Name: Havayolu Direnci Ölçümleri ve Fare Bronkoalveolar Lavaj Sıvısı Örnekleme için, geri dönüşümlü, Non-invaziv Yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-04-13T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: Öğrenin, farelerde tekrarlanabilir oral entübasyon yöntemiyle havayolu hiperreaktivitesi ölçümleri ve bronkoalveoler lavaj sıvısı örnekleme tekniklerini. Bu yöntem solunum fizyolojisi araştırmalarında ileri düzey veri toplama olanağı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. W. Mintzer fiberoptik orotrakeal entübasyon gerçekleştirmek için öneri için teşekkür ederim. Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe U19AI070973, R01AI057696, K02HL75243 ve R01HL082487 tarafından desteklenir.

Allerjen: <ol><li> C57BL / 6 fareler, yaş 4-8 hafta, derin genel anestezi elde etmek için 10 dakika boyunca oksijen buhar karışımı% 3.2 izofluran ile tasfiye hava geçirmez bir pleksiglas odasında anestezi. </li><li> Intranazal allerjen sorunları (45μL OVA (22.5 mikrogram) ve 7μL A. oryzae (7 mg), PBS içinde) olmak üzere toplam yedi ardışık uygulamaları, Perşembe ve Pazar günleri, her Salı, yönetilmektedir. </li></ol> Anestezi: <ol start="3"><li> Önce her bir allerjen, ve 7. meydan, fare, bir ışık hariç yuvasına yerleştirme önce 48 mg / kg etomidat (2 mg / ml) intraperitoneal yönetilmektedir. </li><li> Basınç arka pençeleri (5-10 dk) başvurusu üzerine gözlemlenebilir nörolojik yanıt eksikliği tespit edilene kadar Konu priz kalır. </li></ol> Entübasyon: <ol start="5"><li> ~ 37 ° C vücut çekirdek sıcaklığı, hipotermi önlemek için işlem boyunca konuya odaklanmış olmalıdır bakım sağlamak için mesafe muhafaza radyant ısı lambası. Rektal termometre kullanılan ısı kaynağı ne olursa olsun euthermia onaylamak için başlangıçta en az kullanılmalıdır. KRİTİK ADIMLAR deney hayvanları tarafından alınan tüm sıvı ve aletler steril olmalıdır; prosedürleri sıkı aseptik koşullar altında yapılmalıdır. Anestezi altında iken uzun süreli hipotermi hayvanların anormal veri ve / veya ölüme yol açacaktır. Yeterlilik tüm invaziv prosedürler ile canlı hayvanlar üzerinde çalışmaya başlamadan önce kadavra hayvanlar kullanarak geliştirilmelidir. Oftalmik yağ, genel anestezi altında hayvanların korneal abrazyon önlemek için kullanılmalıdır. </li><li> Anestezi fareler yuvadan kaldırılır ve Pletismograf masaya yatış pozisyonu (ventral yüzü yukarı), yerleştirilir, 45 derecelik bir açıyla ayarlanabilir. </li><li> Tablo çevreleyen bir lastik bant yerine oturana kadar bu konuda güvence altına almak için en üst satırı kesici dişler arkasına eklenir. Sağ elinde cımbız ile, kavrama, genişletmek ve sol elinde depressor metal bir yerde güvence önce ağız dil kaldırın, böylece entübasyon için engelsiz bir havayolu sağlar. </li><li> Angiocatheter içeri sokulur ve bir ışık kaynağına bağlı bir 0.8 mm çaplı fiberoptik konu, ucu ötesine 10 mm genişletilmiş. Depressor sol el ile sakinleştirdi olduğu gibi, ses tellerine görüntülenmiştir kadar fiberoptik iplik ışıklı sonunda sağ el ile ağız boşluğu ve yutak yoluyla yönlendirilir. Parçacığı sonra hareketli ses tellerinin ve trakea içine direk görüş altında geçti, kabloları maksimum açıkken meydana zaman aşımına uğradı. </li><li> Kateter ucu trakeanın orta kısmı içinde yatıyor kadar angiocatheter sonra trakea içine fiberoptik konu geçti. 17-22 gram fareler için, bu konnektör ve konu s alt çene ve kafatası aşırı arasındaki görünür kalan 10 mm kateter segmentine karşılık gelir. Kateter geçirilir gerçek miktarı, ilgili boyutu ve genetik arka plan 2-3 kateterize farelerin trakea doğrudan muayene ile tespit edilmelidir. </li><li> Başparmak ile konnektörün hemen aşağıdaki oklüzyon sonlandırmak düzenli derin nefes (göğüs kafesi ve karın ritmik geziler) gözlemleyerek fiberoptik konu kaldırılır ve başarılı entübasyon teyit edilir. Boğulma tepkisi ne olursa olsun, başparmak tıkanıklığı, düzensiz nefes, ya da nefes almada zorluk, diğer belirtileri malpositioning ve genellikle özofagus entübasyon işaret angiocatheter göstergesidir. KRİTİK ADIM Arıza hızlı bir özofageal entübasyon tersine çevirmek için öldürücü olabilir. Özofageal entübasyon şüpheleniliyorsa, kateterin kolayca çıkartılabilir olmalıdır ve hayvanın normal solunum paterni devam ediyor sonra reinserted. Etomidat, mevcut tüm kemirgen anesteziklerin olarak tercih edilen anestezi, bu ajan en kardiyovasküler toksisite (hipotansiyon, aritmi, kardiyak arrest) kışkırtır. </li><li> Alt Pletismograf tablo çalışma tezgahı ve hava vantilatör port karşı karşıya kadar konu 180 ° dönüş paralel kadar. Ventilatöre bağlanmadan önce yan hayvan açın. </li><li> Torakoabdominal gezi hava geçirmez bir bağlantı sağlamak ve ventilatör (150 solunum / dakika, 9 ml / g tidal volüm,% 100 oksijen işleyişi) aktive sonra, ventilatör ile ayak görüldüğü zaman, başarılı entübasyon daha da teyit edilmiştir. </li></ol> İntravenöz hattı: <ol start="13"><li> A 10 mm konik açısı içine bakacak şekilde, 27ga iğne şırınga konektöründen ücretsiz eritme, ve steril forseps ve hemostat kullanarak orta noktada iğne 90 ° bükme yoluyla kaldırılır. Olmayan Eğimli sonunda IV enjeksiyon portu önde gelen PI10 boru bağlı. </li><li> Potansiyel önlemek içinölümcül hava embolizasyon, tüp ve iğne 37 ile tasfiye ° C, 1 ml şırınga ile% 0.9 NaCl. 15ml bir santrifüj tüpüne kap içine açılan bir delikten itti 27ga iğne, enjeksiyon portu oluşur. Kap, böylece hava iğne sürüklenmemiş ve damar içine enjekte edeceğini olasılığını azaltarak, iğne ucu sürekli batık olduğunu tuzlu gibi ile doludur. </li><li> Isı lambası altında kalan fare ile, iğne kaudal aşırı kuyruk paralel ve lateral ven üzerinden uyumlu hale gelmiştir. Damar s uzunluğu boyunca cranially yönettiği ve bend subkutan itti iğne, cilt altında biraz çalıştırmak. Başarılı IV yerleşimi şırınga pistonu hafif çekme ile IV tüp içine kan backflow gözlemleyerek teyit edilir. Ayrıca, kuyruk ven içine 50-100 ul salin enjeksiyonu üzerine IV hattı üzerinden akışı engelsiz olmalıdır. Ara sıra kuyruk damarları stably kanüle olamaz. Bu gibi durumlarda, fare, diğer tarafında ve IV genellikle zorlanmadan erişilebilir diğer kuyruk 180 derece dönebilir. </li><li> Kurulumdan ısı lambası çıkardıktan sonra, konu daha sonra 4 kelepçeler uygulaması ile hava geçirmez olarak güvenli, Pletismograf içine alınır. KRİTİK ADIM ısı lambası kalmasına izin Pletismograf odasında hava ısı ve potansiyel olarak sağlanmalıdır iv iğneler ve çözümler R RS Sterilite sonraki ölçümler değiştirmez. Iğne Sterilizasyon iv yerleştirme öncesinde steril serum fizyolojik ile durulama ve kızarma% 70 etanol ile çeker ve kızarma tarafından gerçekleştirilir. Ayrıca, kuyruk% 70 etanol veya iv ekleme önce izopropil alkol ile temizlenmesi gerekir. </li></ol> Havayolu direnci ölçümleri: <ol start="17"><li> Tepe direnci katsayısı sürekli kantitatif tarafından belirlenir DPT / V (DPT trakeal basınç değişim ve V hava akışı) eşit akciğer hacmi puan (% 70 tidal hacim). DPT, trakeal angiocatheter bağlı bir basınç dönüştürücü kullanarak belirlenir. V belirlemek için, Pletismograf basınç değişimleri, fizyolojik aralıkları üzerinde çalışılan hacim değişiklikleri kalibre edilir. Preamp modül tarafından hesaplanan zamanla Pletismograf hacmi, diferansiyel, V. istikrarlı bir temel oluşturma sonra R RS (&lt;3 dakika içinde% 5 varyasyon), ardışık beş artan dozlarda (hacim = 2 g / ml vücut ağırlığı) asetilkolin klorür (0.058, 0.18, 0.59, 1.58 ve 5.8 mg / kg vücut ağırlığı, pH 7.4,% 0.9 tuzlu su, buz ve her enjeksiyon öncesinde el ısındı idame) konsantrasyonları ile bir saniye içinde, iv enjekte edilir başlangıca R RS döndükten sonra uygulanan başlangıç ​​direnci üç katına (yaklaşık 12 cm H 2 O x ml -1 x sn, yani yaklaşık 4 cm tipik temel üstünde hava yolu direnci% 200 oranında artış kadar, sonraki her bir doz H 2 O x ml -1 x sn) elde edilir. Bazal değerler (PC 200 adlandırdığı) R RS% 200 artışa neden vücut ağırlığının mg / g, provokatif konsantrasyon Ach Ach-R RS doz-yanıt eğrilerinin matematiksel enterpolasyon ile hesaplanır. </li><li> PC 200 değerleri, serbest elemanları ulaştı ve Pletismograf sökmeye edilmiştir. Maksimum 5 Ach artan dozlarda verilir. Ach konsantrasyon aralığı yukarıda verilen en naif fare suşları için PC 200 değerleri elde etmek için uygundur. KRİTİK ADIM yaklaşık 4 cm H 2 O x ml -1 x saniye 30 saniye boyunca direnç monitör temel üzerine kurulmuştur, normal serum fizyolojik 60 mcL iv anestezi uygun düzlemde elde edildiğini teyit etmek için enjekte edilebilir. Tam anestezi ile, direnç önemli bir değişiklik olacak, bacaklarda ya da kuyruk direnci ya da hareket bir artış fiziksel sıkıntının bir işareti temsil eden ve ek anestezik ihtiyacı gösterir. </li><li> Kuyruk ven IV çıkarın ve sonra trakeal kanül yerinde tutarak solunum yolu bakımı, ventilatör hayvan kesmek. Ara sıra hayvanların hemen spontan solunum devam etmek için başarısız. Bu gibi durumlarda, solunum, göğüs kafesi hafifçe masaj yaparak teşvik edilebilir. KRİTİK ADIM spontan solunum kurtarma odasına transfer etmek için önce kurulmuş olması gerekir, aksi takdirde ölüm meydana gelir. </li><li> Spontan solunumun yeniden başlatılması üzerine, fareler 37% 100 O 2 ve bakımı ile temizlenir bir oda, bir yerde trakeal kanül ile aktarılır ° C bir ısı lambası kullanarak. 15-20 dakika içinde, fare, güçlü bir nefes ve trakeal kateter kaldırılır ve hayvanlar olabilir ve bu noktada, ekstremitelerde hareket etmeye başlayanafely düzenli kafeslerine aktarılır. KRİTİK ADIM havayolu kolayca asetilkolinin indüklediği hiper salivasyon nedeniyle bilinçsiz bir fare tıkalı ve havayolu fizyolojik ölçümler aşağıdaki anestezi farelerde boğulmaya bağlı ölüm için önemli bir nedenidir. Bu nedenle, trakeal kanül uyandırılamadığı ve hiper-salivaton sona kadar çıkarılmamalıdır kadar, bronkoalveoler lavaj uygulanan farelerde bile yerinde kalmalıdır. </li></ol> Bronkoalveoler lavaj: <ol start="21"><li> Bronkoalveoler lavaj sıvı toplanması, farelerin yeterli öğürme refleksi (kurtarma odasında yerleştirildikten sonra ~ 20 dk) kurtarabilirsiniz zaman güvenlidir. Öğürme refleksi angiocatheter hafifçe içe ve dışa doğru kayar tarafından değerlendirilir; açık öksürük ya da mücadele öğürme refleksi geri olduğunu göstermektedir. Izin KRİTİK ADIM bir iyileşme süresi çok uzun süreli bireysel farelerden alınan BAL dönüş verimliliği büyük ölçüde azalacak; bu nedenle, önerilen 20 dakikalık dinlenme dönemi takip öğürme refleksi, her birkaç dakikada izlenebilir olmalıdır . Eğer fareler kısmi uyanışı nedeniyle lavaj işlemi tolere edemeyen,% 3.2 izofluran buhar anestezi kullanılabilir. </li><li> ~ 30 ° sol lob akciğer yönlendirilmiş sürekli bir bend ile metalik entübasyon kılavuz tel (0,5 mm OD), angiocatheter eklenir. Kılavuz tel ve kateter angiocatheter (hub hariç) sadece 1mm tarafından ön dişlerin ötesine uzanan öyle ki, akciğer sol lob birlikte gelişmiş olan. KRİTİK ADIM Arıza sol akciğer izole etmek için büyük ölçüde hayvan ölüm olasılığını artırırken, verim düşürecektir . Bakım, kılavuz telin ucu açık angiocatheter sonuna kadar geçmez emin olmak için alınmalıdır. Çıkıntılı metal ucu ile angiocathether ilerlemek bir trakeal laserasyon ve trakea rüptürü nedeniyle ölüme yol açabilir. </li><li> Angiocatheter yerinde tutmak, kılavuz tel kaldırılır ve 300 mcL PBS (pH 7.4, steril) 1 ml şırınga ile sol akciğer temizlendi. Hemen negatif basınç oluşturmak için şırınga pistonu çizerken, angiocatheter yoğun akciğer masaj yaparken kaldırıldı (3 s) yavaş yavaş, sonra. 100-200 mcL BAL dönüş bekleniyor. </li><li> 37 ° C,% 100 O 2 odasının sürekli toraks masaj yaparken. Lavaj farelerin hemen geri Sol tarafına yerleştirin fareler tamamen düzelene kadar (~ 20 dk). Hayvanlar kafesler içine yerleştirilir. </li></ol> ZAMANLAMA: Fare başına, bütün prosedürü yerine getirmek için 1 saat daha artık almalıdır: 3-4, 5-10 dakika Adım; Adımlar 5-21, 10 dk; Adım 22, 20-30 dakika; Adımlar 23-24. 10 dk. Artmış yeterlilik ile protokol şaşırtıcı konuları, 3 fareler / saat işlenebilir. Temsilcisi Sonuçlar: PC 200 değerleri tedbirler ile belirlenen farelerde Havayolu hiperreaktivite, aktivasyonu ve sitokin IL-135-7 T hücreleri ve sekresyon akciğerlere işe bir sonucudur. Böylece, havayolu hiperreaktivite allerjen ile havayolu meydan kaçınılmaz bir sonucu değildir, ama çok sağlam bir T hücre bağışıklık bölmesi ve T hücre yanıtları için tekrarlanan alerjene maruz ortamında geliştirmek için gereken süreyi bağlıdır. Şekil. 2a, havayolu hiperreaktivite, altıncı meydan sonra başka önemli bir artış ile 5 allerjen zorlukları sonra geliştirilen temel değerleri, önemli ölçüde kıyasla daha düşük PC 200 değerler olarak tanımlanır. Nedenlerden dolayı tam olarak anlaşılmış değildir ilk allerjen (Şekil 2a), hava yolu reaktivitesi sonra (PC 200 değerleri artan) azalmıştır. Benzer eğilimler aynı fareler (Şekil 2b) Ach doz cevap eğrileri karşılaştırılarak açıktır. Ancak, tam havayolu hiperreaktivite beşinci allerjen sonra aniden gelişir burada görülür, öyle ki fareler 30 kat daha fazla olmak, dördüncü ve altıncı sorunları arasında Ach daha duyarlı. Birlikte, AHR en güvenilir ölçümler altı allerjen zorlukları (12 gün) sonra elde edilen bu bulgular gösterir; önceki timepoints ölçümleri, son derece değişken veri verim muhtemeldir. Araç intranazal (tuzlu su) ile tekrar tekrar meydan Fare havayolu hiperreaktivite geliştirmek ve verilen Ach tüm dozlarda, R RS ölçümleri önemli ölçüde (Şekil 3 ve veri gösterilmemiştir) bazal değerlerinden farklılık gösterebilir yok. Önce sağlam AHR ortaya çıkması, allerjen ile indüklenen hava yolu baskın hücre tipi nötrofil (Şekil 4) idi. AHR eğilim benzer şekilde, ancak, eozinofili yavaş yavaş tekrar tekrar allerjen ve af BAL sıvısında eozinofil sayısal baskın hücre tipi oldu güçlendirdineutrophis sayıları belirgin bir düşüş (Şekil 4) ile tesadüf ter altıncı zorluk,. Makrofajlar başlangıçta ilk birkaç allerjen zorluklarla sayısı artmış ve bundan sonra bolluk içinde dalgalanmıştır. Lenfosit bolluk ne olursa olsun, allerjen zorlukların sayısını önemli ölçüde değiştirebilir ve paradoksal model birincil önem verilen, genellikle BAL sıvısında az sayıda hücre vermedi. Ne allerjen ne BAL örnekleme alan farelerde Havayolu direnci ölçümleri deney 17 gün içinde değişiklik yoktu. Havayolu fizyolojisi ölçümler veya allerjen yokluğunda tekrar BAL sıvısı örneklemesi yapılan ve 5 gün (veriler gösterilmemiştir) sonra da devam etmedi solunum yollarında sadece gelişmiş bir nötrofil ve makrofaj işe gösterdi. Bu bulgular, allerjen meydan farelerde gözlenen belirgin nötrofili büyük ölçüde usul ve antijen değil sonucu olduğunu göstermektedir. Kontrol, PBS-meydan fareler, hava yolu direnci ölçümleri de zaman içinde önemli ölçüde değişiklik yoktu. Gelişmiş makrofaj ve nötrofil değil, BAL sıvısında eozinofil, istihdam da bu farelerin, sadece tekrarlanan BAL sıvısı örneklemesi (Şekil 4 b, d) alan farelerde gözlenen bu değişikliklerin benzer görüldü. Hep birlikte, bu veriler, alerjik (eozinofilik) hava yolu inflamasyonu ve AHR indüksiyon, havayolu farklı manipülasyonlar allerjen önemi alt çizgi değil. Burada kullanılan proteinaz benzer intranazal allerjenler kullanarak benzer sonuçlar beklenebilir. Ancak, birçok araştırmacılar alerjik akciğer hastalığı neden ovalbumin kullanın. Ovalbumin intradermal veya intraperitoneal emişli (1-2 hafta) uygun bir süre havayolu hiperreaktivite de dahil olmak üzere, bir alüminyum tuzunun, sağlam bir astım fenotipi çöktürülmüş sonra, çözünür ovalbumin ile tek bir intranazal meydan sonra 24 saat içinde beklenebilir. <img src="/files/ftp_upload/1720/1720fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 kemirgen Pletismograf Fotografik gösterimi, havayolu fizyolojisi ölçüm kayıt hemen önce. <img src="/files/ftp_upload/1720/1720fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Hava yolu direnci ölçümleri. A) istatistiksel amaçlar için, antilog PC 200 değerleri rapor edilmiştir. Ilk meydan okuma ve sonraki düşüş daha fazla zorluklar sonra antilog PC 200 yılında büyük bir artış dikkat edin . B) Solunum sistemi direnci (RRS):, altıncı ve yedinci zorlukları sonra Ach-RRS doz-yanıt eğrisinin dikliği unutmayın. Hata çubukları SEM temsil eder. <img src="/files/ftp_upload/1720/1720fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Temsilcisi gerçek zamanlı solunum sistemi direnci (R SC) Ach ardışık IV dozları alan fare meydan naif bir (A) ve (B) 6X allerjen iz. Doz değerleri mg / kg birimlerinde sunulmaktadır. <img src="/files/ftp_upload/1720/1720fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4 7 ardışık intranazal zorlukları ile tedavi edilen farelerde sol akciğerlerden edilen bronkoalveoler lavaj örneklerinde Diferansiyel bağışıklık hücre sayımı . Allerjen (A) veya PBS (B) ile tedavi edilen farelerde bağışıklık hücrelerinin yüzde (%) bolluğu. Allerjen (C) veya PBS (D) ile tedavi edilen farelerden alınan bağışıklık hücrelerinin toplam sayısı. Sem - Değerler ortalama + / olarak gösterilir.

<ol><li>Hamelmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+measurement+of+airway+responsiveness+in+allergic+mice+using+barometric+plethysmography%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Noninvasive measurement of airway responsiveness in allergic mice using barometric plethysmography.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 156, 766-775 (1997).</li>
<li>Adler, A., Cieslewicz, G., Irvin, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unrestrained+plethysmography+is+an+unreliable+measure+of+airway+responsiveness+in+BALB%2Fc+and+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Unrestrained plethysmography is an unreliable measure of airway responsiveness in BALB/c and C57BL/6 mice.</a> J. Appl. Physiol. 97, 286-292 (2004).</li>
<li>Bates, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+and+misuse+of+penh+in+animal+models+of+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The use and misuse of penh in animal models of lung disease.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 31, 373-374 (2004).</li>
<li>Lundblad, L. K., Irvin, C. G., Adler, A., Bates, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reevaluation+of+the+validity+of+unrestrained+plethysmography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A reevaluation of the validity of unrestrained plethysmography in mice.</a> J. Appl. Physiol. 93, 1198-1207 (2002).</li>
<li>Grunig, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Requirement+for+IL-13+independently+of+IL-4+in+experimental+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Requirement for IL-13 independently of IL-4 in experimental asthma.</a> Science. 282, 2261-2263 (1998).</li>
<li>Corry, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Requirements+for+allergen-induced+airway+hyperreactivity+in+T+and+B+cell-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Requirements for allergen-induced airway hyperreactivity in T and B cell-deficient mice.</a> Mol. Med. 4, 344-355 (1998).</li>
<li>Corry, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin+4%2C+but+not+interleukin+5+or+eosinophils%2C+is+required+in+a+murine+model+of+acute+airway+hyperreactivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Interleukin 4, but not interleukin 5 or eosinophils, is required in a murine model of acute airway hyperreactivity.</a> J. Exp. Med. 183, 109-117 (1996).</li>
<li>Amdur, M. O., Mead, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+of+respiration+in+unanesthetized+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mechanics of respiration in unanesthetized guinea pigs.</a> Am J Physiol. 192, 364-368 (1958).</li>
</ol>

Çalışmada, astım ve diğer çeşitli hava yolu obstrüktif hastalıkları, biyomedikal araştırmanın aktif ve genişleyen bir alan oluşturmaktadır. Astım ile ilgili deneysel araştırmaların önemli bir bileşeni, değişen koşullar altında havayolu boyutu değişiklikleri ölçmek için kapasite. Provokatif meydan okuma, kurallı bir özelliği, astım ve ilgili akciğer hastalıkları ve solunum yolu olarak adlandırılan hava yolu aşırı duyarlılığının bir özellik yanıt aşırı hava yolu daralması, nefes darlığı ve diğer belirtiler, ölüm dahil önd...

Havayolu fizyolojisi ölçüm yazılımı (Rescomp) özel hazırlanmış (415-519-4371 Millennium Premier Grup) oldu. Veriler, Pentium III işlemci (Intel, Inc. Santa Clara, CA) ve dijital sinyal dönüştürücü 17-pin analog (National Instruments, # PC-LPM16) ile donatılmış, Windows XP çalıştıran bir PC iş istasyonu kullanılarak analiz edildi. Buxco, Inc. Wilmington, NC, küçük bir hayvan havayolu fizyolojisi iş istasyonu özel (Millenium Premier Group) piyasada bulunan basınç dönüştürücüleri (parça no TRD5700 ve TRD4510), preamp modülleri (# MAX2270), kasa (part # MAX1320 kullanarak toplandı ) ve özelleştirilmiş bir küçük hayvan Pletismograf. 0.5mm dış çaplı ışık kaynağına bağlı fiber optik iplik, (Cole Palmer Aydınlatıcı, 41.722 serisi) Vantilatör (Harvard Apparatus Mouse Vantilatör, # 687) 10 mm, 27ga iğne (BD Biosciences, kedi yok. 309.602) Isı lambası 1 ml şırınga (BD Biosciences, kedi yok. 305.109) 4 kelepçeleri (Pony 3200 bahar kelepçe) Entübasyon kılavuz için 0,5 mm dış tel Hemasitometre SuperFrost / plus mikroskop lamı (Fisher kedi yok. 12-550-15) Shandon Filtre Kartlar (Termo kedi yok. 5.991.022) Diferansiyel hücre slayt leke (Fisher kedi yok. 122.911) Işık mikroskobu (Leica) Sitospin 3 (Shandon) 20 GA, 1.25 inç ProtectIV intravenöz kateterler (Smith Tıp) 0,5 mm polimer fiber optik (Edmund Optik # NT02-532).

havayolu direnci Ölçümleri ve fare bronkoalveolar lavaj sıvısı Örnekleme için, geri dönüşümlü, non-invaziv yöntemi

A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice

Havayolu hiperreaktivite (AHR) ölçümleri ve bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvısı örneklemesi, deneysel astım modelleri için gerekli olan, ama aynı hayvan gibi ölçümler elde etmek için tekrarlanır prosedürleri genellikle mümkün değildir. Burada, farelerde AHR ve bronkoalveoler lavaj sıvısı örnekleri tekrarlanan ölçümler elde etmek için protokoller göstermektedir. Fareler tedavi güçlü bir allerjen veya plasebo ile 14 gün boyunca intranazal yedi kez meydan vardı. Ilk meydan okuma öncesinde ve her intranazal meydan takip eden 24 saat içinde, aynı hayvanlar sözlü entübe ve mekanik ventilasyon, anesteziye edildi. Sahte ve alerjene meydan hayvanlar arasında asetilkolin (Ach) klorür intravenöz doz artırarak yol açtığı solunum sistemi direnci (RRS) doz cevap eğrileri karşılaştırılarak değerlendirilir AHR, tespit edilmiştir. Daha sonra, böylece hava yolu hücreleri bu diferansiyel numaralandırma yapılabilir ve aynı entübasyon ile, sol akciğere lavaj oldu. Bu çalışmalar AHR ve BAL sıvı toplanması tekrarlanan ölçümler aynı hayvanların mümkün olduğunu ortaya koyuyor ve bu maksimum hava yolu aşırı duyarlılığı ve havayolu eozinofili allerjen başlatılması 7-10 gün içinde elde edilir. Bu roman tekniği uzunlamasına deney için gerekli olan farelerin sayısını önemli ölçüde azaltır ve çeşitli kemirgen türleri, hastalık modelleri ve havayolu fizyolojisi aletleri için geçerli.

Kemirgen solunum fizyolojisi ve solunum yolu inflamatuar hücrelerin örnekleme tekrarlanan ölçümler arzu edilir, ancak genellikle mümkün değildir. Burada sözlü havayolu inflamatuar hücrelerin havayolu hiperreaktivite ve örnekleme tekrarlanan ölçümler izin verir fareler Entübasyon için tekrarlanabilir bir yöntem açıklanmaktadır.

Havayolu Direnci Ölçümleri ve Fare Bronkoalveolar Lavaj Sıvısı Örnekleme için, geri dönüşümlü, Non-invaziv Yöntemi

Hava yolu hiperreaktivitesi (AHR) ölçümleri ve bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvısı örneklemesi, deneysel astım modelleri için temel teşkil etmektedir, ancak tekrarlanan...

Bu prosedüre başlamadan önce, farelere intraperitonal olarak enjekte edilen tomaksid ile anestezi uygulanır. Ardından hayvanlar bir masaya yerleştirilir ve trakeaya oral yolla 20 gauge bir kateter yerleştirilir. Entübe edilen fareler mekanik bir ventilatöre bağlanır ve kuyruk veninden intravenöz bir hat oluşturulur.Ardından fareler, iki basınç dönüştürücüye bağlı bir rodent SIGGRAPH içine yerleştirilir. Elektronik sistem, asetilkolin challenge'ı sırasında solunum sistemi direncinin sürekli ölçülmesine olanak tanır. Ventilatör ve intravenöz hat bağlantısı kesildikten sonra, trakeal kateter sol akciğere ilerletilir; buraya kateter aracılığıyla saline enjekte edilir ve ardından geri çekilerek lavaj yapılır.Merhaba, ben Baylor College of Medicine Tıp Bölümü'nden Simone Phar. Bugün size, havayolu mekaniğinin ve bronkoalveoler lavaj sıvısının tekrar tekrar toplanabilmesine olanak sağlayan farelerde oral entübasyon işlemini göstereceğiz. Bu prosedürü, astımın deneysel bir modeli olan deneysel alerjik hastalığı incelemek için kullanıyoruz ve bu prosedür diğer uygulamalara da uyarlanabilir.Hadi başlayalım. Bu prosedüre başlamak için, fareye intraperitonal yolla kilogram başına 48 miligram ketamin enjekte edilerek derin anestezi uygulanır. Fare daha sonra sakin kalmasını sağlamak için yumuşak ışıklı bir kutuya yerleştirilir.Bu amaçla, bezle örtülmüş temiz bir fare kafesi kullanılabilir. Beş ila 10 dakika sonra, parmak sıkma testiyle hayvanın tamamen anestezi altında olduğu onaylandıktan sonra, hayvanı yan yatırın. Küçük bir masa üzerinde, 45 derecelik bir açıya ayarlanmış şekilde ventral tarafı yukarı bakacak şekilde yerleştirin. Deneyi sabitlemek için, üst diş sırasının arkasından masayı çevreleyen bir lastik bant ENC takın.Fareyi sıcak tutmak için sağ elinizle bir ısı lambası kullanın. Dili ağızdan tutup uzatmak ve kaldırmak için cımbız kullanın. Ardından sol elinizle tuttuğunuz metal bir dil basacağını nazikçe yerleştirin.Bu işlem, hava yolunun açık kalmasını ve entübasyon için ses tellerinin görüntülenmesini sağlayacaktır. Ardından, bir ışık kaynağına bağlı 0,8 milimetre çapındaki fiber optik ipliği anjiyo kateterinden içeri yerleştirin ve ucun 10 milimetre ötesine kadar uzatın. Sol elinizle dil basacağını tutarken, sağ elinizi kullanarak fiber optik ipliğin aydınlatılmış ucunu, ses telleri görüntülenene kadar ağız boşluğu ve farenks boyunca yönlendirin.Ardından, doğrudan görselleştirme altında ve kordların maksimum düzeyde açık olduğu zamanı kollayarak, ipliği hareketli vokal kordlardan geçirip trakeaya iletin. Şimdi, kateter ucu trakeanın orta kısmında yer alana kadar anjiyo kateterini fiber optik iplik üzerinden trakeaya geçirin. 17 ila 22 gram ağırlığındaki bir fare için bu, kateterin 10 milimetrelik bir segmentinin ağız dışında kalmasına karşılık gelir.Başarılı entübasyonu onaylamak için fiber optik ipliği çıkarın. Konnektörün başparmakla kapatılmasını takiben anında sonlanan düzenli derin nefesleri gözlemleyin. Pletismograf tablasını çalışma tezgahına paralel olana kadar indirin ve deneyi, hava ventilatör portuna bakacak şekilde 180 derece döndürün.Hayvanı ventilatöre bağlamadan önce yan tarafına çevirin. Hava sızdırmaz bir bağlantı sağlayın ve ventilatörü etkinleştirin. Daha sonra abdominal ekskürsiyonun ventilatörle eşzamanlı olduğu gözlemlendiğinde intubasyonun başarılı olduğu doğrulanır.İntravenöz hat için iğneyi hazırlamak amacıyla, 10 milimetrelik 27 gauge bir iğneyi şırınga konektöründen çıkarın ve eğimli ucu açının içine bakacak şekilde orta noktasından 90 derece bükün. Eğimli olmayan ucu, IV enjeksiyon portuna giden PE 10 tübe bağlayın. Potansiyel olarak ölümcül hava embolizasyonunu önlemek için.Bir mililitrelik şırınga aracılığıyla 37 °C'lik %0,9 sodyum klorür ile tüpleri ve iğneyi yıkayın. Enjeksiyon portu, 15 mililitrelik bir santrifüj tüpünün kapağına açılmış bir delikten geçirilen 27 gauge bir iğneden oluşur. Kapak, iğnenin ucunun sürekli olarak batık kalmasını sağlayacak şekilde salinle doldurulmuştur; böylece iğneye hava girmesi ve intravenöz olarak enjekte edilmesi olasılığı azaltılmıştır.İğneyi kuyruğun kodal ucuna hizalayın. Lateral vene paralel ve üzerinde tutun. İğneyi yönlendirirken hafifçe cildin altından ilerletin.Damar boyunca kranial yönde ilerleyin ve deri altına doğru bükülme noktasına kadar itin. Başarılı bir IV yerleşimini onaylamak için şırınga pistonunu hafifçe geri çekin. IV tüpüne doğru kan geri akışını görmeniz gerekir.Ayrıca, kuyruk venine 50 ila 100 µL serum fizyolojik enjeksiyonu sonrası IV hattı boyunca akış engelsiz olmalıdır. Isı lambası düzenekten kaldırıldıktan sonra, denek plazmografa yerleştirilmeli ve dört klemens uygulanarak hava sızdırmaz şekilde sabitlenmelidir. Isı lambasının kaldırılması, plazmograf haznesindeki havanın ısınmasını ve böylece solunum sistemi direncinin (RRS) sonraki ölçümlerinin potansiyel olarak değişmesini önlemek için önemlidir. Solunum sistemi direnci veya RRS, bölümün sürekli miktar tayini ile belirlenir.Eşit akciğer hacimleri noktalarında hava akışına göre hava yolu basıncındaki değişim veya V'ye göre delta P. Delta P, trakeal anjiyo kateterine bağlı bir basınç dönüştürücü kullanılarak belirlenir. Plazm greft hacminin zamana göre diferansiyeli preamp modülü tarafından hesaplanır. Stabil bir baz hattı oluşturulduktan sonra, RRS iv yoluyla bir saniye boyunca artan konsantrasyonlarda beş ardışık asetilkolin klorür dozu veya CH enjekte eder.Hava yolu direnci %200 oranında artana kadar, RRS bazal seviyeye döndüğünde her bir sonraki doz uygulanır. IV kanülü kuyruk veninden çıkarın ve fareyi ventilatörden ayırın. Trakeal kanülü yerinde tutarak açık bir hava yolu sağlayın ve farenin spontan solunuma döndüğünden emin olun.Aksi takdirde, toraks hafifçe masaj yapılarak solunum teşvik edilebilir. Fare spontane solunuma başladığında, trakeal kanül yerinde olacak şekilde, %100 oksijen ile temizlenmiş ve ısıtıcı lamba ile 37 °C'de tutulan bir hazneye aktarın. Asetilkolin kaynaklı aşırı tükürük salgılanmasının neden olduğu asfiksiye bağlı ölümü önlemek için trakeal kanül, hayvan uyanana kadar yerinde kalmalıdır.Bronkoalveoler lavaj veya BAL sıvısı, ancak fare öğürme refleksini yeterince geri kazandığında toplanabilir; bu durum, recovery chamber'a yerleştirilmeden yaklaşık 20 dakika sonra gerçekleşmelidir. Öğürme refleksini değerlendirmek için anjiyo kateteri nazikçe içeri ve dışarı doğru kaydırın; belirgin öksürme veya çabalama, öğürme refleksinin geri döndüğünü gösterir. BAL sıvısını toplamak için, akciğerin sol lobuna doğru yaklaşık 30 derecelik sürekli bir büküme sahip metalik bir entübasyon kılavuz teli anjiyo kateterine yerleştirilir.G teli ve anjiyo kateterini, kateter göbeği ön dişlerin sadece bir milimetre ötesine uzanacak şekilde birlikte akciğerin sol lobuna ilerletin. G telinin ucunun anjiyo kateterinin açık ucundan geçmediğinden emin olun. Anjiyo kateteri yerinde tutarken trakeal laserasyon veya rüptürü önlemek için, şırınga pistonunu geri çekerken hemen ardından bir mililitrelik şırınga aracılığıyla sol akciğere 300 µL steril PBS pH 7.4 enjekte edin.Negatif basınç oluşturmak için, akciğere yoğun şekilde masaj yaparken anjiyo kateterini yavaşça çıkarın. 100 ila 200 µL BAL geri dönüşü beklenir. Lavaj yapılan fareyi derhal 37 °C, %100 oksijen haznesine geri yerleştirin.Hayvanı, yaklaşık 20 dakika boyunca tamamen ayılana kadar sol yanına yatırın ve ardından tekrar kafesine yerleştirin. Burada, havayolu direnci ölçümlerinin temsilci sonuçlarını ve dördüncü dozda beş alerjen uygulaması sonrası gelişen, herhangi bir asetilkolin dozunda naif değerlere kıyasla anlamlı derecede daha yüksek olan RRS değerleri olarak tanımlanan havayolu hiperreaktivitesini sunuyoruz. Bununla birlikte, altıncı uygulamadan sonra, yanıt verebilirlikte daha fazla artış olmaksızın çok daha yüksek havayolu hiperreaktivitesi görülmüştür.Yedinci challenge'da, temel değerlerin üç katına çıkmasıyla birlikte CH dozlaması durdurulmuştur; aksi takdirde dozlamadaki daha fazla artışlar ölümcül bronkospazma yol açmaktadır. Havayolu hiperreaktivitesi gelişmemesi için intranazal olarak tekrar tekrar vehicle ile challenge edilen farelerde ve verilen tüm CH dozlarında, robust AHR ortaya çıkmadan önce ardışık IV CH dozları alan naif ve altı kez alerjen challenge'ı uygulanmış bir fareden alınan bu temsilci gerçek zamanlı RRS izleriyle gösterildiği üzere, RRS ölçümleri temel değerlerden önemli ölçüde farklılaşmamaktadır. Alerjen tarafından indüklenen havayolundaki baskın hücre tipi, AHR trendine benzer şekilde nötrofildir. Ancak, tekrarlanan alerjen challenge'ı ile eozinofili kademeli olarak güçlenmiş ve eozinofil, BAL sıvısındaki sayısal olarak baskın hücre tipi haline gelmiştir. Bu durum, nötrofil sayılarındaki belirgin düşüşle eş zamanlı olarak altıncı challenge'dan sonra gerçekleşmiştir.Kontrol PBS uygulanan farelerde, havayolu direnci ölçümleri de zaman içinde anlamlı bir varyasyon göstermemiştir. Bu farelerde, yalnızca tekrarlanan BAL sıvısı örneklemesi yapılan farelerde gözlemlenen değişikliklere benzer şekilde, BAL sıvısına nötrofil ve makrofaj göçünün arttığı, ancak eozinofil göçünün artmadığı görülmüştür.Böylece, solunum yolu fizyolojisi verileri ve bronkoalveoler lavaj sıvısı toplamak için farelerin oral yolla nasıl tersinir şekilde entübe edileceğini ve intravenöz hatta nasıl erişileceğini göstermiş olduk. Bu teknikleri canlı hayvanlar üzerinde uygulamadan önce, her bir tekniği ayrı ayrı pratik yapmak ve mükemmelleştirmek esastır. Kadavra hayvanlar üzerinde.Hassas ve nazik bir işlem yapılması esastır ve her zaman sıkı aseptik teknikler uygulanmalıdır. İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

a-reversible-non-invasive-method-for-airway-resistance-measurements

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz anestezi farelerin trakea yoluyla ciğerlerine test malzemelerin cerrahi olmayan teslimat göstermektedir. Bu yöntem, bakteriyel ve viral patojenler, sitokinler, antikorlar, boncuk, kimyasallar, ya da boyalar akciğer maruz izin verir. Daha hasat ve flow sitometri akciğer ve akciğer drenaj lenf düğümleri (LDLNs) işlenmesi açıklanmaktadır.

Akış Sitometri Akciğerler ve Akciğer Boşaltma lenf düğümleri Analizi fareler cerrahi olmayan intratrakeal damlatma

Alerjik astım Deneysel fare modelleri hastalığı patogenezinde okuyan ve yeni ilaçlar geliştirmek için yeni olanaklar sunar. Bu modeller de alerjik immün yanıt, hava yolu inflamasyonu ve pulmoner patofizyolojisi yöneten ölçüm faktörleri için uygundur.

Alerjen Bağlı Astım murin Modeli

Biz düşük basınçlı emme kullanarak fiberoptik bronkoskopi ve bronkoalveoler lavaj için bir araştırma tekniği açıklar. Bu teknik, akciğer bronkoalveoler yüzeylerinden bağışıklık hücreleri hasat etmek için kullanılır. Lokal anestezik ve hafif bilinçli sedasyon (midazolam) kullanılır. Denekler prosedür iyi ve deneyim minimal yan etkileri tolere.

Araştırma Bronkoalveoler Lavaj (BAL); Yeterli Örnek Verim Alma

Bu video, bronkoalveoler lavaj sıvısındaki çeşitli bağışıklık hücrelerini tanımlamak ve saymak için akış sitometrisinin kullanımını göstermektedir. Başlangıçta, tek bağışıklık hücreleri bir canlılık boyası kullanılarak tanımlanır, ardından yüzey işaretleyici proteinlerin diferansiyel boyanması ile her hücre tipinin kesin sayımı sağlanır.

Bronkoalveoler Lavaj Sıvısındaki İmmün Hücrelerin Flow Sitometri ile Tanımlanması ve Sayımı

SCIREQ Inc, Montreal, Qc; İşbu Protokol solunum sistemi mekaniği ölçümleri yanı sıra zorla salınım tekniği kullanarak farelerde inhale metakoline hava yolu duyarlılığı değerlendirilmesi (flexiVent yürütmek için gerekli prosedürleri ayrıntılı bir adım adım açıklamasını sağlar , Kanada).

Zorla Salınım Tekniği kullanarak Fare Solunum Sistemi Mekanik Değerlendirilmesi

Bu yazıda akciğer fonksiyonu ölçümleri veya fareler kurtarmak için ve daha sonraki dönemlerde de incelenebilir sağlar pulmoner instilasyon için fare entübasyon bir striaghforward ve etkili bir yöntem açıklanır. Işlem doğrudan soluk borusu yanması pahalı olmayan bir fiber optik ışık kaynağı içerir.

Fare Akciğer Entübasyonun Basit Bir Yöntem

X-ışını görüntüleme teknolojisini kullanarak yenidoğan fare akciğerindeki alveolar sıvı klerensi veya pulmoner ödem oranını değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz.

Yenidoğan Fare Akciğer Akciğer Akışkan Ciltler Gerçek zamanlı X-ışını görüntüleme

Bu yazının amacı, büyük ölçüde akciğer kanseri ya da diğer patolojiler ile kurulum ve fare akciğerlerin analizine yardımcı olacak basit yöntemler tarif etmektir. Biz sadece ve güvenilir akciğer instilasyonlar, fiksasyon ve akciğer hacim ölçümleri yürütmek için 3 protokol sunuyoruz.

Fare Akciğer Kanseri Araştırma Faydalı instillation ve Fiksasyon Yöntemi

Akciğerin sağlık durumu, akciğer bronşiollerinde bulunan bağışıklık hücrelerinin türüne ve sayısına göre yansıtılır. Farelerin alt solunum yollarından yapışkan olmayan hücrelerin ve çözünür faktörlerin izolasyonunu ve çalışılmasını sağlayan bir bronkoalveolar lavaj tekniğini açıklıyoruz.

İnflamatuvar Hücre İnfiltrasyonunu İncelemek İçin Murin Akciğerlerin Bronkoalveoler Lavajı

Bu makalenin amacı, laboratuvar faresinin entübasyonunun rafine bir yöntemini açıklamaktır. Yöntem noninvaziv ve bu nedenle, solunum fonksiyonu ve / veya akciğer içine tedavilerin indaşseri izleme gerektiren çalışmalar için idealdir.

Farelerde Tekrarlanan Orotracheal Entübasyon

Burada, noninvaziv ve gerçek zamanlı bir tüm vücut pletismografi (WBP) sistemi kullanılarak öksürük ölçümünü ve farelerin doku örneklerinin toplanması için normatif prosedürleri açıklıyoruz ve hava yolu iltihabını değerlendirmek için bazı yöntemler sunuyoruz.

Farelerde öksürük ve hava yolu iltihabını tespit etme yöntemleri

Öğrenin, farelerde tekrarlanabilir oral entübasyon yöntemiyle havayolu hiperreaktivitesi ölçümleri ve bronkoalveoler lavaj sıvısı örnekleme tekniklerini. Bu yöntem solunum fizyolojisi araştırmalarında ileri düzey veri toplama olanağı sağlar.

Havayolu Direnci Ölçümleri ve Fare Bronkoalveolar Lavaj Sıvısı Örnekleme için, geri dönüşümlü, Non-invaziv Yöntemi

Daha fazla video keşfet