Farklı Dolaşım B Hücre Popülasyonları için Akış Sitometrisi Tabanlı Hücre Sınıflandırması
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:01 dk. • July 8th, 2025
Hücre yüzeyi reseptörlerine dayanarak, insan dolaşımındaki B hücreleri, CD19 pozitif naif B hücreleri, CD19 ve CD27 pozitif bellek B hücreleri ve CD19, CD27 ve CD38 pozitif plazma hücreleri olarak sınıflandırılır.
Bu hücre popülasyonlarını sıralamak için saflaştırılmış bir B hücresi süspansiyonu alın. İnsan immünoglobulin G antikorları ile inkübe edin. Antikorlar, B hücrelerinin Fc reseptörlerini bloke ederek spesifik olmayan antikor bağlanmasını önler.
CD19, CD27 ve CD38'i hedefleyen floresan işaretli antikorlar ekleyin.
Anti-CD19 antikorları, B hücrelerinde her yerde eksprese edilen CD19 reseptörlerine bağlanır.
Anti-CD27 antikorları, bellek B hücreleri ve plazmablast plazma hücreleri üzerinde eksprese edilen CD27 reseptörlerine bağlanır.
Anti-CD38 antikorları, plazmablast plazma hücrelerinde eksprese edilen CD38 reseptörlerine bağlanır.
Ölü hücre işaretleyicisi olarak floresan DNA bağlayıcı bir boya ekleyin.
Ölü hücreler, boyanın hücresel girişine ve çift sarmallı DNA'ya bağlanmasına izin veren bir zar bütünlüğü kaybı sergiler; canlı hücreler boyanmadan kalır.
Bağlanmamış antikorları ve boyaları çıkarmak için santrifüjleyin ve hücreleri FACS tamponunda yeniden süspanse edin. Hom
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin