JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 6:25 dk. • July 8th, 2025
Elektrokemilüminesans, ECL, immünoassay kullanılarak fare beyin lizatında spesifik bir proteinin kantitatif tespiti için, çok kuyulu bir tahlil plakası ile başlayın.
Kuyular, elektrik devresini tamamlayan iletken çalışma ve karşı elektrotlardan oluşur. Bir dielektrik tabaka elektrotları ayırarak tahlil hassasiyetini artırır.
Kuyucuklara hedef proteine karşı birincil fare monoklonal antikorları ekleyin. Daha fazla bağlanma kapasitesine sahip çalışma elektrotları, antikorların üzerlerinde hareketsiz hale gelmesini kolaylaştırır.
Protein içeren bir çözelti ile inkübe edin, kuyucuğun kalan bağlanma yüzeylerine bağlanın ve arka plan girişimini azaltın.
Fare beyni nükleer fraksiyon lizatı ekleyin. Lizattaki hedef protein, spesifik olarak monoklonal antikorlara bağlanır.
Elektrot üzerindeki primer monoklonal antikorlara bağlı olan protein üzerindeki epitopları tanıyan ve bunlara bağlanan etiketlenmemiş poliklonal antikorlar ekleyin. Etiketlenmemiş antikorlara bağlanan rutenyum kompleksi ile etiketlenmiş spesifik ikincil antikorlar ekleyin. Uygun bir ECL üretim ortamı sağlayan yüzey aktif madde ve tripropilamin, TPA içeren uygun bir tampon ekleyin.
Çok kuyulu plakayı ECL algılama sistemine
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin