Antikorların Kompleman Aracılı Bakterisidal Aktivitesi için Bir Serum Bakterisidal Testi

Lipopolisakkaritlere veya gram negatif bakterilerin bir dış zar bileşeni olan LPS'ye karşı monoklonal antikorlar içeren seri olarak seyreltilmiş bir serum örneği alın.

Gram negatif bakterileri tanıtın. Serum antikorları bakteriyel LPS'ye bağlanır.

Kompleman proteinleri ekleyin. C1 kompleksi, LPS'ye bağlı antikorlara bağlanarak enzimatik olarak aktif bir C1 oluşturur.

Aktive edilmiş C1, C4 ve C2'yi C3 konvertaz oluşturmak üzere parçalar, bu da C3'ü C5 konvertaz oluşturmak üzere parçalar. Konvertaz, C6 ve C7'yi işe alan C5b'yi üretmek için C5'i parçalar. Elde edilen kompleks dış zara girer ve C8 ve çoklu C9 ile birleşerek bir gözenek oluşturur.

Dış zar hasarı, iç zarın dengesini bozarak hücre parçalanmasına neden olur.

Karışımı bir agar plakasına yerleştirin ve yayın. Bakteri üremesi için kuluçkaya yatırın. Plakayı, mikrobiyal dehidrojenazlar tarafından indirgenen ve bakteri kolonilerine kırmızı bir renk veren Trifenil tetrazolyum klorür veya TTC içeren agar ile kaplayın.

Koloni sayısı, numune seyreltme ile artar, bu da daha düşük antikor konsantrasyonu ile bakterisidal aktivitenin azaldığını gösterir.

Başlamak için, test numunelerini ısıyla etkisiz hale getirmek için numuneleri 56 s