Name: Standardize Hazırlık gentleMACS Dissociator kullanarak Fare Akciğer Doku Tek Hücre Cezalar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-02T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Öğrenin, gentleMACS dissociator kullanarak fare akciğer dokusundan tek hücre süspansiyonu hazırlama yöntemini. Bu protokol, yüksek canlılıkta hücre elde etmek için tekrarlanabilir bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Miltenyi Biotec GmbH, Almanya çalışanları.

Steril koşullar altında çalışmak için, bir laminer akış kaputun içindeki tüm adımları gerçekleştirmek için tavsiye edilir. 1. Malzemeler <ol><li> HEPES tamponu: 10 mM HEPES-NaOH pH 7.4, 150 mM NaCl, 5 mM KCI, 1 mM MgCl 2, 1.8 mM CaCl 2) </li><li> Kollajenaz D çözüm: kollajenaz D: 100 mg / ml (kollajenaz D&gt; 0.15 U / mg) Hepes, tampon </li><li> DNaz I çözüm: 20.000 U / ml DNaz I </li><li> PBS pH 7,2 </li><li> PEB tampon: 20 kısım 1 kısım BSA Stok Çözüm Çözüm Durulama autoMACS </li><li> Doku: 6 / 7 hafta eski komşu organlara yetişkin erkek BALB / C fare, ikinci elde edilen akciğer. </li><li> İsteğe Bağlı: CD11c mikro, MACS MS Sütunlar fare akciğer tek hücre süspansiyonu dendritik hücrelerin izolasyonu için MACS Ayırıcı </li></ol> 2. Akciğer dokusu Dissociating <ol><li> Eritrositler kaldırmak için PBS içeren bir Petri kabındaki doku durulayın. </li><li> 4.9 mL HEPES tamponu içeren bir gentleMACS C Tüp maksimum 450 mg akciğer dokusunda bir aktarın. </li><li> 2 mg / ml kollajenaz D. nihai konsantrasyonu 100 mcL kollajenaz Ge çözüm </li><li> 150 mg doku (40 U / ml DNaz I final konsantrasyon) veya 150-450 mg akciğer dokusunda için 20 mcL DNaz I (80 U / ml DNaz I final konsantrasyon) için 10 mcL DNaz I çözüm ekleyin. </li><li> Sıkıca C Tüp yakın ve gentleMACS Dissociator üzerine ekleyin. Sonra programı çalıştırın "m_lung_01". </li><li> 37 ° 30 dakika ° C'de otomatik rotasyon veya elle her 5 dakikada bir dönüm. </li><li> GentleMACS Dissociator örnek dönün ve "m_lung_02" programı çalıştırın. </li></ol> 3. Süzme <ol><li> 70 mikron mesh hücre süzgecinden kap değiştirerek filtre hücreleri toplamak için 50 ml tüp hazırlayın. </li><li> Sonra ikinci gentleMACS Programı tüp örnek malzeme dağıtımı bağlı olarak, biter, tüpün alt kısmında örnek malzeme toplamak için kısaca tüp santrifüj olabilir. </li><li> Uygun bir 1000 ul pipet kullanarak C Boru septum kapalı kap aracılığıyla hücreleri hücre süzgeç çıkarın ve bunları uygulamak. </li><li> RT 5 ml HEPES tamponu ile hücre süzgeç yıkayın. </li><li> 10 dakika 300xg 50 ml tüp hücreleri bir pelet Santrifüj. </li><li> Süpernatantı aspire ve PEB tampon istenen hacmi hücre pelletini tekrar süspansiyon haline getirin. </li></ol> Bölüm 4: Temsilcilik Sonuçları: <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig1.jpg" alt="Şekil 1"> Şekil 1: Akciğer disosiasyon gentleMACS ™ Dissociator% 92 canlı hücreler ile sonuçlandı. Ölü hücreler floresan propidium iyodür (PI (); PI boyama sol nokta arsa sağ nokta arsa) ile boyandı. <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig2.jpg" alt="Şekil 2"> Şekil 2 fare akciğer dokusunun canlı lökosit ve endotel hücreleri yüksek oranda gentleMACS Dissociator sonuçlarını kullanarak Ayrılma. CD45-PE ve CD146-FITC veya CD31-FITC kökenli tek hücre süspansiyonları ile boyandı ve flow sitometri ile analiz edildi. <img src="/files/ftp_upload/1266/1266figure2c.png" alt="Şekil 2c"> Şekil 3 fare akciğer dokusundan elde edilen tek hücre süspansiyonu CD11c-FITC ve Anti-mPDCA-1-APC fare CD11c düşük m-PUKÖ-1 + plazmasitoid DC'ler yanı sıra CD11c yüksek hücreleri algılamak için boyandı . <img src="/files/ftp_upload/1266/1266fig4.jpg" alt="Şekil 4"> Şekil 4 CD11c mikro, MiniMACS Ayırıcı ve iki MS Sütunlar kullanarak dendritik hücrelerin zenginleştirilmesi.

<ol><li>Swanson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flt3-Ligand%2C+IL-4%2C+GM-CSF%2C+and+Adherence-Mediated+Isolation+of+Murine+Lung+Dendritic+Cells%3A+Assessment+of+Isolation+Technique+on+Phenotype+and+Function%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Flt3-Ligand, IL-4, GM-CSF, and Adherence-Mediated Isolation of Murine Lung Dendritic Cells: Assessment of Isolation Technique on Phenotype and Function.</a> J. Immunol. 173, 4875-4881 (2004).</li>
<li>Vermaelen, K., Pauwels, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+and+simple+discrimination+of+mouse+pulmonary+dendritic+cell+and+macrophage+populations+by+flow+cytometry%3A+Methodology+and+new+insights%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+Part+A%22%5BJournal%5D)">Accurate and simple discrimination of mouse pulmonary dendritic cell and macrophage populations by flow cytometry: Methodology and new insights.</a> Cytometry Part A. 61A, 170-177 (2004).</li>
</ol>

Yazarlar, bu makalede kullanılan cihazı üreten Miltenyi Biotec GmbH şirketinin çalışanlarıdır.

Bu video, fare akciğer dokusunun ayrışma için yeni bir yöntem tanıtmak. Biz akciğer dokusunun mekanik ve enzimatik tedavi bir arada yaşayabilir lökosit ve endotel hücreleri yüksek oranda vermiştir olduğunu göstermektedir. Özellikle, doku mekanik parçalanması gentleMACS Dissociator tarafından elde edildi. Stator sistemi, yumuşak bir şekilde ayrışmaktadır doku gentleMACS C Tüpler bir rotor. Bu prosedür, cihazın program ayarları tarafından kontrol edilir. Ayarları, yüksek verim ve hücre canlılığı elde etmek için optimize e...

<table><tbody><tr><td>C Tüpleri</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/de/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Başlangıç Kiti</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSmix&amp;#8482; Tüp Rotatörü</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-090-753</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>autoMACS&amp;#8482; Durulama Solüsyonu</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-091-222</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Durulama_Solüsyonu.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Manyetikle Aktive Edilmiş Hücre Ayırma (MACS)&amp;#174; BSA Stok Çözeltisi</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-091-376</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stok_Çözeltisi.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stok_Çözeltisi.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD11c MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş No. 130-052-001</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD11c-FITC, CD11c-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-092-026130-091-830</td><td>&lt;a href=&quot;CD11c (PE) İnsan Dendritik Hücre İzolasyon Kiti

CD11c (PE) İnsan Dendritik Hücre İzolasyon Kiti, periferik kanda bulunan CD11c+ dendritik hücrelerin hızlı ve etkili bir şekilde izole edilmesi için tasarlanmış bir kit olup, manyetikle seçme (magnetic separation) prensibini kullanmaktadır.

Kiti kullanarak, taze veya dondurulmuş insan periferik kan mononükleer hücre (PBMC) örneklerinden yüksek saflıkta ve verimlilikte CD11c+ dendritik hücreler elde edilebilir.

Ürün Özellikleri:
- Yüksek saflıkta CD11c+ dendritik hücre izolasyonu
- Hızlı ve yeniden üretilebilir sonuçlar
- Minimal hücre kaybı
- Optimize edilmiş protokol

Uygulama Alanları:
Bu kit, bağışıklık sistemi araştırmaları, antijen sunumu çalışmaları ve dendritik hücrelerin fonksiyonel analizleri için idealdir.

Kit İçeriği:
- CD11c PE konjuge antikor
- Manyetik microbeadlar
- İzolasyon tamponları

Protokol Özeti:
1. PBMC'lerin hazırlanması.
2. CD11c PE antikorunun eklenmesi ve inkübasyonu.
3. Manyetik microbeadların eklenmesi ve bağlanması.
4. Manyetik ayırıcı kolon yardımıyla pozitif seçimin gerçekleştirilmesi.
5. İzole edilen hücrelerin yıkanması ve toplanması.&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-mPDCA-1-APC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-091-963</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx&quot;&gt;Anti-mPDCA-1 Antikoru (Konjugat)

Anti-mPDCA-1 antikorları, farelerde plasmasitoid dendritik hücrelerin (pDC) seçici izolasyonu için kullanılır. mPDCA-1, pDC'lerin yüzeyinde yüksek düzeyde eksprese edilen bir yüzey markerıdır.

Özellikler:
Anti-mPDCA-1 antikorları, fare pDC'lerinin izolasyonu için geliştirilmiştir. Bu antikorlar, mPDCA-1 yüzey markerını tanır ve bu sayede pDC'lerin diğer lökosit popülasyonlarından etkili bir şekilde ayrıştırılmasını sağlar.

Uygulamalar:
Bu antikorlar, özellikle şu alanlarda kullanılmaktadır:
- Fare pDC'lerinin izolasyonu
- pDC fonksiyonel analizleri
- İmmünoloji ve kanser araştırmaları

Ürün Detayları:
- Hedef: mPDCA-1
- Konjugat: (Belirtilen konjugasyon tipine göre; örn. APC, PE veya Manyetik Boncuklar)
- Tür: (Antikor türü; örn. Fare veya Tavşan)
- Uygulama: Manyetik hücre ayırma veya akış sitometrisi (flow cytometry)&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD146-FITC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-092-026</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx&quot;&gt;CD146 LSEC (Karaciğer Sinüzoidal Endotel Hücreleri) İzolasyonu&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>CD45-PE</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-091-610</td><td>&lt;a href=&quot;CD45 Antikor Konjuge Manyetik Nanopartiküller&quot;&gt;CD45 Antikorları ve Manyetik Boncuklar

CD45 (Löko-Sito-Marker), tüm lökositlerin yüzeyinde yüksek yoğunlukta bulunan bir glikoproteindir. CD45 antikorları, lökositlerin izolasyonu ve zenginleştirilmesi için geniş bir uygulama alanına sahiptir.

Miltenyi Biotec, CD45'e özgü yüksek kaliteli antikorlar ve bunlara bağlı manyetik boncuklar sunmaktadır. Bu ürünler, karmaşık hücre popülasyonlarından lökositlerin hızlı ve etkili bir şekilde ayrıştırılmasını sağlar.

Kullanım Alanları:
* Lökositlerin izolasyonu
* Negatif seçilim yoluyla non-lökosit hücrelerin saflaştırılması
* Hücre yüzeyi işaretleme ve analiz

Ürün Özellikleri:
* Yüksek özgüllük ve afinite
* Minimum hücre aktivasyonu
* Hızlı ve tekrarlanabilir sonuçlar

Miltenyi Biotec'in gelişmiş manyetik ayırma teknolojisi, yüksek hücre verimi ve saflığı ile birleşerek araştırma ve klinik uygulamalarda güvenilir çözümler sunar.&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Propidyum İyodür Çözeltisi</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Art 1000 Reach Pipet Uçları</td><td>Moleküler BiyoÜrünler</td><td>Sipariş no. 2079</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&lt;/a&gt;&lt;br/&gt;&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

standardize hazırlık gentlemacs dissociator kullanarak fare akciğer doku tek hücre cezalar

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Dokuların tek hücre süspansiyonları hazırlık hücre araştırmalarında birçok deneyler için önemli bir ön koşuldur. Bütün organlar dissociating süreci, tekrarlanabilir bir şekilde yüksek bir sayıda canlı hücreleri elde etmek için belirli parametreler gerektirir. GentleMACS Dissociator basit, pratik bir protokol ile bu görevi en iyi hale getirir. Cihaz fare akciğerler dahil olmak üzere çeşitli doku tipleri, verimli ama nazik ayrılma için optimize edilmiş, önceden programlanmış ayarları içerir. Bu yayında farelerden elde edilen akciğer dokusunda gentleMACS Dissociator kullanımı gösterilmiştir.

Belirli doku tiplerinin hücreleri Dissociating doku ajitasyon için belirli parametreler uygulanabilir kültürlenebilen hücrelerinin yüksek ses elde etmek için gereklidir. Miltenyi gentleMACS dissociator basit, pratik bir protokol ile bu görevi en iyi hale getirir. Bu yayında akciğer dokusunda bu cihazların kullanımı açıklanmıştır.

Standardize Hazırlık gentleMACS Dissociator kullanarak Fare Akciğer Doku Tek Hücre Cezalar

Dokulardan tek hücreli süspansiyonların hazırlanması, hücresel araştırmalardaki birçok deney için önemli bir ön koşuldur. ... süreci

Bu video protokolünde, akciğer dokusunun dissosiyasyonunun ardından, gentle max kullanarak yetişkin fare akciğer dokusunun nasıl dissosiye edileceğini göreceksiniz. Kollagenaz d ve DNase I varlığında, tek hücre süspansiyonları 70 mikronluk bir hücre süzgeci kullanılarak filtrelenir, santrifüj edilir ve ileri uygulamalar için süspanse edilir. Merhaba, ben Almanya'daki Mil Biotech'ten Melanie Mlu.Bugün size GenX disosiyasyon yöntemini kullanarak fare akciğer dokusundan tek hücreli süspansiyon hazırlama için tekrarlanabilir ve otomatikleştirilmiş bir prosedürü göstereceğim. Laboratuvarımızda bu prosedürü, lökosit veya endotel hücrelerinin hazırlanması için tek hücreli süspansiyonlar oluşturmak amacıyla kullanıyoruz. Tamam, hadi başlayalım.Protokole başlamadan önce, birkaç standart çözeltinin hazırlanması ve hazır bulundurulması gerekir. İlk olarak, Hebes tamponuna ihtiyaç duyacağız. İkinci olarak, mililitrede 100 miligram enzim ve hebes tamponu içeren bir kollajenaz D çözeltisi hazırlanmalıdır.Üçüncü olarak, mililitre başına 20.000 ünite dase one içeren bir dase one çözeltisi. Son olarak, iki yaygın tampon çözeltisi: pH 7.2'de tipik bir PBS tamponu ve AutoMax durulama çözeltisi ile BS

standardized-preparation-single-cell-suspensions-from-mouse-lung

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video gentleMACS Dissociator kullanarak fare dalak tek hücre süspansiyonları hazırlamak için otomatik doku ayrılma için basit, zaman tasarrufu sağlayan bir teknik açıklar.

Fare Dalak gentleMACS Dissociator Tek Hücreli Cezalar hazırlanması

Belirli doku tiplerinin hücreleri Dissociating doku aggitation için belirli parametreler uygulanabilir kültürlenebilen hücrelerinin yüksek ses elde etmek için gereklidir. Miltenyi gentleMACS Dissociator basit, pratik bir protokol ile bu görevi en iyi hale getirir. Bu yayında, nerual doku bu cihazların kullanımı açıklanmıştır.

Fare Sinir Doku Hücre Tek Cezalar Üretimi

Bu yazıda, fare ikamet akciğer mezenkimal kök hücreler (akciğer MSC), genişleme, karakterizasyonu ve immünomodülatör özellikleri analiz izolasyonu göstermektedir.

Hoechst İzolasyonu ve Karakterizasyonu Düşük CD45 Negatif Fare Akciğer Mezenkimal Kök Hücre

Fare akciğer dendritik hücreler yüksek oranda saflaştırılmış açıklanmıştır. Özgül ağırlık, geleneksel dendritik hücre alt izolasyon verilir.

Fare Akciğer Dendritik Hücrelerinin İzolasyonu

Bu video, akciğer adenokarsinomu hücrelerinin PD-L1 ekspresyonunu incelemek için akış sitometrik analizi için fare akciğer hücresi süspansiyonunun hazırlanmasını açıklar.

Flow Sitometrisi için Fare Akciğeri Hazırlığı: Flow Sitometrik Analiz için Akciğer Dokusundan Hücre Süspansiyonu Oluşturma

Bu çalışma, farklı memeli türlerinin testiküler dokusundan saflaştırılmış germ hücresi popülasyonlarının elde edilmesi için bir yöntemin standartlaştırılmasını açıklamaktadır. Mekanik testis ayrışmasını, Hoechst-33342 ve propidyum iyodür ile boyamayı ve FACS sınıflandırmasını birleştiren basit bir protokoldür ve erkek üreme biyolojisi karşılaştırmalı çalışmalarında geniş uygulamalar yapılmıştır.

Memeli Erkek Germ Hücrelerinin Çok Denekli Saflaştırılmasında Standart Bir Yaklaşım, Mekanik Doku Ayrılma ve Akış Sitometrisi ile

Bu çalışma iki önemli deneysel teknik sunmaktadır: yara kapanmasını değerlendirmek için bir murin yara modelinin oluşturulması ve hücresel canlılığı korumak için murin derisinden tek hücreli süspansiyonların hazırlanması.

Fare Yara Modelleri ve Tek Hücre Süspansiyonlarının Hazırlanması

Manyetik boncuk bazlı T hücresi zenginleştirmesi ve peptit: majör histouyumluluk kompleksi (MHC) tetramerleri aracılığıyla fare akciğerlerindeki nadir antijene özgü T hücresi popülasyonlarını izole etmek ve tanımlamak için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

Fare Akciğerlerinden Nadir Antijene Özgü T Hücrelerinin Peptit ile Tanımlanması: Majör Histouyumluluk Kompleksi Tetramerleri

Bu protokol, canlı bağışıklık ve bağışıklık dışı popülasyonların fare akciğerinden kararlı bir durumda ve grip enfeksiyonunu takiben izolasyonunu detaylandırır. Ayrıca epitelyal ve miyeloid hücre alt kümelerini tanımlamak için geçit stratejileri sağlar.

Fare Akciğerinden Canlı Miyeloid ve Epitel Hücre Popülasyonlarının İzolasyonu

Aşağıda açıklanan protokol, spesifik retinoid otofloresan kullanarak ve floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması kullanarak retinoid içeren hücreleri oldukça heterojen akciğer hücresi popülasyonlarından izole etmenin basit ve etkili bir yoludur.

Akciğer Retinoid İçeren Hücrelerin Hücre Ayıklama ile İzolasyonu

Bu protokol, hem sağlıklı hem de tümör taşıyan fare akciğer dokusundan yüksek kaliteli tek hücreli süspansiyonların izole edilmesi için ayrıntılı bir yöntem sunar. Bu protokol scRNA-dizi, akış sitometrisi analizi ve birincil hücre izolasyonu için uygulanabilir.

Akış sitometrisi ve tek hücreli RNA dizileme için tüm fare tümörü taşıyan akciğer dokusunun optimize edilmiş hazırlanması

Öğrenin, gentleMACS dissociator kullanarak fare akciğer dokusundan tek hücre süspansiyonu hazırlama yöntemini. Bu protokol, yüksek canlılıkta hücre elde etmek için tekrarlanabilir bir yaklaşım sunar.

Standardize Hazırlık gentleMACS Dissociator kullanarak Fare Akciğer Doku Tek Hücre Cezalar

Daha fazla video keşfet