Denna video visar hur man odlar stamceller från mänskliga embryon (hESCs) på musens embryonala fibroblaster (MEF) feeder celler. Del 1 av 3.
Abstract
Denna video visar hur man odlar stamceller från mänskliga embryon (hESCs) på musens embryonala fibroblaster (MEF) feeder celler.
Protocol
Dela upp mänskliga embryonala stamceller (hESCs) pläterade på möss embryonala fibroblaster (MEFs) Vanligtvis ett sammanflytande hESC platta kan delas 1:06 till 01:10, beroende på den särskilda hESC linjen. Uppdelningen plattan blir konfluenta igen 5-7 dagar efter klyvning. Två dagar före delning, gelatinize plattor med hjälp av en 0,1% gelatin lösning. För en 6-brunnar, lägg 2 ml i varje brunn och inkubera plattan i 37 ° C, 5% CO 2 vävnadsodling inkubator …
Discussion
Denna video visar hur man odlar stamceller från mänskliga embryon (hESCs) på musens embryonala fibroblaster (MEF) feeder celler. I det sista steget innan plätering, när hESCs är återsuspenderade bör de vara av ungefär enhetlig koloni storlek och form. Försiktigt Pipettera hESC fjädring upp och ner några gånger för att göra kolonierna mindre och mer enhetlig, men inte så mycket att enstaka celler eller mycket små kolonier är generated.Immunofluorescence färgning och mikroskopi eller flödescytometri för hESC pluripotens m…
Acknowledgements
Mänskliga embryonala stamceller studier i Teitell labbet stöds av en California Institute för regenerativ medicin (CIRM) frö bevilja RS1-00.313. Vi tackar medlemmar i de allmänna Centrum för regenerativ medicin och stamcellsforskning vid UCLA, speciellt Dr Amander Clark, Dr Jerome Zack, och medlemmar av UCLA Broad Institute Stem Cell Core Facility för deras stöd för våra studier.
Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts.Science . 282, 1145-1147 (1998).
Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.Nature Biotechnology . 19, 971-974 (2001).
Zhang, J., Khvorostov, I., Teitell, M. From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs. J. Vis. Exp. (16), e722, doi:10.3791/722 (2008).