Este vídeo demonstra como crescer células estaminais embrionárias humanas (hESCs) em células embrionárias de rato de fibroblastos (MEF) alimentador. Parte 1 de 3.
Abstract
Este vídeo demonstra como crescer células estaminais embrionárias humanas (hESCs) em células embrionárias de rato de fibroblastos (MEF) alimentador.
Protocol
Dividir células estaminais embrionárias humanas (hESCs) semeadas em fibroblastos de rato embrionárias (MEFs) Normalmente uma placa CTEh confluentes podem ser divididos 01:06 – 01:10, dependendo da linha CTEh particular. A placa vai se tornar confluentes dividir novamente 5-7 dias após a divisão. Dois dias antes de se separarem, gelatinizar placas usando uma solução 0,1% de gelatina. Para uma placa de 6 poços, adicionar 2 ml em cada placa bem e incubar a 37 ° C, 5% CO <sub…
Discussion
Este vídeo demonstra como crescer células estaminais embrionárias humanas (hESCs) em células embrionárias de rato de fibroblastos (MEF) alimentador. Na última etapa antes do plaqueamento, quando o hESCs são ressuspenso, eles devem ser do tamanho das colônias mais ou menos uniforme e forma. Pipeta com cuidado a suspensão CTEh cima e para baixo algumas vezes para fazer as colônias menores e mais uniforme, mas não tanto que as células individuais ou colônias são muito pequenas manchas generated.Immunofluorescence e citometria de …
Acknowledgements
Humana estudos de células-tronco embrionárias no laboratório Teitell são suportados por um Instituto da Califórnia de Medicina Regenerativa (CIRM), as sementes conceder RS1-00313. Agradecemos a membros do Centro de Medicina Regenerativa Broad e Investigação em Células Estaminais na Universidade da Califórnia, especialmente Dr. Amander Clark, Dr. Jerome Zack, e membros do Instituto Broad Stem UCLA Facility núcleo celular para o seu apoio de nossos estudos.
Thomson, J. a. m. e. s. A., Itskovitz-Eldor, J. o. s. e. p. h., Shapiro, S. a. n. d. e. r. S., Waknitz, M. i. c. h. e. l. l. e. A., Swiergiel, J. e. n. n. i. f. e. r. J., Marshall, V. i. v. i. e. n. n. e. S., Jones, J. e. f. f. r. e. y. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts.Science . 282, 1145-1147 (1998).
Xu, C. h. u. n. h. u. i., Inokuma, M. a. r. g. a. r. e. t. S., Denham, J. e. r. r. o. d., Golds, K. a. t. h. a. l. e. e. n., Kundu, P. r. a. t. i. m. a., Gold, J. o. s. e. p. h. D., Carpenter, M. e. l. i. s. s. a. K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.Nature Biotechnology . 19, 971-974 (2001).
Zhang, J., Khvorostov, I., Teitell, M. From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs. J. Vis. Exp. (16), e722, doi:10.3791/722 (2008).