מצגת Antigen באיברים הלימפה משני על ידי התאים הדנדריטים הוא קריטי עבור ייזום של תא T בתיווך תגובה חיסונית אדפטיבית. כאן אנו מדגימים את התרבות של מוח העצם נגזר תאים דנדריטים Murine, הפעלה, וסימון עבור הדמיה 2-פוטון.
Abstract
כמה שיטות להכנת תאים דנדריטים Murine ניתן למצוא בספרות. כאן, אנו מציגים שיטה המייצרת יותר מ 85% תאים דנדריטים CD11c גבוה תרבות הביתה הצומת לימפה ניקוז לאחר הזרקה תת עורית ו אנטיגן ספציפי לערמונית להציג לתאי T (ראה וידאו). בנוסף, אנו משתמשים מכשירים אסן Incucyte לעקוב אחר ההבשלה תאים דנדריטים, שם, ב 10 יום, את המורפולוגיה של תאים בתרבית אופייני של תא בוגר הדנדריטים <85% של תאים CD11chigh. המחקר של המצגת אנטיגן בבלוטות הלימפה הפריפריה על ידי 2-פוטון הדמיה עולה כי ישנם שלושה שלבים ברורים של תאים דנדריטים ואינטראקציה תא T 1, 2. שלב I מורכב הקשר בין ניעתי סדרתי קצר מאוד ספציפי אנטיגן בתאי T אנטיגן נושאת תאים דנדריטים 1, 2. השלב השני מתאפיין מגעים ממושכים בין תא-T ו אנטיגן ספציפי אנטיגן נושאות תאים דנדריטים 1, 2. ולבסוף, בשלב השלישי מאופיין בתאי T ניתוק מן התאים הדנדריטים, החזרת תנועתיות ומתחיל לחלק 1, 2. זוהי דוגמה אחת לסוג של אנטיגן ספציפי לערמונית אינטראקציות כי ניתן לנתח על ידי הדמיה שני הפוטונים של אנטיגן טעון תא גשש צבען שכותרתו תאים דנדריטים.
Protocol
1) הסר את שתי עצמות הירך של העכבר one השתמש במספריים לנתיחה כדי לחתוך שרירים לחשוף את עצם הירך מעל ומתחת המפרקים (הברך הירך). אחוז במרכז של עצם הירך עם פינצטה לנתיחה לחתוך מעל ומתחת המפרקים לעזוב כמה שיותר epiphysis ללא פגע ככל…
Discussion
התאים הדנדריטים הם המתווכים העיקריים של התגובה החיסונית הסתגלות התא אנטיגן היעילה ביותר להציג מאופיינת עד כה. שיטות אדם העכבר תרבית תאים דנדריטים בספרות נבדלות בסוג של ציטוקינים להשתמש כדי להשפיע על התפתחות סוגים שונים של תאים דנדריטים. יש לציין, GM-CSF, flt3L, IL4, IL13, TNF-alpha ו – IFN-gamma מש…
Acknowledgements
National Institutes of Health אחווה אחוות Kirchstein predoctoral AI-64128 (MPM), GM-41514 (MDC), GM-48071 (IP)
P. Matheu, M., Sen, D., Cahalan, M. D., Parker, I. Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging. J. Vis. Exp. (17), e773, doi:10.3791/773 (2008).