从MEFs基质胶我的MEFs传代的胚胎干细胞
Summary
本视频演示了如何生长在小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）饲养层细胞的人类胚胎干细胞（胚胎干细胞）。
Abstract
本视频演示了如何生长在小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）饲养层细胞的人类胚胎干细胞（胚胎干细胞）。
Protocol
分割的人类胚胎干细胞（胚胎干细胞）接种于小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs） 通常一个融合的人类胚胎干细胞板可分割1:6至1:10，特别是胚胎干细胞线。分割板块将再次成为汇合后5-7天分裂。 分裂之前两天，涂胶板使用了0.1％的明胶溶液。对于6孔板，每口井，并培育板添加到37℃，5％的CO 2组织培养孵化器一夜之间2毫升。 板MEFs糊化6孔板的前一天，你计划?…
Discussion
本视频演示了如何生长在小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）饲养层细胞的人类胚胎干细胞（胚胎干细胞）。在电镀前的最后一步，当人类胚胎干细胞重悬，他们应大致统一的殖民地的大小和形状。仔细移液器的人类胚胎干细胞悬液和向下几次，使殖民地的体积更小，更均匀，但没有这么多，单细胞或非常小的菌落generated.Immunofluorescence的人类胚胎干细胞全能性的标志物，如10月，染色和显微镜或流式细胞仪4和SSEA – 4，是?…
Acknowledgements
在Teitell实验室的人类胚胎干细胞研究是由加州再生医学研究所（CIRM）种子批RS1 – 00313的支持。我们感谢的再生医学和干细胞研究的加州大学洛杉矶分校，特别是博士Amander克拉克，博士杰罗姆扎克，和加州大学洛杉矶分校的Broad研究所干细胞核心设施为支持我们的研究成员的广泛中心的成员。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Knockout Serum Replacer (KSR) | Reagent | Gibco | 10828-028 | |
| DMEM/F12 | Reagent | Gibco | 11330-057 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| GlutaMax | Reagent | Gibco | 35050-061 | |
| DMEM | Reagent | Gibco | 11995-065 | |
| FBS | Reagent | Clontech | 631107 | |
| L-glutamine | Reagent | Gibco | 25030-081 | |
| BME | Reagent | Fisher | BP176-100 | |
| bFGF | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Collagenase IV | Reagent | Gibco | 17104-019 | |
| Dispase | Reagent | Stem Cell Technologies | 17105-041 | |
| Penicillin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Gelatin | Reagent | Chemicon | ES-006-B | |
| Matrigel | Reagent | BD Biosciences | 354277 | |
| Oct-4 antibody | Reagent | Santa Cruz Biotechnology | SC-9081 | |
| anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3 | Reagent | R&D Systems | FAB1435P | |
| FITCI-conjugated antirabbit IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc. | 715-095-152 |
References
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Cite This Article
Zhang, J., Khvorostov, I., Teitell, M. From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs. J. Vis. Exp. (16), e722, doi:10.3791/722 (2008).