Vitronektinin Bakteri Yüzeylerine Bağlanmasının Flow Sitometri Kullanılarak Tespiti
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 3:05 dk. • July 8th, 2025
Haemophilus influenzae'nin vahşi tip ve mutant suşlarını içeren akış sitometresi tüplerini alın, tip f.
Bloke edici proteinler ve vitronektin içeren bir tampon pipetleyin. Kuluçkaya yatmak.
Bloke edici proteinler, bakteri yüzeyindeki spesifik olmayan etkileşimleri azaltırken, vitronektin molekülleri, vahşi tip bakteri yüzeylerinde vitronektin bağlayıcı bir protein olan protein H'ye bağlanır. Mutant suşta, vitronektin, protein H'nin yokluğundan dolayı bağlanmaz.
merkezkaç. Bağlanmamış vitronektini ve bloke edici proteinleri çıkarın.
Vahşi tip bakteri yüzeylerine bağlı vitronektine spesifik olarak bağlanan birincil anti-vitronektin antikorlarını içeren bir tampon ekleyin.
Daha sonra, vitronektin üzerindeki birincil antikorlara bağlanan ve vitronektin tespitini kolaylaştıran florofor konjuge ikincil antikorları tanıtın.
merkezkaç. Bağlanmamış ikincil antikorları çıkarın. Tampondaki bakterileri yeniden askıya alın.
Vitronektinin bakteri yüzeyine bağlanmasını belirlemek için akış sitometrisi yapın.
Vahşi tip ve mutant suşların floresan sinyallerini karşılaştırın. Yabani tip bakterilerde floresan sinyalindeki bir kayma, vitronektinin bakteri yüzeyine bağlandığını doğrular.
Akış sitometri
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin