ראשי ניתק דופמין במוח התיכון Cell תרבויות מן ילודים מכרסמים
Summary
ראשי ניתק הדופמין במוח התיכון בתרביות תאים מאפשרים ללמוד את המאפיינים presynaptic של נוירונים דופמין. הם יכולים לשמש כדי לפקח בזמן אמת שחרור הדופמין קינטיקה של חלבונים / רמות ה-mRNA של הרגולטורים של exocytosis דופמין. כאן, אנו מראים לך איך לייצר מן התרבויות הללו בילודים מכרסמים.
Abstract
היכולת ליצור תרביות תאים העיקרי של נוירונים דופמין מאפשר ללמוד את המאפיינים presynaptic של נוירונים דופמין במנותק קלט מערכתית ממקומות אחרים במוח. במעבדה שלנו, אנו משתמשים אלו נוירונים להעריך קינטיקה שחרור הדופמין באמצעות סיבי פחמן amperometry, כמו גם רמות הביטוי של גנים הקשורים לדופמין חלבונים באמצעות PCR כמותי ו immunocytochemistry. בסרטון הזה, אנו מראים לך איך אנחנו מייצרים אלה תרבויות מן בילודים מכרסמים.
התהליך כולל מספר שלבים, כולל ציפוי של האסטרוציטים גליה קליפת המוח, את מיזוג של תרבות התקשורת העצבית על ידי תא המצע גליה, דיסקציה של המוח התיכון בילודים, את מערכת העיכול, מיצוי ציפוי של נוירונים דופאמין תוספת של גורמים neurotrophic ל להבטיח את הישרדות התא.
יישומים מתאימים להכנת כזה כוללים electrophysiology, immunocytochemistry, PCR כמותי, מיקרוסקופיה וידאו (כלומר, של איחוי בזמן אמת שלפוחי עם קרום התא), הכדאיות מבחני תא מסכי toxicological אחרים.
Protocol
Discussion
השיטות שתוארו כאן לאפשר רזולוציה נאה של תכונות מורפולוגיות neurochemical של נוירונים דופמין מרכזית אחרת הם לא זמינים מערכתית או גישת vivo.
Acknowledgements
העבודה נתמכה על ידי DK065872 (ENP), קרן משפחת סמית פרס הצטיינות במחקר ביו (ENP), F31 DA023760 (BMG, ENP) ו P30 NS047243 (Tufts המרכז Neuroscience Research).
References
- Geiger, B. M., Behr, G. G., Frank, L., Caldera-Siu, A. D., Beinfeld, M. C., Kokkotou, E. G., Pothos, E. N. Evidence for defective mesolimbic dopamine exocytosis in obesity-prone rats. FASEB Journal. 8, 2740-2746 (2008).
- Pothos, E. N. Regulation of dopamine quantal size in midbrain and hippocampal neurons. Behavioural Brain Research. 130, 203-207 (2002).
- Pothos, E. N., Larsen, K. E., Setlik, W., Gershon, M. D., Krantz, D., Liu, Y. -. J., Edwards, R. H., Sulzer, D. Synaptic vesicle transporter expression regulates vesicle phenotype and quantal size. The Journal of Neuroscience. 20, 7297-7306 (2000).
- Pothos, E. N., Davila, V., Sulzer, D. Presynaptic recording of quanta from midbrain dopamine neurons and modulation of the quantal size. The Journal of Neuroscience. 18, 4106-4118 (1998).
- Sulzer, D., Pothos, E. N. Presynaptic mechanisms that regulate quantal size. Reviews in the Neurosciences. 11, 159-212 (2000).
