वृक्ष के समान कोशिकाओं द्वारा माध्यमिक lymphoid अंगों में एंटीजन प्रस्तुति टी सेल अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया मध्यस्थता की दीक्षा के लिए महत्वपूर्ण है. यहाँ हम अस्थि मज्जा की संस्कृति व्युत्पन्न murine वृक्ष के समान कोशिकाओं, सक्रियण, और 2-photon इमेजिंग के लिए लेबलिंग का प्रदर्शन.
Abstract
Murine वृक्ष के समान कोशिकाओं की तैयारी के लिए कई तरीकों साहित्य में पाया जा सकता है. यहाँ, हम एक तरीका है कि संस्कृति में अधिक से अधिक 85% CD11c उच्च वृक्ष के समान कोशिकाओं का उत्पादन मौजूद है कि उपचर्म इंजेक्शन और प्रतिजन विशेष टी कोशिकाओं (वीडियो देखें) के लिए उपस्थित प्रतिजन के बाद से draining लिम्फ नोड के लिए घर है. इसके अतिरिक्त, हम एसेन उपकरण का उपयोग Incucyte वृक्ष के समान सेल परिपक्वता है, जहां 10 दिन में, संवर्धित कोशिकाओं की आकारिकी एक परिपक्व वृक्ष के समान सेल और <कोशिकाओं के 85% CD11chigh हैं के विशिष्ट है ट्रैक. 2-photon इमेजिंग द्वारा परिधीय लिम्फ नोड्स में प्रतिजन प्रस्तुति के अध्ययन से पता चला है कि वृक्ष के समान सेल और टी सेल एक बातचीत, 2 के तीन अलग – अलग चरणों रहे हैं . चरण मैं अत्यधिक गतिशील प्रतिजन विशेष टी कोशिकाओं और प्रतिजन ले जाने के वृक्ष के समान कोशिकाओं 1, 2 के बीच संक्षिप्त धारावाहिक संपर्कों के होते हैं . दो चरण प्रतिजन विशेष टी सेल और प्रतिजन असर वृक्ष के समान कोशिकाओं 1, 2 के बीच लंबे समय तक संपर्क द्वारा चिह्नित है. अंत में, चरण III वृक्ष के समान कोशिकाओं से detaching, गतिशीलता और फिर 1, 2 विभाजित शुरुआत टी कोशिकाओं द्वारा विशेषता है. यह प्रतिजन विशेष बातचीत है कि प्रतिजन लोड सेल tracker डाई लेबल वृक्ष के समान कोशिकाओं के दो photon इमेजिंग द्वारा विश्लेषण किया जा सकता प्रकार का एक उदाहरण है.
Protocol
1) एक माउस से दोनों फीमर हड्डियों निकालें विच्छेदन कैंची का प्रयोग को दूर मांसपेशियों में कटौती और ऊपर और जोड़ों के नीचे (घुटने और कूल्हे) फीमर हड्डी का पर्दाफाश. विच्छेदन चिमटी के साथ फीमर के बीच सम?…
Discussion
वृक्ष के समान कोशिकाओं अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और सबसे कुशल प्रतिजन पेश तिथि करने के लिए विशेषता सेल के प्रमुख मध्यस्थों हैं. माउस वृक्ष के समान सेल संस्कृति साहित्य में मानव के लिए तरीके अलग वृक्ष क?…
Acknowledgements
स्वास्थ्य Kirchstein फैलोशिप predoctoral फेलोशिप (mpm) एअर इंडिया 64,128, जीएम – 41,514 (एमडीसी), जीएम ४८,०७१ (आईपी) के राष्ट्रीय संस्थान
P. Matheu, M., Sen, D., Cahalan, M. D., Parker, I. Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging. J. Vis. Exp. (17), e773, doi:10.3791/773 (2008).