Beta-Glukozidaz Testi Kullanılarak Bakterilerde Mutasyon Sıklığının Değerlendirilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Mikrobiyoloji
0 görüntülenme • 4:00 dk. • October 30th, 2025
Genetiği değiştirilmiş bakteri kültürünü ele alalım.
Bakteriler, kusurlu düzeltme okuma aktivitesine sahip bir DNA polimeraz mutant varyantını eksprese etmeye teşvik edilir, bu da replikasyon hatası olasılığını artırır.
Bu hatalar, düzenleyici bölgede beta-glukozidaz genini baskılayan ve beta-glukozidaz enziminin ekspresyonunu tetikleyen spontan mutasyonlara yol açabilir.
Düzenli zaman aralıklarında numune toplayın ve her kültürdeki bakteri oluşumunun sayısını değerlendirin. Numuneleri santrifüjleyin ve süpernatanı atın.
Peleti bir tamponda yeniden süspanse edin.
Geçirgen bir çözelti ekleyin ve bakteri zarını geçirgenleştirmek için karıştırın.
Geçirgenleştirilmiş bakteri örneklerini çok oyuklu bir plakaya aktarın.
Bakterilere giren ve beta-glukozidaz enzimi ile reaksiyona girerek renkli bir ürün üreten bir substrat ekleyin.
Beta-glukozidaz aktivitesini belirlemek için renk yoğunluğunu ölçün.
Nesiller boyunca mutasyon sıklığını belirlemek için bakteri kültürlerindeki beta-glukozidaz aktivitesini analiz edin.
Tek bir koloni aktarın E. koli pBAD-ε ve pGOOD1-εD12A11 vektörlerini içeren TOP10, antibiyotiklerle tedavi edilmiş bir mililitre LB ortamına aktarılır.
Kültürü gece boyunca 37 santigrat de
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin