Fare Beyninden Mononükleer Hücre İzolasyonu: Beyinde Yerleşik Mononükleer Hücreleri İzole Etmek İçin Bir Yoğunluk Gradyanlı Santrifüj Tekniği

Beyindeki lenfositleri ve monositleri içeren mononükleer hücreler, beyin fonksiyonunun ve homeostazın korunmasında çok önemli roller oynar.

Bu mononükleer hücreleri izole etmek için önce tuzlu su ile perfüze edilmiş yeni hasat edilmiş bir fare beyni alın.

Perfüzyon, kanın ve bileşenlerinin kan damarlarından uzaklaştırılmasına izin vererek, sonraki adımlarda beyinde yerleşik bağışıklık hücrelerinin izolasyonunu sağlar.

Şimdi, yapışan kırmızı kan hücrelerini çıkarmak için beyni uygun ortamla durulayın. Küçük doku parçaları elde etmek için durulamayı kıyma ile takip edin.

Tek hücrelerin ve hücre parçalarının bir süspansiyonunu elde etmek için doku parçalarını homojenize edin.

Bu süspansiyona, daha sonra düşük yoğunluklu bir gradyan ortamı oluşturmak için uygun hacimlerde soğutulmuş ortam ve uygun yoğunluk gradyan ortamı ekleyin.

Daha sonra, yüksek yoğunluklu bir gradyan ortamının belirli bir hacmini ekleyin; yüksek yoğunluklu gradyan ortamı, süreksiz bir yoğunluk gradyanı oluşturarak altta ayrı bir katman oluşturur.

Süspansiyonu yüksek hız ve düşük sıcaklık koşullarında santrifüjleyin. Mononükleer hücreler, iki yoğunluk gradyan ortam katmanı arasındaki arayüzü işgal eder.

Sinir hücres