JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 3:23 dk. • July 8th, 2025
Metal iyonları gibi ligandlar, belirli bir proteine kovalent olmayan bir şekilde bağlanarak bir protein-metal iyon kompleksi oluşturur. Bu bağlanma, proteinin genel yükünü değiştirir, bu da afinite kapiler elektroforezi kullanılarak bu komplekslerin karakterizasyonuna izin verir.
Başlamak için, iç yüzeyinde yüklü silanol grupları bulunan ince, önceden koşullandırılmış bir cam kılcal damar alın. Kılcal damarı EDTA solüsyonu ile durulayın. EDTA, herhangi bir metal iyonu safsızlığını gideren bir kenetleme maddesidir. Şimdi, istenen proteini içeren numune solüsyonunu pozitif ucundan veya anotundan kılcal damara hidrodinamik olarak enjekte edin.
Elektro-ozmotik bir akış oluşturmak için yüksek bir voltaj uygulayın, proteinleri doğal konformasyonlarında doğal yüklerle kılcal damar içinde katoda doğru hareket etmeye zorlayın. Kılcal damardan bağlanmamış proteinlerin göç modelini kaydedin.
Daha sonra, protein numuneleri ile birlikte kılcal damara özel bir ligand çözeltisi ekleyin ve aynı voltajı uygulayın. Kılcal damarın içinde, ligand molekülleri hedef proteine kovalent olmayan bir şekilde bağlanarak kompleksler oluşturur.
Bu, proteinlerde konformasyonel bir değişikliğe neden olur, bu da d
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin