になり、容易に曲げることができ、針31で滑らかに刺すことができるようになったときに脱灰の終点を決定する。
- 埋め込み切片の脱水
- 検体を自動脱水機に入れて脱水します。
- ワックスを塗ってトリミングしたティッシュを、パラフィンワックスを溶かした正方形の容器の底に1時間置きます。冷えて固いブロックに固まるまで、冷却オーブンに入れます。パラフィン包埋組織ブロックをスライサーで4μmの厚さにスライスします。
- 漂白剤機で切片を広げ、粘着スライドの上に置き、番号を付け、スライスベーキングマシンとオーブンで乾燥させます。
- 脱ワックスと水分補給
- 切片を65°Cで60分間焼きます。
- 切片をキシレンに7分間浸し、続いてさらに2回、新鮮なキシレンにそれぞれ7分間浸します。
- スライスを無水エタノールに5分間浸し、続いて95%エタノール、85%エタノール、75%エタノールにそれぞれ2分間浸します。
- 切片を蒸留水に2分間浸します。
- ヘマトキシリン染色:切片をヘマトキシリンで20秒間染色します。切片を流水ですすいでください。切片を塩酸エタノール分画に3秒間浸します。切片を水道水で5分間すすぎます。
- エオシン再染色:切片をエオシンで30秒間染色します。水道水で切片をすすぎます。
- サンプルの透明性のための脱水
- 切片を95%エタノールにそれぞれ3秒間2回入れ、続いて無水エタノールに3秒間入れます。
- 再び、スライスを無水エタノールに1分間入れ、続いてキシレンをそれぞれ1分間2回洗浄します。
- スライスの密封:スライスを取り出し、中性ガムシーラーを落とし、カバーガラスで覆い、無臭になるまでドラフトでスライスを乾燥させます。
- サンプルの撮影:光学顕微鏡の視野で100倍で観察し、写真を撮ります。
- 評価: 軟骨組織を各グループ32 のマンキン スコアで評価します。
7. データ分析
- 解析ソフトを用いて実験データを統計的に解析します。データを正規分布の対象とした場合、標本の 2 つのグループを t 検定で比較し、複数のグループを一元配置分散分析で比較します。
- 結果を平均±標準偏差 (SD) として表します。市販のソフトウェアを使用して結果を統計プロットとして表現します。差は p <0.05で統計的に有意であった。
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Representative Results
膝の動きの制限と軟骨組織の損傷の程度は、KOAの重症度を反映しています。膝関節のROMは、膝関節の動きの制限の程度を反映しています。膝関節ROMが小さいほど、膝関節の動きの制限はより深刻になります。逆に、膝関節ROMが大きいほど、膝の動きの程度はより正常になります。軟骨組織の形態と構造を観察するためのHE染色は、軟骨組織の損傷の程度を反映しています。軟骨組織の表面が不規則であるほど、亀裂や欠陥の存在が多くなり、軟骨細胞の数が少なくなり、軟骨層の厚さが薄くなり、細胞の配置が乱れ、細胞の分布が不均一になり、層が不明瞭になり、潮汐線が明確でなくなり、完成度が低下します。 マンキンスコアが高いほど、膝関節の軟骨組織の損傷が深刻になり、その逆の場合、軟骨組織はより正常になります32.KOAモデルを確立する際、モデリングの成功は、ウサギの膝関節運動の制限の程度を観察することによって判断することができる23,24。推拿の有効性は、ウサギの膝関節が推拗12によって介入されたときの膝関節運動の制限の程度および軟骨組織損傷の程度の改善を観察することによって決定することができる。
7週目以降、2群のウサギの左膝関節を比較したところ、ROMは74.67°±1.21°と、偽群の140.17°±1.33°よりも低く、モデリングが成功したことが示唆された(図2C、 図4)。
12週目の測定・解析後、偽群の膝関節ROMは140.33°、モデル群、推拿群の膝関節ROMは、それぞれ140.33°±1.37°、76.33°±1.37°、134.33°±1.51°であり、Tuina群の膝関節可動性はモデル群よりも有意に高く(p < 0.01)、TuinaはKOAウサギの膝関節機能を改善する可能性があることが示された(図5)。
各群のウサギの左膝関節軟骨のHE染色は、偽群の軟骨組織表面が滑らかで無傷であることを示し、軟骨細胞の数は331.67±13.98であり、軟骨層の厚さは259.42±41.97μmであり、細胞はよく配置され、均等に分布しており、レベルは明確であった。 潮の満ち引きは澄み切っていて、連続していて、マンキンのスコアは0.33±0.52でした。モデル群の軟骨組織表面は、偽群と比較して、欠損や亀裂のある不規則な組織であり、軟骨細胞数は29.50±8.04であり、軟骨層の厚さは103.15±24.64μmであり、細胞は乱れ、不均一に分布しており、層は明確ではなく、潮汐線は明確で不完全であり、マンキンのスコアは9.33±1.03であった。モデル群と比較して、推拿群の軟骨は規則的な表面を持ち、欠損や亀裂が少なく、軟骨細胞の数は291.83±8.18であり、軟骨層の厚さは183.58±15.34μmであり、細胞はより整然と配置され、わずかに不均一に分布し、層はより明確であり、潮汐線は比較的明確で完全であった。 マンキンのスコアは3.00±0.63でした(図6)15,23,33。細胞数、軟骨層厚、マンキンスコアはモデル群よりも有意に良好であり(p < 0.001)、Tuinaが損傷した軟骨組織を修復できることが示唆された。
図1:KOAモデルウサギの確立と推拿のプロトコル。 ウサギに1週間の適応給餌を行った後、ウサギの左膝関節にKOAモデルを6週間構築し、モデリング開始の1日目、4日目、7日目に4%パパイン溶液を注射します。ウサギの左膝関節を4週間、1日おきに1回介入します。1週間の給餌後、ウサギの左膝関節のROMを測定し、サンプルを採取します。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図2:KOAモデルの確立 (A)ウサギの左膝関節を調製し、消毒した。(B)Waixiyanから針を挿入し、ウサギのモデリング群と偽群の膝関節腔にそれぞれ4%パパイン溶液と0.9%塩化ナトリウム溶液を注入した。(C)左膝関節の動きを制限したKOAモデルウサギの成形に成功。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図3:推拿技術パラメータ決定装置を使用した推拿技術のトレーニング。 (A)親指で回転捏ねる方法のトレーニング。(B)親指による回転混練法の曲線。(C)親指の先端でプレス方法をトレーニングします。(D)親指の先端を持つプレス方法の曲線。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図4:モデリング前後のウサギの左膝関節ROM。データは、偽グループとモデリンググループに関するt検定によって処理され、結果は平均±SDとして表されました。 ns p > 0.05,***p < 0.001. この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図5:ウサギの左膝関節ROM。 偽グループ、モデルグループ、および推拿グループについては、データを分散分析で処理し、結果は平均±SDとして表されました。1週目には、ROMは3つのグループすべてでわずかに増加しました。模造群と比較して、モデル群および推拿群では、モデリング時のROMが徐々に減少した(p < 0.001)。モデル群とは対照的に、推拿群では介入後にROMが徐々に増加した(p < 0.001)。 この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
図6:ウサギ膝関節軟骨のHE染色 。 (A)偽基のHE染色。(B)モデル群のHE染色。(C)Tuina基のHE染色。(D)グループ間の軟骨細胞数の比較。(E)グループ間の軟骨層の厚さの比較。(F)グループ間のマンキンのスコアの比較。データはANOVAによって処理され、結果は平均±SDとして表されました。12週間後、HE染色で見られるように、グループの軟骨組織は構造的に無傷であり、細胞数と配置は正常でした。モデル群の軟骨組織は、細胞数が少なく、無秩序な配置で構造的に破壊されました。Tuinaグループの軟骨組織は、比較的正常な細胞数と配列で無傷でした。 ***p < 0.001。スケールバー = 100 μm. N =6. この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。
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Discussion
実験プロトコルの設計は、KOAの治療における推拿のメカニズムを調査するために特に重要です。KOAモデリングは、ワイシヤンでパパイン注射によりウサギで行われました。ワイシヤンは膝蓋靭帯の外側陰窩に位置しており、見つけやすく、膝屈曲時の大腿骨と脛骨の間の関節空間が大きいため、膝関節腔への注入が容易で、周囲の組織への損傷を防ぐことができるため、KOAモデル34の確立が容易です。KOAウサギへのトゥイナ介入中、モデルウサギはトゥイナ投与を容易にするために適切に配置されました。ウサギは健康な側のウサギの固定箱に入れられ、頭を固定され、感情を落ち着かせて全身をリラックスさせ、もがきませんでした。トゥイナの強度と頻度を標準化し、トゥイナ介入の均質性を改善するために、トゥイナは、トゥイナ技術パラメータ決定装置によるトゥイナ操作の厳格なトレーニングを受けたオペレーターによって実行されます。
このプロトコルの重要なステップは、KOAを治療するために膝関節回転矯正法と組み合わせたTuinaを使用することです。手術前に、ウサギの患部の下肢を股関節から足首まで触診し、膝関節周辺に焦点をあて、腱の結び目や筋肉のこわばりを探り、膝関節を曲げたり伸ばしたりして、NeixiyanとWaixiyanの高さを観察し、正確な推拿操作を行いました。回転式混練と圧搾法は、筋肉の緊張とけいれんを解放し、膝関節の血液循環を改善し、炎症物質の代謝を促進し、腫れと痛みを軽減することができます35,36。ツボは病気の反応と治療のツボであり、GB34とEX-LE2はKOAの治療に感度の高いツボであり、それらを刺激することで肥満細胞に作用し、5-ヒドロキシトリプタミン、トリプターゼ、ヒスタミン37の放出に影響を与えます。データマイニングにより、GB 34、SP 9、EX-LE5、EX-LE4、EX-LE2、SP 10、ST 34、およびBL 40はすべて、臨床診療で一般的に使用される経穴であることが明らかになりました38,39。これらのツボには、腱や結び目を和らげ、血液循環を活性化し、痛みを和らげる効果があります38,39。研究によると、上記のツボを刺激すると、腫瘍壊死因子-αやインターロイキン-1βなどの炎症因子の血清レベルが低下し、軟骨細胞骨格の破壊が抑制され、KOA 39,40,41が治療されることが示されています。
力のレベルを調整して能動的抵抗運動の下で行われる膝関節回転矯正法は、実行が容易であり、屈曲や圧迫などの受動運動技術と比較して、膝の構造を調整する際の怪我の潜在的なリスクを回避します。角度はトルクに影響し、膝関節の内閉トルクと外転トルクのバランスが崩れると、関節の異常な負荷が増加し、KOA42,43,44,45を引き起こす可能性があります。いくつかの研究は、定期的なレジスタンス運動による推拿介入が骨密度を改善し、筋肉のけいれんを解放し、筋肉量と強度を回復し、痛みを軽減し、KOAを効果的に治療できることを示しました46,47,48,49,50。ウサギの膝は人間の膝よりも小さく、自発的な抵抗運動を行うことができないため、元の2人用トゥイナは、抵抗下での膝関節回転矯正法のより良い有効性と操作性を確保するために、1人用、両手のトゥイナに変更されました12。ここで、ウサギの大腿骨を片手で固定して抵抗運動をシミュレートし、もう片方の手で下西燕にねじりと牽引力を加えて、ワイシヤンと内渓燕が同じ高さになるようにして、内側と外側の脛骨プラトーの相対的な高さを調整することで、膝関節の回転矯正法を実行します。膝関節はまた、その内向きおよび外向きのトルクを調整し、軸方向のアライメントを促進し、大腿腓骨関節および大腿骨蓋関節のアライメントを調整し、膝関節の法線力構造を回復し、膝関節の負荷を軽減し、膝関節の安定性を高め、膝関節の正常な可動性および生理学的機能を回復させることができる42。43,44,45です。
チームの以前の臨床試験では、KOAの治療におけるこの方法の有効性が示されており、動物実験では、KOAの治療において硫酸グルコサミンよりも効果的であることが示されています12。推梨は、インターロイキン1β(IL-1β)および細胞外シグナル調節キナーゼ1/2(ERK1/2)-核転写因子κB(NF-κB)シグナル伝達経路を媒介し、ウサギ末梢血清および関節液中のIL-1β濃度を低下させ、B細胞リンパ腫-2(Bcl-2)の発現レベルを上昇させ、ERK1/2、Bcl-2関連xタンパク質、NF-κB p65、およびシステインアスパラギン酸プロテアーゼの発現レベルを低下させることができます3。これは、軟骨細胞のアポトーシスと増殖を調節し、乱れた軟骨細胞内部環境のバランスをとるのに役立ち、軟骨の病理学的変化を改善します12。
この方法の限界は、推拿の介入が機械ではなく人間によって行われ、オペレーターが推拿の強度と周波数の完全な均質性を達成することが困難であることである。
結論として、推拿は膝関節の炎症を効果的に軽減し、膝軟骨の変性を抑制し、徐々に正常な生理学的可動性を回復することができ、この研究は、膝関節疾患の推拿治療のメカニズムに関する科学的で実行可能な研究プロトコルを提供することができます。
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Disclosures
著者らは、利益相反の可能性はないと宣言しています。
Acknowledgments
この研究は、山東省伝統漢方科学技術プロジェクト(2021Q080)とQilu School of Traditional Chinese Medicine Academic School Inheritance Project[Lu-Wei-Letter (2022) 93]の支援を受けました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9 % sodium chloride injection | Sichuan Keren Pharmaceutical Co. | Z22121903 | |
| -20°C refrigerator | Haier | BD-328WL | |
| 4 % fixative solution | Solarbio | P1110 | |
| 4°C refrigerator | Haier | SC-315DS | |
| Anhydrous ethanol | Sinopharm | ||
| Automatic tissue dewatering machine | Dakowei (Shenzhen) Medical Equipment Co. | HP30 | |
| Blast drying oven | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co. | DHG-9070A | |
| Coverslip | Biyuntian | FCGF50 | |
| Electric thermostat water bath | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co. | HWS-26 | |
| Embedding freezing table | Changzhou Paishijie Medical Equipment Co. | BM450 | |
| Embedding machine | Changzhou Paishijie Medical Equipment Co. | BM450A | |
| Ethylenediaminetetraacetic acid decalcification solution | Servicebio | G1105-500ML | |
| Fluorescent inverted microscope | Leica | Leica DM IL LED | |
| Hematoxylin-eosin staining kit | Cisco Jet | EE0012 | |
| Hydrochloric acid | Laiyang Economic and Technological Development Zone Fine Chemical Plant | ||
| Medical joint goniometer | KOSLO | ||
| Neutral gum | Cisco Jet | EE0013 | |
| Normal-grade male New Zealand rabbit | Jinan Xilingjiao Breeding and Breeding Center | SCXK (Lu) 2020 0004 | |
| Papain(3000 U/mg) | Bioss | D10366 | |
| Pathological tissue bleaching and drying instrument | Changzhou Paishijie Medical Equipment Co. | PH60 | |
| Pet electric clippers | Codos | CP-3180 | |
| Rabbit fixing box | any brand | ||
| Rotating Slicer | Leica | 531CM-Y43 | |
| Tuina technique parameter determination instrument | Shanghai DuKang Instrument Equipment Co. Ltd. | ZTC- |
|
| Ventilator | TALY ELECTRIC | C32 | |
| Xylene | Fuyu Reagent |
References
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