MEFの存在下で継代ヒトES細胞：MEFをから私をマトリゲルする
Summary
このビデオでは、マウス胚性線維芽細胞（MEF）フィーダー細胞上でヒト胚性幹細胞（ヒトES）を成長させる方法を示しています。 3のパート1。
Abstract
このビデオでは、マウス胚性線維芽細胞（MEF）フィーダー細胞上でヒト胚性幹細胞（ヒトES）を成長させる方法を示しています。
Protocol
マウス胚性繊維芽細胞（MEF）上に播種した分割するヒト胚性幹細胞（ヒトES） 通常コンフルエントhESCのプレートは、特定のhESCのラインに応じて、1:10に1時06分を分割することができます。分割板が分割後に再度5〜7日間コンフルエントになります。 分割の前に2日間、0.1％ゼラチン溶液を用いてプレートをゼラチン状にする。 6ウェルプレートの場合は、一晩37℃、…
Discussion
このビデオでは、マウス胚性線維芽細胞（MEF）フィーダー細胞上でヒト胚性幹細胞（ヒトES）を成長させる方法を示しています。メッキ前の最後のステップでは、ヒトES細胞が再懸濁するとき、彼らはほぼ均一なコロニーの大きさと形状でなければならない。慎重にコロニーが小さく、より均一にするため、上下に数回hESCの懸濁液をピペットではなく、あまり単一の細胞または非常に小さいコロニーのよう?…
Acknowledgements
Teitellラボでヒト胚性幹細胞研究は再生医療のためのカリフォルニア工科大学（CIRM）種子助成RS1 – 00313でサポートされています。我々は、UCLA、特に博士Amanderクラーク博士ジェロームザック、そして我々の研究の支援のためのUCLAのブロード研究所の幹細胞の中核施設のメンバーで、再生医療と幹細胞研究のブロードセンターのメンバーに感謝。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Knockout Serum Replacer (KSR) | Reagent | Gibco | 10828-028 | |
| DMEM/F12 | Reagent | Gibco | 11330-057 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| GlutaMax | Reagent | Gibco | 35050-061 | |
| DMEM | Reagent | Gibco | 11995-065 | |
| FBS | Reagent | Clontech | 631107 | |
| L-glutamine | Reagent | Gibco | 25030-081 | |
| BME | Reagent | Fisher | BP176-100 | |
| bFGF | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Collagenase IV | Reagent | Gibco | 17104-019 | |
| Dispase | Reagent | Stem Cell Technologies | 17105-041 | |
| Penicillin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Gelatin | Reagent | Chemicon | ES-006-B | |
| Matrigel | Reagent | BD Biosciences | 354277 | |
| Oct-4 antibody | Reagent | Santa Cruz Biotechnology | SC-9081 | |
| anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3 | Reagent | R&D Systems | FAB1435P | |
| FITCI-conjugated antirabbit IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc. | 715-095-152 |
References
- Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts. Science . 282, 1145-1147 (1998).
- Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells. Nature Biotechnology . 19, 971-974 (2001).
Cite This Article
Zhang, J., Khvorostov, I., Teitell, M. From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs. J. Vis. Exp. (16), e722, doi:10.3791/722 (2008).