Summary

Tuina intervention i kaninmodell av knäartros

Published: August 25, 2023
doi:

Summary

Protokollet beskriver en metod för Tuina-intervention i en kaninmodell av knäartros.

Abstract

Knäartros (KOA) kännetecknas främst av degenerativa förändringar i knäledens brosk och omgivande mjukvävnader. Effekten av Tuina vid behandling av KOA har bekräftats, men den bakomliggande mekanismen behöver undersökas. Denna studie syftar till att etablera en vetenskapligt genomförbar KOA-kaninmodell behandlad med Tuina för att avslöja de underliggande mekanismerna. För detta delades 18 6 månader gamla normalklassiga hankaniner från Nya Zeeland slumpmässigt in i sken-, modell- och Tuina-grupper, med 6 kaniner i varje grupp. KOA-modellen etablerades genom att injicera 4% papain-lösning i knäledshålan. Tuina-gruppen ingrep med Tuina i kombination med knäledens roterande korrigeringsmetod i 4 veckor. Endast den vanliga greppningen och fixeringen utfördes i sken- och modellgrupper. I slutet av den 1 vecka långa interventionen observerades knäledens rörelseomfång (ROM) och broskhematoxylin-eosin (HE) färgning gjordes. Studien visar att Tuina kan hämma kondrocytapoptos, reparera broskvävnad och återställa knäledens ROM. Sammanfattningsvis visar denna studie den vetenskapliga genomförbarheten av Tuina-behandling för KOA-modellkaniner, vilket belyser dess potentiella tillämpning i studien av KOA och liknande knäledsrelaterade tillstånd.

Introduction

Knäartros (KOA) är en degenerativ sjukdom i knäleden, som främst manifesteras av knäsmärta, svullnad, deformation och begränsad rörelse, med en hög funktionsnedsättning och en högre prevalens hos kvinnor, med 527,81 miljoner patienter med artros över hela världen 2019 och dess globala prevalens som står för 60,6 % av den totala globala prevalensen av OA1. Kliniskt brukar behandlingen av KOA delas in i icke-kirurgiska och kirurgiska behandlingar. Icke-kirurgiska behandlingar inkluderar sjukgymnastik, farmakoterapi och blodplättsrik plasmainjektionsterapi 2,3. Tuina är en vanlig, säker, pålitlig och effektiv behandlingsmetod inom kinesisk medicin. I denna studie används Tuina i kombination med knäledskorrigeringsmetoden för att behandla KOA. Tuina-tekniker som den roterande knådnings- och pressningsmetoden kan balansera muskelvävnad, minska smärta, justera inflammatoriska faktornivåer, förbättra vävnadsmetabolismen och hämma ledbroskdegeneration 4,5. Knäledens roterande korrigeringsmetod kan justera inriktningen av ben och leder i nedre extremiteterna, förbättra knäledsgapet, återställa den normala kraftlinjen och balansera biomekaniken i nedre extremiteterna 6,7,8,9. Motståndsövningar kan öka muskelmassa och styrka och främja förnyelse av broskvävnad10,11. En preliminär studie visade att detta Tuina-protokoll är betydligt effektivare än orala glukosaminsulfatkapslar vid behandling av KOA, med en snabbare insättande effekt och signifikant hämning av kondrocytdegeneration och reparation av skadad broskvävnad12. Vid behandling av KOA, jämfört med Tuina-terapi, har icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel negativa effekter och otillfredsställande långsiktig effekt, relativt höga kirurgiska risker och kostnader, och kräver vissa indikationer för kirurgisk behandling, med postoperativa problem och periprotetiska komplikationer13,14,15. Jämfört med läkemedelsbehandling och kirurgi erbjuder Tuina-behandling för KOA flera fördelar, inklusive minskade biverkningar, lägre risk, förbättrad säkerhet, kostnadseffektivitet och mer långvarig effekt. Dessutom kan det effektivt lindra knäledssmärta, svullnad, knäppning och begränsad rörelse 6,13,16,17.

Tuinas mekanism för behandling av KOA behöver dock klargöras, vilket begränsar förbättringen och perfektionen av behandlingsprotokollet för KOA. Därför är det en effektiv metod att studera mekanismen för Tuinas intervention vid KOA genom djurförsök. Kaniner, jämfört med råttor, har ett fogligt temperament och större knäleder. Den anatomiska strukturen och broskets biokemiska index liknar människans, så det är ett lämpligt ämne för att studera mekanismen för knäledssjukdom av Tuina18. KOA-modellen som etablerats genom att injicera papain i knäledshålan hos kaniner har fördelarna med kort modelleringstid, minskat trauma, hög framgångsfrekvens, hög överlevnadsgrad och liknande patologisk mekanism som KOA19. Denna studie syftar till att etablera ett vetenskapligt genomförbart djurförsöksprotokoll för Tuina-intervention vid KOA och undersöka mekanismen för Tuina.

Protocol

Studien godkändes av den etiska kommittén vid Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine (godkännandenummer: 2020-29). 1. Försöksdjur Föd upp 18, 6 månader gamla hankaniner av normal kvalitet (2,75 ± 0,25 kg) i vanliga enkelburar (12 timmars ljus/mörkercykel, temperatur 20-24 °C, luftfuktighet 40%-60%). 2. Metod för gruppering Välj 6 av de 18 nyzeeländska kaniner…

Representative Results

Graden av begränsad knärörelse och broskvävnadsskada återspeglar svårighetsgraden av KOA. Knäledens ROM återspeglar graden av begränsning av knäledens rörelse. Ju mindre knäledens ROM är, desto allvarligare är begränsningen av knäledens rörelse. Tvärtom, ju större knäledens ROM är, desto mer normal är graden av knärörelse. HE-färgning för att observera broskvävnadens morfologi och struktur återspeglar graden av broskvävnadsskada. Ju mer oregelbunden broskvävnadens yta är, desto högre före…

Discussion

Utformningen av det experimentella protokollet är särskilt viktigt för att undersöka Tuinas mekanism vid behandling av KOA. KOA-modellering utfördes på kaniner genom injektion av papain vid Waixiyan. Waixiyan ligger i den laterala kryptan i patellarligamentet, som är lätt att lokalisera, och ledutrymmet mellan lårbenet och skenbenet är stort här under knäböjning, vilket gör det lätt att injicera i knäledshålan och förhindrar skador på de omgivande vävnaderna, så det är lätt att etablera KOA modell<…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Detta arbete stöddes av Shandong Provincial Traditional Chinese Medicine Science and Technology Project (2021Q080) och Qilu School of Traditional Chinese Medicine Academic School Inheritance Project [Lu-Wei-Letter (2022) 93].

Materials

0.9 % sodium chloride injection Sichuan Keren Pharmaceutical Co. Z22121903
-20°C refrigerator Haier BD-328WL
4 % fixative solution Solarbio P1110
4°C refrigerator Haier SC-315DS
Anhydrous ethanol Sinopharm
Automatic tissue dewatering machine Dakowei (Shenzhen) Medical Equipment Co. HP30
Blast drying oven Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co. DHG-9070A
Coverslip Biyuntian FCGF50
Electric thermostat water bath Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co. HWS-26
Embedding freezing table Changzhou Paishijie Medical Equipment Co. BM450
Embedding machine Changzhou Paishijie Medical Equipment Co. BM450A
Ethylenediaminetetraacetic acid decalcification solution Servicebio G1105-500ML
Fluorescent inverted microscope Leica Leica DM IL LED
Hematoxylin-eosin staining kit Cisco Jet EE0012
Hydrochloric acid Laiyang Economic and Technological Development Zone Fine Chemical Plant
Medical joint goniometer KOSLO
Neutral gum Cisco Jet EE0013
Normal-grade male New Zealand rabbit Jinan Xilingjiao Breeding and Breeding Center SCXK (Lu) 2020 0004
Papain(3000 U/mg) Bioss D10366
Pathological tissue bleaching and drying instrument Changzhou Paishijie Medical Equipment Co. PH60
Pet electric clippers Codos CP-3180
Rabbit fixing box any brand
Rotating Slicer Leica 531CM-Y43
Tuina technique parameter determination instrument Shanghai DuKang Instrument Equipment Co. Ltd. ZTC-Equation 1
Ventilator TALY ELECTRIC C32
Xylene Fuyu Reagent

References

  1. Long, H. B., et al. Prevalence trends of site-specific osteoarthritis from 1990 to 2019: findings from the global burden of disease study 2019. Arthritis & Rheumatology. 74 (7), 1172-1183 (2022).
  2. Tschopp, M., et al. A randomized trial of intra-articular injection therapy for knee osteoarthritis. Investigative Radiology. 58 (5), 355-362 (2023).
  3. Buchanan, W. W., Kean, C. A., Kean, W. F., Rainsford, K. D. Osteoarthritis. Inflammopharmacology. , (2023).
  4. Wang, W. Y., et al. A randomized, parallel control and multicenter clinical trial of evidence-based traditional Chinese medicine massage treatment VS External Diclofenac Diethylamine Emulgel for the treatment of knee osteoarthritis. Trials. 23 (1), 555 (2022).
  5. Wang, M. N., et al. Mechanism of traditional Chinese medicine in treating knee osteoarthritis. Journal of Pain Research. 13, 1421-1429 (2020).
  6. Katz, J. N., Arant, K. R., Loeser, R. F. Diagnosis and treatment of hip and knee osteoarthritis: A review. The Journal of the American Medical Association. 325 (6), 568-578 (2021).
  7. Chang, A., et al. The relationship between toe-out angle during gait and progression of medial tibiofemoral osteoarthritis. Annals of the Rheumatic Diseases. 66, 1271-1275 (2007).
  8. Jenkyn, T. R., Hunt, M. A., Jones, I. C., Giffin, J. R., Birmingham, T. B. Toe-out gait in patients with knee osteoarthritis partially transforms external knee adduction moment into flexion moment during early stance phase of gait: a tri-planar kinetic mechanism. Journal of Biomechanics. 41 (2), 276-283 (2008).
  9. Brouwer, G. M., et al. Association between valgus and varus alignment and the development and progression of radiographic osteoarthritis of the knee. Arthritis & Rheumatism. 56 (4), 1204-1211 (2007).
  10. Liao, C. D., et al. Effects of protein supplementation combined with resistance exercise training on walking speed recovery in older adults with knee osteoarthritis and sarcopenia. Nutrients. 15 (7), 1552 (2023).
  11. Thudium, C. S., et al. Cartilage tissue turnover increases with high-compared to low-intensity resistance training in patients with knee OA. Arthritis Research & Therapy. 25 (1), 22 (2023).
  12. Zheng, L. J., et al. Shutiao Jingjin massage can stabilize intracellular environment of rabbit chondrocytes following knee osteoarthritis-induced cartilage injury. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 27, (2023).
  13. Liu, K. Q., et al. Efficacy and safety of Tuina (Chinese therapeutic massage) for knee osteoarthritis: A randomized, controlled, and crossover design clinical trial. Frontiers in Medicine. 10, 997116 (2023).
  14. Wang, Z., et al. Systematic Review and Network Meta-analysis of Acupuncture Combined with Massage in Treating Knee Osteoarthritis. BioMed Research International. 2022, 4048550 (2022).
  15. Li, Y. Y., et al. Therapeutic effect of acupotomy at Sanheyang for cartilage collagen damage in moderate knee osteoarthritis: a rabbit model. Journal of Inflammation Research. 16, 2241-2254 (2023).
  16. Guo, G. X., et al. Cerebral mechanism of Tuina analgesia in management of knee osteoarthritis using multimodal MRI: study protocol for a randomised controlled trial. Trials. 23 (1), 694 (2022).
  17. Perlman, A., et al. Efficacy and safety of massage for osteoarthritis of the knee: a randomized clinical trial. Journal of General Internal Medicine. 34 (3), 379-386 (2019).
  18. Chen, B. J., et al. Aerobic exercise combined with glucosamine hydrochloride capsules inhibited the apoptosis of chondrocytes in rabbit knee osteoarthritis by affecting TRPV5 expression. Gene. 830, 146465 (2022).
  19. Rasheed, M. S., Ansari, S. F., Shahzadi, I. Formulation, characterization of glucosamine loaded transfersomes and in vivo evaluation using papain induced arthritis model. Scientific Reports. 12 (1), 19813 (2002).
  20. Li, Z. R. Experimental acupuncturology. Beijing: China Press of Traditional Chinese Medicine. 2003, 314-319 (2003).
  21. Hu, Y. L. Manual of practical animal acupuncture. Beijing: China Press of Agriculture. 2003, 286-298 (2014).
  22. Liu, J., et al. Effects of "knot-loosing" of acupotomy on motor function and morphological changes of knee joint in knee osteoarthritis rabbits. Zhen Ci Yan Jiu. 46 (2), 129-135 (2021).
  23. Li, Q., et al. The protective effects and mechanism of Ruyi Zhenbao Pill, a Tibetan medicinal compound, in a rat model of osteoarthritis. Journal of Ethnopharmacology. 308, 116255 (2023).
  24. Kwon, M., Nam, D., Kim, J. Pathological characteristics of monosodium iodoacetate-induced osteoarthritis in rats. Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 20 (3), 435-446 (2023).
  25. Wang, J. G., Tang, C. L. Experimental Tuina science. Beijing: China Press of Traditional Chinese Medicine. Chinese. , (2017).
  26. Fang, M., Song, B. L. Tuina science. Beijing: China Press of Traditional Chinese Medicine. , (2016).
  27. Jin, X. Y., Yu, Y. Y., Lin, Y. Y., Yang, J. P., Chen, Z. H. Tendon-regulating and bone-setting manipulation promotes the recovery of synovial inflammation in rabbits with knee osteoarthritis via the TLR4-MyD88-NF-κB signaling pathway. Annals of Translational Medicine. 11 (6), 245 (2023).
  28. Wang, M., Liu, C., Xiao, W. Intra-articular injection of hyaluronic acid for the reduction in joint adhesion formation in a rabbit model of knee injury. Knee Surgery, Sports Traumatology, Arthroscopy: Official Journal of the ESSKA. 22 (7), 1536-1540 (2014).
  29. Xu, C., et al. Bacterial cellulose membranes used as artificial substitutes for dural defection in rabbits. International Journal of Molecular Sciences. 15 (6), 10855-10867 (2014).
  30. Leary, S., et al. AVMA guidelines for the euthanasia of animals: 2020 edition. Schaumburg: American Veterinary Medical Association. 2020, (2020).
  31. Amirtham, S. M., Ozbey, O., Kachroo, U., Ramasamy, B., Vinod, E. Optimization of immunohistochemical detection of collagen type II in osteochondral sections by comparing decalcification and antigen retrieval agent combinations. Clinical Anatomy. 33 (3), 343-349 (2020).
  32. Niazvand, F., et al. Curcumin-loaded poly lactic-co-glycolic acid nanoparticles effects on mono-iodoacetate-induced osteoarthritis in rats. Veterinary Research Forum: An International Quarterly Journal. 8 (2), 155-161 (2017).
  33. Liu, A., et al. Intra-articular injection of umbilical cord mesenchymal stem cells loaded with graphene oxide granular lubrication ameliorates inflammatory responses and osteoporosis of the subchondral bone in rabbits of modified papain-induced osteoarthritis. Frontiers in Endocrinology. 12, 822294 (2022).
  34. Hall, M. M. The accuracy and efficacy of palpation versus image-guided peripheral injections in sports medicine. Current Sports Medicine Reports. 12 (5), 296-303 (2013).
  35. Xing, L., et al. Traditional Chinese medicine ointment combined with Tuina therapy in treatment of pain and swelling after total knee arthroplasty. World Journal of Orthopedics. 13 (10), 932-939 (2022).
  36. Xu, H., et al. The effectiveness of Tuina in relieving pain, negative emotions, and disability in knee osteoarthritis: a randomized controlled trial. Pain Medicine. 24 (3), 244-257 (2023).
  37. Ding, N., et al. Mast cells are important regulator of acupoint sensitization via the secretion of tryptase, 5-hydroxytryptamine, and histamine. The Public Library of Science One. 13 (3), e0194022 (2018).
  38. Cai, F. H., Li, F. L., Zhang, Y. C., Li, P. Q., Xiao, B. Research on electroacupuncture parameters for knee osteoarthritis based on data mining. European Journal of Medical Research. 27 (1), 162 (2022).
  39. Mei, Z. G., Cheng, C. G., Zheng, J. F. Observations on curative effect of high-frequency electric sparkle and point-injection therapy on knee osteoarthritis. Journal of Traditional Chinese Medicine. 31 (4), 311-315 (2011).
  40. Xiao, G., et al. Effect of manipulation on cartilage in rats with knee osteoarthritis based on the Rho-associated protein kinase/LIM kinase 1/Cofilin signaling pathways. Journal of Traditional Chinese Medicine. 42 (2), 194-199 (2022).
  41. Wu, M. X., et al. Clinical study on the treatment of knee osteoarthritis of Shen-Sui insufficiency syndrome type by electroacupuncture. Chinese Journal of Integrative Medicine. 16 (4), 291-297 (2010).
  42. Richards, R. E., Andersen, M. S., Harlaar, J., van den Noort, J. C. Relationship between knee joint contact forces and external knee joint moments in patients with medial knee osteoarthritis: effects of gait modifications. Osteoarthritis Cartilage. 26 (9), 1203-1214 (2018).
  43. Shull, P. B., et al. Toe-in gait reduces the first peak knee adduction moment in patients with medial compartment knee osteoarthritis. Journal of Biomechanics. 46 (1), 122-128 (2013).
  44. Adouni, M., Shirazi-Adl, A. Partitioning of knee joint internal forces in gait is dictated by the knee adduction angle and not by the knee adduction moment. Journal of Biomechanics. 47 (7), 1696-1703 (2014).
  45. Kutzner, I., Trepczynski, A., Heller, M. O., Bergmann, G. Knee adduction moment and medial contact force–facts about their correlation during gait. The Public Library of Science One. 8 (12), e81036 (2013).
  46. Camacho-Cardenosa, A., et al. Resistance circuit training combined with hypoxia stimulates bone system of older adults: a randomized trial. Experimental Gerontology. 169, 111983 (2022).
  47. Babur, M. N., Siddiqi, F. A., Tassadaq, N., Arshad Tareen, M. A., Osama, M. Effects of glucosamine and chondroitin sulfate supplementation in addition to resistance exercise training and manual therapy in patients with knee osteoarthritis: A randomized controlled trial. The Journal of the Pakistan Medical Association. 72 (7), 1272-1277 (2022).
  48. Wang, H. N., et al. Effect of low-load resistance training with different degrees of blood flow restriction in patients with knee osteoarthritis: study protocol for a randomized trial. Trials. 23 (1), 6 (2022).
  49. Cheon, Y. H., et al. Relationship between decreased lower extremity muscle mass and knee pain severity in both the general population and patients with knee osteoarthritis: Findings from the KNHANES V 1-2. The Public Library of Science One. 12 (3), e0173036 (2017).
  50. Murton, A. J., Greenhaff, P. L. Resistance exercise and the mechanisms of muscle mass regulation in humans: acute effects on muscle protein turnover and the gaps in our understanding of chronic resistance exercise training adaptation. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 45 (10), 2209-2214 (2013).
check_url/65763?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Zhang, S., Zhang, X., Sun, G., Wang, K., Qiao, Y., He, Y., Li, M., Li, H., Zheng, L. Tuina Intervention in Rabbit Model of Knee Osteoarthritis. J. Vis. Exp. (198), e65763, doi:10.3791/65763 (2023).

View Video