MEFs부터를 Matrigel하기 : MEFs의 면전에서 Passaging hESCs를
Summary
이 동영상은 마우스 배아 fibroblast (MEF) 피더 세포에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)를 성장하는 방법을 보여줍니다. 3 부 1.
Abstract
이 동영상은 마우스 배아 fibroblast (MEF) 피더 세포에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)를 성장하는 방법을 보여줍니다.
Protocol
분리 인간의 배아 줄기 세포 (hESCs)는 마우스 배아 섬유아 세포의 (MEFs)에 도금 일반적으로 합류 hESC 접시는 특정 hESC 라인에 따라 1시 10분에서 1시 6분까지을 분할 수 있습니다. 분할 플레이트는 분리 후 다시 5-7일 합류하게 될 것입니다. 분할 이틀 전에는 0.1 % 젤라틴 용액을 사용하여 번호판을 아교 질로 만들다. 6 – 잘 접시, 야간 37 ° C 5 % CO 2 조직 문화 인큐베…
Discussion
이 동영상은 마우스 배아 fibroblast (MEF) 피더 세포에 인간 배아 줄기 세포 (hESCs)를 성장하는 방법을 보여줍니다. 도금 전에 마지막 단계에서 hESCs가 resuspended 때, 그들은 약 균일 콜로니 크기와 모양을해야합니다. 조심스럽게 hESC의 정지를 피펫 아래 몇 번 식민지가 더 작고 균일하게하기 위해,하지만 너무 많은 단일 셀 또는 아주 작은 식민지 같은 월 hESC pluripotency 마커에 대한 generated.Immunofluorescence 염색법과 현미경…
Acknowledgements
Teitell 연구실에서 인간 배아 줄기 세포 연구는 재생 의료에 대한 캘리포니아 연구소 (CIRM) 씨앗 부여 RS1 – 00313에 의해 지원됩니다. 우리는 UCLA, 특히 박사 Amander 클라크 박사 제롬 잭, 우리의 연구들의 지원 UCLA 브로드 연구소 줄기 세포 핵심 시설의 멤버에 재생 의료 및 줄기 세포 연구의 브로드 센터의 회원을 감사드립니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Knockout Serum Replacer (KSR) | Reagent | Gibco | 10828-028 | |
| DMEM/F12 | Reagent | Gibco | 11330-057 | |
| Non-essential Amino Acids | Reagent | Gibco | 11140-050 | |
| GlutaMax | Reagent | Gibco | 35050-061 | |
| DMEM | Reagent | Gibco | 11995-065 | |
| FBS | Reagent | Clontech | 631107 | |
| L-glutamine | Reagent | Gibco | 25030-081 | |
| BME | Reagent | Fisher | BP176-100 | |
| bFGF | Reagent | R&D Systems | 233-FB-025 | |
| Collagenase IV | Reagent | Gibco | 17104-019 | |
| Dispase | Reagent | Stem Cell Technologies | 17105-041 | |
| Penicillin / Streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | |
| Gelatin | Reagent | Chemicon | ES-006-B | |
| Matrigel | Reagent | BD Biosciences | 354277 | |
| Oct-4 antibody | Reagent | Santa Cruz Biotechnology | SC-9081 | |
| anti-h/mSSEA-4 Phycoerythrin Conjugated Mouse IgG3 | Reagent | R&D Systems | FAB1435P | |
| FITCI-conjugated antirabbit IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Laboratories. Inc. | 715-095-152 |
References
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Cite This Article
Zhang, J., Khvorostov, I., Teitell, M. From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs. J. Vis. Exp. (16), e722, doi:10.3791/722 (2008).