Sıçan Omurgasından DRG Toplama: Bir Sıçan Modelinin Omurgasından Dorsal Kök Ganglionunu Çıkarmak İçin Bir Prosedür

Dorsal kök gangliyonları veya DRG, omuriliğin her iki tarafındaki omurların içine yerleştirilmiş duyusal nöronların hücre gövdelerinin kümeleridir. Birincil işlevleri, duyusal nöronal sinyalleri periferik sinir sisteminden merkezi sinir sistemine iletmektir.

Dorsal kök gangliyonlarını izole etmek için, yeni hasat edilmiş bir sıçan omurgası alarak başlayın. Servikal, torasik ve lomber bölgeleri ayırmak için omurgayı inceleyin. Doku hidrasyonunu sağlamak için omurga bölümlerini uygun bir tamponda tutun.

Şimdi, göğüs bölümünü sırt tarafı yukarı bakacak şekilde konumlandırın. Bölümü iki yanal yarıya bölün. Daha sonra, omurga segmentinin disseke edilmiş yarısını, medial tarafı yukarı bakacak şekilde sabitleyin. Altta yatan DRG'yi ortaya çıkarmak için ikiye bölünmüş omuriliği - uzun, boru şeklinde bir yapı - bölümün segmentli omur kemiklerinden nazikçe ayırın.

DRG, spinal kanal içine gömülü dorsal ve ventral kökleri olan belirgin beyaz kitleler olarak görünür. İnce forsepslerle, omurilik kanalından çıkarmak için DRG'yi dikkatlice dışarı çekin. Son olarak, hasat edilen DRG'yi daha sonraki sonraki uygulamalar için uygun bir ortama aktarın.

Ötenazi uygulanmış bir sıçanın sırt derisini% 70 etanol ile temizleyin ve omurgayı çıkarmak için makas kullanın. Servikal, torasik ve lomber bölgeleri ayırın ve doku örneklerini nemli tutmak için omurga bölümlerini PBS ile 10 santimetrelik bir kültür kabına yerleştirin.

Hassas kemik makası kullanarak, omurgayı iki yan yarıya ayırmak için torasik ve servikal vertebral kemikleri dorsal ve ventral yönlerde açın ve doku bölümlerini taze PBS ile 10 santimetrelik temiz bir tabağa yerleştirin. Forseps kullanarak, dorsal kök ganglionlarını görselleştirmek için omuriliği vertebral kemiklerden nazikçe ayırın.

Her ganglionun altına tutulan bir çift ince forsepsin uçlarını yerleştirerek, dokuyu kavrayın ve bulunduğu kemik boşluğundan çekin. Hasattan hemen sonra, sinir dokularının bakteriyel kontaminasyonunu önlemeye yardımcı olmak için her gangliyonu %2 Penisilin ve Streptomisin veya Kalem / Strep ve %10 Fetal Sığır Serumu veya FBS ile takviye edilmiş DMEM kültür ortamına yerleştirin.