Name: Birden Farklı Suşlarının incelenmesi için bir mikroakışkan Cihazı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Öğrenin, farklı maya suşlarının aynı dinamik koşullarda davranışlarını görüntülemek için iki katmanlı bir mikroakışkan cihazı kullanmayı. Bu yöntem, kuyular arası kirlenme olmadan eşzamanlı gözlem sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

YG İDB bir burs tarafından desteklenmektedir. IN Alon dost ve Edmond J ‭ bir öğretim görevlisidir. Tel Aviv Üniversitesi Biyoenformatik ‬ Safra Merkezi ‭. ‬ Bu araştırma ISF hibe 1499-1410 tarafından desteklenmiştir.

1. Scotch-bant Master 5 Oluşturma <ol><li> Beraberlik veya kağıt üzerinde istenilen mikrokanal düzeni, ölçeklendirme, yazdırabilirsiniz. Bizim durumumuzda tasarımı iki Y-şekilli kanal, her bir meydana 3 mm genişliğinde (Şekil 2). </li><li> Séloteyip katmanları ile cam slayt örtün. Katman sayısı, kanal (kat başına yaklaşık 60 um) yüksekliğini belirler. Biz 3 séloteyip katmanları kullanılır. </li><li> Düz bir yüzeye düzeni tasarım yerleştirin. Tasarım deseni üzerinde slayt hizalayın. Dikkatle düzenine göre bir neşter ile cam slayt üzerine bandı kesti. </li><li> Mikrokanalın düzeni dışındaki cam slayt tüm bölgelerinden seloteyp çıkarın. </li><li> 2-3 dk için 65 ° C sıcaklıkta bir ısıtma fırını içinde kayar yerleştirin. Etanol ile nazikçe temizleyin. </li></ol> 2. Bir PDMS mikroakışkan Cihaz Fabricating <ol><li> Üretici tarafından tavsiye edilen şekilde PDMS taban ve tedavi edici bileşenler karıştırılır. Biz 10:1 kullanınsertleştirici baz oranı. ~ 0.5 cm yüksekliğinde bir Petri kabı içine PDMS karışımı yaklaşık 30 ml dökün. Vakum Degas PDMS gerekirse. Yukarı bakacak desenli bant ile PDMS daldırın cam slayt. PDMS sonra desen yerleştirme slayt ve çanak alt arasındaki hava kabarcıklarının oluşmasını engeller. Yemek bir su terazisi kullanarak yatay olduğundan emin olarak, 65 ° C&#39;de 48 saat süreyle Cure. </li><li> Yeni bir 90 mm Petri kabı PDMS karışımı, 3 ml derin 0.5 mm bir tabaka ile sonuçlanan, dökün. (A spin lak mevcut ise, bu aşama için kullanılabilir). </li><li> Degas ve 2.1 gibi tedavi. </li><li> Hafifçe bir neşter ile istenilen boyutta mikroakışkan cihaz kesip. Bu katman &quot;akış tabaka&quot; terimi olacaktır. </li><li> İkinci Petri çanak ince tabaka PDMS aynı boyutlu bir parça kesin. Bu işlem, &quot;kuyu tabaka&quot; terimi olacaktır. </li><li> Akış katmanda giriş ve çıkışları için delikler için uygun boyutta bir biyopsi puncher (Biz 1.2 mm ID kullanınız). </li&gt; <li> Düzeni üzerinde mikrokanallar ile uyum içinde 2 mm ID biyopsi zımba kullanılarak kuyuları dışında tasarım düzen ve yumruk üzerinde kalın bir cam slayt üzerinde kuyular katmanı yerleştirin. </li><li> Her iki PDMS katmanlar hem de etanol ile birlikte, 24 mm x 60 mm ebadındaki bir cam lamel temizleyin. Hava kuru ve temiz tutun. </li><li> Plazma tersinir yapıştırma için ya standart plazma yakıcısı (tersinir olmayan yapıştırma için) veya bir el corona işlemcinize 6 kullanarak cam lamel ve kuyular katmanı PDMS hem tedavi. Dikkatlice (Şekil 3) yapışma neden lamel üstüne kuyular katmanı yerleştirin. Yavaşça herhangi bir hava kabarcığı (gerekirse) dışarı sürün. </li></ol> 3. Hücre Görüntüleme Deneyi <ol><li> Eğer şırınga pompası 0.02 iç çapı &quot;(Tygon) ile esnek plastik borular bağlı uygun şırınga hazır İstenen ortam olduğundan emin olun. </li><li> S. büyütün YPD sıvı halinde arzu edilen faz için cerevisiae suşları. Iyice vorteksleyin ve yerde 300 μBir mikrosantrifüj tüpüne her bir suş l. </li><li> Yavaşça Concanavalin A (Sigma) her oyuğuna 2 mg / ml &#39;lik 1 ul koyun. Yavaşça su pipetleme bir her iyi iki kez gelen aşırı Concanavalin yıkayın. </li><li> Concanavalin A kurutma iken, glukoz eksik SC orta 300 ul ile iki kez suşlar yıkayın. Hücre duvarlarından kalan glukoz Çamaşır Concanavalin A. uygun bağlılık olur </li><li> Iyice Vortex hücreler. Pipet 0.75 ul ya da kendi başına da (Şekil 3) her bir hücre süspansiyonu daha az. Yavaşça zengin orta rezidüel hücreleri yıkayın. Sonraki iki adım kurumasını önlemek hücreleri için hızlı bir şekilde gerçekleştirilmesi gereklidir. </li><li> Plazma çip tedavi ve kuyuların iyice doğrudan kuyu vurmak için dikkatli olmak, el korona işlemcinize kullanarak. Ikisi arasındaki uyumu yakından ilgilenerek, kuyular üzerinde çip dikkatlice yerleştirin (Bu adım stereoskop altında yapılabilir). Yavaşça PD iki kat uymak için basınMS. Yavaş yavaş hava kabarcığı kanal içinde kalır emin, yaklaşık 50 ul zengin bir ortam ile tamamen cihazı doldurun. </li><li> , Aygıtı bağlayın uygun girişleri içine tüpler ekleme ve medya akışını başlatmak. Bu kaldırmak için zor olabilir gibi hiçbir hava kabarcığı cihazın içine tanıtıldı dikkat edin, bu bir giriş veya çıkış kesme gerçekleştirilir ve yavaşça cam lamel kırmak için dikkatli olmak, kabarcıkları olan cihaza dokunarak olabilir. </li><li> Mikroskop altında yerleştirin ve her kuyuya uygun görüntüleme noktalarını bulabilirsiniz. </li><li> Gerekirse kurtarma izin vermek için 1 saat veya daha uzun süre zengin orta akış altında hücreler tutun. </li><li> Denemeyi başlat: biz istediğiniz gibi göreceli akış oranları değişiyor, medyanın geri akışı önlemek için iki şırınga pompaları her birinden sürekli akış kullanın. Orta bir kanal genişliği (Şekil 4)% 80 üzerinde akan bir 0.8 ml / saat ve pompa B ile 0.2 ml / saat sonuçlar pompa ayarlanması. Bu dinamik c olabilirİki akış oranları değiştirerek astı. Yeni koşullar kanal 2 tam uzunluğu boyunca saniye içinde stabilize eder. </li></ol>

<ol><li>Dertinger, S. K., Jiang, X., Li, Z., Murthy, V. N., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradients+of+substrate-bound+laminin+orient+axonal+specification+of+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Gradients of substrate-bound laminin orient axonal specification of neurons.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99, 12542-12547 (2002).</li>
<li>Hersen, P., McClean, M. N., Mahadevan, L., Ramanathan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signal+processing+by+the+HOG+MAP+kinase+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Signal processing by the HOG MAP kinase pathway.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 7165-7170 (2008).</li>
<li>Paliwal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAPK-mediated+bimodal+gene+expression+and+adaptive+gradient+sensing+in+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">MAPK-mediated bimodal gene expression and adaptive gradient sensing in yeast.</a> Nature. 446, 46-51 (2007).</li>
<li>Bennett, M. R., Hasty, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+devices+for+measuring+gene+network+dynamics+in+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">Microfluidic devices for measuring gene network dynamics in single cells.</a> Nat. Rev. Genet. 10, 628-638 (2009).</li>
<li>Shrirao, A. B., Perez-Castillejos, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simple+Fabrication+of+Microfluidic+Devices+by+Replicating+Scotch-tape+Masters%5BTitle%5D)+AND+%22Chips+%26+Tips%22%5BJournal%5D)">Simple Fabrication of Microfluidic Devices by Replicating Scotch-tape Masters.</a> Chips & Tips. , (2010).</li>
<li>Haubert, K., Drier, T., Beebe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDMS+bonding+by+means+of+a+portable%2C+low-cost+corona+system%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">PDMS bonding by means of a portable, low-cost corona system.</a> Lab Chip. 6, 1548-1549 (2006).</li>
<li>Gerber, D., Maerkl, S. J., Quake, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+microfluidic+approach+to+generating+protein-interaction+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">An in vitro microfluidic approach to generating protein-interaction networks.</a> Nat. Methods. 6, 71-74 (2009).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu yazıda dinamik koşullar altında aşağıdaki birkaç maya suşları eş zamanlı sağlayan bir mikroakışkan cihaz oluşturmak için basit benchtop yöntemi sunuyoruz. Bir kanal birkaç suşları takiben birden suşları tek hücre yanıtlarının dinamikleri karşılaştırmak için güvenilir bir araç sağlar. Bu çalışmanın yaklaşımının bir avantajı, bir temiz oda için ihtiyaç olmadan basit tekniklerle cihaz imal etme kabiliyetidir. Aslında, biz de plazma işlemler (adım 2.9 ve 3.6) atlanıyor protokolü yapılmış ve iyi sonuçlar aldım, bu yüzden ...

Hücreler sürekli olarak metabolizması, transkripsiyonel profili ve hücresel fonksiyonları değiştirerek, dinamik olarak değişen bir ortama tepki. Bu olayların incelenmesi, bu tür değişikliklerin sayısal olarak yöntemlere ihtiyaç vardır. Bu tür tepkiler için okuma bir tipi, besin strese cevap olarak strese bağlı transkripsiyon faktörleri lokalizasyonu için bir değişimdir. Mikroakışkan cihazlar 1 dinamik hücreleri 2-4 çevre koşulları işlemek için kullanılır olmuştur. Hücrelerin ortam hassas bir şekilde kontrol ve dinamik olarak değiştirilebilir; hücre harici koşullar manipülasyon sırasında dahil olmak üzere, her zaman, canlı-görüntülü olabilir, ve en az reaktif hacimleri gereklidir: Bunlar, canlı hücre görüntüleme için çeşitli avantajlar sunmaktadır. İki durum arasındaki ardalanması izin mikroakışkan cihaz için çok basit bir tasarım, bir Y-şeklindeki cihaz 2&#39;dir. Biz rutin izin Y-şekilli mikroakışkan cihazları kullanmakKanal sistemindeki hücrelerden dinamik değişiklikler uygulanması. Biz maya hücreleri floresan etiketli strese bağlı transkripsiyon faktörlerinin lokalizasyonu değişiklikleri takip için bu cihazı kullanabilirsiniz. Biz beslenme değişen koşullarda bu değişiklikleri uygulayın. Örneğin, bir puls (veya puls dizisi) sağlayabilir glikoz-ihtiva eden çok ince bir zamansal çözünürlükte, no-glikoz orta bir süre içinde ortamı. Genellikle bu tür deneylerde, bir farklı hücre suşları (örneğin, farklı mutantlar veya farklı yabani izolatlar) tepkileri karşılaştırarak ilgileniyor. Y-şekilli kanal her bir kanalın bir suşu ile sınırlı - Birden fazla suşu kullanıldığında, suşları arasında ayırt etmek için basit bir yolu yoktur. Bunun üstesinden gelmek için, farklı kanalları da kullanılabilir. Biz birden suşlar aynı dinamikleri koşulları uygulamak istiyorsanız, biz birden fazla kanal ile Y-kanal kavramı birleştirmek istiyorum. Bu çözümü uygulamaya iki zorluklar vardır: Bu t uygulamak zor olabilironun bütün kanallar için aynı anda aynı koşullar, ve orada bir cihaz içine monte edilebilir Y-kanallarının sayısı için bir geometrik sınırlamasıdır. Bu nedenle dinamik koşullar altında bir kanal birkaç suşları görüntülemek için bir yol aradılar. Burada aynı dinamik koşullar altında bir kanal görüntüleme Birden fazla suşu için tasarlanmış bir iki katmanlı mikroakışkan cihaz tarif. Alt tabaka delikli bir sıra ile ince PDMS oluşur. Bu tabaka, cam lamel bu cam, Concanavalin A ile yapıştırma, farklı suşları yer hangi kuyu içine oluşturmak için eklenir. İkinci katman seloteyp kullanılarak oluşturulan yöntem 5 Y-şekilli bir Mikroakışkan cihazdır. Kuyularda suşların yerleştirdikten sonra ikinci kat hızlı hizalanır ve farklı suşlar içeren birkaç kuyuları ile bir kanal oluşturarak, ilk bağlı. Bu, nihai cihaz burada her bir kanal içinde çeşitli suşları aşağıdaki sağlarsuşlar aynı anda aynı şartlarına tabi tutulur. Tüm tasarım ve üretim sürecinin hiçbir yumuşak litografi, basit araçları kullanarak, benchtop yapılabilir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> PDMS-Sylgard 184 </td><td> Dow Corning USA </td><td></td></tr><tr><td> Vakum desikatörde </td><td> Nalgene </td><td> 5310-0250 </td></tr><tr><td> Perforatörler Biyopsisi </td><td> Ted Pella Inc </td><td> Harris Uni-Core 15076 (2 mm), 15074 (1.2 mm) </td></tr><tr><td> Şırınga pompalar </td><td> Chemyx </td><td> Füzyon 200 </td></tr><tr><td> Corona işlemcinize </td><td> Elektro-teknik ürünleri </td><td> BD-20 </td></tr><tr><td> Tygon boru </td><td> Tygon </td><td> S-54-HL </td></tr><tr><td> Concanavalin-A </td><td> Sigma </td><td> C7275 </td></tr><tr><td> Seloteyp </td><td> 3M Scotch </td><td> Şeffaf Bant 1/2 &quot; </td></tr></tbody></table>

birden farklı suşlarının incelenmesi için bir mikroakışkan cihazı

A Microfluidic Device for Studying Multiple Distinct Strains

Çevresel değişimlere hücre yanıtlarının çalışmada birçok deneysel zorluklar teşkil etmektedir: hücreler karşılaştırmalı bir şekilde sık sık değişen koşullar altında yansıması gerekmektedir. Multiwell plakaları rutin birçok farklı suşları veya hücre hatları karşılaştırmak için kullanılan, ancak çevre dinamikleri üzerinde sınırlı kontrole izin verir. Microfluidic cihazlar, diğer taraftan, çevreleyen koşullara üzerinde mükemmel dinamik kontrol etmek için kullanılır, fakat görüntü için zorlu ve bunları birkaç soyu daha fazla ayırt edilir. Burada kolay ve hızlı bir kanalda birden çok farklı maya suşları için dinamik olarak değişen koşullar uygulanarak yetenekli bir mikroakışkan cihaz üretimi için bir yöntem açıklanmaktadır. Cihaz yumuşak litografi gerek kalmadan tasarlanmış ve basit araçlarla üretilir. Bu, mikro barındıran bir ikinci tabaka bağlı Y-şekilli bir akış kanalı oluşturmaktadır. Suşları ayrı mikro yerleştirilir ve aynı dinamik koşullar altında görüntülü. Biz demofarklı maya suşunda besin değişikliklerin darbelerinin protein yerelleştirme tepkilerini ölçmek için cihazın kullanımı nstrate.

Farklı suşlar arasındaki mesafeyi göstermek için biz alternatif kuyularda iki ayırt maya suşları görüntülendi. Görüntüleme tam kuyu kuyu (Şekil 5a, b) arasında bir hücre kaçağı gösterir. Her iki suş YFP ile etiketlendi transkripsiyon faktörü MSN2 var. Dinamik koşullar arasında değişen eşzamanlı etkisini test etmek için, çekirdeğin (Şekil 5c, d) MSN2-YFP lokalizasyonu ile sonuçlanmıştır no-glikoz, orta bir adım oluşturarak, iki giriş kanalı içinde, akış hızı değiştirmiş. Bütün kuyucuklar...

Biz temiz oda ya da yumuşak litografi gerek kalmadan, birden çok farklı suşları için benzer dinamik koşullar uygulanarak yeteneğine microfluidic cihazlar üretmek için basit bir yöntem sunulmaktadır.

Birden Farklı Suşlarının incelenmesi için bir mikroakışkan Cihazı

Hücrelerin çevresel değişimlere verdiği yanıtların incelenmesi birçok deneysel zorluk teşkil eder: hücrelerin, genellikle ... içindeki değişen koşullar altında görüntülenmesi gerekir.

Aşağıdaki yöntemin genel amacı, farklı maya suşlarından gelen tekil hücrelerin davranışlarını aynı dinamik koşullar altında görüntülemektir. Bu, iki katmanlı bir mikroakışkan cihaz üretilerek gerçekleştirilir; alt katman farklı suşların her birini ayrı ayrı içerecek, üst katman ise ikinci bir adım olarak dinamik akış koşullarını sağlayacaktır. Farklı maya suşları kuyucuklara yerleştirilir ve cihaz kapatılarak, birden fazla ayrılmış suşun bulunduğu tek bir kanal oluşturulur.Ardından, dinamik ortam değişikliklerine karşı hücre yanıtlarını görüntülemeye geçiyoruz. Y Kanalının iki girişindeki akış hızları kontrol edilerek, farklı suşların aynı dinamik koşullara maruz bırakıldığı ve kuyucuklar arasında çapraz kontaminasyonun gerçekleşmediği görülmüştür. Bu mikroakışkan cihaz, mevcut diğer sistemlere göre birkaç temel avantaja sahiptir. Aynı dinamik koşullar altında birden fazla farklı suşun görüntülenmesine olanak tanır.Ayrıca, önemli bir nokta olarak, özel bir ekipman gereksinimi olmaksızın herhangi bir laboratuvarda kolayca üretilebilir. Bu yöntem, farklı vahşi East izolatlarının açlık geçişlerine verdiği yanıtların nasıl takip edileceği konusundaki tartışmalardan doğmuştur. Başlangıç olarak, istenen mikrokanal düzenini ölçekli olarak çizin veya yazdırın.Ardından, bir lamı scotch bant katmanlarıyla kaplayın. Kanalın istenen yüksekliğine ulaşmak için, yerleşim tasarımını düz bir yüzeye yerleştirin ve lamı tasarım deseniyle hizalayın. Şimdi, cam lam üzerindeki bandı yerleşime göre dikkatlice kesin. Scotch bandı cam lamın tüm bölgelerinden çıkarın.Bunları mikro kanal düzenine uygun şekilde kabul edin. Lamı üç dakika boyunca 65 °C'lik bir ısıtma fırınında bekletin. Ardından etanol ile nazikçe temizleyin.PDMS baz ve kürleme bileşenlerini üreticinin önerdiği şekilde karıştırın. Yaklaşık 30 mililitre PDMS karışımını, yaklaşık 0,5 santimetre yüksekliğe ulaşacak şekilde bir Petri kabına dökün. Gerekirse PDMS'i vakum altında gazdan arındırın.Desenli scotch bant kısmı yukarı bakacak şekilde cam lamı PDMS'in içine daldırın. Deseni PDMS'ten sonra yerleştirmek, lam ile kap tabanı arasında hava kabarcığı oluşumunu önler. Yeni bir 90 milimetrelik Petri kabına üç mililitre PDMS karışımı dökün. Bir hava kabarcığı terazi kullanarak kabın yatay olduğundan emin olarak 65 degrees Celsius sıcaklıkta 48 saat boyunca kürleyin.Bu adım, mevcutsa bir spin kodlayıcıda gerçekleştirilebilir. DGAs ve kürleme işlemleri daha önce gösterildiği gibi uygulanır. Şimdi, mikroakışkan cihazın akış katmanını bir biyopsi puncher'ı ile istenen boyutta dikkatlice kesin.Akış katmanındaki giriş ve çıkışlar için delikler açın. Ayrıca, ikinci Petri kabından benzer boyutlarda bir kuyucuk katmanı kesin ve kalın bir cam üzerine yerleştirin. Tasarım düzenini üzerine kaydırın.Ardından, etanol kullanarak yerleşim planındaki mikrokanallarla hizalı şekilde kuyucukları delin, her iki PDMS katmanını ve cam lamı temizleyin ve havada kurutun. Daha sonra, geri dönüşümsüz yapıştırma için standart bir plazma aşındırıcı veya geri dönüşümlü yapıştırma için el tipi bir korona işlemcisi ile cam lamı ve kuyucuk katmanı PDMS'i işlemden geçirin. Yapışmayı sağlamak için kuyucuk katmanını dikkatlice lamın üzerine yerleştirin.Hava kabarcıkları nazikçe dışarı itilir. İstenen besiyeri uygun şırıngalarda hazırlanır ve bir şırınga pompası üzerinden geçirilen tigon hortumlarına bağlanır. Hücre görüntüleme için.Güçleri kullanın. İstenen faza gidin, kültürü iyice vorteksleyin ve 300 microliters miktarını mikro santrifüj tüplerine aktarın. Her bir PDMS kuyu tabakası kuyucuğuna nazikçe bir microliters con canna A yerleştirin.Con A kururken, her kuyucuktaki fazla con A'yı nazikçe su pipetleyerek iki kez yıkayın. Suşları, glikoz içermeyen 300 µL SC ortamı ile iki kez yıkayın. Hücre duvarlarındaki kalıntı glikozun yıkanması, konvalla doğru yapışmaya yardımcı olur.Vortekslendikten sonra, hücre süspansiyonundan yaklaşık 0.5 µL hücreyi münferit kuyucuklara pipetle aktarın. Kalan hücreleri zengin besiyeri ile nazikçe yıkayın. Hücrelerin kurumasını önlemek için sonraki iki adımın hızlıca gerçekleştirilmesi gerekmektedir.Opsiyonel bir adım olarak, kuyucuklara doğrudan çarpmamaya dikkat ederek çipi ve kuyucukları plazma ile işlemden geçirin. Ardından, bir stereoskop altında, ikisi arasındaki hizalamaya çok dikkat ederek çipi dikkatlice kuyucukların üzerine yerleştirin. İki PDMS katmanının birbirine yapışması için hafifçe bastırın.Kanal içerisinde hava kabarcığı kalmadığından emin olarak, cihazı yaklaşık 50 µL zengin besiyerı ile yavaşça tamamen doldurun. Şimdi, tüpleri uygun girişlere yerleştirerek cihazı bağlayın ve besiyeri akışını başlatın. Borularda hava kabarcığı oluşmamasına dikkat edin; çünkü bu kabarcıklar cihazda takılıp akışı bozabilir.Cihazı mikroskobun altına yerleştirin ve her birindeki uygun görüntüleme noktalarını bulun. Hücrelerin toparlanmasına izin vermek için, onları bir saat veya gerekirse daha uzun süre zengin besiyeri akışında tutun.Deneye sabit akış ayarıyla başlayın. Pompa A'yı 0.8 milliliters per hour ve pompa B'yi 0.2 milliliters per hour değerine ayarlayın. Besiyeri, kanal genişliğinin %80'inden fazlasını kapsayacak şekilde akmalıdır.Bağıl akış hızlarını değiştirerek cihazdaki koşulları dinamik olarak değiştirebiliriz. Yeni koşullar, tüm kanal boyunca saniyeler içinde stabilize olur. Farklı suşlar arasındaki ayrımı göstermek için, ayırt edilebilen iki maya suşu ardışık kuyucuklarda görüntülenir.Bu deneyde kuyucuklar arasında hücre sızıntısı olmadığını unutmayın. Dinamik olarak değişen koşulların eş zamanlı etkisini test etmek için her iki suşta da MSN two transkripsiyon faktörü YFP ile etiketlenmiştir. Glukoz içermeyen ortamdan oluşan bir basamak oluşturmak amacıyla iki giriş kanalındaki akış hızları değiştirilmiştir.Bu durum, MSN iki'nin çekirdeğe yerleşmesiyle sonuçlanmıştır. Önemli bir nokta olarak, tekil hücrelerdeki nükleer MSN iki YFP seviyelerinin zaman takibi analiz edilebilir. Böylece PDMS mikroakışkan cihaz, birden fazla kuyucuğa eş zamanlı dinamik koşullar uygulamak için kullanılabilir.Bu prosedür uygulanırken, cihaz montajı sırasında hücrelerin kurumasına izin verilmemesi gerektiğini unutmamak önemlidir. Bu teknikte uzmanlaşıldığında, yumuşak litografi ihtiyacı olmadan kolayca gerçekleştirilebilir.

a-microfluidic-device-for-studying-multiple-distinct-strains

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz hücre yakalama ve kültür etkinleştirebilirsiniz mikroakışkan cihazların imalatı için bir protokol tanımlamaktadır. Bu yaklaşımda, mikroakışkan kanallar içinde oluk gibi desenli mikro, içinde hücre sabitleyebilirsiniz Shear stresin düşük olduğu bölgelerde oluşturmak için kullanılır.

Hücresel Davranış incelenmesi için Groove Desenler mikroakışkan Aygıt

Bu protokol, chemoeffectors istikrarlı konsantrasyon gradyanlar bakteriyel kemotaksis soruşturma için bir mikroakışkan aygıt geliştirme açıklar.

Kararlı Konsantrasyon Degradeler Bakteriyel Kemotaksis miktarının mikroakışkan Aygıt

Kaynak: Cabeen, M. T. ve diğerleri. Bacillus subtilis'in Tek Hücreli Mikrofluidik Analizi. J. Vis. Exp. (2018)Video, tek hücre düzeyinde bakteri büyümesini gözlemlemek için mikrofluidik bir cihazın kullanıldığını gösteriyor. Mikro ölçekli hendeklerde hapsedilmiş hareketsiz bakteriyel hücrelerin sürekli olarak floresan mikroskobu altında nasıl görüntülendiğini ve beslendiğini gösteriyor. Bu kurulum, hücre bölünmesi ve soy takibinin birden fazla nesil boyunca gerçek zamanlı görselleştirilmesini...

Mikrofluidik bir sistemde tek hücre çözünürlüğünde bakteri büyümesini takip etmek

Bu protokolde, prokaryotik mikroorganizmaların tek hücreli analizi için bir mikroakışkan pikolitre biyoreaktörün (PLBR) üretimi, kurulumu ve temel çalışması tanıtılmaktadır. Endüstriyel olarak ilgili mikroorganizmalar, geleneksel yöntemlerle neredeyse imkansız olan, belirli zaman dilimlerinde büyüme hızı, morfoloji ve fenotipik heterojenlik hakkında bilgi sahibi olmaya izin veren ilke kanıtı olarak analiz edildi.

Mikrobiyal Tek Hücreli Analiz için Mikroakışkan Pikolitre Biyoreaktör: Fabrikasyon, Sistem Kurulumu ve Çalışması

Bu yazıda tek bir hücre analizi için bir mikroakışkan çip sunuyoruz. Bu sağlar: hücre içi proteinler, enzimler, kofaktörler, ve floresan deneyleri veya bağışıklık aracılığıyla ikinci haberciler miktar.

Tek Hücrelerinin yönlü Kimyasal Analiz için mikroakışkan Chip

Burada, yüksek verimli tek hücre izolasyonu ve uzun süreli klonal kültüre izin vermek için yeni bir mikro kuyu tasarım konseptini kullanan mikroakışkan bir platformla tek hücreleri izole etmek ve kültürlemek için bir protokol sunuyoruz.

Yüksek verim Tek hücreli İzolasyonu ve Kültür mikroakışkan Platformu

Biz örnek olarak Bacillus subtilis kullanarak bireysel bakteri hücre soy mikrosıvısal çözümlenmesi için bir yöntem mevcut. Yöntemi gözlem, hücre nesiller sıkı bir şekilde kontrol edilebilir ve düzgün büyüme koşullar altında yüzlerce izin vererek Mikrobiyoloji geleneksel analitik yöntemleri eksikliklerin üstesinden gelir.

Bacillus subtilis tek hücreli mikrosıvısal analizi

Bu rapor, birden fazla hücrenin yüksek verimli eşleştirme ve mikroskobik analizinin sağlanabileceği tek bir hücre kültürü deneyi kurmak için mikroakışkan çip tabanlı bir yöntem tanımlanmaktadır.

Mikroakışkan Çiple Deterministik Bir Şekilde Tek Hücreli Ortak Kültürlerin Oluşturulması

1500 kültür ünitesi, bir dizi gelişmiş peristaltik pompa ve yerinde karıştırma modülünden oluşan karmaşık yaşam makineleri üzerinde yüksek verimli çalışmalar için mikroakışkan bir sistem sunuyoruz. Mikroakışkan çip, vivodaki son derece karmaşık ve dinamik mikro çevresel koşulların analizini sağlar.

Yüksek Verimli Mikroakışkan Cihaz Kullanarak Dinamik ÇevreSel Koşulların Üretilmesi

Toprağın opaklığı nedeniyle, kurucu mikroplar arasındaki etkileşimler hücresel çözünürlükle kolayca görselleştirilemez. Burada, mantar-mikrobiyal etkileşimleri araştırmak için yeni fırsatlar sunan iki mikroakışkan araç sunulmaktadır. Cihazlar çok yönlü ve kullanımı kolaydır, bu da hücresel düzeyde yüksek mekansal zamansal kontrol ve yüksek çözünürlüklü görüntüleme sağlar.

Hücresel Düzeyde Mantar-Mikrobiyal Etkileşimleri Probalamak için Mikroakışkan Araçlar

Bakteri popülasyonlarının sürekli düşük besinli koşullarda (yüzlerce nanomolar konsantrasyona kadar) veya geçici besin dalgalanmaları altında küçük bir zaman ölçeğinde yetiştirilmesini sağlayan milifluidik sürekli kültür cihazı (MCCD) için bir protokol sunuyoruz.

Düşük ve Dalgalanan Besin Koşullarında Escherichia coli'nin Incelenmesi için Sürekli Kültür Milifluidik Cihaz

Öğrenin, farklı maya suşlarının aynı dinamik koşullarda davranışlarını görüntülemek için iki katmanlı bir mikroakışkan cihazı kullanmayı. Bu yöntem, kuyular arası kirlenme olmadan eşzamanlı gözlem sağlar.

Birden Farklı Suşlarının incelenmesi için bir mikroakışkan Cihazı

Daha fazla video keşfet