Ters Fazlı Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi: Fare Karaciğerinden İzole Edilen Floresan Etiketli ve Türetilmiş Sialik Asitlerin Kantitasyonu İçin Sağlam Bir Yöntem

N-asetilnöraminik asit ve N-glikolilnöraminik asit gibi sialik asitler, memeli hücre yüzeyindeki oligosakkarit zincirlerinin distal uçlarında bulunan negatif yüklü karbonhidrat kısımlarıdır.

Ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi veya RP-HPLC kullanarak fare karaciğer dokusundaki bu sialik asitlerin nispi miktarlarını ölçmek için, önce izole edilmiş sialik asit karışımını türevlendirme maddesi ile muamele edin. Türevlendirme ajanı, sialik asitlerin fonksiyonel grupları ile etkileşime girerek kararlı, floresan sialik asit türevleri üretir.

Bir floresan dedektörüne bağlı bir RP-HPLC sütunu monte edin. Kolon, kromatografik çalışma sırasında sialik asit türevleri ile seçici etkileşimleri kolaylaştırmak için polar olmayan, hidrofobik, alkil zincir ligandlarına bağlanmış gözenekli silika bazlı sabit faz içerir.

Optimum kolon koşullandırma için daha az polar organik çözücü olan düşük konsantrasyonlarda asetonitril içeren sulu polar mobil faz kullanarak kolonu dengeleyin.

Türetilmiş sialik asit karışımını kolona yükleyin.

Hidrofobik bir N-asetil grubu içeren N-asetilnöraminik asit, sabit fazın hidrofobik ligandlarına, hidrofilik bir N-glikolil grubuna sahip N-glikolilnöraminik