Name: İnsan Nöral Kök Hücreler Sayma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 37 s
Description: Öğrenin, insan nöral kök hücrelerini hemocytometer ve Trippan mavisi kullanarak sayma yöntemini. Canlı ve ölü hücreleri ayırt ederek doku kültürü deneyleri için güvenilir hücre sayımı yapın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Çocuk Hastanesi, Orange County hNSPC kültürleri Araştırma Enstitüsü Ulusal İnsan Nöral Kök Hücre Kaynak Dr. Philip H. Schwartz kabul etmek istiyorum.

İnsan Nöral Kök Hücreler Pasajlanması Not: Lütfen bakınız <a href="/index/details.stp?ID=263">Pasajlanması İnsan Nöral Kök Hücreler</a> , hücreleri ayırmak ve tekrar süspansiyon nasıl makale . https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263 Sayma Hücre Süspansiyon hazırlanması <ol><li> Yeri 25% 0.4 Tripan Blue çözüm ve Eppendorf tüp içine hücre medya 20 ul ul. </li><li> Medya bilinen bir hacmi hücreleri içeren homojen bir süspansiyon oluşturmak için tüp hafifçe dokunarak sayılmak üzere hücreleri tekrar Hücre 5 ul Eppendorf tüp önceki adımda içine yerleştirin. Bu adım, 10 kat hücre konsantrasyonu sulandırır. </li><li> Hemasitometre cam kapak yerleştirin ve yaklaşık 11-12 ul hücre süspansiyonu yüklemek. <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_4/262_Figure-01.png" alt="262_Figure-01" width="511" height="139"> </li></ol> Hemasitometre hücreler Sayma <ol><li> Bir faz kontrast mikroskopta hemasitometre tüm ızgara dikkat edin. Izgara bir kadranda (örneğin kırmızı biri olarak) odaklanın. <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_5/262_Figure-02.png" alt="262_Figure-02" width="492" height="278"> </li><li> Ölü veya ölmekte olan hücrelerin membran hasar ve Tripan mavi boya dışlamak mümkün değildir çünkü mavi görünecektir. Canlı hücreler mavi görünmez ve faz kontrast ışık "halo" ("faz-parlak" olacaktır) ile çevrili olacak. </li><li> Canlı hücrelerinin sayısını bir çeyrek (alan 1 mm 2). Ayrıca, hücrelerin toplam sayısına göre canlı hücreler sayısına bölünmesiyle hücre canlılığı belirleyebilirsiniz. 3-4 rastgele kadran hücre sayımı ve kadran başına bir hücre ortalama sayısını belirlemek. Bir kadran hacmi 10 -4 ml veya 0.1 ul olduğu bilinen bu yana, hücre konsantrasyonu tespit edilebilir <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_6/262_Figure-03.png" alt="262_Figure-03" width="741" height="165"> </li><li> # Hücre / ml belirlemek için aşağıdaki kısayolu kullanabilirsiniz: <img src="/files/ftp_upload/old/262_2008_7_18_7/262_Figure-04.png" alt="262_Figure-04" width="368" height="69"> # Tüp tüp hücreleri Toplam = # hücre / ml X ul </li></ol>

<ol><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passaging+Human+Neural+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Passaging Human Neural Stem Cells.</a> Journal of Visualized Experiments. 7, 
 
 <a target="_blank" href="http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263">http://www.jove.com/index/Details.stp?ID=263</a> (2007).</li>
<li>Caprette, D. avidR. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+a+Hemacytometer%5BTitle%5D)+AND+%22BioEd+Online%22%5BJournal%5D)">Using a Hemacytometer.</a> BioEd Online. , 
 
 <a target="_blank" href="http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer&dpg=3">http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer&dpg=3</a> (2008).</li>
<li>Caprette, D. avidR. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+Chamber+%28Hemacytometer%29%5BTitle%5D)+AND+%22BioEd+Online%22%5BJournal%5D)">Counting Chamber (Hemacytometer).</a> BioEd Online. , 
 
 <a target="_blank" href="http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=2
">http://www.bioedonline.org/slides/slide01.cfm?q=%22hemacytometer%22&dpg=2
</a> (2008).</li>
</ol>

Bu protokol, çeşitli hücreleri içeren deneyler bir hücre konsantrasyonu belirlemek için basit ve hızlı bir şekilde açıklamaktadır. 3d açıklanan kısayolu kullanarak, hızlı ve doğru bir hücre konsantrasyonu ve belirli bir hacmi toplam hücre sayısı belirleyebilirsiniz.

<table><tbody><tr><td>Faz Kontrast Hemositometre</td><td>Araç</td><td>Hausser Scientific</td><td>02-671-54</td><td>Belirtilen katalog numarasıyla Fisher tarafından dağıtılmıştır</td></tr><tr><td>Trypan Blue Boyası %0,4</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, Life Technologies tarafından</td><td>15250-061</td><td>Belirtilen katalog numarasıyla Invitrogen tarafından dağıtılmıştır</td></tr></tbody></table>

İnsan nöral kök hücreler sayma

Counting Human Neural Stem Cells

Immünsitokimya veya hücre transfections için kaplama hücreleri gibi birçok rutin doku kültürü manipülasyonlar, bir hücre süspansiyonu belirli bir hacmi canlı hücreler tam sayısının Bilgi için gereklidir. Bu protokol, canlı ve ölü hücreleri arasındaki farklılıklarda ve hücre konsantrasyonu ve toplam hücre sayısı hemasitometre kullanarak miktarının belirlenmesi için basit ve hızlı bir yöntem açıklanır. Bu prosedür, öncelikle bir büyüme yüzey hücreleri ayırma ve medya onları resuspending gerektirir. Sonra, hücrelerin Tripan mavi (ideal kadran başına 20-50 hücre verecek bir konsantrasyon) bir çözüm seyreltilmiş ve hemasitometre yerleştirilir. Son olarak, biri 1 mm 2 kadranda (0,1 ul) ve seyreltme faktörü ile çarpılarak hacmi ortalama bölme, rastgele seçilen birkaç kadran ortalama canlı hücrelerin sayılarını l. ortalama hücre sayısını verir Ul toplam hacmi bu hücre konsantrasyonu Çarpma toplam hücre sayısını verir. Bu protokol, insan sinir kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) sayma açıklar, aynı zamanda birçok diğer hücre türleri için kullanılabilir.

Canlı hücreler tam sayısının Bilgi, birçok doku kültürü manipülasyonlar için gereklidir. Bu protokol, canlı ve ölü hücreleri arasındaki ayrım ve hemasitometre kullanarak hücrelerin miktarını nasıl açıklamaktadır. Insan sinir kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) sayma açıklar olsa da, diğer hücre türleri için kullanılabilir.

İnsan Nöral Kök Hücreler Sayma

Bir hücre süspansiyonunun belirli bir hacmindeki canlı hücrelerin kesin sayısının bilinmesi, ... gibi birçok rutin doku kültürü işlemi için gereklidir.

Şimdi size insan nöro öncül hücrelerinin nasıl sayılacağını göstereceğim; hücrelerinizi immünokimya işlemi yapacağınızda veya nükleer faktör makinesi ile bir transfeksiyon gerçekleştirmek istediğinizde saymanız gerekir. Kenar ızgaralı bir faz kontrastlı hemositometre ve ayrıca trypan mavi adı verilen bir boya kullanıyorum. Bu boya, canlı ve ölü hücreleri birbirinden ayırabilmesi bakımından faydalıdır.Ölü veya ölmekte olan hücreler bu boyayı alır ve mavi görünürler. Hemositometrede hücrelere baktığınızda, canlı hücreler bu boyayı dışarıda tutabilir ve mavi görünmezler. Böylece hücrelerinizin canlılığını belirleyebilirsiniz; bunun için trypan blue ve besiyeri içeren bir çözelti hazırlayın.Bu 0,5 ml'lik epi tüpe 20 µL tuzak ve mavi çözelti ekleyeceğim. Ardından 25 µL medya ekleyeceğim. Böylece şu anda toplam 45 µL tuzak pan mavisi ve medya çözeltisine sahibim; böylece beş µL hücre süspansiyonu eklediğimde 1:10 oranında bir dilüsyon elde etmiş olacağım.Şimdi beş mikrolitre hücre süspansiyonu ekleyeceğim. Öncelikle, parmakla vorteksleyerek hücrelerin iyice yeniden süspanse edildiğinden emin olacağım. Böylece bu solüsyonun iyi karıştığından emin olmak istiyorum.Bu nedenle, tablaya birkaç kez yukarı ve aşağı hareket yaptıracağım. Ve son olarak, bu hücre süspansiyonundan yaklaşık 12 µL'yi bir hemositometreye yükleyeceğim. Cihazın iki portu vardır ve bunlardan herhangi birini kullanabilirsiniz.Tek yapmanız gereken çözeltiyi bu porttan tanıtmak; sıvı, kılcal hareketle yukarı çekilecektir. Ve şimdi sayıma hazırım. İşte 10x büyütmede hemositometre görünümü ve burada 16 kare içeren bir kadranımız var.Ve gördüğünüz gibi, burada canlı ve ölü hücreleri gözlemleyebiliriz. Burada şunun, şunun ve şunun gibi canlı hücrelerimiz var. Ayrıca şunun gibi bazı ölü hücrelerimiz de mevcut.Fark edeceğiniz üzere, ölü hücre koyu mavi görünürken, canlı hücrelerin etrafında bir tür hale bulunmaktadır. Şimdi tüm canlı hücreleri sayacağım. Bu nedenle soldan sağa ve yukarıdan aşağıya doğru ilerleyeceğim.1, 2, 3, 4, 5, 6, 33, 1 32, 33, 34, 3 5, 3 6. Böylece bu kadranda toplam otuz altı hücremiz var. Bu nedenle, tam buradaki çizgi boyunca olduğu gibi, kadranın sınırında olan hücreler gördüğümde, tutarlı olmak adına, sol sınırda ve üst sınırda yer alan hücreleri sayıyorum.Hemositometredeki tüm kadranlar için bu sınırlardaki hücreleri istikrarlı bir şekilde sayıyorum. Şimdi, mikrolitre başına kaç hücremiz olduğunu hesaplayacağız. Bunu yapmak için, kadran başına hücre sayısının ortalamasını, yani 38'i alacağım ve bunu, odacık boyutları tarafından belirlenen bir faktör olan 10 ile çarpacağım.Ve bu durumda seyreltme faktörümüz olan 10 ile de çarpacağız. Sonuçta, mikrolitre başına hücre sayısını elde etmiş olacağız. Dolayısıyla bu örnekte, mikrolitre başına 3.800 hücremiz var.Hücre peletimizi 500 µL çözeltide resüspande ettiğimiz için, toplamda kaç hücreniz olduğunu hesaplayabilirsiniz. Hazırlıklarımızı tamamladık.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bir ilgi bir hücreye gen Tanıtımı in vivo fonksiyonu nedenlerine açıklık için güçlü bir yöntemdir. Bu protokol Amaxa tarafından yapılan Nucleofector elektroporasyon cihazları kullanırken insan nöral kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) bir kültür transfecting verimli bir yöntem açıklanır.

Amaxa Nucleofector İnsan Sinir Kök Hücreler Transfecting

, In vitro olarak insan nöral kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) manipüle etme yeteneği, tedavi amaçlı hücre nakli olarak kendi programını araştırmak için insan sinir gelişimi ve keşfetmek için sağlar. Bu protokol, insan kök hücre araştırmalarının giderek tekrarlanabilirlik umuduyla kültür ve Pasajlanması hNSPCs bir yöntem sunmaktadır.

İnsan Nöral Kök Hücreler Pasajlanması

İmmünositokimya varlığı, hücre içi lokalizasyonu ve kültür hücreleri ilgi antijen göreceli bolluk belirlemek için güçlü bir yöntemdir. Bu protokol sunan, kolay takip serisi bir antikorlar korunması ve boyama en iyi şekilde almak için sağlayacak adımlar.

İmmünositokimya: İnsan Sinir Kök Hücreler

Bu video protokolü iyi niyetli nöral kök hücreler nöral prekürsör hücrelerin koloni oluşturan nöral hücre çalışması ile oluşan karışık bir nüfus nasıl ayrımcılık ve numaralandırmak göstermektedir.

Hücre Testi Şekillendirme Sinir-Koloni: Sinir Progenitör Hücreler Bona Fide Sinir Kök Hücreler Ayırım Bir Testi

Atılır insan fetal kortikal doku sinir kök hücrelerin izolasyonu ve kültürü üzerinde basit ve güvenilir bir yöntem açıklanmıştır. Bilinen insan nörolojik bozukluklar türetilen Kültürler farmakolojik etkinliğini değerlendirmek için bir platform sağlamak gibi, hücresel ve moleküler patolojik süreçleri karakterizasyonu için kullanılabilir.

Atılan İnsan Fetal Kortikal Doku Sinir Kök Hücre Üretimi

Bu protokol, tek bir hücre süspansiyonu için ayrışma olmadan küresel nöral kök ve projenitör hücre agrega genişlemesini sağlayan bir yeni mekanik bir kesme yöntemi tarif etmektedir. Hücre / hücre teması sürdürmek üzerinde 40 geçişleri için hızlı ve istikrarlı bir büyüme sağlar.

İnsan Nöral Agregalarının bir cGMP uygulanabilir Açılım Yöntemi kök hücrelerin pluripotent kök hücreleri veya Fetal Beyin dokusundan türetilen

Bir yöntem de periferik kan hücrelerinden zenginleştirilen hematopoietik projenitör hücrelerinden insan nöral kök hücrelerini elde etmek için geliştirilmiştir.

Periferik kan Hematopoetik Progenitör Hücreleri İnsan Sinir Kök Hücre Doğrudan İndüksiyon

Farklılaşmış insan nöral kök hücreleri (hNSC'ler) üzerindeki miRNA'lardaki değişiklikleri karakterize etmek amacıyla, üç boyutlu bir sistemde hNSC farklılaşmasını, miRNA PCR dizisi ile mikroRNA ekspresyonundaki değişikliklerin değerlendirilmesini ve miRNA hedef tahmini için hesaplamalı analizi ve ikili lusiferaz testi ile doğrulanmasını açıklıyoruz.

Üç Boyutlu Kültürleri, mıkroRNA Analizi ve Putatif Hedef Genler üzerinde bir İnsan Sinir Kök Hücre Hattı Farklılaşma

Yetişkin memeli omuriliği, kültürde izole edilebilen ve genişletilebilen nöral kök/progenitör hücreler (NSPC'ler) içerir. Bu protokol, erişkin omuriliğinin periventriküler bölgesinden sıçandan ve insan organ nakli donörlerinden üretilen NSPC'lerin toplanmasını, izolasyonunu, kültürünü ve geçişini açıklar.

Periventriküler Yetişkin Rat Bölgesinde ve İnsan Omurilik gelen Nöral Kök / Progenitör Hücreler izolasyonu

Nöral kök hücreler (NSC'lerde) kendini yenilemek ve üç sinir soy içine ayırt edebilirsiniz hücrelere bakın. Burada, klonal koşullarda neurosphere oluşumu ve farklılaşmayı kullanarak belirli bir hücre popülasyonu MGK sıklığını belirlemek için bir protokol açıklar.

Nöral Kök Hücre Sayım klonal Tahliller Kullanma

Bu protokolün amacı, belirli bir lokal nöral devrenin kemogenetik manipülasyonuna yanıt olarak yetişkin nöral kök/progenitor hücrelerin davranışını analiz etmek için bir yaklaşım tanımlamakta.

Yetişkin hipokampal sinirsel precursor hücrelerinin devre spesifik Yönetmeliği

Öğrenin, insan nöral kök hücrelerini hemocytometer ve Trippan mavisi kullanarak sayma yöntemini. Canlı ve ölü hücreleri ayırt ederek doku kültürü deneyleri için güvenilir hücre sayımı yapın.

İnsan Nöral Kök Hücreler Sayma

Daha fazla video keşfet