प्राथमिक dissociated कृंतक नवजात शिशुओं से midbrain dopamine सेल संस्कृतियों
Summary
प्राथमिक dissociated midbrain dopamine सेल संस्कृतियों dopamine न्यूरॉन्स के presynaptic विशेषताओं के अध्ययन के लिए अनुमति देते हैं. वे वास्तविक समय dopamine जारी कैनेटीक्स और प्रोटीन / mRNA डोपामाइन exocytosis के नियामकों के स्तर की निगरानी के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यहाँ, हम आपको बताते हैं कैसे कृंतक नवजात शिशुओं से इन संस्कृतियों को उत्पन्न करने के लिए.
Abstract
dopamine न्यूरॉन्स की प्राथमिक सेल संस्कृतियों बनाने की क्षमता मस्तिष्क में कहीं से प्रणालीगत इनपुट से अलगाव में dopamine न्यूरॉन्स के presynaptic विशेषताओं के अध्ययन के लिए अनुमति देता है. हमारी प्रयोगशाला में, हम इन न्यूरॉन्स का उपयोग करने dopamine जारी कार्बन फाइबर amperometry, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से डोपामाइन से संबंधित जीन और मात्रात्मक पीसीआर और immunocytochemistry का उपयोग प्रोटीन की अभिव्यक्ति के स्तर का उपयोग कैनेटीक्स का आकलन. इस वीडियो में, हम आपको बताएंगे कि कैसे हम कृंतक नवजात शिशुओं से इन संस्कृतियों उत्पन्न.
प्रक्रिया cortical glial astrocytes के चढ़ाना, glial सब्सट्रेट द्वारा neuronal सेल संस्कृति मीडिया की कंडीशनिंग, नवजात शिशुओं में midbrain के विच्छेदन, पाचन, निष्कर्षण और dopamine न्यूरॉन्स की चढ़ाना और neurotrophic कारकों में से करने के अलावा सहित कई कदम शामिल सेल अस्तित्व को सुनिश्चित करते हैं.
इस तरह के एक तैयार करने के लिए उपयुक्त अनुप्रयोगों इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी, immunocytochemistry, मात्रात्मक पीसीआर, वीडियो माइक्रोस्कोपी (यानी, प्लाज्मा झिल्ली के साथ वास्तविक समय vesicular संलयन), सेल व्यवहार्यता assays और अन्य विषाक्तता स्क्रीन शामिल हैं.
Protocol
Discussion
यहाँ वर्णित तरीकों केंद्रीय dopamine न्यूरॉन्स कि एक प्रणालीगत या vivo दृष्टिकोण में अन्यथा उपलब्ध नहीं हैं morphological और neurochemical सुविधाओं का ठीक संकल्प के लिए अनुमति देते हैं.
Acknowledgements
काम DK065872 (ENP), जैव चिकित्सा अनुसंधान में एक स्मिथ परिवार उत्कृष्टता के फाउंडेशन पुरस्कार (ENP), F31 (बीएमजी, ENP) DA023760 और NS047243 p30 (तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान के लिए Tufts केंद्र) द्वारा समर्थित किया गया.
References
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