Name: Hücresel Davranış incelenmesi için Groove Desenler mikroakışkan Aygıt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 50 s
Description: Öğrenin mikroakışkan cihaz üretimini hücre yakalama ve kültürü için. Bu yöntem düşük kayma gerilimi bölgeleri oluşturarak hücre davranışlarını incelemeye olanak tanır ve hücre biyolojisi araştırmalarını ilerletir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Mikroakışkan cihazın A. mikroimalat <ol><li> 4-inç Si levhası, reaktif oksijen plazma (30W, harrick Bilimsel az 5 dakika, NY) ile tedavi edilir. </li><li> Negatif fotorezist (SU-8 2015, Microchem, MA) Si gofret 1 dakika için 900 rpm spin-kaplı. </li><li> Gofret yumuşak, 95 pişirilmiş ° C, bir ocak 6 dk ve mikro içeren bir maske filmi ile 4 dakika UV ışığı (200W) maruz kalmaktadır. </li><li> Gofret 95 pişmiş yazılan ° C 6 dakika süreyle ve SU-8 fotorezist geliştirici kullanılarak geliştirilmiştir. </li><li> Petri kabı içerisinde mikro içeren desenli paslanmaz çeliğin gofret yerleştirilir. </li><li> Poli (dimethylsiloxane) (PDMS) (Sylgard 184) kalıplar, karıştırma silikon elastomer ve sertleştirici (10:1 oranı) tarafından imal edilir. </li><li> PDMS karışımı Si ana kalıp üzerine dökülür ve kabarcıklarını çıkarmak için bir vakum desikatörde yerleştirilir. </li><li> PDMS 1 ~ 2 saat boyunca 70 ° C&#39;de kür. </li><li> PDMS kalıpları sonra Si ana kalıptan sıyrılır. </li></ol> B. cihaz ve Montajı <ol><li> 40 mikron kalınlığında üst akışkan kanalları ve 40 mikron kalınlığında alt microgrooved kanalları (25, 50, 75, ve μ 100 m genişliğinde), iki farklı Si ana kalıplar elde edilir . </li><li> Kanal akışkan cihaz giriş ve çıkış delikli. </li><li> Akışkan kanalları ve devirli plâktaki incecik kanalları geri dönüşümsüz reaktif oksijen plazma (30W, harrick Bilimsel az 5 dakika, NY) ile yapıştırılır. </li><li> Ekstrasellüler matriks (ECM), (yani fibronektin) 1 saat inkübatör (37 ° C) için mikroakışkan cihazın içinde kaplanmıştır. </li></ol> C. Hücre tohumlama ve deney düzeneği <ol><li> NIH-3T3 fare fibroblastlar% 10 fetal sığır serumu (FBS) içeren Dulbecco&#39;nun Modifiye Kartal Media (DMEM) kullanarak doku kültürü şişesi kültür. </li><li> Hücreler tripsinize ve ayrışmış. </li><li> Disosiye hücreleri hücre yoğunluğu 3 × 10 6 hücre / ml (Şekil 1) devirli plâktaki incecik kanallar içine yüklenir. <img src="/files/ftp_upload/old/270_2008_8_24_3/270_Figure-01.png" alt="Şekil 1" width="191" height="300" /> Şekil 1 </li><li> 2 mL medya, 100 mM H 2 O 2 ve apoptozis assay (20 mcL Annexin V ve 40 mcL propidium iyodür, Invitrogen, CA) bir şırınga pompası (1 ul / dk) ile bir kanal içine infüze. </li><li> Hücreler gerçek zamanlı ters bir mikroskop kullanılarak (Nikon TE 2000) tarafından izlenir. </li></ol>

<ol><li>Chung, B. G., Park, J. W., Hu, J. S., Huang, C., Monuki, E. S., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hybrid+microfluidic-vacuum+device+for+interfacing+with+conventional+cell+culture+platform%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A hybrid microfluidic-vacuum device for interfacing with conventional cell culture platform.</a> BMC Biotechnol. 7, (2007).</li>
<li>Khademhosseini, A., Yeh, J., Eng, G., Karp, J., Kaji, H., Borenstein, J., Farokhzad, O. C., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+docking+inside+microwells+within+reversibly+sealed+microfluidic+channels+for+fabricating+multiphenotype+cell+arrays%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Cell docking inside microwells within reversibly sealed microfluidic channels for fabricating multiphenotype cell arrays.</a> Lab Chip. 5, 1380-1386 (2005).</li>
<li>Whittemore, E. R., Loo, D. T., Watt, J. A., Cotman, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+detailed+analysis+of+hydrogen+peroxide-induced+cell+death+in+primary+neuronal+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A detailed analysis of hydrogen peroxide-induced cell death in primary neuronal culture.</a> Neuroscience. 67, 921-932 (1995).</li>
</ol>

Hücreler mikroakışkan bir cihaz microgrooved substratlar içinde hareketsiz ve desenli. Hidrojen peroksit maruz kalan hücrelerin apoptozis sürecini gerçek zamanlı olarak gözlenen ve Annexin V ve propidium iyodür kullanılarak analiz edildi. Böylece, devirli plâktaki incecik kanalları içeren bu mikroakışkan cihaza, yüksek verimli ilaç tarama için yararlı olabilir.

<table><tbody><tr><td>PDMS</td><td>Reaktif</td><td>K.R. Anderson Co.</td><td>2065622</td><td>Poly(dimethylsiloxane), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb)</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>besiyeri</td><td>Invitrogen</td><td>11965</td><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Modifiye Eagle&amp;rsquo;s Besiyeri </td></tr><tr><td>FBS</td><td>serum</td><td>Invitrogen</td><td>10082-147</td><td>Fetal Bovin Serum</td></tr><tr><td>Hidrojen peroksit</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Apoptoz analizi</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>V13242</td><td>Annexin A, propidyum iyodür</td></tr><tr><td>Negatif fotoresist </td><td></td><td>MicroChem Corp.</td><td>SU-8 2015</td><td></td></tr><tr><td>Si gofret </td><td>Ekipman</td><td></td><td></td><td>4 inç silikon gofret</td></tr><tr><td>Reaktif oksijen plazması </td><td>Reaktif</td><td>Harrick Scientific Products, Inc.</td><td></td><td>gofreti 30W'da 5 dk boyunca işleyin</td></tr><tr><td>evrak mikroskop </td><td>Ekipman</td><td>Nikon Instruments</td><td>TE 2000</td><td></td></tr></tbody></table>

hücresel davranış incelenmesi için groove desenler mikroakışkan aygıt

A Microfluidic Device with Groove Patterns for Studying Cellular Behavior

Biz hücresel davranış eğitimi için microgrooved desenleri ile bir mikroakışkan cihaz açıklar. Bu mikroakışkan platformda üst akışkan bir kanal ve bir alt microgrooved substrat oluşur. Microgrooved kanalları imal etmek için, mikroakışkan kanalları izlenim içeren bir üst poli (dimethylsiloxane) (PDMS) kalıp hizalanmış ve microgrooved bir yüzeye yapıştırılır. Bu cihazı kullanarak, fare fibroblast hücreleri (25, 50, 75, ve 100 mm genişliğinde) immobilize ve microgrooved substratlar içinde desenli. Mikroakışkan bir cihaz apoptozis çalışmak için 2 saat boyunca akışkan kanal içine hidrojen peroksit, Annexin V ve propidium iyodür içeren medya perfüze edildi. Biz oksidatif strese maruz kalan hücrelerin apoptotik oldu bulundu. Bu apoptotik hücreler apopitoz işlemi sırasında plazma membranı dış broşüre fosfatidilserin bağlı Annexin V tarafından teyit edildi. Mikroakışkan microgrooved desenleri ile bu cihazı kullanarak, apoptozis sürecini gerçek zamanlı olarak gözlenen ve bir kuluçka odası (37 ° C,% 5 CO 2) içeren bir inverted mikroskop kullanılarak analiz edildi. Bu nedenle, microgrooved substratları dahil bu mikroakışkan cihaz hücresel davranış eğitimi ve yüksek verimli bir ilaç tarama yapmak için yararlı olabilir.

Biz hücre yakalama ve kültür etkinleştirebilirsiniz mikroakışkan cihazların imalatı için bir protokol tanımlamaktadır. Bu yaklaşımda, mikroakışkan kanallar içinde oluk gibi desenli mikro, içinde hücre sabitleyebilirsiniz Shear stresin düşük olduğu bölgelerde oluşturmak için kullanılır.

Hücresel Davranış incelenmesi için Groove Desenler mikroakışkan Aygıt

Hücresel davranışı incelemek için mikro oluklu desenlere sahip mikroakışkan bir cihaz tanımlıyoruz. Bu mikroakışkan platform, üst bir akışkan kanalından ... oluşmaktadır.

Benim adım Jiang; Harvard ve MIT sağlık, bilim ve teknoloji alanlarında poster bursiyeriyim. Bu laboratuvardaki uzmanlığım kapsamında, hücresel davranışı incelemek için özgün mikroakışkan cihazlar geliştirebiliyorum. Çok özgün gradyan cihazlarının yanı sıra, mikroakışkan cihazlar için entegre sistemler de geliştirebilirim.TC cihazı, hücre-hücre etkileşimini, hücre etkileşimini ve hücre-solar faktör temasını hassas bir şekilde manipüle edebilir. Bu nedenle, TC sistemini kullanarak temel hücre biyolojisini anlamanın yanı sıra gelişim biyolojisi ve kök hücre biyomühendisliği alanlarında uygulamalar yapabiliyorum. Benim adım Amir Manchi; Harvard, MIT Sağlık Bilimleri ve Teknoloji Bölümü'ndeki Profesör Haan laboratuvarında lisans öğrencisiyim.Mikroakışkan cihazlar üzerine çalışıyorum ve mikroakışkan cihazların hücre kültürü yapmak ve toksisite çalışmaları gibi farklı araştırmalar yürütmek için büyük potansiyel taşıyan araçlar olduğunu bir prensip kanıtı olarak göstermeye çalışıyoruz; ayrıca bu cihazlar içindeki akış karakterizasyonunu akış hızları, geometri ve diğer çeşitli parametrelerin bir fonksiyonu olarak incelemeye ve optimize etmeye çalıştık. Şu an mikrofabrikasyon odasından başl

a-microfluidic-device-with-groove-patterns-for-studying-cellular

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz, iyi tanımlanmış mikroçevresinin mekansal ve zamansal degradeleri üretebilir degrade üreten mikroakışkan cihaz mikroimalat için bir protokol tanımlamaktadır. Bu yaklaşımda, degrade üreten mikroakışkan cihaz yönlendirilmiş hücre göçü, embriyogenez, yara iyileşmesi, ve kanser metastazı çalışma için kullanılabilir.

Hücre Biyolojisi Degrade üreten mikroakışkan Aygıt

Mikroakışkan cihazlar gerçek zamanlı olarak ve uygun fiziksel ölçeklerde karmaşık doğal süreçler görselleştirmek için kullanılabilir. Biz yeraltı bakteri büyüme ve taşımacılık eğitimi için doğal gözenekli ortamın temel özellikleri taklit basit bir mikroakışkan cihaz geliştirdik.

Gözenekli Ortam Mikrobiyal Ulaştırma incelenmesi için basit mikroakışkan Sistemleri: Mikrodünya Pencere

Biz temiz oda ya da yumuşak litografi gerek kalmadan, birden çok farklı suşları için benzer dinamik koşullar uygulanarak yeteneğine microfluidic cihazlar üretmek için basit bir yöntem sunulmaktadır.

Birden Farklı Suşlarının incelenmesi için bir mikroakışkan Cihazı

Kaynak: Cabeen, M. T. ve diğerleri. Bacillus subtilis'in Tek Hücreli Mikrofluidik Analizi. J. Vis. Exp. (2018)Video, tek hücre düzeyinde bakteri büyümesini gözlemlemek için mikrofluidik bir cihazın kullanıldığını gösteriyor. Mikro ölçekli hendeklerde hapsedilmiş hareketsiz bakteriyel hücrelerin sürekli olarak floresan mikroskobu altında nasıl görüntülendiğini ve beslendiğini gösteriyor. Bu kurulum, hücre bölünmesi ve soy takibinin birden fazla nesil boyunca gerçek zamanlı görselleştirilmesini...

Mikrofluidik bir sistemde tek hücre çözünürlüğünde bakteri büyümesini takip etmek

Kaynak: Scheidweiler, D. ve diğerleri. Akışkan Cihazların Mikroskopi ve Akış Sitometrisi ile Birleştirilerek Gözenekli Ortamlarda Mikrobiyal Taşınımı Mekansal Ölçeklerde İncelemek. J. Vis. Exp. (2020).Bu video, rastgele düzenlenmiş sütunlardan oluşan gözenekli bir matriks aracılığıyla bakteri hareketliliğini ölçmek için mikrofluidik bir cihazın kullanıldığını gösteriyor. Fluoresan etiketli bakteriler cihaza dahil edilir, gözenekli matriksin içinden gözlem kanalına ilerlerken mikroskopi ile...

Mikrofluidik Cihaz Kullanarak Bakteriyel Hareketliliğin Değerlendirilmesi

Bu yazıda tek bir hücre analizi için bir mikroakışkan çip sunuyoruz. Bu sağlar: hücre içi proteinler, enzimler, kofaktörler, ve floresan deneyleri veya bağışıklık aracılığıyla ikinci haberciler miktar.

Tek Hücrelerinin yönlü Kimyasal Analiz için mikroakışkan Chip

Bu mikron çaplı daralması bir düzeni sekansından geçerken hücre için gereken süreden daha ölçmek için mikroflüidik bazlı analiz göstermektedir.

Mikroakışkan Tekniği Hücre deformabilitesi Probe

Akışkan bileşenlerle entegre edilmiş mikro fabrikasyon cihazlar, in vivo mikro ortamı taklit eden hücre çalışmaları için in vitro bir platform sağlar. Tek veya bir arada bulunan kimyasal/elektriksel/kesme gerilimi uyaranları altında hücresel tepkileri incelemek için polimetilmetakrilat bazlı mikroakışkan çipler geliştirdik.

Tek ya da Eşlik Kimya / Elektrik / Kesme Stres Uyaranların altında Hücresel Yanıtları incelenmesi için mikroakışkan Cihazlar Tasarımı

Tandem kabarcık üretimi için altın nokta çiftleri ve yakındaki tek hücreli modelleme için fibronektin kaplı adalar üretmek üzere bir mikroakışkan çip üretildi. Elde edilen akış alanı, parçacık görüntü hızı ile karakterize edildi ve hücre zarı porasyonu, zar deformasyonu ve hücre içi kalsiyum yanıtı dahil olmak üzere çeşitli biyoetkileri incelemek için kullanıldı.

Tek hücreli Seviyesinde Kavitasyon Kabarcık (ler) -Hücre Etkileşim ve Sonuç biyoetkiler incelenmesi için yüzey Desenlendirme ile mikroakışkan Sistemi

Bu protokol, aynı zamanda, bir polimer matrisi üzerinden bir ilacın difüzyon hızını belirlemek için kullanılabilir chemoattractants yanıt olarak hücre göçü ölçmek için özelleştirilebilir yöntemi göstermektedir.

Ölçme Hücre Göç Bir Özelleştirilebilir Odası

Kimyasal ve oksijen gradyanlarının kontrolü hücre kültürleri için esastır. Bu makale, hücre göçü çalışmaları için kimyasal ve oksijen gradyanlarının kombinasyonlarını güvenilir bir şekilde üretebilen ve karmaşık enstrümantasyon olmadan biyolojik laboratuvarlarda pratik olarak kullanılabilen bir polidimetilsiloksan-polikarbonat (PDMS-PC) mikroakışkan cihazını bildirmektedir.

Hücre Göç Çalışmaları altında Dik Kimya ve Oksijen Gradyanların için polidimetilsiloksan-polikarbonat mikroakışkan Cihazlar

Öğrenin mikroakışkan cihaz üretimini hücre yakalama ve kültürü için. Bu yöntem düşük kayma gerilimi bölgeleri oluşturarak hücre davranışlarını incelemeye olanak tanır ve hücre biyolojisi araştırmalarını ilerletir.

Hücresel Davranış incelenmesi için Groove Desenler mikroakışkan Aygıt

Daha fazla video keşfet