Name: İnsan Nöral Kök Hücreler Pasajlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: Öğrenin, insan nöral kök hücrelerinin pasajlanması için fibronektin kaplama ve hücre ayrıştırma tamponu kullanarak güvenilir bir yöntem. Bu protokol, sinirbilim ve kök hücre araştırmalarında tekrarlanabilirliği artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar, minnetle, Çocuk Hastanesi, kendi kültür hNSPCs ve ilk öğretim sağlamak için Orange County Araştırma Enstitüsü Ulusal İnsan Nöral Kök Hücre Kaynağı Dr. Philip H. Schwartz kabul etmiş sayılırsınız.

Not: Haftada bir kez, bizim hNSPCs rutin kültür için, biz her gün ve medya genellikle geçit 01:02 50-100% değişim . F12 baz medya: kültür ortamı% 20 BIT 9500 DMEM, 1X antibiyotik / antimikotik ve büyüme faktörleri (EGF, FGF ve PDGF her 40 ng / ml) içerir. Kaplamalı Flask hazırlanması ve Hücreler Dissociating <ol><li> 37, 10 mikrogram / ml insan fibronektin gecede 4 saat, ya da için EMEM geçişli hücreler, mont T25 şişeler ° C doku kültürü inkübatör için yeni şişeler hazırlamak. Hücrelerin sağ Pasajlanması önce, fibronektin çözüm kaldırmak ve şişeler PBS ile yıkayın. </li><li> Yeni fibronektin kaplı şişeler (her bir şişesi için medya yarısı son hacim &quot;şartlı&quot; medya olacağını gibi) geçişli hücreler eski &quot;şartlı&quot; medya aktarın. Bu kültür, bu hücreler kendi farklılaşmamış durumda tutmaya yardımcı. </li><li> Bir kez tüm medya geçişli olması hücreleri kaldırılır, PBS ile bir kez hücreleri durulayın. Hücrelerin kurumasına değil dikkat edin. </li><li> Hücre Ayrılma Tampon (CDB) hücreleri (T25 şişesi için 1.0-1.5 ml) üzerine doğrudan ekleyin. Oda sıcaklığında yaklaşık 5 dakika boyunca tampon hücrelerin inkübe edin. Şişeyi hafifçe dokunarak hücre dekolmanı hız yardımcı olacaktır. </li></ol> Santrifüj Resuspending ve Kaplama Hücreler <ol><li> Balona müstakil hücrelerin (CDB, yaklaşık 3X hacmi kullanın): serum içeren medya (F12 10 ile% ısı ile inaktive edilmiş fetal sığır serumu DMEM) ekleyin. 15 ml konik tüp medya ve hücreler çıkarın. Şişeyi çalkalayın ve kalan hücreleri kurtarmak için küçük bir hacim taze serum içeren medya kullanın. </li><li> 5 dakika 1000 rpm (~ 200xg) medya ve hücreler santrifüjleyin. </li><li> Serum içeren medya kapalı Emme ve homojen bir hücre süspansiyonu yapmak için yukarı ve aşağı pipetleme, taze kültür ortamı hücrelerin tekrar süspansiyon haline getirin. </li><li> Yeniden süspanse hücrelerin yarısı 1:2 bölünmüş her yeni şişesi içine aktarın. Şişesi üzerinde yeni bir geçit numarasını not edin. </li></ol>

<ol><li>Flanagan, L. A., Rebaza, L. M., Derzic, S., Schwartz, P. H., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> J. Neurosci. Res. 83, 845-856 (2006).</li>
<li>Nethercott, H. N., Maxwell, H., Schwartz, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+stem+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Stem+Cell+Manual%3A+A+Laboratory+Guide%22%5BJournal%5D)">Neural stem cell culture.</a> Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide. Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. , Elsevier/Cell Press. (2007).</li>
<li>Palmer, T. D., Schwartz, P. H., Taupin, P., Kaspar, B., Stein, S. A., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+culture.+Progenitor+cells+from+human+brain+after+death%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cell culture. Progenitor cells from human brain after death.</a> Nature. 411, 42-43 (2001).</li>
<li>Schwartz, P. H., Bryant, P. J., Fuja, T. J., Su, H., O'Dowd, D. K., Klassen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+neural+progenitor+cells+from+post-mortem+human+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of neural progenitor cells from post-mortem human cortex.</a> J Neurosci Res. 74, 838-851 (2003).</li>
</ol>

Biz bu protokolü hNSPCs güvenilir kültürleri sağlar bulduk. Bir kritik bir faktör hücreler için oldukça yoğun kültür olarak tutulacak ve hücrelerin seyrek olduğu noktaya geçişli olamaz ihtiyaç vardır. Bizim ellerde, seyrek kültürleri çok yavaş büyür ya da tamamen bölen ateşkes. Bu nedenle, bir kültürün son derece yoğun olduğu için, genellikle kültürler 1:2 veya 01:03 bölünmüş. Iyi hücre eki ve göç teşvik eden, ancak, laminin aksine, aynı zamanda hücreleri ayırmak için Hücre Ayrılma Tampon (CDB) kullanılmasına izin verir bu yana, fibronektin...

<table><tbody><tr><td>BIT-9500 (BSA, İnsülin, Transferrin)</td><td>Reaktif</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>09500</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik-Antimikotik</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>15240-062</td><td></td></tr><tr><td>DMEM:F12 (1X)</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>11330-032</td><td></td></tr><tr><td>EMEM (1X)</td><td>Reaktif</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>MT-10-010-CV</td><td>Belirtilen katalog numarası ile Fisher tarafından dağıtılmaktadır</td></tr><tr><td>Fetal Bovin Serum</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>FGF, human basic rekombinant</td><td>Reaktif</td><td>PeproTech Inc</td><td>100-18B</td><td></td></tr><tr><td>PDGF-AB</td><td>Reaktif</td><td>PeproTech Inc</td><td>100-00AB</td><td></td></tr><tr><td>EGF, human rekombinant</td><td>Reaktif</td><td>BD Biosciences</td><td>CB40052</td><td>Belirtilen katalog numarası ile Fisher tarafından dağıtılmaktadır</td></tr><tr><td>Hücre Kültür Balonu, 25 cm2</td><td>Ekipman</td><td>Corning</td><td>10-126-28</td><td>Belirtilen katalog numarası ile Fisher tarafından dağıtılmaktadır</td></tr><tr><td>Fibronektin, human, doğal</td><td>Reaktif</td><td>BD Biosciences</td><td>CB40008A</td><td>Belirtilen katalog numarası ile Fisher tarafından dağıtılmaktadır</td></tr><tr><td>İnsan Nöral Kök/Öncül Hücreleri</td><td>Hücreler</td><td>National Human Neural Stem Cell Resource</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hücre Disosyasyon Tamponu</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>13150-016</td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan nöral kök hücreler pasajlanması

Passaging Human Neural Stem Cells

In vitro insan sinir kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) manipüle etme yeteneği, tedavi amaçlı hücre nakli olarak kendi programını araştırmak için yanı sıra birçok temel insan sinir gelişimi ve patoloji süreçleri keşfetmek için bir araç sağlar. Bu protokol, bu tekniğin standartlaştırılması ve insan kök hücre araştırmalarının tekrarlanabilirlik artan umutlar, kültür ve Pasajlanması hNSPCs basit bir yöntem sunuyor. Kullandığımız hNSPCs Ulusal İnsan Nöral Kök Hücre Kaynağı kadavra postnatal beyin korteks izole ve şişeler yapışık kültürler fibronektin (Palmer ve ark, 2001; Schwartz ve ark, 2003) ile kaplı olarak yetiştirilir. Biz bir DMEM kültür bizim hNSPCs: F12 serum ücretsiz medya EGF, FGF ve PDGF ile desteklenmiş ve geçit onları 01:02 yaklaşık her yedi gün. Kültür hücrelerin çoğunluğunu kullanarak, bu koşulları, iki kutuplu bir morfoloji korumak ve farklılaşmamış nöral kök hücreler (örneğin nestin ve sox2) belirteçleri ifade.

, In vitro olarak insan nöral kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) manipüle etme yeteneği, tedavi amaçlı hücre nakli olarak kendi programını araştırmak için insan sinir gelişimi ve keşfetmek için sağlar. Bu protokol, insan kök hücre araştırmalarının giderek tekrarlanabilirlik umuduyla kültür ve Pasajlanması hNSPCs bir yöntem sunmaktadır.

İnsan Nöral Kök Hücreler Pasajlanması

İnsan nöral kök/öncül hücrelerini (hNSPC'ler) in vitro ortamda manipüle edebilme yeteneği, bu hücrelerin ... için hücre nakli olarak kullanıma uygunluklarının araştırılmasına olanak sağlar.

Merhaba, ben Steve. UC Irvine Patoloji Bölümü'nde Dr. Flanagan'ın laboratuvarında çalışıyorum. Bugün size insan nöral öncül hücrelerinin nasıl pasajlanacağını göstereceğim.Bu teknik, yeni bir flaskın insan fibronektin çözeltisi ile kaplanmasını, hücrelerin hücre disosiasyon tamponu ile yüzeyden ayrılmasını, ardından hücre disosiasyon tamponunun %10'luk serum çözeltisi ile nötralize edilmesini, hücre süspansiyonunun santrifüjlenmesini, hücrelerin taze besiyerinde yeniden süspanse edilmesini ve hücre süspansiyonunun yeni bir flaska aktarılmasını içerir. Laboratuvarımızda, insan nöral öncül hücrelerini her iki günde bir besiyerlerinin yarısını değiştirerek kültüre ediyoruz ve yaklaşık haftada bir kez bire bir veya bire iki oranında bölerek pasajlıyoruz. Hücreleri pasajladığımda, eğer onları bir immünokimya deneyi için ayırmak istiyorsam veya nükleer bir efektör ile transfeksiyon yapmak istiyorsam hücreleri sayabilirim.Hücreleri paketlerken hücre ayrıştırma tamponu kullanmak önemlidir; çünkü öncelikle, tripsinin aksine enzimatik değildir ve hücreler üzerinde çok daha yumuşak bir etkiye sahiptir. Merhaba, şu an doku kültürü odasındayız ve size konfluen bir insan öncül hücre flaskının na

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bir ilgi bir hücreye gen Tanıtımı in vivo fonksiyonu nedenlerine açıklık için güçlü bir yöntemdir. Bu protokol Amaxa tarafından yapılan Nucleofector elektroporasyon cihazları kullanırken insan nöral kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) bir kültür transfecting verimli bir yöntem açıklanır.

Amaxa Nucleofector İnsan Sinir Kök Hücreler Transfecting

Canlı hücreler tam sayısının Bilgi, birçok doku kültürü manipülasyonlar için gereklidir. Bu protokol, canlı ve ölü hücreleri arasındaki ayrım ve hemasitometre kullanarak hücrelerin miktarını nasıl açıklamaktadır. Insan sinir kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) sayma açıklar olsa da, diğer hücre türleri için kullanılabilir.

İnsan Nöral Kök Hücreler Sayma

Sinir kök hücreleri, yetişkin olmayan kış uykusuna toklu Arctic zemin sincap (AGS) hipokampus hazırlanmıştır. Bu sinir kök hücreleri, sayısız kanallar sayesinde genişletilmiş, farklılaşmış ve glial kültürü neredeyse 50:50 nöron olarak muhafaza edilebilir.

Yetişkin Hipokampal Arctic Zemin Sincap Nöral Kök Hücre Büyüme ve Farklılaşma

Atılır insan fetal kortikal doku sinir kök hücrelerin izolasyonu ve kültürü üzerinde basit ve güvenilir bir yöntem açıklanmıştır. Bilinen insan nörolojik bozukluklar türetilen Kültürler farmakolojik etkinliğini değerlendirmek için bir platform sağlamak gibi, hücresel ve moleküler patolojik süreçleri karakterizasyonu için kullanılabilir.

Atılan İnsan Fetal Kortikal Doku Sinir Kök Hücre Üretimi

Beyin tümörlü hastalarda rutin kranial radyoterapi ve zayıflatıcı bilişsel işlev bozukluğu yararlı, bu tedavi genellikle sonuç. Bu ciddi bir çözülmemiş sorun, şu anda herhangi bir klinik rücu ve radyasyona bağlı bilişsel azaltır kurtarma için kök hücre temelli tedaviler hazırlamak için çabalarımızı tahrik vardır.

Kranial Radyoterapi neden Bilişsel Disfonksiyon Restorasyon Kök Hücre Transplantasyon Stratejileri

Bu video, enzimatik tedavi ve büyüme faktörü açısından zengin bir ortamda kültürleme kullanarak insan nöral kök hücrelerini nörosferlerden nöral ve astrosit progenitörlerine ayırma yöntemini gösterir, bu da sonunda özel progenitör hücrelere olgunlaşmaya yol açar.

İnsan Nöral Kök Hücrelerinin Nöral ve Astrosit Progenitörlerine Farklılaştırılması

Yetişkin beyin hasat nöral kök hücreler sinir sistemi gelişiminin temel araştırma rejeneratif tıpta potansiyel klinik uygulamaları keşfetmek için çeşitli uygulamalar kullanılmaktadır artmaktadır. Bu deneysel sonuçların ses için kritik bu hücreleri büyümek için kullanılan yalıtım ve kültür koşullarında titiz kontrolü yapar.

Yetişkin Kemirgen Beyin konvansiyonel ve konvansiyonel olmayan Bölgelerinden Nöral Kök Hücreler Büyüyen

Bu protokol, tek bir hücre süspansiyonu için ayrışma olmadan küresel nöral kök ve projenitör hücre agrega genişlemesini sağlayan bir yeni mekanik bir kesme yöntemi tarif etmektedir. Hücre / hücre teması sürdürmek üzerinde 40 geçişleri için hızlı ve istikrarlı bir büyüme sağlar.

İnsan Nöral Agregalarının bir cGMP uygulanabilir Açılım Yöntemi kök hücrelerin pluripotent kök hücreleri veya Fetal Beyin dokusundan türetilen

Bir yöntem de periferik kan hücrelerinden zenginleştirilen hematopoietik projenitör hücrelerinden insan nöral kök hücrelerini elde etmek için geliştirilmiştir.

Periferik kan Hematopoetik Progenitör Hücreleri İnsan Sinir Kök Hücre Doğrudan İndüksiyon

Farklılaşmış insan nöral kök hücreleri (hNSC'ler) üzerindeki miRNA'lardaki değişiklikleri karakterize etmek amacıyla, üç boyutlu bir sistemde hNSC farklılaşmasını, miRNA PCR dizisi ile mikroRNA ekspresyonundaki değişikliklerin değerlendirilmesini ve miRNA hedef tahmini için hesaplamalı analizi ve ikili lusiferaz testi ile doğrulanmasını açıklıyoruz.

Üç Boyutlu Kültürleri, mıkroRNA Analizi ve Putatif Hedef Genler üzerinde bir İnsan Sinir Kök Hücre Hattı Farklılaşma

Yetişkin memeli omuriliği, kültürde izole edilebilen ve genişletilebilen nöral kök/progenitör hücreler (NSPC'ler) içerir. Bu protokol, erişkin omuriliğinin periventriküler bölgesinden sıçandan ve insan organ nakli donörlerinden üretilen NSPC'lerin toplanmasını, izolasyonunu, kültürünü ve geçişini açıklar.

Periventriküler Yetişkin Rat Bölgesinde ve İnsan Omurilik gelen Nöral Kök / Progenitör Hücreler izolasyonu

Öğrenin, insan nöral kök hücrelerinin pasajlanması için fibronektin kaplama ve hücre ayrıştırma tamponu kullanarak güvenilir bir yöntem. Bu protokol, sinirbilim ve kök hücre araştırmalarında tekrarlanabilirliği artırır.

İnsan Nöral Kök Hücreler Pasajlanması

Daha fazla video keşfet