توليد مستقرة ايليجانس جيم المعدلة وراثيا عن طريق Microinjection
Summary
هذا الفيديو يوضح أسلوب microinjection في الغدد التناسلية من ايليجانس جيم لخلق حيوانات معدلة وراثيا.
Abstract
يمكن أن يكون وراثيا ايليجانس انواع معينة بسهولة عن طريق إنشاء microinjection حل DNA البلازميد في 1 التناسلية. ال DNA البلازميد يتشكل من جديد إلى النموذج concatamers خارج الصبغي التي ورثت ستابلي ، وإن لم يكن بنفس الكفاءة كما الكروموسومات الفعلي 2. والمورثة ذات الاهتمام المشترك مع حقن علامة an المظهري واضحة ، مثل رول أو GFP – 6 ، للسماح للاختيار من الحيوانات المعدلة وراثيا تحت المجهر تشريح. ويمكن التعبير عن هذا الجين الخارجية من المروج الأصلي للدراسات توطين الخلوية. بدلا من ذلك ، يمكن أن تكون مدفوعة من قبل التحوير المروج مختلف الأنسجة محددة لتقييم دور الجينات في منتج معين أو تلك الخلية الأنسجة. هذه التقنية محركات بكفاءة التعبير الجيني في جميع أنسجة ايليجانس جيم باستثناء الجنين أو أوائل germline 3. ويستخدم على نطاق واسع من الحيوانات المعدلة وراثيا إنشاء لمجموعة من النماذج التجريبية. هذا الفيديو يوضح الإجراء microinjection لتوليد الديدان المعدلة وراثيا. وعلاوة على ذلك ، وصفت اختيار وصيانة خطوط مستقرة جينيا ايليجانس جيم.
Protocol
Discussion
عند القيام بهذا الإجراء ، فإنه من المهم أن نتذكر أن :
— حقن مباشرة في مركز الغدد التناسلية
— لا حقن السائل الكثير
— العمل بسرعة لمنع أصاب.
إذا واجهت مشاكل مع الإبرة ، مثل كسره كبيرة جدا ، فمن الأفضل لإعادة إبرة جديدة ، بدلا من محاولة لحقن مع أقل…
Acknowledgements
نود أن نعترف الروح التعاونية لجميع أفراد مختبر كالدويل. وقد تم دعم حركة البحث اضطرابات في المختبر من خلل التوتر باخمان شتراوس ومؤسسة باركنسون ، مؤسسة باركنسون المتحدة الأمريكية جمعية مرض باركنسون ، جمعية مرض باركنسون ولاية ألاباما ، وجيه مايكل فوكس مؤسسة للأبحاث مرض باركنسون ، والبحوث الجامعية.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agarose | Ultrapure | Invitrogen | 15510-027 | |
| Halocarbon Oil, Voltalef | Hulle 10S | elfatochem, France | ||
| Coverglass 18×18 mm | Fisher | 12-548-A | ||
| Coverglass 20×30 mm | Fisher | 12-548-5A | ||
| Coverglass 22×50 mm | Fisher | 12-545-E | ||
| 100 ul Capillary | VWR | 53432-921 | ||
| Glass Capillary for Needles | “Kwik-Fil” | World Precision Instruments | 1B100F-4 | |
| Needle Puller | Tool | Narishige | Model PP-830 | |
| microINJECTOR System | Tritech Research | MINJ-1000 | Scope, Stage, Manipulator | |
| Dissecting, with Fluorescence | Microscope | Nikon | SMZ800 | |
| Dissecting | Microscope | Nikon | SMZ645 |
References
- Stinchcomb, D. T., Shaw, J. E., Carr, S. H., Hirsh, D. Extrachromosomal DNA transformation of Caenorhabditis elegans. Mol. Cell. Biol. 5, 3484-3496 (1985).
- Mello, C. C., Kramer, J. M., Stinchcomb, D., Ambros, V. Efficient gene transfer in C.elegans: extrachromosomal maintenance and integration of transforming sequences. EMBO J. 10, 3959-3970 (1991).
- Kelly, W. G., Xu, S., Montgomery, M. K., Fire, A. Distinct requirements for somatic and germline expression of a generally expressed Caenorhabditis elegans gene. Genetics. 146, 227-238 (1997).
- Cao, S., Gelwix, C. C., Caldwell, K. A., Caldwell, G. A. Torsin-mediated neuroprotection from cellular stresses to dopaminergic neurons of C. elegans. J Neurosci. 25, 3801-3812 (2005).
- Caldwell, G. . Integrated Genomics: A Discovery-Based Laboratory Course. , (2006).
- Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
