العرض مستضد في الأجهزة اللمفاوية الثانوية من قبل خلايا الجذعية هو أمر حاسم لبدء بوساطة الخلايا التائية الاستجابة المناعية التكيفية. نحن هنا لشرح ثقافة نخاع العظم الخلايا الجذعية المستمدة الفئران ، التنشيط ، ووضع العلامات لمدة 2 الفوتون التصوير.
Abstract
يمكن العثور على العديد من الطرق لتحضير الخلايا الجذعية في الفئران الأدب. هنا ، نقدم طريقة التي تنتج CD11c عالية أكبر من 85 ٪ في الخلايا الجذعية الثقافة التي يعيش في العقدة الليمفاوية تجفيف بعد الحقن تحت الجلد وهذا المستضد للخلايا T مستضد معين (انظر الفيديو). بالإضافة إلى ذلك ، ونحن نستخدم الآلات ايسن Incucyte لتعقب الخلايا الجذعية النضج ، حيث ، في يوم 10 ، مورفولوجيا الخلايا المستزرعة هي الحال في خلية الجذعية الناضجة و<85 ٪ من الخلايا CD11chigh. كشفت دراسة العرض مستضد في الغدد الليمفاوية الطرفية بنسبة 2 الفوتون التصوير أن هناك ثلاث مراحل متميزة من الخلايا الجذعية والتفاعل خلية T 1 و 2. المرحلة الأولى تتكون من الاتصالات بين الخلايا وجيزة المسلسل مستضد تي متحركة محددة للغاية ويحمل مستضد الخلايا الجذعية 1 و 2. تتميز المرحلة الثانية من خلال اتصالات طويلة بين المستضد محددة الخلايا التائية والخلايا الجذعية تحمل المستضد 1 و 2. أخيرا ، تتميز المرحلة الثالثة من قبل خلايا تي من فصل الخلايا الجذعية ، واستعادة القدرة على الحركة وبداية لتقسيم 1 و 2. هذا مثال واحد من هذا النوع من التفاعلات محددة مستضد التي يمكن تحليلها من قبل اثنين من الفوتون التصوير من مستضد محملة الخلايا خلية الصبغة التي تحمل علامات تعقب شجيري.
Protocol
1) إزالة عظام الفخذ كلا من الماوس استخدام مقص لقطع تشريح العضلات والعظام عظم الفخذ تعرض فوق وتحت المفاصل (الركبة والورك). فهم وسط عظم الفخذ مع ملاقط التشريح وقطع فوق وتحت مفاصل لمغادرة قدر من الكردوس سليمة قدر الإمكان. </…
Discussion
الخلايا الجذعية هي الوسطاء الرئيسيين للاستجابة المناعية التكيفية والخلية مستضد الأكثر كفاءة تقديم تتسم حتى الآن. طرق الإنسان والثقافة الماوس الخلية الجذعية في الأدب تختلف في نوع من السيتوكينات استخدامها للتأثير على تطوير أنواع مختلفة من الخلايا الجذعية. خصوصا ، وتستخدم GM – CSF …
P. Matheu, M., Sen, D., Cahalan, M. D., Parker, I. Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging. J. Vis. Exp. (17), e773, doi:10.3791/773 (2008).